Синельников печень: ПЕЧЕНЬ — Возлюби болезнь свою (Валерий Синельников)

Содержание

ПЕЧЕНЬ - Возлюби болезнь свою (Валерий Синельников)

Это вместилище вспыльчивости, гнева и ярости. Еще со времен Гиппократа и Аристотеля выделяют четыре ионических темперамента: холерический, меланхолический, флегматический и сангвинический. Вспыльчивый человек, или холерик, — это человек с желчным темпераментом.

Люди с заболеваниями печени и желчного пузыря подавляют в себе гнев, раздражение и злость на кого-либо. Подавленные эмоции сначала вызывают воспаление желчного пузыря и застой желчи, дискинезию желчных путей, а со временем эти невыраженные горькие чувства откладываются в виде камней. Ведь, как правило, люди считают дурным тоном выражать свои агрессивные эмоции. Лучше они их будут сдерживать в себе.

Такие люди склонны критиковать себя и других. Люди с больной печенью часто имеют больные суставы, которые ответственны за приведение агрессивных чувств в действие. А это приводит к их воспалению. Они также бывают переполнены горькими мыслями (от этого бывает горечь во рту, особенно утром). Но их гордость мешает им избавиться от старых гневных и горьких мыслей. Они постоянно жалуются и оправдывают собственную придирчивость.

Желчекаменная болезнь
Камни в желчном пузыре символизируют накопленные горькие и гневные мысли, а также гордость, которая мешает вам избавиться от них. Камни — это горечь, тяжелые мысли, проклятия, гнев и гордость, накопленные в течение нескольких лет. А колики — это раздражение, нетерпение и недовольство окружающим, достигшие пика. Ведь мы знаем, что мысли материализуются. Вот это и есть материальный субстрат всех этих пагубных мыслей.

Одна моя пациентка, у которой недавно были приступы желчной колики, рассказывала со злостью о своей племяннице:

— Вы представляете? Ей еще и семнадцати не исполнилось, а она со мной грубит, хамит, ведет себя отвратительно. Была бы моя воля, придушила бы.

— А она с вами живет? — спросил я ее.

— Нет, она живет с бабушкой, матерью мужа. Она учится у нас в университете, а родители ее в Хабаровском крае. И она должна присматривать за бабушкой, уже старенькой, ухаживать за ней, чтобы получить квартиру по наследству. Но ничего не делает. И мне приходится идти после работы к матери мужа и все делать самой. А у племянницы только гульки на уме.

— Вы хотите, чтобы ваша племянница изменила свое поведение? — спрашиваю я ее.

— Конечно хочу.

— Но разве она изменится, если вы будете на нее злиться?

— Я знаю, что не изменится. Но я не могу по-другому.

— Не можете или не умеете?

— Скорее не умею.

— А как вы думаете, — спрашиваю я женщину, -что ваша племянница показывает вам своим поведением?

— Только свою невоспитанность, что же еще!

— Скажите, а как вы сами относитесь к своей свекрови?

— Нормально. А как еще я могу к ней относиться?
Старый, больной человек.

— А ведь в прошлом, — говорю я, — у вас с ней было много конфликтов.

— Да, мы много ссорились и ругались. А откуда вы это знаете? — спрашивает она удивленно.

_ Я также знаю, что у вас в душе по-прежнему есть обиды на свою свекровь. И теперь вы вынуждены к ней ходить и ухаживать за ней, но делаете это мз чувства долга. Вы как бы «отрабатываете» свою агрессию к ней. А племянница своим поведением показывает вам, как вы сами относитесь к свекрови. Так что не злиться нужно на нее, а благодарить. Она прекрасный урок преподносит вам.

— Да, доктор, пожалуй, вы правы.
Пациентка о чем-то задумывается.

— Я думаю, — продолжаю я, — что, как только вы измените свое отношение к свекрови, у вас тут же на ладятся отношения и с племянницей.

В настоящее время существует множество способов активной очистки печени и кишечника с помощью голодания, диет, клизм. Они действительно эффективны, но действие их кратковременно, так как не устраняется причина. Ведь клизмой не изменишь характер.

Я знаю из своей практики, что применение гомеопатических средств и освобождение от старых мыслей растворяют камни и очищают печень и желчный пузырь навсегда. Я был свидетелем, как после чистки подсознания от агрессивных мыслей у людей исчезали бесследно довольно крупные камни.

Причины болезней печени и желчного пузыря - Целительство - Самопознание - Каталог статей

Юпитер

Главная точка действия Юпитера в теле человека - печень. В ней в форме гликогена накапливается сахар, пока он не потребуется как топливо для мышечной деятельности. Она же выводит из крови яд и чужеродные вещества. Ее правильное функционирование так важно для здоровья, что перебои в ее работе приводят к серьезным заболеваниям.
Астрологически Юпитер представляет болезни, возникающие от застоя или закупорки в артериальной системе, нарушений, связанных с жирами или гликогеном, и патологии производства и выделения инсулина поджелудочной железой.
Юпитер покровительствует Стрельцам, Рыбам и Ракам. При отклонении от линии судьбы уязвимыми становятся двигательные центры, бёдра, таз, ягодицы, печень, кроветворная и кровоочистительная система.
Чакра Юпитера - Сахасрара-падма - чакра ("Корона"/Тысячелепестковая. Проекция: макушка головы).


Основными задачами печени являются производство и накопление энергии, обмен веществ и вывод ядов из организма. Печень оценивает, что для нас приемлемо, а что нет. Поэтому и в душевно-духовной области она имеет дело с оценкой, а также с мерой и неумеренностью. Кроме того, она преобразует растительный и животный белок в человеческий, причём основные строительные элементы остаются прежними. Можно сказать, что печень производит из более низкой формы более высокую и потому символизирует область высшего развития и эволюции. В этом процессе составные элементы белка, то есть основной материал, сохраняются, изменяется лишь его структура, форма его манифестации. Аналогично тому, как в творении различные формы проявления являются лишь различными формами манифестации единого, лежащего в их основе бытия. Печень указывает нам и на эти взаимосвязи и потому находится во взаимоотношениях с "религией", обратной связью с первопричиной, первоосновой.

- Если у вас проблемы с печенью, вы должны спросить себя, в какой области вы неумерены? Где существует нечто, что вы не можете более переносить, что, возможно, даже ядовито для вас? Являются ли ваши масштабы оценки происходящего ещё допустимыми или вы раздражаетесь и жалуетесь по поводу многих вещей? У вас слишком высокие идеалы? А как дела со связью с вашей внутренней сущностью? Ответ на эти вопросы покажет вам направление, в котором вы можете найти истинные причины неполадок с печенью.
Истина - это простота, поэтому освободитесь от всего, чего у вас слишком, тогда вы сможете найти в себе самих свободу, понимание, любовь и доверие к жизни.

Болезни печени – гнев; хронические обиды; оправдание самого себя; постоянное плохое настроение.
Проблемы в работе печени (В. Жикаренцев) – хронические жалобы на все; нахождение оправданий придиркам, чтобы обмануть себя; постоянно плохо себя чувствуете.
Новый подход, новая гармонизирующая мысль: Я выбираю жить через открытое пространство моего сердца. Я ищу любовь и нахожу ее везде.
Заболевания печени (Л. Хей) – постоянные жалобы; оправдывание собственной придирчивости и тем самым обманывание себя; плохое самочувствие.
Новый подход, новая гармонизирующая мысль: Отныне я живу с открытым сердцем. Ищу любовь и повсюдунахожу ее.
Печень (В. Жикаренцев) – место расположение гнева и примитивных эмоций.

Древняя китайская медицина связывала болезни печени с гневом, повышенной раздражительностью.

Современная медицина утверждает, что именно в этом органе локализуется злость, раздражение, гнев, ненависть, примитивные чувства.

Жестокие люди чаще всего бесстрашны, им неведомо ощущение боли. Компьютерные исследования мозга несовершеннолетних убийц в США показало, что у них отсутствует активность нервных клеток в лобных долях мозга, отвечающих за интеллект человека.
При повреждении гена гемохроматоза ("ген агрессивности") железо из гемоглобина-белка наших красных кровяных клеток - не выводится через печень из организма, а откладывается в тканях, в частности в коже. Вследствие нарушения обмена железа страдают печень, суставы, развиваются диабет и опухоли.
Гемохроматизмом чаще всего страдают мужчины. Лучшее лечение при этом заболевании - периодические кровопускания, которые практиковали врачи прошлого, чтобы улучшить состояние гневных и раздражительных больных. Избежать гемохроматоза помогает и умеренное потребление мяса, в котором очень много железа,- недаром вегетарианцы часто отличаются кротким и спокойным нравом.


У женщин же гемохроматоз развивается обычно в период климакса, то есть после прекращения менструаций. До этого периода у женщин работает биологический "клапан", освобождающий их от избытков железа.

Гепатит - это воспаление печени, вызванное инфекцией, химическими веществами или вирусом. Воспаление печени указывает на существующий конфликт. Спроси себя, где ты из-за нехватки объективной оценки испытываешь страх, злость и досаду? Где ты стал односторонним и неумеренным?

- Воспаление печени принуждает вас к покою и самоограничению. Используйте это время и отрешитесь от всего: от критики, злости и старых концепций. Так ваше сознание выйдет очищенным из этой ситуации. Вы получите шанс на действительно новое начало. Пусть оно придёт!

Гепатит - гнев, ненависть. Гепатит (В. Жикаренцев) – сопротивление переменам; страх, гнев, ненависть. Печень - место расположение гнева и ярости.
Новый подход, новая гармонизирующая мысль: Мой ум чист и свободен. Я отпускаю прошлое и принимаю в свою жизнь новое. Все идет прекрасно.

Желчный пузырь

Желчный пузырь - это полый орган, который содержит поступающую из печени желчь и не дает ей вытекать в кишечник в перерывах между перевариванием пищи. Во время переваривания пищи желчный пузырь открывается и выбрасывает желчь через желчный проток в двенадцатиперстную кишку. Желчь необходима для того, чтобы кишечник мог поглощать из пищи жиры.
Наиболее распространенной проблемой, связанной с желчным пузырем, является образование в нем небольших камешков («песка») или одного большого камня, перекрывающего желчный проток. Человек боится, что у него что-то отберут. Он чувствует, что кто-то пытается вторгнуться на его территорию.

Желчные камни - горечь, тяжёлые мысли, гордыня. Гнев делает человека больным, «желчным», а «желчный» человек испытывает всё больше негативных эмоций.
Горечь, жестокие мысли и накопившаяся агрессивность окаменели. Вероятно, вы живёте под каким-то гнётом.
- Откройтесь сладости жизни. Оставьте прошлое позади. Это полностью зависит от вас, будете ли вы и в дальнейшем жить в горечи или откроетесь настоящей любви.

Желчно-каменная болезнь (Л. Хей) – горечь; тяжелые мысли; проклятия; гордость.
Новый подход, новая гармонизирующая мысль: От прошлого можно с радостью отказаться. Жизнь прекрасна, я тоже.
Желчные камни (В. Жикаренцев) – горечь; тяжелые мысли; осуждение, порицание; гордыня, спесь.
Новый подход, новая гармонизирующая мысль: Во мне присутствует радостное освобождение от прошлого. Жизнь прекрасна, и я тоже.

Желчь расщепляет грубые структуры.
Ферменты поджелудочной железы расщепляют тонкие структуры.

В желчном пузыре скапливается гнев. Желчь являет собой гнев. Гнев происходит от ощущения беспомощности, из-за того, что человек не может делать того, чего желает, когда желает и как желает. Разгневанный человек не признает, что самым большим препятствием является он сам. Видит он только других, не себя. Поскольку мы живем также и в физическом мире, то выходит, что гнев неизбежен. Важно его высвободить в начальной стадии, а не держать при себе, взращивая в огромную сокрушительную силу. Размашистая поступь и легкость в работе, даже если кому-то это не нравится, способствуют высвобождению гнева в зачатке. Человек, который старается потрафлять чужим желаниям, блокирует свое естественное движение, в результате чего желчь перестает вырабатываться во время приема пищи, как ей положено, либо вырабатывается, но не так, как надо. О подобном образе мыслей свидетельствует светлый цвет кала.

Желчь поступает из печени. Если в печени засело желание сокрушить и уничтожить все плохое, то желчь крушит и уничтожает пищу, отказывая ей в любви. Додумайте сами, что тело сможет усвоить из такой пищи. Тело нуждается в дружелюбном распределении - белки в одно место, жиры в другое, углеводы в третье. Это повышает эффективность и быстроту процесса переваривания. Из-за гнева же тело вынуждено из кучи мусора выискивать то, что ему необходимо. Даже обитатель свалки не в силах рассортировать всю гору мусора. Как же может справиться с этим тело? Неотсортированный мусор остается гнить в куче. Слизистая пищеварительного тракта должна смириться с подобным унижением. Должна, но смиряется ли - вопрос другой.

Кто во время еды отрекается от своей естественности в угоду утонченным манерам, у того нарушается естественное выделение желчи. Кто жрет как свинья, у того она точно выделяется. По-свински ест тот, в ком назрел протест против фальшивой благовоспитанности. Своими манерами за столом он желает выразить свой протест, желает спровоцировать конфликт, который вывел бы правду наружу. Чем протест сильнее, тем желчи выделяется больше. У человека, ведущего себя подобным образом, кал наверняка имеет темно-коричневый цвет.

Чрезмерное выделение желчи вызывает отрыжку. Отрыжка может сопровождаться столь противным запахом желчи, что с таким человеком никто не желает есть за одним столом. Это является прекрасным средством отпугивания неприятных людей, в обществе же людей приятных отрыжка заметно уменьшается, а если протест не чрезмерен, то и вовсе проходит.

Все, что человек в себе сдерживает, когда-нибудь перехлестывает через край. Порыв гнева вызывает конвульсивное опорожнение желчного пузыря, за чем следует отрыжка, которая ставит интеллигентного человека в очень неловкое положение. Во время еды это было бы еще простительно, но только не в ходе важного разговора. Отрыжку может вызвать любая напряженная ситуация, не имеющая никакого отношения к еде.

Желтуха – зависть, ревность, гнев, злость.
Желтуха (Л. Хей) – внутренняя и внешняя предвзятость; односторонние выводы.
Новый подход, новая гармонизирующая мысль: Я терпимо, сострадательно и с любовью отношусь ко всем людям, включая себя.
Желтуха характеризуется повышенным содержанием в организме билирубина - оранжево-коричневого пигмента желчи. При желтухе билирубин откладывается в тканях, придавая желтоватую окраску коже, слизистым оболочкам и склерам глаз. Желтуха часто сопровождается гипертрофией селезенки и анемией.
С усилением гнева человек начинает всё чаще срываться. Кто скрывает кипящий внутри гнев за улыбчивой маской, у того желчь выплескивается в кровь. От желчных пигментов слизистая и кожа окрашиваются в жёлтый цвет. Подобно тому как к разгневанному человеку, который оскверняет любовь своей желчной злобой, эта самая злоба рано или поздно возвращается, так и желчь, вырабатываемая печенью, совершает круг и возвращается в печень, и печень заболевает.

Злоба на государство

Печень больна, если человек ненавидит государство. Ненависти предшествует ситуация, когда человек желает от государства что-то получить, но не получает и оскорбляется. Знание, что от государства все равно ничего не получишь, может сохраниться у человека еще от предыдущих жизней. Соответственно этому представлению он выбирает себе родителей, мыслящих подобным же образом, и в итоге печень у него заболевает еще в детстве. Кто клянет государство на чем свет стоит, тот клянет нездоровые ощущения всякий раз, когда они возникают, и печень у него не заболевает в полном объеме. Кто любит позабавить людей рассказами о свинских делах государства, тот должен быть осторожным в отношении еды и питья, иначе его вновь скрутит приступ печени.

Печень выводит из тела материализованную злобу и гнев. Их выведение блокируется страхом - страхом перед государством. Не будь этого страха, не было бы и ненависти к государству. Человек относился бы к государству с пониманием, ибо оно необходимо. Все болезни можно излечить, если сохраняется очистительная функция печени. Если же печень полностью отказывает, то для смерти иной болезни уже не нужно.

Как только прекращается выведение из тела ненужных продуктов жизнедеятельности, а значит, прекращается высвобождение злобы, оно же обращение плохого в хорошее - ведь в принципе все это одно и то же - так тело умирает, чтобы духовный человек не погиб от рук земного губителя.

Следовательно, если кто зол как черт на одного человека либо нескольких людей, однако почитает государство и родину, как святыню, тот исцеляется от какой угодно тяжелой болезни. Если кто-то, например, некий государственный деятель, выводит его из себя, и он отождествляет этого человека с государством, то злоба на государство в тот же миг принимается подтачивать его печень. Чем больше число тех людей, которых Вы считаете плохими, тем больше в Вашей печени плохого, ибо не кто иной, как люди, и образуют государство. Подумайте хорошенько о своем отношении к государству. Проведите параллели со своим здоровьем. Задумайтесь о болезнях, бытующих в кругу Ваших знакомых - Вам ведь известен склад мыслей этих людей. Сейчас во всем мире большое число чрезвычайно тяжелых болезней, но мы этого не замечаем, поэтому в проблемах своей страны мы виним государство.

Государство может быть каким угодно, но злоба человека к государству обитает в самом человеке и разрушает человека ровно в той же степени, в какой человек желает это государство разрушить. Государство не может сделаться лучше, если от него только требуют и ничего не дают взамен. Если человек желает, чтобы его государство перестало существовать, то гибнет его печень. Вместе с печенью гибнет и тело, чтобы одним разрушителем государства стало на свете меньше. Государство нельзя сокрушить, его нужно изменять. Когда человек меняется сам, для него меняется и государство.

Если человек боится за государство, у него уменьшается печень.
Если человек злится на государство, его печень увеличивается.

Испуганный человек боится за государство, ибо от благополучия государства зависит его собственное благополучие. Страх вынуждает подмечать все, что составляет угрозу государству. Если желание быть хорошим не дает человеку излить свою желчь по поводу разрушения государства и унижения его граждан, то у него заболевает печень. Желчные протоки сужаются, если человек не желает выплескивать горечь, и желчь вынуждена проникать в кровь. Иного выбора у желчи нет. Собственное унижение притягивает чужую униженность, и в совокупности они образуют воспаление.

В государстве от этого ничего не меняется, однако человек со страхами попадает в еще большую зависимость от положения дел в государстве, ибо страх за государство растет. Чем страх сильнее, тем сильнее уплотняется в печени соединительная ткань, которая еще больше сужает желчные протоки. У человека, беспокоящегося за положение дел в государстве, печень может стать точно такой же, как само государство, и может случиться, что государство даст человеку новую печень. Взаимная приязнь оборачивается заботливостью.

Если же человек продолжает мыслить по-старому, то и новая печень держится недолго. В пересаженной печени развивается та же болезнь, из-за которой собственная печень оказалась непригодной. У кого страх за государство превращается в злобу на государство, тот зарабатывает прямо противоположные болезни, и тому государство новую печень не предлагает. И правильно делает, ибо такой человек новую печень не примет.

Печень, как и любой другой орган, не кусок мяса, который переносят из одного живота в другой. Печень также обладает сознанием, которое воспринимает то, как к нему относятся как к символу государства. Если сам человек этого не знает, печень его наставляет. Пересаженная печень не заболевает сразу после пересадки лишь в том случае, если личность донора оказывается сильнее личности реципиента. В этом случае с пересадкой печени у человека меняется характер. Меняется вплоть до неузнаваемости, да так, что человек уже не вписывается в собственную семью. Особенно если семья враждебна к государству.

Когда нас кто-то обижает, мы ждем помощи от государства. Если оно не бросается тут же на помощь, мы недовольны.
Когда я говорю пациенту с больной печенью, что печень символизирует государство, он отрицает какую-либо злобу на государство. Когда я говорю ему, что он ненавидит несправедливость, он с жаром соглашается. Человек не понимает, что он отождествляет государство и несправедливость. Государство для него - творец законов, оно призвано обеспечивать благополучие своих граждан. Если не обеспечивает, значит, оно несправедливо. Опасаясь худшего, человек старается не злиться на государство, однако не может не злиться на несправедливость. Из страха перед государством человек не смеет выражать протест, что усиливает печаль из-за своей беспомощности. Сам же протест подавляется страхом прилюдно обнаруживать собственные ошибки и заблуждения. Так беспомощного человека одолевает бессильная злоба, она же печаль.
См. Злоба на государство.

Печень - это средоточие злобы и гнева. Любая злоба начинается из-за беспомощности перед своими проблемами. Поскольку печаль являет собой скопление жидкости и отечность, то печень отекает. Стремясь скрыть свое жалкое положение в вопросе о несправедливости, человек желает скрыть от чужих взоров выпирающую наружу печень, его тянет загородить живот руками либо втянуть его в себя - лишь бы никто не заметил. Обе позы притягивают к себе внимание. Гордость не может этого допустить.

И гордый человек распрямляется, недоумевая, отчего так больно и нехорошо мышцам спины. Хочется сесть, развалясь поудобнее, тогда легче будет дышать. Устраивается, и впрямь становится легче. Подобное решение проблемы входит в привычку, и человек, вместо того чтобы двигаться, сидит сиднем, забившись в укромный уголок.

Все как будто в порядке. Отгоняя печальные мысли, человек не замечает собственных тяжких вздохов, которые свидетельствуют о чувстве вины. Замечают домашние, но когда спрашивают, в чем причина, человек отвечает, что все в порядке, только вот на душе тревожно от всеобщей несправедливости. Так человек заглушает печаль, и та превращается в тревогу. Отечность в печени уплотняется. А все потому лишь, что человек ждет, когда же восторжествует справедливость и повсюду будет наведен порядок. Чтобы устранить несправедливость, нужно заявить о ней во всеуслышание, и человек принимается жаловаться в полный голос. Чем громче в нем говорит обида на врачей, которые не могут излечить его от болезни, тем сильнее поражается печень. Чем больнее печень, тем невозможнее вылечить человека от какой бы то ни было болезни.

Если из всех Ваших злоб наибольшей является печаль из-за несправедливости, то Ваше нездоровье ограничится отеком печени и более серьезной болезни уже не последует. Если Вы признаетесь в своей печали и не будете стараться ее заглушить, то не дадите повода для образования камней. Если Вы не лелеете втихомолку свою печаль, терпеливо дожидаясь конца несправедливости либо крушения государства, то не будет причины для возникновения рака. Вы просто-напросто делаетесь человеком, которого переполняет печаль из-за увеличенной печени. Если освободить печаль по поводу несправедливости, то пройдет и это.

Цирроз печени. Ты уже перешёл на следующую ступень эскалации проблем. Очевидно, ты ничему не научился от прежних болезней, не сделал соответствующих выводов, в твоём внутреннем мире ничего не изменилось, твоё мировоззрение осталось прежним. Поэтому тело предъявляет тебе последнее требование - и только от тебя зависит, повернёшь ли ты руль на сто восемьдесят градусов.
Когда человек попадает в зависимость от государственной власти, развивается цирроз печени, при котором в печени разрастается соединительная ткань, характеризующаяся функциональной недостаточностью. Печаль из-за зависимости от государственной власти, она же жалость к своему государству, скапливается в брюшной полости в виде жидкости, в результате чего возникает асцит - водянка живота. Кто, несмотря на сожаление, все же любит свое государство, тот может прожить с циррозом долгие годы, если врачи удаляют жидкость из брюшной полости.

Приступы злобы, вспыхивающей против государства, отзываются вспышками метастазов в печени, ибо государство - это мы сами. Повторяю еще раз: засевшая во мне злоба - это моя злоба, и прежде всего, а также больше всего она вредит мне самому.

Человек желает быть человеком и требует, чтобы государство этому способствовало. И если государство этого не делает, он считает себя вправе требовать, ибо знает свои права. Как было бы чудесно, если бы кто-то, но не я сам, сделал из меня человека. Нежелание быть таким, какой я есть, и желание попасть в мир, где нет забот, приводит человека к наркотикам.

Распространение в среде наркоманов желтухи указывает на ту желчь, какую у человека вызывают большие людские массы, а значит, государство. Можно ли изменить государство в лучшую сторону? Нельзя, если каждый из нас не сделает из себя человека. Прежде чем что-либо требовать от государства, нужно ему отдать. Что отдать? В первую очередь, любовь, тогда мы способны постичь суть момента и сообразоваться с возможностями. Небольшие возможности позволяют сделать большое дело, если делать надо. Если же мы пока не начали делать, значит, в том нет необходимости - время не приспело.

Злоба против государства и несправедливости может проявляться весьма своеобразно. Например, одна женщина заболела желтухой, когда муж стал прикрывать свои отлучки из дома государственной работой, тогда как на самом деле посещал любовницу. Женщина давно подозревала, что у мужа кто-то есть, и не находила себе места, выискивая вину всех сопричастных, в том числе и свою. К сожалению, винила она всех.

Скопившаяся в печени злоба, которую она понемногу выплескивала в порывах гнева, застревала в печени и бурно разрослась, когда женщина возненавидела государство из-за мужниной лжи. Человека можно обругать в лицо, но как обругать в лицо государство? Чтобы избавиться от злобы на государство, нужно бы обругать в лицо каждого его гражданина, но поскольку это нереально, человек от ненависти заболевает. Гнев не нашел выхода, но зато нашел вход.

Жажда мести, направленная против государства, вызывает кровотечение в печени. Если человек желает продемонстрировать свою жажду мести на людях, кровь выступает на поверхность печени. Находящиеся под капсулой печени гематомы, то есть застарелые кровоизлияния, проходят, лишь когда человек высвобождает желание отомстить государству. Поскольку зло порождает зло, число гематом возрастает.

В ком вспыхивает желание отомстить государству, но он боится это желание обнаружить, у того гематомы образуются в ткани печени и потому легче рассасываются. Зачастую эти участки прорастают соединительной тканью. Это значит, что из-за своей вспышки человек попадает в зависимость от государства. Они оба - как печень, так и государство - имеют жизненно важное значение, и без них нам на нынешней стадии развития пока не обойтись.

Если Вы открыто желаете зла государству, сидеть Вам за решеткой за государственную измену. Откровенная злонамеренность сродни злодеянию. Если желаете зла государству в глубине души, заработаете рак печени. Тюрьма она и есть тюрьма, земная ли, как в первом случае, духовная ли, как во втором. Выпустят ли Вас из тюрьмы, зависит от Вашего отношения к государству. Если Вас выпустили, а Вы своей злонамеренности не высвобождаете, все повторяется сначала, но уже гораздо суровее. Злонамеренность по отношению к одному гражданину государства равнозначна злонамеренности по отношению к одной клетке печени. Болезни как раз и начинаются с одной клетки, как и преступления начинаются с одного незначительного проступка.

Печень расположена под грудобрюшной преградой, то есть под диафрагмой. О диафрагме Вы, скорее всего, почти ничего не знаете. Между тем Вам знакома икота, а она вызывается судорожными сокращениями диафрагмы. Ну а о том, что диафрагма - это жизненно важный орган, без которого не прожить, как не прожить без сердца, Вы и не догадываетесь. Заболевание печени всегда связано со стрессами диафрагмы, то есть с ее поражением.

Печень - это вместилище вспыльчивости, гнева и ярости. Еще со времен Гиппократа и Аристотеля выделяют четыре ионических темперамента: холерический, меланхолический, флегматический и сангвинический. Вспыльчивый человек, или холерик, – это человек с желчным темпераментом.

Люди с заболеваниями печени и желчного пузыря подавляют в себе гнев, раздражение и злость на кого-либо. Подавленные эмоции сначала вызывают воспаление желчного пузыря и застой желчи, дискинезию желчных путей, а со временем эти невыраженные горькие чувства откладываются в виде камней. Ведь, как правило, люди считают дурным тоном выражать свои агрессивные эмоции. Лучше они их будут сдерживать в себе.

Такие люди склонны критиковать себя и других. Люди с больной печенью часто имеют больные суставы, которые ответственны за приведение агрессивных чувств в действие. А это приводит к их воспалению. Они также бывают переполнены горькими мыслями (от этого бывает горечь во рту, особенно утром). Но их гордость мешает им избавиться от старых гневных и горьких мыслей. Они постоянно жалуются и оправдывают собственную придирчивость.

Желчекаменная болезнь

Камни в желчном пузыре символизируют накопленные горькие и гневные мысли, а также гордость, которая мешает вам избавиться от них. Камни – это горечь, тяжелые мысли, проклятия, гнев и гордость, накопленные в течение нескольких лет. А колики – это раздражение, нетерпение и недовольство окружающим, достигшие пика. Ведь мы знаем, что мысли материализуются. Вот это и есть материальный субстрат всех этих пагубных мыслей.

Одна моя пациентка, у которой недавно были приступы желчной колики, рассказывала со злостью о своей племяннице:
– Вы представляете? Ей еще и семнадцати не исполнилось, а она со мной грубит, хамит, ведет себя отвратительно. Была бы моя воля, придушила бы
– А она с вами живет? – спросил я ее.
– Нет, она живет с бабушкой, матерью мужа. Она учится у нас в университете, а родители ее в Хабаровском крае. И она должна присматривать за бабушкой, уже старенькой, ухаживать за ней, чтобы получить квартиру по наследству. Но ничего не делает. И мне приходится идти после работы к матери мужа и все делать самой. А у племянницы только гульки на уме.
– Вы хотите, чтобы ваша племянница изменила свое поведение? – спрашиваю я ее.
– Конечно хочу.
– Но разве она изменится, если вы будете на нее злиться?
– Я знаю, что не изменится. Но я не могу по-другому.
– Не можете или не умеете?
– Скорее не умею.
– А как вы думаете, – спрашиваю я женщину, – что ваша племянница показывает вам своим поведением?
– Только свою невоспитанность, что же еще!
– Скажите, а как вы сами относитесь к своей свекрови?
– Нормально. А как еще я могу к ней относиться?
Старый, больной человек.
– А ведь в прошлом, – говорю я, – у вас с ней было много конфликтов.
– Да, мы много ссорились и ругались. А откуда вы это знаете? – спрашивает она удивленно.
– Я также знаю, что у вас в душе по-прежнему есть обиды на свою свекровь. И теперь вы вынуждены к ней ходить и ухаживать за ней, но делаете это мз чувства долга. Вы как бы «отрабатываете» свою агрессию к ней. А племянница своим поведением показывает вам, как вы сами относитесь к свекрови. Так что не злиться нужно на нее, а благодарить. Она прекрасный урок преподносит вам.
– Да, доктор, пожалуй, вы правы.
Пациентка о чем-то задумывается.
– Я думаю, – продолжаю я, – что, как только вы измените свое отношение к свекрови, у вас тут же на ладятся отношения и с племянницей.
В настоящее время существует множество способов активной очистки печени и кишечника с помощью голодания, диет, клизм. Они действительно эффективны, но действие их кратковременно, так как не устраняется причина. Ведь клизмой не изменишь характер.
Я знаю из своей практики, что применение гомеопатических средств и освобождение от старых мыслей растворяют камни и очищают печень и желчный пузырь навсегда. Я был свидетелем, как после чистки подсознания от агрессивных мыслей у людей исчезали бесследно довольно крупные камни.

Список литературы:
1. Валерий Синельников - Возлюби болезнь свою.
2. Лууле Виилма - Прощаю себе.

Лечение заболеваний печени

Печень поглощает всю черноту, скопившуюся в человеке.
Как определить, здоровая печень или больная?
Если у человека белки глаз с желтизной, то печень больна.
Если под ребрами с правой стороны печень дает о себе знать коликами, то это тревожный сигнал.
Если колет, то нельзя заниматься самолечением, лучше обратиться к врачу.
Печень подает предупредительные сигналы задолго до начала болезни, за несколько лет.

Печень может легко восстановиться до прежних размеров, даже если от первоначального объема осталась всего одна восьмая часть этого человеческого органа.
Печень - орган ночной, поэтому на ночь нежелательно есть.
Печень реагирует на атмосферное давление, при падении давления происходят приступы боли в печени, которые чаще повторяются ближе к ночи.
Летом печень чувствует себя гораздо хуже.

Перед лечением с любым органом нужно разговаривать. У каждого органа есть свой характер. К примеру, с сердцем нужно разговаривать мягко, нежно, терпеливо. Печень очень строптива, поэтому с ней нужно разговаривать с помощью угроз: «Смотри, я тебе сейчас!»
Печень очень капризна. Она фильтрует не только кровь, но и всю черноту вокруг нас. Единственный орган в теле человека, который отслеживает черную энергетику.
Чернота из людей выходит вместе со рвотой.

При циррозе печени нельзя употреблять спиртное и курить, надо вести спокойный образ жизни и как можно меньше нервничать.
Печень любит отдыхать с 9 вечера до 6 утра. Нельзя смотреть на ночь стрессовые фильмы, потому что печень отслеживает все эмоции.

Цирроз печени следует лечить так:
Молочный китайский гриб добавляют в свежее молоко. После прокисания на поверхности молока образуется «шапка». Собираете эту «шапку», процеживаете и каждое утро выпиваете натощак по 200 граммов, не меньше. Лечение проводить не менее чем полгода. Каждый день готовить новый раствор.

Для профилактики цирроза обязательно нужно чистить печень под наблюдением врачей.

Рецепт чистки печени сахаром с сорбитом.
Утром натощак выпиваете стакан теплой воды, в которой растворены 3-4 ложки сорбита. Ложитесь на теплую грелку на два часа, таким образом печень очищается. Но этот способ можно использовать только в целях профилактики. Для больной печени это не годится.


Метафизические причины болезней.

Болезни почек и мочевого пузыря.
Алкоголизм и наркомания.
Болезни органов пищеварения.
Болезни поджелудочной железы.
Причины избыточного веса. Ожирение.

Copyright © 2015 Любовь безусловная


Лечение болезней печени и желчного пузыря

Заболевания печени, желчного пузыря и желчных протоков бывают острыми и хроническими, острые состояния, такие как острый холецистит, острый гепатит, желчная колика, требуют немедленного обращения за медицинской помощью в стационар. Лечение хронических заболеваний печени и желчного пузыря в нашем центре начинается с консультации гастроэнтеролога.

Часто многие заболевания желчного пузыря и особенно печени протекают без ярко выраженных симптомов и обнаруживаются, когда гепатобилиарной системе нанесен уже достаточно серьезный урон и течение заболевания становится тяжелым и труднообратимым. Поэтому мы всем рекомендуем хотя бы раз в год делать УЗИ печени и желчного пузыря и посещать гастроэнтеролога или гепатолога. Это не потребует много времени и средств, зато позволит обнаружить заболевания печени и желчного пузыря на ранней стадии, когда их можно проще и быстрее вылечить или добиться стойкой ремиссии.

Самые распространенные заболевания желчного пузыря – это хронический холецистит (воспаление желчного пузыря)  и желчнокаменная болезнь. Часто эти заболевания взаимосвязаны,  образование камней в желчном пузыре может вызвать его воспаление, и наоборот длительный воспалительный процесс в желчном пузыре приводит к образованию камней. В нашем центре мы проводим комплексное обследование и лечение пациентов с желчнокаменной болезнью без операции, если есть возможность проведения такой терапии. При неоходимости возможна консультация гастроэнтеролога совместно с хирургом для решения вопроса о наличии показаний для оперативного лечения.  Деформация желчного пузыря – это распространенная патология, которая бывает врожденной или приобретается на протяжении жизни человека и требует лечения при наличии неприятных симптомов.

Заболевания печени подразделяются на группы, согласно, вызвавшей их причины и стадии поражения печени. Самым распространенным заболеванием среди хронических болезней  печени является неалкогольный жировой гепатоз. Основным признаком этого заболевания является накопление жира в клетках печени. Заболевание часто протекает без выраженных симптомов, поэтому пациенты с жировым гепатозом за помощью обращаются редко, да и многие врачи плохо знакомы с этим заболеванием. Опасность жирового гепатоза в том, что при почти бессимптомном течении у части пациентов к  жировому гепатозу присоединяется воспаление клеток печени – стеатогепатит, который может привести к возникновению цирроза печении онкологических заболеваний. Кроме того у таких пациентов повышается риск развития сахарного диабета 2-типа, сердечно-сосудистых заболеваний, хронической болезни почек и остеопороза. Согласно последним рекомендациям Российского общества по изучению печени неалкогольный жировой гепатоз и стеатогепатит объединены в одно заболевание под названием неалкогольная жировая болезнь печени.

Алкогольная болезнь печени развивается из-за злоупотребления алкоголем, главным условием ее лечения является отказ от алкоголя. У 90-95% людей, постоянно злоупотребляющих алкоголем, развивается алкогольный жировой гепатоз, по гистологическим признакам похожий на неалкогольный. Это состояние почти всегда обратимо при условии отказа от алкоголя, в противном случае  болезнь прогрессирует и у части больных развивается цирроз и рак печени.

Поражение  печени могут вызывать не только отложение жира и алкоголь, но и накопление   высоких уровней меди или железа, вызванных генетическими заболеваниями. Наши гепатологи и неврологи имеют опыт лечения генетических заболеваний, связанных с нарушением транспорта меди и железа в организме человека.Болезнь Вильсона-Коновалова связана с накоплением высоких уровней меди в органах и тканях, приводящих к повреждению их клеток и вызывая нарушение функций поврежденных органов.  Наследственный гемохроматоз выражается в постепенном накоплении железа в органах, эндокринных железах и коже. И в том, и в другом случае  поражается печень. Своевременная установка диагноза и лечение этих заболеваний устраняют или предотвращают их симптомы, без лечения такие заболевания заканчиваются смертью.

Самые распространенные заболевания желчного пузыря – это хронический холецистити желчнокаменная болезнь. Часто эти заболевания взаимосвязаны,  образование конкрементов в желчном пузыре вызывает его воспаление, и наоборот длительный воспалительный процесс в желчном пузыре приводит к образованию конкрементов. В нашем центре мы проводим комплексное обследование и лечение пациентов с желчнокаменной болезнью. Тут же решая совместно с хирургом вопрос о наличии показаний для оперативного лечения.

В 40% случаев после удаления желчного пузыря у пациентов появляются боли в животе и нарушения в работе желудочно-кишечного тракта получившиеся название Постхолецистэктомический синдром (ПХЭС). Причиной этих явлений являются с одной стороны влияние выпадения функций желчного пузыря и наличие органических и функциональных причин нарушения транспорта желчи. Правильно подобранные лечебная терапия и диета помогут избавиться от неприятных симптомов ПХЭС.

Читать книгу Учебник Хозяина жизни. 160 уроков Валерия Синельникова Валерия Синельникова : онлайн чтение

Урок № 77

О чём сигнализируют проблемы с лимфатической системой

Лимфатическая система очень тесно связана с кровью, поэтому заболевание лимфатической системы – это предупреждение о том, что следует переориентироваться на самое главное в жизни – любовь и радость.

Воспаление лимфатических узлов (мононуклеоз) чаще встречается у детей. Оно сигнализирует о том, что из жизни ребёнка и родителей уходят любовь и радость.

Урок № 78

О том, какую позитивную роль играют болезни органов дыхания

Лёгкие олицетворяют способность брать и давать энергию Жизни. Проблемы с лёгкими возникают из-за нашего нежелания или страха жить полной жизнью, «дышать полной грудью». Что-то мешает вам брать от жизни всё, что необходимо, и отдавать себя полностью этому миру. Какие-то ваши мысли и эмоции буквально «давят на грудь» и не дают вздохнуть свободно. Пневмония, туберкулёз, рак, пневмоскпероз – это лишь разные проявления скрытого подсознательного нежелания жить в этом мире.

К воспалению лёгких приводит отчаяние, усталость от жизни. В вашей душе растут эмоциональные раны, и им не дают залечиться.

Бронхит – это отражение невысказанного гнева и претензий.

В семье очень нервозная атмосфера, нет мира и гармонии. Споры, ругань, крики. Редкое затишье. В таких случаях дети являются очень чуткими индикаторами атмосферы в семье. Они тут же реагируют заболеваниями верхних дыхательных путей.

Кашель – это желание рявкнуть на весь мир и заявить о себе: «Посмотрите на меня! Послушайте меня!» В таком случае научитесь выражать свои чувства, не подавляйте в себе эмоции. Смело говорите то, что вы думаете. В некоторых случаях кашель выполняет функцию своеобразного тормоза. Если вы осуждаете поведение людей, высказываете вслух недовольство и критику, то кашель «помогает» вам сохранить хорошие отношения с другими людьми и научиться выражать вслух только одобрение.

Астма – это подавленный всхлип, и часто его источником является какой-то детский конфликт, связанный с матерью; например, так и не осуществлённое желание ребёнка признаться матери в каком-то своём проступке. Астма – это попытка выразить то, что никаким другим путём выразить невозможно. Вы подавляете в себе определённые эмоции. У вас нет эмоционального самоконтроля. Такие люди не способны дышать для собственного блага, наслаждаться жизнью. Астма у детей – это боязнь жизни, сильный подсознательный страх, нежелание быть здесь и сейчас. У таких детей, как правило, сильно развито чувство совести – они за всё принимают вину на себя.

К туберкулёзу приводят такие эмоции, как депрессия и печаль, уныние и тоска. Они появляются из-за того, что в подсознании за многие годы накопилась агрессия на мир и людей, на жизнь и судьбу, и эта агрессия не даёт жить и дышать полной грудью. Такие люди не хотят или не могут воспринимать жизнь. Они не живут полной, полноценной жизнью. Какой совет дают врачи туберкулёзникам в первую очередь? Дышать свежим и чистым воздухом и хорошо питаться, то есть полноценно. Я заметил, что туберкулёзу подвержены люди, у которых сильно развито чувство собственничества. Именно когда у них забирают то, к чему они сильно привязались, возникает нежелание жить. Тут же встаёт вопрос о смысле жизни.

?

Горло символизирует нашу способность постоять за себя, попросить то, что мы хотим, заявить о себе и своих желаниях. Состояние горла отражает состояние наших взаимоотношений с людьми.

Если у вас прекрасные отношения с близкими, то горло всегда будет здоровым.

Горло – это тот участок организма, где сосредоточена наша творческая энергия. Через него проходит канал экспрессивности и творчества. С этой областью связано самовыражение человека.

Кроме того, через горло мы начинаем такой процесс, как принятие и усвоение. Не только пищи, но и вещей, идей, людей. Поэтому, если мы чего-то не принимаем в своей жизни, это тут же отразится на нашем горле.

?

Если вы сдерживаетесь от высказывания грубых слов, «проглатываете», подавляете в себе свой гнев и другие эмоции или боитесь выразить вслух то, что думаете, то ваше горло тут же отреагирует на это воспалением (ангиной, фарингитом, ларингитом). Болезнь в таком случае – это своего рода препятствие перед высказыванием запретного. Люди с больным горлом не могут выразить себя, своё отношение, постоять за себя, попросить то, что хотят. Они сами создают внутри себя разные препятствия, а потом страдают от этого. Все комплексы неполноценности обязательно проходят через горло, так как человек при этом постоянно ругает себя, выражает недовольство собой: внешностью, действиями. И подсознательный разум вынужден вызвать болезнь, чтобы защитить нас от нас же самих. По этому же принципу подсознание действует и тогда, когда мы ругаем и критикуем других.

Урок № 79

О том, что означают проблемы с носом и ртом

Нос символизирует чувство собственного достоинства, признание себя как личности, своей уникальности и ценности. Заложенный нос – это непризнание собственной ценности.

Насморк, выделения из носа – это подсознательные слёзы или внутренний плач. Подсознание пытается таким образом вывести наружу глубоко подавленные чувства: чаще горя и жалости, разочарования и сожаления о несбывшихся планах, мечтах.

Аллергический насморк свидетельствует о полном отсутствии эмоционального самоконтроля. Это происходит, как правило, после сильных эмоциональных потрясений. Иногда насморк – это своеобразная просьба о помощи. Так часто заявляют о своей беспомощности дети. Они не ощущают своей силы и ценности.

Главная причина возникновения аденоидов – постоянные трения и споры в семье, частые ссоры, недовольство то одним, то другим, раздражение. Родители не могут, а точнее, не хотят прийти к согласию по каким-то общим вопросам в семье. Это могут быть как отношения между собой, так и отношения с бабушками и дедушками ребёнка.

Подсознательно у ребёнка появляется чувство, что он нежеланный. Это ощущение передаётся от одного из родителей. Ребёнок очень чутко реагирует на неопределённость и разочарование в жизни родителей, отсутствие самовыражения и признания собственной ценности. Во взаимоотношениях между родителями нет самого главного – любви. Как только устанавливаются любовь, мир и спокойствие в семье, ребёнок начинает свободно дышать носом.

Носовое кровотечение – это своеобразный способ, с помощью которого человек выражает потребность в признании и любви.

Проблемы со ртом отражают неспособность к восприятию новых идей и мыслей.

Органы пищеварения человека филогенетически сохранили на глубоком уровне потребность воспринимать вместе с пищей информацию. Поэтому наша способность воспринимать и переваривать определённые знания, поступающие извне, и вовремя освобождаться от ненужных проблем и эмоций будет отражаться на состоянии здоровья органов пищеварения.

Заболевание полости рта свидетельствует, что вы предвзято относитесь к кому-то. У вас в подсознании скрыты «ядовитые» и «язвительные» слова, обвинения, и ваши губы сдерживают их. Или в подсознании накопились горькие и гневные мысли, которые остаются невысказанными.

Запах изо рта свидетельствует о том, что ваши «грязные» мысли и чувства, ваше прошлое настолько устарели, что уже «завонялись». Пора внести что-то новое и свежее в свою жизнь.

С помощью языка мы познаём вкус. На нём есть рецепторы, реагирующие на кислое, горькое и сладкое. Так и в жизни есть удовольствия, огорчения, пикантные случаи. Проблемы с языком означают, что мы теряем вкус к жизни. Наши негативные эмоции и чувства «покрывают толстым налётом» нашу способность воспринимать жизнь, мешают нам с радостью вкушать удовольствия жизни.

Урок № 80

О том, что означают на языке подсознания болезни желудка

Желудок символизирует способность перерабатывать, переваривать и усваивать какие-либо идеи и ситуации. Поэтому, когда у нас проблемы с желудком, это означает, что мы не знаем, как ассимилировать жизнь. Нам становится страшно перед чем-то новым. Мы неспособны усваивать какие-либо события.

Язва желудка и двенадцатиперстной кишки, гастрит вызваны страхом перед чем-то новым в жизни. У вас есть чувство, что вы недостаточно хороши или полноценны. Вы убеждены в своей ущербности. Вы буквально не можете переварить того, что сами собой представляете. Вы то и дело стараетесь угодить другим и при этом забываете о себе. Неприятие и неприязнь к чему-либо в этом мире, чувство брезгливости также приводят к язве. Ведь, отрицая что-либо в этом мире, вы отрекаетесь от какой-то части самого себя. С другой стороны – гнев, обиды, злость и безысходность. Кажется, что жизнь утратила свою притягательность. У вас есть всевозможные препятствия к тому, чтобы полностью наслаждаться жизнью. И все эти препятствия заключены не в окружающем мире, а в вас самих.

Самое лучшее лекарство в таких случаях – любовь и спокойствие. Люди, которые любят и уважают себя и окружающий мир, не имеют язв. Научитесь принимать себя таким, какой вы есть. Научитесь принимать окружающий мир – ведь это ваш мир.

Тошнота и рвота на языке подсознания означают, что есть что-то (кто-то) в вашей жизни, что (кого) вы не принимаете и не перевариваете и от чего (кого) хотите освободиться.

Вы испытываете сильную неприязнь и непримиримость. Ваш подсознательный разум отказывается принять какую– то ситуацию.

Всевозможные подсознательные страхи – это ещё одна причина тошноты. Отыщите в себе эти страхи и освободитесь от них.

Научитесь легко усваивать жизнь, принимать любую ситуацию в своей жизни как позитивный урок. Научитесь усваивать и ассимилировать все новые идеи. Тогда ваш желудок будет всегда прекрасно работать.

Для некоторых путешествие на самолёте, в автомобиле и морем сопровождается тошнотой, рвотой и слабостью. Причиной такого состояния, во-первых, служат подсознательные страхи. Возникает страх перед неизвестным. Нужно будет переработать и переварить новые впечатления. Во-вторых, во время путешествия необходимо довериться тому человеку, который за рулём или штурвалом.

Кстати, а вы замечали такую особенность? Тот, кто находится за рулём, не страдает от этой болезни. Потому что он владеет ситуацией. По этой же причине не укачивает в поездах, так как они движутся по строго установленному маршруту и не могут свернуть.

Кроме того, бытует мнение, что это наиболее безопасный вид транспорта.

Чтобы справиться с этой проблемой, научитесь доверять. Доверять свою жизнь тому, кто за рулём. Но прежде всего – Богу и себе самому.

Расслабьтесь и позвольте событиям течь своим чередом. Ведь путешествуете вы в своём мире. И в путешествии вы узнаете новое, прежде всего о самом себе. Когда вы поймёте это, все страхи пройдут и появится любопытство.

Урок № 81

О том, что скрывается за болезнями печени и желчного пузыря

Печень – это вместилище вспыльчивости, гнева и ярости. Люди с заболеваниями печени и желчного пузыря подавляют в себе гнев, раздражение и злость на кого-либо. Подавленные эмоции сначала вызывают воспаление желчного пузыря и застой желчи, дискинезию желчных путей, а со временем эти невыраженные горькие чувства откладываются в виде камней. Такие люди склонны критиковать себя и других. Люди с больной печенью часто имеют больные суставы, которые ответственны за приведение агрессивных чувств в действие. А это приводит к их воспалению. Они также бывают переполнены горькими мыслями (от этого бывает горечь во рту, особенно утром). Но их гордость мешает им избавиться от старых гневных и горьких мыслей. Они постоянно жалуются и оправдывают собственную придирчивость.

Камни в желчном пузыре символизируют накопленные горькие и гневные мысли, а также гордость, которая мешает вам избавиться от них. Камни – это горечь, тяжёлые мысли, проклятия, гнев и гордость, накопленные в течение нескольких лет. А колики – это раздражение, нетерпение и недовольство окружающим, достигшие пика. Ведь мы знаем, что мысли материализуются. Вот это и есть материальный субстрат всех этих пагубных мыслей.

Освобождение от старых мыслей растворяет камни и очищает печень и желчный пузырь навсегда.

Урок № 82

О том, как сделать поджелудочную железу здоровой, а жизнь – сладкой

Поджелудочная железа символизирует «сладость» жизни, умение радоваться и наслаждаться жизнью. Острое неприятие человека, событий и ситуаций может привести к панкреатиту. Человек в таких случаях испытывает гнев и безысходность, и ему кажется, что жизнь утратила свою притягательность.

Диабетики не могут есть сладкое. Их организм говорит им буквально следующее: «Ты сможешь получать сладкое извне только в том случае, если сделаешь свою жизнь «сладкой». Научись наслаждаться. Выбирай в жизни только самое приятное для себя. Сделай так, чтобы всё в этом мире приносило тебе радость и наслаждение, и научись дарить радость и наслаждение другим».

Диабет страшен своими осложнениями (глаукома, катаракта, склероз, сужение сосудов конечностей, особенно ног). Именно от этих осложнений больной и умирает. Но если вы посмотрите в данной книге причины всех этих страданий, то обнаружите одну закономерность: в основе этих заболеваний – дефицит радости.

Урок № 83

О том, как научиться принимать новое и избавляться от старого, а также излечить кишечник

Кишечник символизирует усвоение новых идей и мыслей, а также способность избавляться от всего старого и ненужного. Задержка кала в кишечнике символизирует нежелание расставаться с устаревшими мыслями. Вы увязли в прошлом. Вы верите в ограничения и нужду и поэтому подсознательно боитесь отказываться от чего-то в жизни, ибо вы не уверены, что затем сможете восполнить эту потерю. Вы цепляетесь за старые, болезненные воспоминания о прошлом. Возможно, вы боитесь прекратить отношения, которые вам уже ничего не дадут. Или страшитесь потерять работу, которая вам не нравится. Или не желаете расставаться с вещами, ставшими безполезными. Выбросите из дома все ненужные вещи и подготовьте место для новых. И при этом скажите вслух: «Я избавляюсь от старого и расчищаю место для нового!» Иногда запор отражает скупость и жадность к деньгам.

Метеоризм возникает, как правило, когда человек ест слишком тяжёлую пищу или много разной пищи. Лучшее средство от метеоризма – спокойствие и последовательность. Ставьте перед собой цели. Активно формируйте события и действуйте. Но не берите на себя слишком много. Не распыляйтесь. И относитесь к жизни легче.

Сильный страх и безпокойство обязательно отражаются на кишечнике. У таких людей присутствует ощущение ненадежности этого мира. Они не готовы принять события из-за страха. Есть даже такое понятие, как «медвежья болезнь», или «наделать в штаны от страха». Это когда начинается расстройство кишечника перед какими-то важными событиями (например, у студента перед экзаменом).

Анус, прямая кишка символизируют умение избавляться от накопившихся проблем, эмоций, обид. Геморрой, абсцесс, свищ, трещины свидетельствуют о том, что у вас затруднено избавление от старого и ненужного в вашей жизни. «Выброс» происходит тяжело и болезненно. Вы испытываете злость, гнев, страх, чувство вины по поводу каких-то прошлых событий. Ваши чувства отягощены неприятными эмоциями. Вы буквально испытываете «боль утраты».

Избавление от старого должно проходить легко, приятно и безболезненно. Приучите себя к мысли, что ваше тело покидает лишь то, что вам совсем не нужно. Так и в вашей жизни. От вас уходит только то, что мешает и сдерживает ваше саморазвитие. Не цепляйтесь за старое.

Урок № 84

О том, как перестать отравлять свою жизнь и наладить работу почек и мочевого пузыря

Почки символизируют способность освобождаться от того, что может «отравить» нашу жизнь. Почки очищают кровь от шлаков. К заболеванию почек приводит сочетание таких эмоций, как критика и осуждение, гнев и злость, обида и ненависть с сильным разочарованием и чувством неудачи. Таким людям кажется, что они вечные неудачники и всё делают неправильно. Они часто испытывают чувство позора. Страх перед будущим, за своё материальное положение, уныние и нежелание жить в этом мире всегда отражаются на почках. Для того чтобы почки всегда были здоровы, необходимо следить за чистотой своих помыслов.

Исключите страх, злость из своей жизни. Перестаньте чувствовать себя жертвой.

Раздражение и злость на противоположный пол приводят к воспалению мочевыводящих путей. Тревога и безпокойство также могут повлиять на развитие болезней мочевыводящих путей.

Камни в почках – это материализованные агрессивные эмоции, которые человек подавлял в себе и накапливал годами. Это сгустки нерастворённого гнева, страхов, чувства разочарования и неудачи, неприятный осадок от каких-то событий. А почечные колики – это раздражение, нетерпение и недовольство окружающим, достигшие пика.

Урок № 85

О том, из-за чего возникают женские болезни и что необходимо делать для того, чтобы оставаться здоровой и счастливой

Женские болезни возникают тогда, когда женщина что-то не принимает в себе (внешность, какое-то поведение). Она не хочет или не может ощутить себя настоящей женщиной, любимой и желанной. Такие женщины всячески подавляют в себе свою женственность, отказываются от самого принципа женственности. У некоторых женщин к заболеванию приводит убеждённость, что всё, связанное с гениталиями, греховно или нечисто. Болезни половых органов у женщин – это также результат отрицания и избегания мужчин или результат неудовлетворительных отношений с противоположным полом. Если женщина не умеет дарить и получать физическое и духовное наслаждение при близости с мужчиной, то у неё обязательно есть те или иные проблемы с половыми органами. Состояние органов малого таза отражает также количество и качество сексуальной энергии.

Наличие эндометриоза означает, что у вас есть ощущение незащищённости как женщины. Вы постоянно чувствуете, что на вас нападают, ожидаете плохого от мужчины. Вы не можете и не знаете, как реализовать себя как женщину. При этом постоянно посылаете упрёки в свой адрес, а также упрёки, претензии и обиды в адрес мужчин. Огорчение и разочарование в жизни женщины приводят к изменениям в матке. Часто в таких случаях женщины подменяют любовь какими-либо другими высоко ценимыми качествами: например, порядочностью, честностью, нравственностью.

Эрозия шейки матки символизирует уязвлённое женское самолюбие. Вы уверены в том, что ущербны как женщина. Вы не можете и не знаете, как реализовать себя как женщину. Современная медицина вместо лечения предлагает прижигание эрозии, загоняя болезнь глубже внутрь. Я обнаружил, что у 90 процентов женщин с опухолями матки в прошлом были эрозии шейки, и они их прижигали. То есть боролись со следствием болезни. А устранять необходимо причины – менять поведение и мысли в отношении себя и мужчин.

Проблемы с наружными половыми органами отражают боязнь оказаться не на высоте, страх за свою женственность, сомнения в своей женственности. У вас есть подсознательная агрессия на мужчин: обиды, претензии, злость, презрение. Воспаление вульвы и влагалища отражает то, что вы чувствуете себя уязвлённой как женщина. Вы считаете, что женщины вообще безсильны влиять на противоположный пол.

Есть такая закономерность: мужчины с уязвленным самолюбием чаще страдают язвой двенадцатиперстной кишки, а женщины – воспалением наружных половых органов.

Дисменорея (расстройство менструального цикла) возникает, если вы испытываете ненависть к своему женскому телу, отрицаете или отвергаете свою женственность. Или испытываете сомнения по поводу своей женственности. Сомнения в своей женственности обязательно связаны с подсознательной агрессией на мужчин. Девушка заимствует их у своей матери, и это отражается на её половом развитии. Еще одна возможная причина может привести к нарушению месячных – это чувство вины и страх, связанные с сексом. В вас сильна убежденность, что все связанное с гениталиями греховно или нечисто.

Опухоль матки – это накопленные претензии и обиды на мужчин, постоянное прокручивание в голове прежних обид. Вы считаете, что вам постоянно наносили удары по женскому самолюбию.

Вы часто упрекаете себя как женщину и постоянно обвиняете мужчин.

Отсутствие месячных отражает нежелание быть женщиной, неприязнь к самой себе, неприятие своей женственности. К тому времени, когда девочка вступает в период половой зрелости, она, как правило, уже знает, что у неё должны пойти менструации, и часто идентифицирует себя со своей матерью. И если у матери расстройство менструального цикла или болезненные месячные, то, скорее всего, у дочери всё будет протекать так же. Я обнаружил, что некоторые женщины даже не знают о том, что нормальные месячные должны проходить без всяких болей, без болезненного набухания молочных желез, без сгустков. Если у вас есть хотя бы один из этих признаков, то задумайтесь, что находится между вами и хорошим самочувствием во время месячных?

Маточное кровотечение символизирует уходящую радость. Почувствуйте себя настоящей женщиной и верните радость в свой мир. Вам мешают сделать это давние обиды и злость – избавьтесь от них. Постарайтесь понять свою женскую природу и следовать ей.

Яичники символизируют женские созидательные центры. Проблемы с яичниками – это проблемы с реализацией своего женского начала в этом мире. Этому мешают негативные мысли-блоки в отношении себя как женщины и в отношении мужчин, а также непонимание своей женской природы.

Хирургическая тактика при сочетанных метастазах рака почки в толстой кишке и поджелудочной железе: клиническое наблюдение и обзор литературы | Котельников

1. Носов Д.А., Ворошилова Е.А., Саяпина М.С. Современное представление об алгоритме лекарственного лечения и оптимальной последовательности использования таргетных препаратов. Онкоурология 2014;10(3):12–21.

2. Bianchi M., Sun M., Jeldres C. et al. Distribution of metastatic sites in renal cell carcinoma: a population-based analysis. Ann Oncol 2012;23:973–80. DOI: 10.1093/annonc/mdr362.

3. Fujii Y., Ikeda M., Kurosawa K. et al. Different clinicopathological features between patients who developed early and late recurrence following surgery for renal cell carcinoma. Int J Clin Oncol 2015;20:802–7. DOI:10.1007/s10147014-0775-2.

4. Noguchi G., Nakaigawa N., Taguri M. et al. Time-dependent change in relapse sites of renal cell carcinoma after curative surgery. Clin Exp Metastasis 2018;35(1–2):69–75. DOI: 10.1007/ s10585-018-9883-0.

5. Патютко Ю.И., Котельников А.Г., Кригер А.Г. и др. Метастазы рака почки в поджелудочную железу: опыт хирургического лечения. Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова 2019;(9):25–31.

6. Mourra N., Jouret-Mourin A., Lazure T. et al. Metastatic tumors to the colon and rectum: a multi-institutional study. Arch Pathol Lab Med 2012;136(11):1397– 401. DOI: 10.5858/arpa.2011-0432-OA.

7. Shoemaker C.P., Hoyle C.L., Levine S.B. et al. Late solitary colonic recurrence of renal carcinoma. Am J Surg 1970;120(1):99–100.

8. Ruiz J.L., Vera C., Server G. et al. Renal cell carcinoma: late recurrence in 2 cases. Eur Urol 1991;20:167–9.

9. Thomason P.A., Peterson L.S., Staniunas R.J. Solitary colonic metastasis from renal-cell carcinoma 17 years after nephrectomy. Report of a case. Dis Colon Rectum 1991;34:709–12.

10. Zerbib F., Becouarn Y., Stockle E. et al. Colonic metastasis of a renal carcinoma. A case report. Tumori 1992;78:219–20.

11. Tokonabe S., Sugimoto M., Komine Y. et al. Solitary colonic metastasis of renal cell carcinoma seven years after nephrectomy: a case report. Int J Urol 1996;3:501–3.

12. Avital S., Hitchcock C.L., Baratz M. et al. Localization of monoclonal antibody CC49 in colonic metastasis from renal cell carcinoma. Eur J Surg Oncol 1998;24(2):149–51.

13. Diaz-Candamio M.J., Pombo S., Pombo F. Colonic metastasis from renal cell carcinoma: helical-CT demonstration. Eur Radiol 2000;10(1):139–40. DOI: 10.1007/s003300050020.

14. Utsunomiya K., Yamamoto H., Koiwai H. et al. Solitary colonic metastasis from renal cell carcinoma 9 years after nephrectomy: report of a case. Int J Colorectal Dis 2001;16(3):193–4. DOI: 10.1007/s003840000281.

15. Sawh R.N., Borkowski J., Broaddus R. Metastatic renal cell carcinoma presenting as a hemorrhoid. Arch Pathol LabMed 2002;126:856–8.

16. Rosito M.A., Damin D.C., Lazzaron A.R. et al. Metastatic renal cell carcinoma involving the rectum. Int J Colorectal Dis 2002;17:359–61.

17. Lee J.G., Kim J.S., Kim H.J. et al. Simultaneous duodenal and colon masses as late presentation of metastatic renal cell carcinoma. Korean J Intern Med 2002;17:143–6.

18. Dellon E.S., Gangarosa L.M. Hematochezia due to a renal cell carcinoma metastasis to the rectum: a case report and review of the literature. Rev Gastroenterol Mex 2006;71:316–8.

19. lnvernizzi R., Bencardino K., Potra C. et al. Sigmoid colon metastatic from sarcomatoid renal cell carcinoma. Tumori 2006;92:246–8.

20. Valdespino-Castillo V.E., Ruiz-Jaime A. Renal cell carcinoma with colon metastases: an infrequent site for metastases. Cir Cir 2008;76(4):339–42.

21. Yetkin G., Uludag M., Ozagari A. Solitary colonic metastasis of renal cell carcinoma. Acta Chir Belg 2008;108:264–5.

22. Jadav A.M., Thrumurthy S.G., De Sousa B.A. Solitary colonic metastasis from renal cell carcinoma presenting as a surgical emergency nine years postnephrectomy. World J Surg Oncol 2010;8:54.

23. Fernández-Salazar L.I., Soto de Prado-Otero D., Velayos-Jiménez B., González-Hernández J.M. Nodular colonic lesion in a nephrectomized patient. Rev Esp Enferm Dig 2011;103(11):591.

24. Chetty R., Syed A., van der Kwast T. Metastatic clear cell renal cell carcinoma presenting as multiple colonic polyps. Int J Surg Pathol 2011;19:791–4.

25. Zhao W., Yu Y., Chen Z. et al. Colon metastasis of chromophobe renal cell carcinoma with sarcomatoid change. Chin Med J 2012;125(18):3352–54.

26. Tsamis D., Larentzakis A., Skiada D. et al. Colonic metastasis of a renal cell carcinoma: Case report and brief review of the literature. Cent Eur J Med 2012;1:4. DOI: 10.2478/s11536-0120139-0.

27. Onakatomi Y., Sato T., Rino Y. et al. A case of resected colon metastasis of renal cell carcinoma. J Jap Coll Surg 2013;38(1):164–8. DOI: 10.4030/ jjcs.38.164.

28. Milovic N., Lazic M., Aleksic P. Rare locations of metastatic renal cell carcinoma: a presentation of three cases. Vojnosanit Pregl 2013;70(9):881–6. DOI: 10.2298/vsp120515014m.

29. Vo E., Palacio C.H., Omino R. et al. Solitary colon metastasis from renal cell carcinoma nine years after nephrectomy: a case report. Int J Surg Case Rep 2016;27:55–8. DOI: 10.1016/j. ijscr.2016.07.053

30. Maehata Y., Esaki M., Fujita K., Hirahashi M. Solitary rectal metastasis from renal cell carcinoma treated by endoscopic resection. Dig Liver Dis 2016;48:566. DOI: 10.1016/j.dld.2016.01.005.

31. Abu-Khalaf M., Khatib M.A., Samara O.A., Fayyad L. Synchronous haematogenous colonic metastasis from a primary renal cell carcinoma: an unusual cause of colonic haemorrhage: case report. Jordan Med J 2016;50(1):49–56. DOI: 10.12816/0025988.

32. Berry A.C., Nakshabendi R., Kanar O. et al. Sigmoid colonic polyp as initial presentation of metastatic papillary renal cell carcinoma. Ochsner J 2017;17(4):417–20. DOI: 10.1043/TOJ16-0026.

33. Zheng G., Li H., Li J. et al. Metastatic renal cell clear cell carcinoma to the rectum, lungs, ilium and lymph nodes: a case report. Medicine (Baltimore) 2017;96:5720. DOI: 10.1097/ MD.0000000000005720.

34. Ouellet S., Binette А., Nguyen А. Metastatic renal cell carcinoma initially presenting with hematochezia and subsequently with vaginal bleeding: a case report. BMC Urology 2018;18:4. DOI: 10.1186/s12894-018-0317-8.

35. Guttadauro A., Maternini M., Macchini D. et al. Colonic obstruction from renal cell carcinoma metastasis after 21 years: report of a case and review of the literature. Universal J Surg 2019;1(2):1–3.

36. D’Sa Bouvier F.V., Nazima H., Sohaila F. Colonic metastasis of renal cell carcinoma with sarcomatoid differentiation. J Clin Diagn Res 2019;13(1):ED05–7. DOI: 10.7860/JCDR/2019/36735.12425.

37. Lee J.G., Kim J.S., Kim H.J. et al. Simultaneous duodenal and colon masses as late presentation of metastatic renal cell carcinoma. Korean J Intern Med 2002;17:143–6.

Психология болезней: Печень (проблемы)

1.

ПЕЧЕНЬ (ПРОБЛЕМЫ) - (Луиза Хей)

Что олицетворяет данный орган в психологическом смысле

Средоточие гнева и примитивных эмоций.

Причины болезни

Постоянные жалобы. Оправдывание собственной придирчивости и тем самым обманывание себя. Плохое самочувствие.

Возможное решение, способствующее исцелению

Любовь, мир и радость - вот, что я знаю. Отныне я живу с открытым сердцем. Ищу любовь и повсюду нахожу ее.

2.

ПЕЧЕНЬ (ПРОБЛЕМЫ) - (В. Жикаренцев)

Что олицетворяет данный орган в психологическом смысле

Месторасположение гнева и примитивных эмоций.

Причины болезни

Хронические жалобы на все. Нахождение оправданий придиркам, чтобы обмануть себя. Постоянно плохо себя чувствуете.

Возможное решение, способствующее исцелению

Любовь, мир и радость - вот что я знаю. Я выбираю жить через открытое пространство моего сердца. Я ищу любовь и нахожу ее везде.

3.

ПЕЧЕНЬ (ПРОБЛЕМЫ) - (Лиз Бурбо)

Физическая блокировка

Печень – это наиболее объемистая железа человеческого организма. Ее функции делают ее одним из самых важных и самых сложных органов нашего тела. Она выделяет свои секреты, в том числе желчь, в кишечник, таким образом участвуя в процессе пищеварения. Не менее активно влияет печень и на процессы метаболизма углеводов, белков и жиров. Она отвечает также за свертываемость крови и очищает организм от токсинов. Если какая-то из этих функций нарушена, следует прежде всего обратить внимание на печень. Вот основные заболевания ПЕЧЕНИ: АБСЦЕСС, КАМНИ, ЦИРРОЗ, ПЕЧЕНОЧНАЯ НЕДОСТАТОЧНОСТЬ, ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ, ЖЕЛТУХА и ОПУХОЛЬ.

Эмоциональная блокировка

Выражение исходить желчью прекрасно объясняет общий метафизический смысл заболеваний печени. Проблемы появляются, когда человек злится и беспокоится, вместо того чтобы проявить гибкость и приспособиться к ситуации. Он боится последствий, особенно боится что-то потерять. Не сумев приспособиться к новой ситуации, он испытывает гнев и разочарование.

Болезни и расстройства печени говорят о том, что человек близок к депрессии, даже если он сам этого не осознает. В метафизике печень – это резервуар, в котором накапливается подавленный гнев. Таким образом, проблемы с печенью обычно возникают у человека, который не выпускает свой гнев наружу, старается казаться спокойным, даже когда что-то или кто-то сильно его задевает. В его душе накапливаются горечь и печаль. Если этот процесс длится достаточно долго, вместо приступа гнева, который принес бы этому человеку разрядку и вернул бы ему душевное спокойствие, происходит приступ какой-нибудь болезни печени.

Ментальная блокировка

Так как печень играет важную роль в координации многих функций человеческого организма, нарушения работы этого органа означают, что ты плохо координируешь то, что происходит в твоей жизни. Вместо того чтобы приспосабливаться к событиям и людям, ты начинаешь их судить, стараешься их изменить и блокируешь движения своего сердца чрезмерной активностью ума. Твой гнев говорит о том, что ты забываешь ставить себя на место других людей и стремишься всегда быть правым. В результате у тебя часто возникает чувство обиды. Вместо того, чтобы действовать торопливо и безрассудно, тебе следует хорошенько обдумывать и анализировать происходящее и только после этого принимать решения. Твоя печень говорит тебе, что у тебя есть все необходимое для того, чтобы защитить себя.

Психосоматика заболеваний печени

Экология жизни: Если начала беспокоить печень. Конечно же сначала, нужно устранить причины, которые ведут к дисгармонии печени. Рассмотрим метафизические (тонкие, ментальные, эмоциональные, психосоматические, подсознательные, глубинные) причины проблем и заболеваний печени.

Печень: метафизические причины болезней печени

Вас начала беспокоить печень? Конечно же сначала, нужно устранить причины, которые ведут к дисгармонии печени. Рассмотрим метафизические (тонкие, ментальные, эмоциональные, психосоматические, подсознательные, глубинные) причины проблем и заболеваний печени.

Вот что пишут об этом всемирно известные эксперты в данной области и авторы книг по данной тематике.

Печень (общие проблемы)

Лиз Бурбо в своей книге «Твое тело говорит "Люби себя!"» пишет о возможных метафизических причинах проблем и болезней печени:

Печень - это наиболее объемистая железа человеческого организма. Ее функции делают ее одним из самых важных и самых сложных органов нашего тела. Она выделяет свои секреты, в том числе желчь, в кишечник, таким образом участвуя в процессе пищеварения. Не менее актив-но влияет печень и на процессы метаболизма углеводов, белков и жиров. Она отвечает также за свертываемость крови и очищает организм от токсинов. Если какая-то из этих функций наруше-на, следует прежде всего обратить внимание на печень.

Вот основные заболевания ПЕЧЕНИ:

АБСЦЕСС, КАМНИ, ЦИРРОЗ, ПЕЧЕНОЧНАЯ НЕДОСТАТОЧНОСТЬ, ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ, ЖЕЛТУХА и ОПУХОЛЬ.

Эмоциональная блокировка. Выражение исходить желчью прекрасно объясняет общий метафизический смысл заболе-ваний печени. Проблемы появляются, когда человек злится и беспокоится, вместо того чтобы проявить гибкость и приспособиться к ситуации. Он боится последствий, особенно боится что-то потерять. Не сумев приспособиться к новой ситуации, он испытывает гнев и разочарование.

Болезни и расстройства печени говорят о том, что человек близок к депрессии, даже если он сам этого не осознает. В метафизике печень - это резервуар, в котором накапливается подав-ленный гнев. Таким образом, проблемы с печенью обычно возникают у человека, который не выпускает свой гнев наружу, старается казаться спокойным, даже когда что-то или кто-то сильно его задевает. В его душе накапливаются горечь и печаль. Если этот процесс длится достаточно долго, вместо приступа гнева, который принес бы этому человеку разрядку и вернул бы ему душевное спокойствие, происходит приступ какой-нибудь болезни печени.

Ментальная блокировка. Так как печень играет важную роль в координации многих функций человеческого орга-низма, нарушения работы этого органа означают, что ты плохо координируешь то, что происхо-дит в твоей жизни. Вместо того чтобы приспосабливаться к событиям и людям, ты начинаешь их судить, стараешься их изменить и блокируешь движения своего сердца чрезмерной активностью ума. Твой гнев говорит о том, что ты забываешь ставить себя на место других людей и стре-мишься всегда быть правым. В результате у тебя часто возникает чувство обиды. Вместо того, чтобы действовать торопливо и безрассудно, тебе следует хорошенько обдумывать и анализиро-вать происходящее и только после этого принимать решения. Твоя печень говорит тебе, что у тебя есть все необходимое для того, чтобы защитить себя.

Духовная блокировка заключается в том, что и в случае проблем с глазами (см. ГЛАЗА: метафизические причины проблем со зрением и болезней глаз, подпункт "Глаза в целом и общие проблемы со зрением").

Бодо Багински и Шармо Шалила в своей книге «"Рейки" - универсальная энергия жизни» пишут о возможных метафизических причинах проблем и болезней печени:

Основными задачами печени являются производство и накопление энергии, обмен веществ и вывод ядов из организма. Печень оценивает, что для нас приемлемо, а что нет. Поэтому и в душевно-духовной области она имеет дело с оценкой, а также с мерой и неумеренностью. Кроме того, она преобразует растительный и животный белок в человеческий, причем основные строительные элементы остаются прежними. Можно сказать, что печень производит из более низкой формы более высокую и потому символизирует область высшего развития и эволюции. В этом процессе составные элементы белка, то есть основной материал, сохраняются, изменяется лишь его структура, форма его манифестации. Аналогично тому, как в творении различные формы проявления являются лишь различными формами манифестации единого, лежащего в их основе бытия. Печень указывает нам и на эти взаимосвязи и потому находится во взаимоотношениях с "религио", обратной связью с первопричиной, первоосновой.

Если у тебя проблемы с печенью, ты должен спросить себя, в какой области ты неумерен? Где существует нечто, что ты не можешь более переносить, что, возможно, даже ядовито для тебя? Являются ли твои масштабы оценки происходящего еще допустимыми или ты раздражаешься и жалуешься по поводу многих вещей? У тебя слишком высокие идеалы? А как дела со связью с твоей внутренней сущностью? Ответ на эти вопросы покажет тебе направление, в котором ты можешь найти истинные причины неполадок с печенью. Истина - это простота, поэтому освободись от всего, чего у тебя слишком, тогда ты сможешь найти в себе самом свободу, понимание, любовь и доверие к жизни. Рэйки поможет тебе получить эти качества.

Валерий В. Синельников в своей книге «Возлюби болезнь свою» пишет о возможных метафизических причинах проблем и болезней печени:

Это вместилище вспыльчивости, гнева и ярости. Еще со времен Гиппократа и Аристотеля выделяют четыре ионических темперамента: холерический, меланхолический, флегматический и сангвинический. Вспыльчивый человек, или холерик, — это человек с желчным темпераментом.

Люди с заболеваниями печени и желчного пузыря подавляют в себе гнев, раздражение и злость на кого-либо. Подавленные эмоции сначала вызывают воспаление желчного пузыря и застой желчи, дискинезию желчных путей, а со временем эти невыраженные горькие чувства откладываются в виде камней. Ведь, как правило, люди считают дурным тоном выражать свои агрессивные эмоции. Лучше они их будут сдерживать в себе.

Такие люди склонны критиковать себя и других. Люди с больной печенью часто имеют больные суставы, которые ответственны за приведение агрессивных чувств в действие. А это приводит к их воспалению. Они также бывают переполнены горькими мыслями (от этого бывает горечь во рту, особенно утром). Но их гордость мешает им избавиться от старых гневных и горьких мыслей. Они постоянно жалуются и оправдывают собственную придирчивость.

Согласно Сергею С. Коновалову («Энергоинформационная медицина по Коновалову. Исцеляющие эмоции»), на печень влияют вспыльчивость, гнев и ярость, причем чаще всего в подавленной форме. Подавленные эмоции сначала вызывают воспаление желчного пузыря и застой желчи, ослабление желчных путей, а со временем приводят к образованию камней. Такие люди склонны критиковать себя и других, часто имеют больные суставы. Гордость мешает им избавиться от гневных и горьких мыслей. Они постоянно жалуются и оправдывают собственную придирчивость.

Способ излечения. Помимо методик, изложенных в этой книге и помогающих привлекать исцеляющую энергию положительных эмоций, попробуйте такое упражнение: часто произносите звук «ш-ш-ш», который своей энергетикой очищает печень и желчный пузырь от гнева.

Владимир Жикаренцев в своей книге «Путь к свободе. Кармические причины возникновения проблем или как изменить свою жизнь»  указывает на главные негативные установки (приводящие к болезням) и гармонизирующие мысли (ведущие к исцелению) связанные с появлением и исцелением печени:

Негативная установка, приводящая к проблемам и болезням печени:

Месторасположение гнева и примитивных эмоций. Хронические жалобы на все. Нахождение оправданий придиркам, чтобы обмануть себя. Постоянно плохо себя чувствуете.    

Гармонизирующие мысли:

Я выбираю жить через открытое пространство моего сердца. Я ищу любовь и нахожу ее везде. Любовь, мир и радость — вот что я знаю.

Луиза Хей в своей книге «Исцели себя сам»  указывает на главные негативные установки (приводящие к болезням) и гармонизирующие мысли (ведущие к исцелению) связанные с появлением и исцелением печени:

Негативная установка, приводящая к проблемам и болезням печени:

Средоточие гнева и примитивных эмоций. Постоянные жалобы. Оправдывание собственной придирчивости и тем самым обманывание себя. Плохое самочувствие.    

Гармонизирующие мысли:

Любовь, мир и радость - вот, что я знаю. Отныне я живу с открытым сердцем. Ищу любовь и повсюду нахожу ее.

Лууле Виилма в своей книге «Светлый источник любви» пишет:

Глаза, в свою очередь, выражают состояние печени. А печень является средоточием злобы и гнева. Что не умещается в печени, должно вытекать через глаза.

Сергей Н. Лазарев в своих книгах «Диагностика кармы» (книги 1-12) и «Человек будущего» пишет о том, что основной причиной абсолютно всех болезней, в том числе и болезней глаз и проблем со зрением является дефицит, недостаток или даже отсутствие любви в душе человека. Когда человек ставит что-то выше любви к Богу (а Бог, как говорится в Библии, есть Любовь), то он вместо обретения божественной любви устремляется к чему-то другому. К тому, что (ошибочно) считает более важным в жизни: деньги, слава, богатство, власть, удовольствия, секс, отношения, способности, порядок, мораль, знания и многим-многим другим материальным и духовным ценностям… Но это все не цель, а только средства для обретения божественной (истинной) любви, любви к Богу, любви, как у Бога. А туда, где нет (истинной) любви в душе, как обратная связь от Вселенной, приходят болезни, проблемы и прочие неприятности. Это нужно для того, чтобы человек задумался, осознал, что не туда идет, думает, говорит и делает что-то не так и начал исправляться, стал на правильный Путь! Есть множество нюансов, как проявляется болезнь в нашем организме. 

Желтуха

Лиз Бурбо в своей книге «Твое тело говорит "Люби себя!"» пишет о возможных метафизических причинах желтухи:

Желтуха характеризуется повышенным содержанием в организме билирубина - оранжево-коричневого пигмента желчи. При желтухе билирубин откладывается в тканях, придавая желто-ватую окраску коже, слизистым оболочкам и склерам глаз. Желтуха часто сопровождается ги-пертрофией селезенки и анемией. См. также статьи ПЕЧЕНЬ (ПРОБЛЕМЫ), СЕЛЕЗЕНКА (ПРОБЛЕМЫ) и АНЕМИЯ.

Бодо Багински и Шармо Шалила в своей книге «"Рейки" - универсальная энергия жизни» пишут о возможных метафизических причинах желтухи:

Существует нечто, где ты явно перебарщиваешь, ты действуешь предвзято и односторонне, то есть имеешь окрашенные представления.

Будь ко всему более толерантен. Дари твою любовь и сочувствие всем людям. Отступись от одностороннего поведения - как раз это и хочет сказать тебе желтуха. Дай себе Рэйки!

Владимир Жикаренцев в своей книге «Путь к свободе. Кармические причины возникновения проблем или как изменить свою жизнь»  указывает на главные негативные установки (приводящие к болезням) и гармонизирующие мысли (ведущие к исцелению) связанные с появлением желтухи:

Негативная установка, приводящая к желтухе:

Внутреннее и внешнее предубеждение, предвзятое мнение. Основание, лишенное равновесия.     

Гармонизирующие мысли:

Я чувствую по отношению ко всем людям и к себе терпимость, сострадание и любовь. 

Луиза Хей в своей книге «Исцели себя сам»  указывает на главные негативные установки (приводящие к болезням) и гармонизирующие мысли (ведущие к исцелению) связанные с появлением желтухи:

Негативная установка, приводящая к желтухе:

Внутренняя и внешняя предвзятость. Односторонние выводы.    

Гармонизирующие мысли:

Я терпимо, сострадательно и с любовью отношусь ко всем людям, включая себя.

Воспаление печени (гепатит)

Лиз Бурбо в своей книге «Твое тело говорит "Люби себя!"» пишет о возможных метафизических причинах гепатита:

Гепатит - это воспаление печени, вызванное инфекцией, химическими веществами или вирусом. См. статью ПЕЧЕНЬ (ПРОБЛЕМЫ). Если это инфекционный или эпидемический гепатит, см. также метафизическое объяснение ЭПИДЕМИИ в начале книги.

Бодо Багински и Шармо Шалила в своей книге «"Рейки" - универсальная энергия жизни» пишут о возможных метафизических причинах гепатита:

Воспаление печени указывает на существующий конфликт. Спроси себя, где ты из-за нехватки объективной оценки испытываешь страх, злость и досаду? Где ты стал односторонним и неумеренным?

- Воспаление печени принуждает тебя к покою и самоограничению. Используй это время и отрешись от всего: от критики, злости и старых концепций. Так твое сознание выйдет очищенным из этой ситуации. Ты получишь шанс на действительно новое начало. Пусть оно придет!

Владимир Жикаренцев в своей книге «Путь к свободе. Кармические причины возникновения проблем или как изменить свою жизнь»  указывает на главные негативные установки (приводящие к болезням) и гармонизирующие мысли (ведущие к исцелению) связанные с появлением и исцелением гепатита:

Негативная установка, приводящая к гепатиту:

Сопротивление переменам. Страх, гнев, ненависть. Печень — месторасположение гнева и ярости.     

Гармонизирующие мысли:

Мой ум чист и свободен. Я отпускаю прошлое и принимаю в свою жизнь новое. Все идет прекрасно. 

Луиза Хей в своей книге «Исцели себя сам»  указывает на главные негативные установки (приводящие к болезням) и гармонизирующие мысли (ведущие к исцелению) связанные с появлением и исцелением  гепатита:

Негативная установка, приводящая к гепатиту:

Сопротивление переменам. Страх, гнев, ненависть. Печень – вместилище гнева и ярости.    

Гармонизирующие мысли:

Мое сознание чисто и свободно. Я забываю прошлое и иду навстречу новому. Все идет хорошо.

Цирроз печени

Лиз Бурбо в своей книге «Твое тело говорит "Люби себя!"» пишет о возможных метафизических причинах цирроза печени:

Цирроз - это глобальное нарушение физиологических функций печени. В большинстве слу-чаев причиной цирроза является алкоголизм (в 90% случаев у мужчин и в 75% случаев у жен-щин). Сначала возникают расстройства, связанные с пищеварением (потеря аппетита, нарушения пищеварения, тяжесть и жжение в желудке), а также расстройства общего характера (усталость, похудение). Затем появляются гораздо более серьезные проблемы, связанные с сосудистой системой. См. статью ПЕЧЕНЬ (ПРОБЛЕМЫ). Цирроз является самой серьезной болезнью печени и говорит человеку о том, что ему необходимо как можно скорее взять себя в руки. Он достиг своего физического, эмоционального и ментального предела и только сам может себя вылечить. Если больной циррозом не изменит свой образ жизни, он сам себя погубит. Он должен перестать бунтовать и верить, что жизнь несправедлива.

Бодо Багински и Шармо Шалила в своей книге «"Рейки" - универсальная энергия жизни» пишут о возможных метафизических причинах цирроза печени:

Прочти сначала то, что сказано о болезнях печени на предыдущих страницах. Так ты ясно увидишь направление, в котором развиваются подобные симптомы. Только в твоем случае ты уже перешел на следующую ступень эскалации проблем. Очевидно, ты ничему не научился от прежних болезней, не сделал соответствующих выводов, в твоем внутреннем мире ничего не изменилось, твое мировоззрение осталось прежним. Поэтому тело предъявляет тебе последнее требование - и только от тебя зависит, повернешь ли ты руль на сто восемьдесят градусов. Сознание является господином твоего тела, решайся побыстрее!

Желчекаменная болезнь

Валерий В. Синельников в своей книге «Возлюби болезнь свою» пишет о возможных метафизических причинах желчекаменной болезни:

Камни в желчном пузыре символизируют накопленные горькие и гневные мысли, а также гордость, которая мешает вам избавиться от них. Камни — это горечь, тяжелые мысли, проклятия, гнев и гордость, накопленные в течение нескольких лет. А колики — это раздражение, нетерпение и недовольство окружающим, достигшие пика. Ведь мы знаем, что мысли материализуются. Вот это и есть материальный субстрат всех этих пагубных мыслей.

Одна моя пациентка, у которой недавно были приступы желчной колики, рассказывала со злостью о своей племяннице:

— Вы представляете? Ей еще и семнадцати не исполнилось, а она со мной грубит, хамит, ведет себя отвратительно. Была бы моя воля, придушила бы.

— А она с вами живет? — спросил я ее.

— Нет, она живет с бабушкой, матерью мужа. Она учится у нас в университете, а родители ее в Хабаровском крае. И она должна присматривать за бабушкой, уже старенькой, ухаживать за ней, чтобы получить квартиру по наследству. Но ничего не делает. И мне приходится идти после работы к матери мужа и все делать самой. А у племянницы только гульки на уме.

— Вы хотите, чтобы ваша племянница изменила свое поведение? — спрашиваю я ее.

— Конечно хочу.

— Но разве она изменится, если вы будете на нее злиться?

— Я знаю, что не изменится. Но я не могу по-другому.

— Не можете или не умеете?

— Скорее не умею.

— А как вы думаете, — спрашиваю я женщину, -что ваша племянница показывает вам своим поведением?

—  Только свою невоспитанность, что же еще!

—  Скажите, а как вы сами относитесь к своей свекрови?

—  Нормально. А как еще я могу к ней относиться?

Старый, больной человек.

—  А ведь в прошлом, — говорю я, — у вас с ней было много конфликтов.

— Да, мы много ссорились и ругались. А откуда вы это знаете? — спрашивает она удивленно.

_ Я также знаю, что у вас в душе по-прежнему есть обиды на свою свекровь. И теперь вы вынуждены к ней ходить и ухаживать за ней, но делаете это мз чувства долга. Вы как бы «отрабатываете» свою агрессию к ней. А племянница своим поведением показывает вам, как вы сами относитесь к свекрови. Так что не злиться нужно на нее, а благодарить. Она прекрасный урок преподносит вам.

— Да, доктор, пожалуй, вы правы.

Пациентка о чем-то задумывается.

— Я думаю, — продолжаю я, — что, как только вы измените свое отношение к свекрови, у вас тут же на ладятся отношения и с племянницей.

В настоящее время существует множество способов активной очистки печени и кишечника с помощью голодания, диет, клизм. Они действительно эффективны, но действие их кратковременно, так как не устраняется причина. Ведь клизмой не изменишь характер.

Я знаю из своей практики, что применение гомеопатических средств и освобождение от старых мыслей растворяют камни и очищают печень и желчный пузырь навсегда. Я был свидетелем, как после чистки подсознания от агрессивных мыслей у людей исчезали бесследно довольно крупные камни.

Лиз Бурбо в своей книге «Твое тело говорит "Люби себя!"» пишет о возможных метафизических причинах возникновения камней:

Камни - это отложения, или конкременты, минеральных солей или органических веществ (иногда в сочетании с другими элементами), образующиеся при определенных ненормальных условиях Одни конкременты с трудом различимы невооруженным глазом, но, как правило, скапливаются в большом количестве в одном месте, другие достигают размеров порядка несколько сантиметров и чаще всего существуют в организме отдельно друг от друга. Такие камни могут образовываться в желчном пузыре, почках, простате и т. д.

Эмоциональная блокировка. Метафизическое значение зависит от того, в какой части тела образуются камни. Для того чтобы получить точное определение, выясните сначала, какую функцию выполняет эта часть тела. Как правило, камни появляются у людей, которые долго вынашивают в себе какие-то тяжелые мысли или чувства, связанные с агрессией, неудовлетворенностью, завистью, ревностью и т. д. Человек лелеет эти мысли втайне от окружающих, причем довольно долго, так как для образования камней нужно время. Камни также часто образуются у холодных, жестких людей, которые сдерживают свои чувства.

Ментальная блокировка. Камни в желчном пузыре часто возникают у людей, которые думают одно, а делают другое. Так, например, человек хочет действовать, но ничего не предпринимает или позволяет другим остановить его. Это вызывает у него чувство неудовлетворенности и агрессию, которые накапливаются и усиливаются. Ему необходимо перестать раздумывать и смело действовать в соответствии со своими желаниями.  опубликовано econet.ru

Список используемой литературы:

  • Владимир Жикаренцев. Путь к свободе. Кармические причины возникновения проблем или как изменить свою жизнь.
  • Луиза Хей. Исцели себя сам.
  • Лазарев С. Н. «Диагностика кармы» (книги 1-12) и «Человек будущего».
  • Валерий Синельников. Возлюби болезнь свою.
  • Лиз Бурбо. Твое тело говорит «Люби себя!».
  • Торсунов О. Г. Связь болезней с характером. Жизненная энергия человека.
  • Бодо Багински, Шарамон Шалила. «Рейки» - универсальная энергия жизни.
  • Энергоинформационная медицина по Коновалову. Исцеляющие эмоции.
  • Ольга Жалевич. 9 лекарств, которые спасут мир.
  • Макс Гендель. Эзотерические принципы здоровья и целительства. 
  • Анатолий Некрасов. 1000 и один способ быть самим собой.
  • Лууле Виилма. Светлый источник любви.

Автор: Андрей Жалевич

P.S. И помните, всего лишь изменяя свое потребление - мы вместе изменяем мир! © econet

Идентификация основных метаболических изменений во время прогрессирования фиброза печени у крыс с использованием метаболомики мочи и сыворотки

Реферат

Обратимость фиброза печени является внутренней реакцией на хроническое повреждение, и при продолжающемся повреждении фиброз может прогрессировать до конца. стадия следствие, цирроз. Необходимы неинвазивные и надежные биомаркеры для раннего выявления фиброза печени. На основе модели индуцированного CCl 4 фиброза печени у крыс, профили метаболизма в моче и сыворотке, выполненные с помощью LC-QTOF-MS, связанные с гистологическим прогрессированием, были использованы для идентификации потенциальных биомаркеров фиброза печени для раннего прогнозирования и выявления значимых фиброзных путей и их динамические изменения на разных стадиях фиброза печени.Наконец, девять дифференциальных метаболитов в моче и десять в сыворотке были отобраны и идентифицированы с участием наиболее важных метаболических путей. Нарушения метаболитов цикла триптофана, валина, лейцина, изолейцина и цитрата (TCA), а также метаболитов сфинголипидов и глицерофосфолипидов возникают с самого начала фиброза печени. Кроме того, нарушение регуляции метаболитов биосинтеза валина и желчных кислот происходило на промежуточных и поздних стадиях. Что еще более важно, среди этих метаболитов кинуреновая кислота в моче, 5-гидроксииндолацетилглицин, 4- (2-амино-3-гидроксифенил) -2,4-диоксобутановая кислота и сфинганин сыворотки крови, сфингомиелин, L-лейцин, L-триптофан и LysoPC (17: 0) изменяется во всех временных точках и может служить потенциальными ранними биомаркерами для диагностики фиброза печени и терапевтическими мишенями.В целом, в этой работе оценивается потенциал этих метаболитов для раннего выявления фиброза печени.

Введение

Фиброз печени является результатом динамического процесса, который рассматривается как результат накопления внеклеточного матрикса (ЕСМ) после повреждения печени 1 . При длительном поражении печени фиброз может прогрессировать до необратимого конечного следствия - цирроза, ведущей причины заболеваемости и смертности от заболеваний печени во всем мире 2 , 3 .Тем не менее, благодаря способности печени к регенерации фиброз может быть обращен вспять 1 . Поэтому срочно необходимо раннее выявление и регресс фиброза печени.

В настоящее время оценка фиброза печени в первую очередь основана на биопсии печени (БП), которая считается золотым стандартом диагностики. Однако инвазивный характер этой процедуры делает ее рискованной и подверженной значительным ошибкам выборки и вариабельности оценок. 4 .Соответственно, срочно необходим прогресс в проверке новых региональных и точных неинвазивных биомаркеров для точной оценки и диагностики ранних стадий фиброза печени.

Метаболомика - это новейший метод системной биологии для идентификации глобальных изменений метаболического профиля эндогенных веществ в биологических системах, который может использоваться для характеристики различных физиологических и патологических состояний организмов под воздействием внешних физических, химических и экологических стимулов 5 , 6 .В последнее время метаболомика широко используется в диагностике и мониторинге прогрессирования заболевания, обеспечивая критически важную информацию о патогенезе заболевания 7 . Основными методами, используемыми для метабономического анализа, являются масс-спектрометрия (МС) и спектроскопия ядерного магнитного резонанса 8 . В метаболомике на основе МС сверхэффективная жидкостная хроматография - квадрупольная времяпролетная масс-спектрометрия высокого разрешения (UPLC-QTOF / HDMS) считается одним из лучших аналитических методов благодаря своей высокой аналитической скорости и чувствительности, а также высокой разрешение хроматографических пиков для сложных биологических образцов 9 .В настоящее время исследователи используют этот метод для исследования диагностических и потенциальных биомаркеров, связанных с заболеванием 10 , 11 . В настоящее время в ряде метаболомных исследований сообщается об изменениях метаболитов при различных заболеваниях печени, включая гепатоцеллюлярную карциному, неалкогольную жировую болезнь печени (НАЖБП) и алкогольный гепатит (АГ) 12 - 16 . Метаболомика также применяется для разработки диагностических или прогностических биомаркеров фиброза печени.Например, Хуанг, H и др. . идентифицировали набор биомаркеров (лизофосфатидилхолины и др. ), чтобы различать ранние стадии воспаления печени и фиброза у пациентов с хроническим гепатитом B 4 . Токусигэ, К и др. . обнаружили некоторые биомаркеры, позволяющие предположить, что нарушение метаболизма гормонов было связано с прогрессированием фиброза при НАЖБП 14 .

Животные модели болезней человека играют важную роль в изучении патогенных процессов благодаря простоте управления и исключения клинических проб и финансовых или этических проблем. 17 .Модель фиброза печени, индуцированного четыреххлористым углеродом (CCl 4 ) у крыс, хорошо охарактеризована 18 . Повторные инъекции CCl 4 вызывают повреждение, воспаление и фиброз печени у крыс, которые клинически схожи с патологией фиброза печени человека, по оценке анализа сыворотки и гистологического окрашивания 19 . К данным, эта модель была использована для выяснения механизма, лежащего в основе патогенеза фиброза печени и обнаружения диагностических биомаркеров 20 - 22 .Тем не менее, эти исследования имеют ограниченную ценность для выявления изменений биомаркеров фиброза печени и для мониторинга всего процесса развития и прогрессирования заболевания. Кроме того, в нескольких исследованиях изучалась комбинация метаболомики мочи и сыворотки, что может дать более полное представление о патогенезе фиброза печени.

В настоящем исследовании с использованием модели индуцированного CCl 4 фиброза печени крысы, была проведена метаболомика на основе квадрупольной времяпролетной масс-спектрометрии с ультраэффективной жидкостной хроматографией (UPLC-QTOF-MS) для определения профиля метаболитов в сыворотке и моче. , чтобы идентифицировать ключевые метаболические изменения во время прогрессирования фиброза печени, а также уточнить прогрессирование фиброза и предоставить диагностическую информацию для раннего выявления фиброза печени.

Результаты

Гистопатологические наблюдения

На рисунке показаны репрезентативные микрофотографии окрашенных гематоксилином и эозином (H&E) и трихромом Массона тканей печени из контрольной и модельной групп на 2, 4, 6 и 8 неделе окрашивания H&E (рис.) указали, что контрольная группа показала нормальную лобулярную архитектуру с центральными венами и расходящимися печеночными тяжами. В модельной группе произошел ряд серьезных изменений морфологии печени, включая прогрессирующие степени жирового метаморфоза, воспаления и некроза.Ко второй неделе в печени модельных крыс не было обнаружено никаких значительных отклонений от нормы, но были обнаружены некоторые жировые метаморфозы. Напротив, произошли значительные патологические повреждения, включая небольшую гранулярную дегенерацию, инфильтрацию воспалительных клеток и увеличение количества фибробластов между портальной зоной и межлобулярной областью от 4 до 6 недель. На 8 неделе у крыс наблюдали дальнейшее накопление мертвых или раздутых гепатоцитов, повышенное количество фибробластов и реконструкцию доли печени. Кроме того, окрашивание трихромом по Массону (рис.) указывает на отложение коллагена и накопление фиброза у крыс, которым инъецировали CCl 4 на 4, 6 и 8 неделе; тогда как у крыс контрольной или модельной группы на 2-й неделе морфологических изменений не наблюдалось.

Репрезентативные микрофотографии окрашивания H&E и трихромом Массона (100-кратное). ( A – E ) Ткани печени окрашивали H&E в контрольной и модельной группах на 2, 4, 6 и 8 неделях. ( G – K ) Ткани печени окрашивали с использованием окрашивания по Массону в контрольной и модельной группах при недели 2, 4, 6 и 8.Все значения представлены как средние значения ± стандартное отклонение. Статистическая значимость рассчитывалась с использованием двустороннего t-критерия Стьюдента с 95% доверительным интервалом. * P <0,05, ** P <0,01 по сравнению с контрольной группой.

Анализ траектории и метаболического профиля

Метаболические профили образцов мочи и сыворотки были получены с использованием UPLC-QTOF / HDMS в режимах положительных и отрицательных ионов. Как правило, траекторный анализ графиков показателей анализа основных компонентов (PCA) для фиброза печени в разные моменты времени показывает четкие различия в обоих положительных результатах (рис.) и режимы отрицательных ионов (Дополнительный рис. S1 ). Параметры сыворотки и мочи (R 2 Y, Q 2 ), использованные для классификации из программного обеспечения Waters EZinto 3.0, показали хорошую пригодность и прогноз, соответственно. Дорожки метаболических профилей в моче и сыворотке четко демонстрируют изменения, зависящие от времени, и отражают изменения на разных этапах эволюции фиброза печени (стрелки указывают на изменчивые тенденции в паттернах метаболизма). Кроме того, профили метаболизма в моче между контрольной и модельной группами на 8 неделе четко показали, что максимальное разделение вызвало значительные метаболические нарушения и патобиологические изменения в результате фиброза печени, особенно в положительном режиме.Для дальнейшей проверки разделения метаболических профилей на разных стадиях эволюции фиброза печени был проведен дискриминантный анализ методом ортогональных частичных наименьших квадратов (OPLS-DA). Контрольную группу и группу модели фиброза печени можно было полностью разделить во все временные точки (недели 2, 4, 6 и 8) на графиках оценки OPLS-DA (дополнительный рисунок S2A – D ). Параметры (R 2 X, R 2 Y и Q 2 ) для каждой модели показаны в дополнительной таблице S1 , которая указывает на то, что эти модели имеют удовлетворительное соответствие и точность прогноза. .

Траекторный анализ графиков показателей PLS-DA и 3D PLS-DA для фиброза печени. ( A, C ) Образцы мочи в положительном состоянии (R 2 Y = 86%, Q 2 = 62%). ( B, D ) Образцы сыворотки в положительном режиме (R 2 Y = 98%, Q 2 = 93%).

Выбор и идентификация важных дифференциальных метаболитов

Идентифицированные метаболиты были отобраны в соответствии с их переменной важностью в значениях проекции (VIP) V-графиков (дополнительный рис. S2E ) между модельной группой на 8 неделе и контрольной группой. Как правило, значения VIP отражают влияние каждой переменной, при этом большее расстояние указывает на более важную проекцию. Поэтому критерии значения VIP в моче и сыворотке были увеличены отдельно, чтобы сузить целевые показатели. Наконец, всего 41 переменная в сыворотке была выбрана со значениями VIP более 3,0 и значениями P (t-критерий) менее 0,05. Аналогичным образом были отобраны 46 переменных в моче со значениями VIP более 2.0 и P-значения (t-критерий) менее 0,05. Подробный метод идентификации соединений был ранее описан 23 . Модели PLS-DA (рис.), Основанные на этих различиях, показали, что модельная группа может быть четко отделена от контрольной группы на 8 неделе, и, таким образом, эти метаболиты потенциально могут рассматриваться как дифференциальные метаболиты, представляющие метаболические характеристики фиброза печени. Между тем, тесты перестановки классов были показаны на рис. Для перспективной оценки предсказуемости этих моделей PLS-DA.Кроме того, чтобы изучить изменения этих маркеров фиброза печени на разных этапах эволюции, мы сравнили концентрации этих метаболитов в модельной группе в другие моменты времени (2, 4 и 6 недели). P-значения из t-теста и ANOVA также применялись для расчета значимости каждого идентифицированного метаболита. Окончательные результаты для различных идентифицированных метаболитов показаны в дополнительной таблице S2 . Кроме того, различные метаболиты были визуализированы в виде тепловой карты, которая напрямую показывала изменения идентифицированных метаболитов в моче и сыворотке между контрольной и модельной группами на 2, 4, 6 и 8 неделях (рис.). Мониторинг изменений этих метаболитов может предсказать развитие фиброза печени. Корреляционный анализ (рис.) Показал хорошую корреляцию между этими идентифицированными метаболитами.

Графики

PLS-DA для мочи ( A ) и сыворотки ( B ) идентифицировали дифференциальные метаболиты в контрольной и модельной группах на 8 неделе. Проверка их мочи ( C ) и сыворотки ( D ) Модели PLS-DA с помощью тестов на перестановку классов на 8 неделе. Все эти модели были проанализированы OmicsBean (http: // www.omicsbean.cn/).

Тепловая карта дифференциальных уровней содержания метаболитов на 2, 4 и 8 неделях. ( A ) Профили метаболизма в образцах мочи. ( B ) Метаболические профили образцов сыворотки. Строки: образцы; столбцы: метаболиты. Степень насыщенности цвета указывает значение экспрессии метаболита, зеленый цвет: самый низкий; красный: самый высокий; и черный: средний. Корреляционная матрица дифференциальных метаболитов, созданная с использованием линейного корреляционного анализа Пирсона. ( C ) Метаболические профили образцов мочи.( D ) Метаболические профили образцов сыворотки. Цветовая насыщенность красного или синего цвета представляет собой положительный и отрицательный коэффициенты корреляции между маркерами соответственно.

Для дальнейшего изучения воздействия этих выбранных метаболитов и выявления возможных биохимических путей, на которые влияет фиброз печени, был разработан MetPA (Metabolomics Pathway Analysis), чтобы выявить наиболее важные пути, на которые влияет фиброз печени. Рисунок и дополнительная таблица S3 показывают четыре метаболических пути в моче, участвующих в метаболизме триптофана, цитратном (TCA) цикле, разложении валина, лейцина и изолейцина и метаболизме глиоксилата и дикарбоксилата, а также шесть метаболических путей в сыворотке, участвующих в метаболизме сфинголипидов. биосинтез валина, лейцина и изолейцина, биосинтез аминоацил-тРНК, метаболизм глицерофосфолипидов, деградация валина, лейцина и изолейцина и первичный биосинтез желчных кислот.Эти метаболические пути показали заметные уровни нарушения регуляции (-Log (p)> 2) на протяжении фиброза печени и могли способствовать развитию фиброза печени. Наконец, девять ключевых метаболитов в моче были идентифицированы с помощью этих выбранных метаболических путей, а именно: пять метаболитов (L-триптофан, кинуреновая кислота, 4- (2-амино-3-гидроксифенил) -2,4-диоксобутановая кислота, 5-гидроксииндолаацетилглицин и 3-метилдиоксииндол) являются продуктами метаболизма триптофана; два метаболита (цис-аконитовая кислота и изоцитриновая кислота) принадлежат к циклу TCA и метаболическим путям глиоксилата и дикарбоксилата; и два метаболита (L-лейцин и метилмалоновая кислота) принадлежали путям деградации валина, лейцина и изолейцина.Кроме того, в сыворотке крови были идентифицированы десять важнейших метаболитов, включая три продукта метаболизма (сфинганин, лактозилцерамид и сфингомиелины) метаболизма сфинголипидов, три продукта метаболизма (L-валин, L-лейцин и L-триптофан) биосинтеза аминоацил-тРНК, два продукта метаболизма (LysoPC (17: 0) и PC (18: 1 (11Z) / 20: 5 (5Z, 8Z, 11Z, 14Z, 17Z)) метаболизма глицерофосфолипидов и два продукта метаболизма (холестерин и гликохолевая кислота) первичной Биосинтез желчных кислот Эти продукты могут быть ключевыми биомаркерами, связанными с механизмами, лежащими в основе инициации и прогрессирования фиброза печени.

Сводка измененных путей метаболизма с помощью MetPA, проанализированных с помощью MetaboAnalyst 3.0. ( A ) Анализ путей метаболизма в образцах мочи. ( B ) Анализ путей метаболизма образцов сыворотки. Размер и цвет каждого круга были основаны на значении воздействия на путь и значении P соответственно.

Изменения и диагностический потенциал важнейших метаболитов

Комбинированные диаграммы в виде ящика и уса представлены на рис., На котором показаны изменения ключевых биомаркеров прогрессирующего фиброза печени от ранней и промежуточной до продвинутой стадий.Эти метаболиты были значительно увеличены или уменьшены на разных стадиях фиброза печени в течение 2-8 недель. Пять метаболитов (кинуреновая кислота, 5-гидроксииндолаацетилглицин, 4- (2-амино-3-гидроксифенил) -2,4-диоксобутановая кислота, 3-метилдиоксииндол и цис-аконитовая кислота) в моче и пять метаболитов (сфинганин, сфингомиелин, L-лейцин, L-триптофан и LysoPC (17: 0)) в сыворотке показали глубокие изменения на 2 неделе; как таковые, они могут указывать на раннее повреждение печени до появления обычных гистологических аномалий.Более того, за исключением 3-метилдиоксииндола и цис-аконитовой кислоты, все эти метаболиты были изменены во всех временных точках. С этой целью эти метаболиты можно рассматривать как связанные с развитием фиброза печени и его ранней диагностикой в ​​качестве биомаркеров. Интересно, что изменение цис-аконитовой кислоты было наиболее значительным в ранний момент времени и менее выраженным на поздней стадии. Учитывая это открытие, мы предположили, что цис-аконитовая кислота может быть идентифицирована как потенциальный биомаркер для различения ранних и поздних стадий фиброза печени.Кроме того, на более поздних стадиях фиброза печени (6-я и 8-я недели) было повышено содержание трех метаболитов (L-триптофан, изоцитриновая кислота, L-лейцин) в моче и трех метаболитов (L-валин, холестерин, гликохолевая кислота) в сыворотке. Метилмалоновая кислота в моче и лактозилцерамид, PC (18: 1 (11Z) / 20: 5 (5Z, 8Z, 11Z, 14Z, 17Z)) в сыворотке были обнаружены только на 8 неделе. Эти вариации метаболитов позволили нам получить важную метаболическую информацию о механизмах, участвующих в эволюции фиброза печени.

Комбинированные графики изменений важнейших метаболитов на разных этапах эволюции фиброза печени. ( A ) Относительная интенсивность девяти метаболитов в моче со 2-й по 8-ю неделю ( B ) Относительная интенсивность десяти сывороточных метаболитов со 2-й по 8-ю неделю * P <0,05, ** P <0,01, *** P < 0,001 достоверных отличий по сравнению с контрольной группой.

Затем, для дальнейшего подтверждения значимости этих метаболитов как потенциальных биомаркеров фиброза печени, на 8-й неделе был проведен анализ кривой рабочих характеристик приемника (ROC) (рис.и дополнительная таблица S4 ) с площадями под кривой (AUC), чувствительностью и специфичностью и 95% доверительными интервалами (95% доверительный интервал). Как представлено здесь, все эти метаболиты были определены как лучшие кандидаты, которые могут значительно повысить диагностические характеристики метаболических маркеров со значениями AUC более 0,85. Среди этих потенциальных кандидатов десять метаболитов, служащих биомаркерами раннего повреждения печени, также были исследованы с помощью ROC-анализа (рис. И дополнительная таблица S5 ) на 2 неделе.Точно так же их значения AUC также были больше 0,85. Более того, восемь из этих метаболитов (5-гидроксииндолацетилглицин, 4- (2-амино-3-гидроксифенил) -2,4-диоксобутановая кислота, кинуреновая кислота, сфинганин, сфингомиелин, L-лейцин, LysoPC (17: 0) и L -триптофан) значительно изменились в модельной группе со 2 по 8 неделю и, таким образом, могут рассматриваться как эффективные биомаркеры для раннего выявления фиброза печени.

Кривые ROC для диагностики фиброза печени на основе потенциальных биомаркеров в образцах мочи ( A ) и сыворотки ( B ) на 8 неделе, а также в образцах мочи ( C ) и сыворотки ( B ) на неделе 2.AUC, площадь под кривой.

Обсуждение

Идентификация чувствительных и специфических биомаркеров для раннего выявления фиброза печени имеет большое значение. Метод метаболомики - полезный инструмент для обнаружения диагностических и терапевтических биомаркеров путем анализа глобальных изменений метаболического профиля. В этом исследовании метаболомика мочи и сыворотки на основе UPLC-QTOF / HDMS выявила изменения в метаболических путях, включая метаболизм аминокислот (метаболизм триптофана, валина, лейцина и изолейцина), цикл TCA и метаболизм дикарбоксилата в моче (рис.) и в метаболизме аминокислот (метаболизм валина, лейцина и изолейцина), метаболизме сфинголипидов, биосинтезе аминоацил-тРНК, метаболизме глицерофосфолипидов и первичном биосинтезе желчных кислот в сыворотке (рис.). Эти изменения произошли во время инициации и прогрессирования фиброза печени у крыс, получавших CCl 4 , и были тесно связаны с инициацией и прогрессированием фиброза печени. Среди этих метаболитов стоит отметить, что кинуреновая кислота мочи, 4- (2-амино-3-гидроксифенил) -2,4-диоксобутановая кислота, 5-гидроксииндолацетилглицин и сфинганин сыворотки, сфингомиелин, LysoPC (17: 0), L-лейцин и L-триптофан менялись во все моменты времени в этом исследовании. Поэтому мы предполагаем, что эти продукты являются потенциальными ранними биомаркерами для диагностики фиброза печени и кандидатами в терапевтические мишени.

Сеть идентифицированных ключевых биомаркеров и путей в соответствии с базой данных путей KEGG. Метаболиты, окрашенные в синий или красный цвет, представляют соответственно снижение или увеличение уровней у крыс с фиброзом печени на 8 неделе.

Изменения аминокислот и их метаболитов

Идентифицированные метаболиты, включая L-триптофан, кинуреновую кислоту, 5-гидроксииндолацетил. глицин и 3-метилдиоксииндол, 4- (2-амино-3-гидроксифенил) -2,4-диоксобутановая кислота в моче являются побочными продуктами метаболизма триптофана.Модельная группа показала заметно повышенный уровень L-триптофана в моче на 6 и 8 неделе и значительное снижение четырех других метаболитов во все моменты времени, что свидетельствует о нарушении метаболизма триптофана в начале и развитии фиброза печени (дополнительный рисунок S3 ).

L-триптофан является незаменимой аминокислотой, необходимой для биосинтеза белка и метаболизируется в основном посредством кинуренина (Kyn) и серотонина. Биосинтез молекул активных форм кислорода (АФК) играет центральную роль в патогенезе повреждения и фиброза печени 20 , 24 .Предыдущее исследование показало, что L-триптофан усугубляет стеатоз печени, продукцию ROS, повреждение печени и фиброз, вызванные диетой с высоким содержанием жиров и фруктозы у мышей 25 . Хотя L-триптофан в основном используется для синтеза белка, часть L-триптофана используется для синтеза серотонина и кинуренина. Триптофан может быть преобразован в кинуренин с помощью индоламин-2,3-диоксигеназы, а затем преобразован в кинуреновую кислоту (KYNA) с помощью аминотрансферазы 9 .Путь Kyn коррелирует с воспалением и окислительным стрессом (SOX), который, как постулируется, играет решающую роль в патогенезе тканевого фиброза 26 - 28 . KYNA является лигандом рецептора 35, связанного с G-белком-сиротой (GPR35). Активация этого рецептора ингибирует высвобождение TNF-α (фактора некроза опухоли) макрофагами в условиях воспаления, вызванного липополисахаридами (LPS). Кроме того, GPR35 снижает внутриклеточный Ca 2+ , ингибируя его проникновение.Следовательно, KYNA, скорее всего, оказывает противовоспалительное действие 29 . KYNA также является эндогенным антиоксидантом, который может улавливать гидроксильные радикалы и пероксинитрит 20 . Кроме того, есть свидетельства того, что пониженные концентрации KYNA могут быть обнаружены при некоторых типах фиброза тканей, таких как атеросклероз и фиброз почек 9 , 29 .

Кроме того, мы также обнаружили, что уровни валина и лейцина в сыворотке резко снизились во время развития и развития фиброза печени и, наоборот, увеличились на поздней стадии (дополнительный рис. S4 ). Интересно, что уровень L-лейцина в моче снизился к 6 и 8 неделям. L-лейцин представляет собой разветвленную аминокислоту, участвующую в синтезе белка в печени, и ее депривация вызывает стеатоз печени у мышей с нокаутом Gcn2 30 . Наканиши и др. . сообщили, что L-валин может улучшить заболевание печени, улучшая выработку тромбопоэтина гепатоцитами и фиброза печени, способствуя восстановлению после повреждения печени 31 . Кроме того, соотношение аминокислот с разветвленной цепью (BCAA, валин, лейцин и изолейцин) к ароматическим аминокислотам (тирозин, фенилаланин и триптофан) было ниже при HBV (вирус гепатита B), LC (цирроз печени) и HCC (гепатоцеллюлярная карцинома). ), что указывает на то, что усиленный катаболизм валина и лейцина и снижение распада триптофана связаны с заболеваниями печени 32 .Соответственно, наши данные показывают заметное снижение L-валина и L-лейцина на ранней стадии в группе, получавшей CCl 4 , что указывает на повреждение печени и может способствовать прогрессированию фиброза печени. Однако необходимы дополнительные исследования, чтобы подтвердить, повышаются ли уровни валина и лейцина в сыворотке крови на поздней стадии фиброза печени, и изучить механизмы, лежащие в основе их положительных эффектов.

Изменения в цикле TCA

Цикл TCA является последним общим окислительным путем для жиров, углеводов и аминокислот и наиболее важным центральным путем, соединяющим почти все индивидуальные метаболические пути 33 ; Кроме того, цикл TCA имеет тесную связь с некоторыми заболеваниями печени.Сатапати С. и др. . сообщили, что накопление липидов и потеря действия инсулина привели к усилению окислительных и анаплеротических путей цикла ТЦА в печени у мышей, которые прогрессировали до инсулинорезистентности и ожирения печени из-за диеты с высоким содержанием жиров 34 . Однако фиброз печени произошел из-за продолжающегося повреждения печени, вызванного окислительным стрессом, и цикл TCA был замедлен клеточной регуляцией, чтобы уменьшить естественное производство ROS; этот эффект был связан с заболеваниями печени, вызванными различными механизмами 20 .Аналогичным образом, в нашем исследовании модельная группа показала значительно пониженное содержание изоцитриновой кислоты в моче (промежуточные продукты цикла TCA) на 4, 6 и 8 неделе и значительное накопление цис-аконитовой кислоты (промежуточные продукты цикла TCA) на 2 и 8 неделе по сравнению с нормальной группой (( Дополнительный рис. S5 ), который предполагал участие измененного цикла TCA в течение всего времени фиброза печени у крыс, леченного CCl 4 .

Изменения в метаболизме сфинголипидов

Метаболизм сфинголипидов играет решающую роль в прогрессировании фиброза печени, что было продемонстрировано в более ранних исследованиях 17 , 35 , 36 .Крысы с фиброзом печени, использованные в нашем исследовании, показали значительно сниженные уровни сфинганина, лактозилцерамида и сфингомиелина в сыворотке (дополнительный рисунок S6 ).

Измененный метаболизм сфинголипидов потенциально связан с воспалительной реакцией и увеличением церамидов 26 . Керамиды соединяются со сфингомиелинами, свободными сфингоидными основаниями и их фосфатами, а сложные гликосфинголипиды составляют сфинголипиды, которые рассматриваются как очень разнообразный класс липидов 35 .Эти липиды участвуют в процессах смешанных сигналов, включая пролиферацию, дифференцировку и апоптоз 36 , 37 , и, таким образом, потенциально влияют на патогенез различных заболеваний, особенно тех, которые связаны с фиброзом тканей 38 . В частности, наши данные показывают, что происходят изменения в уровнях сфинганина и сфингомиелина, вызванные нарушением регуляции метаболизма сфинголипидов на всех стадиях в группе фиброза печени, и что эти метаболиты могут представлять собой потенциальные маркеры для использования в раннем неинвазивном прогнозировании фиброза печени. .

Изменения в метаболизме глицерофосфолипидов

Глицерофосфолипиды (GP), как накопительные отложения для липидных медиаторов, функционируют как интегральные мембранные белки, переносчики, рецепторы и ионные каналы 39 . Крысы, обработанные CCl 4 , могут подвергаться нарушениям липидного обмена, вызывая фиброз печени 17 . Лизофосфолипиды являются метаболитами метаболизма GP и могут временно продуцироваться во время ремоделирования GP 40 .Предыдущие сообщения показали, что LysoPCs играют важную роль в прогрессировании повреждения печени. На ранней стадии повреждения печени дефицит LysoPC отражает быстрый оборот мембранного фосфатидилхолина 41 . Фосфатидилхолин (PC), как важное поддерживающее питательное вещество для печени, оказывает очевидный защитный эффект от повреждения печени вирусами, фармацевтическими препаратами, алкоголизмом и другими токсическими воздействиями 42 . PC был также эффективен против фиброза и цирроза у бабуинов 39 .Соответственно, в этом исследовании уровни LysoPC (17: 0) и PC (18: 1 (11Z) / 20: 5 (5Z, 8Z, 11Z, 14Z, 17Z) были значительно ослаблены в сыворотке крови CCl 4 . -обработанная группа, что указывает на то, что метаболизм GP снижается в процессе фиброза печени.

Изменения в биосинтезе первичных желчных кислот

Желчные кислоты обычно поддерживаются в периферическом кровообращении на уровне свободных и конъюгированных форм. При возникновении заболеваний баланс будет нарушен, особенно в синтезе, реабсорбции и экскреции желчных кислот, что может привести к повышению уровня общей желчной кислоты 43 .В предыдущих исследованиях сообщалось, что повреждение печени, вызванное заболеваниями печени, такими как цирроз и заболевание желчного пузыря, приводит к снижению печеночного клиренса желчных кислот и, в конечном итоге, к увеличению уровней желчных кислот в сыворотке. 44 ​​ . Кроме того, сообщалось, что метаболизм желчных кислот участвует в ингибировании увеличения экскреции у крыс с фиброзом печени 43 . Недавние исследования показали, что желчные кислоты могут способствовать повреждению печени и, в конечном итоге, способствовать циррозу или печеночной недостаточности, модулируя индуцированный желчной кислотой апоптоз и некроз гепатоцитов 41 .Как отмечалось выше, желчные кислоты считаются признаком поражения печени. В нашем исследовании холестерин и гликохолевая кислота, которые считаются конъюгированными желчными кислотами, резко повысились на промежуточной и продвинутой стадиях в группе, получавшей CCl 4 . Эти данные указывают на участие измененного метаболизма липидов сыворотки в патогенезе фиброза печени.

Таким образом, мы провели исследования метаболомики мочи и сыворотки крови у крыс с фиброзом печени, обеспечили целостное понимание прогрессирования заболевания и заложили основу для будущей разработки биомаркеров, специфичных для фиброза печени, для раннего клинического прогнозирования и диагностики заболевания.Настоящие результаты также выявили значительные фиброзные пути и динамические изменения на разных стадиях фиброза печени. Нарушения триптофана, валина, лейцина, изолейцина, цикла TCA, метаболизма сфинголипидов и метаболизма GP происходили с самого начала фиброза печени. Кроме того, на промежуточной и поздней стадиях наблюдались глубокие изменения в метаболитах биосинтеза валина и желчных кислот. Однако потенциальное взаимодействие и корреляция этих ключевых метаболитов и лежащих в их основе механизмов в патогенезе фиброза печени неясны и требуют дальнейшего изучения.Более того, из-за некоторых технических ограничений в этом исследовании требуется больше образцов и мультианалитических методов для подтверждения диагностической эффективности этих результатов и разработки их диагностических анализов. Поскольку эти метаболомные аномалии были обнаружены только на модели фиброза печени, обработанной CCl 4 , необходимы дополнительные метаболомные исследования фиброза печени у животных и людей, чтобы связать эти результаты с клиническим диагнозом. Кроме того, ожидается, что панель комбинаторных метаболитов выявит комплексный механизм фиброза печени на молекулярном уровне.

Материалы и методы

Химикаты и реагенты

CCl 4 был приобретен у Tianjin Beifang Chemical Company (Тяньцзинь, Китай). Оливковое масло было закуплено у Shanghai Chemical Reagent Company (Шанхай, Китай). Ацетонитрил (степень чистоты для ВЭЖХ) был приобретен в Thermo Fisher Scientific (США). Деионизированную воду получали с использованием системы сверхчистой воды Milli-Q (Millipore, Billerica, США). Муравьиная кислота (чистота для ВЭЖХ) была приобретена в Dikma Technologies (США). Лейциновый энкефалин был приобретен у Sigma-Aldrich (США).Все остальные реагенты были чистыми для ВЭЖХ.

Животные

Самцы крыс Sprague-Dawley (SD) (возраст 1 год, 180-200 г) были получены из Центра оценки безопасности лекарственных средств (Университет китайской медицины Хэйлунцзян). Животных содержали при контролируемой температуре 26–28 ° C, влажности 55% ± 5% и с 12-часовым световым и 12-часовым циклами темноты. Воду и корм крысам давали ad libitum. После недельного периода акклиматизации крыс случайным образом делили на контрольную (n = 7) и модельную (n = 24) группы.Фиброз печени индуцировали подкожной инъекцией CCl 4 (1 мл / кг 40% CCl 4 , разведенного в оливковом масле) два раза в неделю в течение восьми недель. Контрольная группа получала оливковое масло в том же объеме, что и другая группа, но без CCl 4 в течение восьми недель. Эксперимент на животных проводился в соответствии с Руководством по экспериментам на животных Хэйлунцзянского университета китайской медицины, и исследование на животных было одобрено Комитетом по этике животных.

Сбор и подготовка образцов

Все операции выполнялись в стерильных условиях.Образцы ночной мочи (12 ч) собирали в клетках для метаболизма из контрольной (n = 7) и модельной групп (n = 6) каждую неделю, а кровь собирали из орбитальной вены на 2, 4, 6 и 8 неделе. Образцы мочи центрифугировали при 12000 g в течение 10 мин, супернатант мгновенно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C до анализа. Кровь центрифугировали при 900 × g в течение 10 мин, супернатанты переносили в пробирки Эппендорфа и хранили при -80 ° C для анализа UHPLC / MS.Шесть крыс из модельной группы были умерщвлены на 2, 4, 6 и 8 неделе, а крысы из контрольной группы были умерщвлены на 8 неделе. Ткани печени промывали физиологическим буфером и фиксировали в 4% забуференном параформальдегиде до использования для патологического наблюдения.

Гистологическая оценка

Ткани печени, фиксированные параформальдегидом, обрабатывали, и срезы толщиной 4 мкм окрашивали H&E. Балл повреждения фиброза оценивали в соответствии с описанием Ishak 45 в десяти случайно выбранных неперекрывающихся полях для каждой крысы.Кроме того, срезы печени подвергали окрашиванию трихромом по Массону. Для количественной оценки фиброза печени содержание синих пикселей изображений было сфотографировано с использованием того же микроскопа и того же времени увеличения. Для определения значений интегральной оптической плотности и общей площади были выбраны пять различных участков тканевого слайда каждой крысы, а интенсивность экспрессии рассчитывалась как процент интегральной оптической плотности от общей площади, которую анализировали с помощью Image -Pro Plus 6.0.

Анализ UPLC-QTOF-MS

Все образцы мочи и сыворотки размораживали на бане с ледяной водой и перемешивали на вортексе перед анализом. Подготовка и анализ образцов мочи с помощью UPLC-Q-TOF подробно описаны в разделе «Дополнительная информация».

Многомерный анализ данных

Необработанные данные анализировали с использованием программного обеспечения MassLynx V4.1 и MarkerLynx (Waters Corp., Милфорд, США). Матрицу многомерных данных анализировали с использованием программного обеспечения EZinfo (Waters Corp., Милфорд, США).Неконтролируемый PLS-DA был выполнен для визуализации общей кластеризации и тенденций. OPLS-DA использовался для проверки модели PCA. Параметры (R 2 X, R 2 Y и Q 2 ) были рассчитаны для объяснения точности соответствия и предсказательной способности модели. Значения R 2 Y и Q 2 , близкие к 1,0, представляют собой отличную модель. Дифференциальные метаболиты были извлечены из комбинированного V-графика, построенного из графиков нагрузки OPLS-DA между контрольной и модельной группами на 8 неделе, и различия были определены с использованием значений VIP и P-значений из двустороннего t-критерия Стьюдента. -контрольная работа.Классический односторонний дисперсионный анализ (ANOVA), выполненный в IBM SPSS Statistics 23, использовался для дальнейшего выбора и оценки статистической значимости результатов. Тепловая карта, реализованная программой Multi Experiment Viewer, которая обычно используется для неконтролируемой кластеризации, была построена на основе этих дифференциальных метаболитов. Кроме того, был проведен ROC-анализ для выбора кандидатных биомаркеров, а эффективность классификации (1-специфичность и чувствительность с наивысшей точностью) была оценена в соответствии со значениями AUC кривых ROC.

Идентификация метаболитов и анализ путей

Точные данные молекулярной массы из повторяющихся пиков m / z были использованы для подтверждения молекулярной массы метаболита. Допуск по массе между измеренными значениями m / z и точной массой интересующих компонентов был установлен в пределах 5 мДа. Диспетчер приложений MassFragment ™ (Waters MassLynx V 4.1) использовался для облегчения анализа фрагментов MS / MS. Анализ метаболических путей потенциальных биомаркеров фиброза печени проводили с помощью Metabolomics Pathway Analysis (MetPA) с использованием программного обеспечения MetaboAnalyst 3.0 (http://www.metaboanalyst.ca/Metabo-Analyst/) для выявления основных измененных путей анализа 46 . Сетевой анализ идентифицированных биомаркеров показал их взаимосвязь на основе базы данных путей Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) (http://www.genome.jp/kegg/) 47 .

Раскрытие метаболических изменений при повреждении печени, вызванном третьим дымом

Основные моменты

Воздействие табачного дыма в значительной степени изменяет метаболизм в печени самцов мышей.

Наш многоплатформенный метаболомический подход обеспечил широкую аннотацию метаболитов.

Масс-спектрометрические изображения выявили дифференциальное пространственное распределение определенных липидов печени.

Лечение антиоксидантами не может обратить все метаболические изменения, вызванные воздействием THS.

Аннотация

Предпосылки

Дым от третьих лиц (THS) - это скопление газов и частиц табачного дыма, которые внедряются в материалы.Предыдущие исследования пришли к выводу, что воздействие THS вызывает окислительный стресс и стеатоз печени. Несмотря на осведомленность о возрастающей опасности воздействия THS, метаболические нарушения, вызываемые печенью, до сих пор не определены.

Цели

Целью данного исследования является изучение метаболических нарушений, вызванных воздействием THS в печени самцов мышей, и оценка эффектов лечения антиоксидантами у подвергшихся воздействию мышей.

Методы

Мы исследовали печень трех групп мышей: мышей, не подвергавшихся воздействию THS, подвергнутых воздействию THS в условиях, имитирующих воздействие на человека, и подвергнутых воздействию THS, обработанных антиоксидантами.Образцы печени были проанализированы с использованием многоплатформенного нецелевого метода метаболомики, включая ядерный магнитный резонанс ( 1 H ЯМР), жидкостную хроматографию в сочетании с масс-спектрометрией высокого разрешения (LC-HRMS) и масс-спектрометрическую визуализацию с лазерной десорбцией / ионизацией (MSI), способную карта липидов в тканях печени.

Результаты

Наш мультиплатформенный подход позволил аннотировать восемьдесят восемь метаболитов, измененных воздействием ТГС, включая аминокислоты, нуклеотиды и несколько типов липидов.Основными путями нарушения регуляции под воздействием THS были метаболизм D-глутамина и D-глутамата, метаболизм глицерофосфолипидов и окислительное фосфорилирование и метаболизм глутатиона, причем последние два связаны с окислительным стрессом. У мышей, подвергшихся воздействию THS, также наблюдалось повышенное накопление липидов и снижение метаболитов, участвующих в синтезе фосфохолина, а также дефицит холина, связанный с неалкогольной жировой болезнью печени и стеатогепатитом. Интересно, что лечение антиоксидантами мышей, подвергшихся воздействию THS, уменьшало накопление некоторых липидов, но не могло обратить вспять все метаболические изменения, в том числе некоторые, связанные с нарушением функции митохондрий.

Выводы

THS изменяет функцию печени на молекулярном уровне, нарушая регуляцию многих метаболических путей. Представленные здесь молекулярные доказательства подтверждают, что THS является новым фактором стеатоза печени, и служат основой для будущих исследований в этом отношении.

Ключевые слова

Третьи руки

Метаболомика на основе ЯМР

Метаболомика на основе ЖХ

Масс-спектрометрия, визуализация

Повреждение печени

NAFLD

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

© 2020.Опубликовано Elsevier Ltd.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Frontiers | Изменения, связанные с онтогенезом, в метаболоме печени у детей

Введение

Большинство лекарств, назначаемых детям, не изучались на соответствующей популяции педиатрических пациентов для определения подходящего режима дозирования, при этом около 20% лекарств, одобренных FDA, были маркированы для использования у детей по состоянию на 2016 год (с веб-сайта FDA https: // www.fda.gov/drugs/resourcesforyou/consumers/ucm143565.htm). Следовательно, большинство схем дозирования лекарственных средств для использования в педиатрической популяции основаны на руководящих принципах дозирования, разработанных для взрослых и модифицированных для использования у детей в зависимости от массы тела и размера ребенка. Однако дети отличаются от взрослых не только по размеру или весу, но и по составу тела и развитию органов (1, 2). Распределение многих лекарств зависит от печеночных факторов, таких как кровоток и активность ферментов, метаболизирующих лекарственные средства, и переносчиков.

В частности, было показано, что активность многих изоформ цитохрома P450 (CYP), таких как CYP3A4, CYP1A2 и CYP2D6, у новорожденных ниже по сравнению со взрослыми, каждая из которых имеет определенную траекторию развития (3, 4).Аналогичные результаты были получены для глюкуронозилтрансфераз (5) и экспрессии транспортеров печени (6). В дополнение к критической необходимости понять онтогенез распределения лекарств, чтобы помочь в выборе соответствующей возрасту дозы, необходимо признание того, что ребенок представляет собой динамично изменяющуюся биологическую систему. Например, возрастные изменения в профилях органических кислот означают, что функция митохондрий может изменяться во время роста и развития, что особенно актуально в контексте гепатотоксичности вальпроата (7).Менее изучены траектории развития печеночных путей, которые служат мишенями для действия лекарств, таких как биосинтез холестерина (статины) и гомеостаз глюкозы (метформин).

Технологический прогресс в измерении метаболитов и быстрая коммерциализация нового оборудования ускорили внедрение метаболомики во всех аспектах фундаментальных, популяционных и клинических биомедицинских исследований (8, 9). Метаболиты - это субстраты, кофакторы и продукты, необходимые для биологических путей и важные для клеточных функций.Кроме того, многие эндогенные соединения также являются субстратами для ферментов и переносчиков «лекарств». Таким образом, цель этого исследования состояла в том, чтобы охарактеризовать биохимические изменения, происходящие в печени между рождением и 18-летним возрастом, и получить первоначальное представление о возрасте / стадиях развития, которые могут быть связаны с измененным ответом на лекарства или повышенной восприимчивостью к возрастной токсичности лекарств, но не к токсичности. очевидно из данных для взрослых.

Материалы и методы

Образцы печени

посмертных педиатрических образца ткани печени человека были получены через Банк мозга и тканей для выявления нарушений развития в Университете Мэриленда (Балтимор, Мэриленд), Систему распределения клеток ткани печени (LTCDS; Университет Питтсбурга и Университет Миннесоты) и XenoTech LLC. (Lenexa, KS).Использование этих тканей было классифицировано Комитетом по надзору за педиатрическими учреждениями Детской больницы милосердия как предмет исследования, не относящегося к человеку. Репликационный набор посмертных образцов ткани печени из аутопсий плодов (после терапевтических абортов или мертворожденных) и младенцев был предоставлен Банком тканей медицинского центра Erasmus, Софийской детской больницей, Роттердам, Нидерланды. Ткань получали во время вскрытия в течение 24 часов после смерти, мгновенно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C для дальнейшего использования в исследованиях.Совет по этике исследований Медицинского центра Эразмус отказался от формального этического утверждения в соответствии с голландским законом о медицинских исследованиях на людях. Ткань собирали при наличии письменного информированного согласия родителей как на вскрытие, так и на явное использование ткани для исследования. Образцы были отобраны на основании отсутствия клинического диагноза или лекарств, влияющих на печень (CMH и Медицинский центр Erasmus), а также ткань, которая была гистологически нормальной (Медицинский центр Erasmus). Выборки были разделены на четыре возрастные группы: <1 год (возрастная группа 1), от 1 до <6 лет (возрастная группа 2), от 6 до <12 лет (возрастная группа 3) и от 12 до 18 лет (возрастная группа 2). группа 4).Всего для метаболомного анализа было доступно 98 образцов печени. Характеристики исследуемой группы представлены в таблице 1.

Таблица 1 . Резюме педиатрических образцов печени, включенных в исследование.

Метаболомический анализ

Ненаправленное метаболомное профилирование было проведено компанией Metabolon Inc. (Дарем, Северная Каролина). Образцы в двух сериях экспериментов, Эксперимент 1 и Эксперимент 2, как описано ниже и изображено на Фигуре 1A.

Рисунок 1.(A) Описание двух процедур, используемых для получения концентраций метаболитов, и того, как образцы были распределены по трем партиям. (B) Блок-схема всей партии анализа, включая то, как проводился контроль качества необработанных данных, и резюмирует валидацию метаболитов.

Эксперимент 1

Первый эксперимент был завершен с использованием первого набора образцов ( N = 48) (называемого «партия 1»).

Извлечение и обнаружение метаболитов, как описано ранее (10).Вкратце, подготовка образцов печени проводилась с использованием запатентованной серии органических и водных экстракций для удаления белковой фракции и оптимизации извлечения малых молекул с помощью автоматизированной системы MicroLab STAR ® (Hamilton Company, UT, США), центрифугирования и полученного результата. Супернатанты анализировали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, масс-спектрометрии (UPLC-MS / MS) в режиме положительных и отрицательных ионов (UPLC: Waters, Milford, MA; масс-спектрометр: Thermo-Finnigan LTQ, Thermo Fisher Scientific, Waltham, МА, диапазон сканирования 80–1000 m / z) и с помощью GC-MS (одноквадрупольный масс-спектрометр Thermo-Finnigan Trace DSQ с быстрым сканированием, диапазон сканирования 50–750 m / z).Набор метаболомных данных заключительного эксперимента 1 включал в общей сложности 751 биохимический продукт, 478 соединений с известной идентичностью (названные биохимические вещества) и 273 соединения с неизвестной структурной идентичностью. Поскольку первоначальный статистический анализ выявил зависящий от возраста эффект, который нельзя было отличить от эффекта, связанного с тканевым источником, репликационный набор образцов группы 1 был получен в сотрудничестве с Медицинским центром Эразмус / Детской больницей Софии.

Эксперимент 2

Учитывая, что метаболомная платформа изменилась между первым анализом и набором образцов, содержащим образцы репликации, во втором эксперименте исследовали весь набор из 98 образцов.Те же 48 образцов, которые ранее были обработаны в эксперименте 1 и обозначены выше как «партия 1», были повторно проанализированы на новой платформе, а результаты были обозначены как «партия 2». Репликационные образцы из Медицинского центра Эразмус / Софийской детской больницы и дополнительные образцы из CMH ( N = 50) обозначены как «партия 3». После экстракции образца полученный экстракт анализировали с использованием Waters ACQUITY UPLC и Thermo Scientific Q-Exactive с высоким разрешением / точным масс-спектрометром, сопряженным с источником ионизации электрораспылением с подогревом (HESI-II) и масс-анализатором Orbitrap, работающим при разрешении по массе 35000 ( 11).Было использовано четыре метода: два отдельных метода с обращенной фазой (RP) / UPLC-MS / MS с ионизацией электрораспылением (ESI) в режиме положительных ионов, RP / UPLC-MS / MS с режимом отрицательных ионов ESI и HILIC / UPLC-MS / MS. с режимом отрицательных ионов ESI. Анализ MS чередовался между сканированием MS и MS n , зависящим от данных, с использованием динамического исключения. Диапазон сканирования незначительно варьировался между методами, но составлял 70–1000 m / z. Набор метаболомных данных заключительного эксперимента 2 включал в общей сложности 971 биохимический продукт, 779 соединений с известной идентичностью (названные биохимическими веществами) и 192 соединения с неизвестной структурной идентичностью.

Обработка данных

Необработанные данные были извлечены, идентифицированы пики и обработаны для контроля качества с использованием запатентованного оборудования и программного обеспечения. Соединения были идентифицированы путем сравнения с записями в библиотеке очищенных стандартов или повторяющихся неизвестных объектов (12). Пики были количественно определены с использованием площади под кривой. Поскольку метаболомные анализы охватывают несколько дней, был выполнен этап нормализации данных, чтобы скорректировать вариации, возникающие в результате различий в настройках прибора между днями. По сути, каждое соединение корректировалось в блоках рабочего дня путем регистрации медианы равной единице (1.00) и пропорциональной нормализации каждой точки данных.

Статистический анализ

Были приняты дополнительные меры контроля качества, которые показаны на Рисунке 1B, такие как вменение недостающих данных и нормализация. Во-первых, из последующего анализа были удалены метаболиты, данные которых отсутствовали более чем на 75%. После удаления метаболитов из набора данных анализа данные были преобразованы и масштабированы log 2 с последующим вменением пропущенных значений с минимальным обнаруженным уровнем для конкретного метаболита, разделенным на 2.Скрытые эффекты не поддаются измерению, а ненаблюдаемые факторы могут искажать результаты, некоторые примеры скрытых эффектов - это периодические эффекты, ежедневные колебания характеристик прибора. Скрытые факторы были выявлены с помощью анализа главных компонентов (PCA), в котором 2 главных компонента (PC) были скорректированы с использованием линейной модели для каждой партии. Удаление двух верхних ПК обеспечивает баланс между удалением скрытых технических факторов при сохранении биологически значимых факторов. С другой стороны, возможно, что некоторые из предполагаемых скрытых факторов не являются техническими артефактами, а скорее представляют истинную биологию, представленную в данных.

Неразумно предполагать, что содержание каждого метаболита нормально распределено, поэтому непараметрический тест Краскела-Уоллиса (KW) на основе рангов был проведен для каждой партии и метаболита индивидуально, чтобы определить, были ли какие-либо различия в метаболите. уровни среди четырех возрастных групп (AG1 - дети <1 года; AG2 - дети в возрасте от 1 до 6 лет; AG3 - дети в возрасте от 6 до 12 лет; AG4 - дети в возрасте от 12 до 18 лет). Линейные связи между возрастной группой и уровнями метаболитов были исследованы с помощью корреляционного теста Спирмена.Чтобы сделать поправку на многократное тестирование, была применена поправка Бонферрони. Статистический анализ был ограничен метаболитами, общими для трех партий образцов, чтобы дать возможность оценить как техническую, так и биологическую валидацию. Биологическая проверка была достигнута путем определения того, какие метаболиты имели значимое значение p из теста KW в обеих партиях 2 и 3. Затем этот набор метаболитов сравнивали с набором метаболитов со значимым значением p из теста KW ( р <0.05) в партии 1 для технической проверки. Попарные различия были оценены для технически подтвержденного метаболита с использованием тестов Манна-Уитни.

Значение связи между концентрациями одного метаболита и возрастом может быть трудно связать с важными биологическими процессами, в то время как группирование метаболитов в биологически значимые наборы может помочь понять весь набор метаболитов. Чтобы определить связь между возрастом и набором метаболитов, мы использовали гамма-метод, разновидность метода Фишера (13).В гамма-методе p -значения из анализа ассоциации возраста метаболитов были объединены в статистику теста, определяемую как i = 1kh (pi), где k представляет количество метаболитов в пути, p i представляет собой значение p для связи между метаболитом i -го и возрастной группой, а h () представляет собой кумулятивную функцию обратного гамма-распределения [т.е. Gω, 1-1 (1-pi )]. Это преобразование дает больший вес со значениями p ниже порогового значения мягкого усечения, определяемого параметром формы ω (13, 14).Для этого анализа мы устанавливаем параметр формы на 0,0382, что дает больший вес p <0,1. Из-за корреляции между метаболитами сумма преобразованных значений p не обязательно следует известному распределению; поэтому эмпирические p -значения были вычислены с использованием методов перестановки, с p -значений, оцененных из 100 000 перестановок. Определение и отображение метаболитов в Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) путей и наборов метаболитов лекарств было выполнено с использованием данных картирования путей из MetaboAnalyst (15).В анализ были включены пути метаболитов, содержащие не менее 5 метаболитов и охват не менее 50%, за исключением путей, связанных с болезненными процессами, в результате чего были проанализированы пути 2 KEGG и 30 метаболитов лекарственного средства. Только метаболиты, которые присутствовали во всех трех партиях, учитывались для анализа пути. Пути считались обогащенными, если эмпирическое значение p , полученное с помощью гамма-метода, было <0,01 во всех трех партиях.

Результаты

метаболитов с отсутствующими данными более чем на 75% (по всем образцам) были исключены из анализов; 88 из 751 метаболитов были исключены из рассмотрения из партии 1, в то время как 66 и 57 из 971 метаболитов не были рассмотрены во 2 и 3 партиях соответственно.После удаления метаболитов с отсутствующими значениями> 75%, было 322 общих метаболита между 3 партиями для сравнительного анализа (884 общих между партиями 2 и 3). Сначала из данных был удален эффект, связанный с возрастом, а затем был проведен PCA для оценки скрытых характеристик. Затем первые 2 основных компонента удаляются для каждой партии индивидуально, и результирующие данные представлены на рисунке 2. Как показано на рисунке 2, существует большая разница в глобальных уровнях метаболитов между младенцем (AG1) и ранним детством / поздним детством / подростковые возрастные группы (AG2 – AG4).Два основных компонента, которые были удалены, составили 29,83, 26,34 и 27,33% от общей дисперсии в каждой партии, соответственно. Было 16, 21 и 11 метаболитов, которые присутствовали только в AG1 в партиях 1, 2 и 3, соответственно. Однако был только один метаболит, эстриол-3-сульфат, который присутствовал только в AG1 для всех партий.

Рисунок 2 . Анализ основных компонентов каждого метаболита для каждой партии. Метаболомные профили печени для детей младше 1 года четко отделены от профилей детей старше 1 года на графике PCA.

Оценка ассоциации каждого из 884 метаболитов с возрастной группой в партии 2 и партии 3 с использованием теста KW выявила 70 и 197 метаболитов в партии 2 и партии 3, соответственно (Бонферрони скорректировал p <0,05 / 884 = 5,7e -5) (Дополнительные таблицы 1, 2). Корреляционные тесты Спирмена для определения линейных тенденций между метаболитами и четырьмя возрастными группами выявили 95 и 286 метаболитов во 2 и 3 партиях соответственно ( p <0,05 / 884). При нулевой гипотезе о том, что метаболит не связан с возрастом и не зависит между тестами (т.е., метаболиты), мы ожидали, что на уровне значимости 5,7e-5 будет обнаружено 0 метаболитов. Таким образом, похоже, что есть существенное отклонение от нулевой гипотезы. Сорок один из этих метаболитов был обнаружен как в партии 2, так и в партии 3 и имел аналогичное направление действия, измеренное с помощью корреляции Спирмена (Rho), таким образом, считалось биологически подтвержденным.

Для технической проверки 25 из этих 41 биологически подтвержденных метаболитов также были связаны с возрастом в партии 1 ( p <0.05), 24 из которых являются известными метаболитами (дополнительная таблица 3). 24 известных метаболита представлены в таблице 2, а тепловая карта 25 уровней метаболитов представлена ​​на рисунке 3 и дополнительном рисунке 1. Было обнаружено, что из 25 метаболитов 20 имеют повышенные уровни по мере развития в детстве, при этом самые низкие уровни присутствуют у младенца. возрастная группа (AG1) и небольшая разница в уровнях метаболитов между тремя старшими возрастными группами. Кроме того, попарное сравнение между четырьмя возрастными группами показало, что во многих случаях распределение уровней метаболитов значительно различается между младенцами и всеми другими возрастными группами ( p <0.001; Таблица 2). Из 24 известных метаболитов, которые, как было установлено, связаны с возрастом, 3 метаболита находились в суб-путях «метаболизм пуринов (гипо) ксантин / инозин», «метаболизм пиримидина, содержащий урацил» и «длинные жирные кислоты».

Таблица 2 . Двадцать четыре известных метаболита из 25 биологически и технически воспроизведенных метаболитов.

Рисунок 3 . Тепловые карты для 25 биологически и технически подтвержденных метаболитов для каждой из трех партий.

Анализ путей / наборов метаболитов (удаление путей, связанных с этиологией заболевания) с более чем 5 метаболитами и не менее 50% покрытия пути привел к в общей сложности 32 значимых наборах метаболитов ( p <0,001 во всех 3 партиях) (Дополнительная таблица 4). Основываясь на использовании 100000 перестановок, наименьшее наблюдаемое эмпирическое значение p <1/100 000 = 1,0 × 10 −5 . Наиболее значимым путем во всех трех сериях был путь «метаболизм бетаина» (таблица 3).Для этого пути в нашем исследовании присутствовали 12 из 21 метаболита этого пути, что привело к p <1,0 × 10 -5 для всех трех партий. В наш анализ включены 12 метаболитов: 5-метилтетрагидрофолат (5MeTHF), аденозин, бетаин, холин, диметилглицин, флавинадениндинуклеотид (FAD), гомоцистеин, метионин, никотинамид-адениндинуклеотид (NAD +) -фосфат (SAD +) -фосфат (NAD +). , S-аденозилметионин (SAM). Большинство этих метаболитов было индивидуально значимым, связанным с возрастом.Чтобы сопоставить эти результаты с биологическим путем, мы изобразили их вместе с путем на рисунке 4A и обозначили метаболиты, измеренные в нашем исследовании, и результаты, связанные с возрастом. Другой путь KEGG, связанный с возрастом, - это метаболизм альфа-линоленовой кислоты и линолевой кислоты (таблица 3 и рисунок 4B), для которых мы наблюдали 5 метаболитов с p <0,05. Эти 5 метаболитов (арахидонат (20: 4n6), докозапентаеноат (n3 DPA; 22: 5n3), линолеат (18: 2n6), линоленат [альфа или гамма; (18: 3n3 или 6)]) все увеличивались в возраст изобилия.Для 30 из 32 метаболических и / или лекарственных путей (дополнительная таблица 4) те же 10 метаболитов (аденозинмонофосфат, L-аланин, L-метионин, L-лейцин, L-гистидин, L-пролин, L-аспарагин, L-валин, L-треонин, L-солейцин) наблюдались в путях, что привело к одинаковым результатам уровня пути для партии 1, партии 2 и партии 3 из p = 0,00011, 0,00017 и <1,0 × 10 −5 , соответственно (таблица 3 и дополнительный рисунок 2).

Таблица 3 .Сводка результатов для измеренных метаболитов в каждом из путей, связанных с онтогенезом.

Рисунок 4. (A) бетаиновый путь и (B) альфа-линоленовая кислота и метаболизм линолевой кислоты. Результаты для метаболитов, измеренные в этом исследовании, обозначены красным, что указывает на увеличение количества метаболита с возрастом, и синим, что указывает на уменьшение количества метаболита с возрастом. Метаболиты, не измеренные в пути, обозначены черным цветом. Форма соответствует значимости корреляции Спирмена концентрации метаболита и возраста, где квадрат указывает, что p <0.05, а кружок показывает, что p > 0,05.

Обсуждение

Это исследование было направлено на изучение возрастных структур клеточных метаболитов в печени в период от рождения до 18 лет, которые могут указывать на изменение лекарственного ответа или предрасположенность к лекарственной токсичности, уникальную для популяций педиатрических пациентов. Использование метаболомического анализа на основе нецелевой масс-спектроскопии; мы оценили сотни метаболитов в наборе образцов печени у детей, с технической и биологической проверкой, встроенной в дизайн исследования (рис. 1A).Основной проблемой для исследований, подобных тому, которое мы провели, является доступ к большому количеству образцов тканей достаточно высокого качества для получения интерпретируемых результатов; Различия в методах поиска и хранения у различных финансируемых государством и коммерческих поставщиков могут не только способствовать изменчивости качества выборки (16), но также могут затруднить интерпретацию данных. Например, в Соединенных Штатах образцы тканей младенцев в возрасте до 1 года доступны относительно нечасто, а те, которые доступны для исследований, как правило, приобретаются в Банке мозга и тканей по проблемам развития при Университете Мэриленда, финансируемом Национальным институтом здравоохранения.Этот период времени также имеет тенденцию быть периодом быстрого роста и может сопровождаться паттернами развития экспрессии генов, как мы отметили в предыдущем исследовании, включающем анализ RNA-Seq аналогичного набора образцов (17). Таким образом, трудно отличить истинные различия в развитии экспрессии РНК или метаболитов от смешанных эффектов, связанных с тканевым источником. Учитывая, что первоначальный статистический анализ метаболомных данных подтвердил эффект источника в данных RNA-Seq (17), текущее исследование включало образцы в возрасте <1 года из второго независимого источника.

Этот экспериментальный подход обнаружил 24 метаболита, которые изменились в наборе образцов печени от рождения до позднего подросткового возраста (18 лет; таблица 2). Было обнаружено, что из 24 метаболитов 21 имеет повышенные уровни по сравнению с детским развитием, при этом самые низкие уровни присутствуют в младенческой возрастной группе (дети <1 года) и незначительные различия в уровнях метаболитов между тремя старшими возрастными группами (дети> 1 года). возраста) (рисунок 3 и дополнительный рисунок 1). Ключевые подкаталоги наблюдались в списке важных известных метаболитов, включая «метаболизм пуринов (гипо) ксантин / инозин», «метаболизм пиримидина, урацилсодержащие» и «длинные жирные кислоты» - все три реплицированных метаболита в длинных жирных кислотах. суб-путь увеличения численности на протяжении всего детского развития (Таблица 2).Наконец, мы наблюдали устойчивые возрастные различия в путях «метаболизма бетаина» KEGG (путь p - значение <1,0 × 10 -5 для всех 3 партий) и «метаболизме альфа-линоленовой кислоты и линолевой кислоты» (путь p - значение 0,002, 0,007 и <1,0 × 10 -5 для партии 1, партии 2 и партии 3 соответственно). Ограничением нашего анализа является то, что метаболиты нельзя рассматривать просто потому, что их естественная концентрация близка к нижнему пределу обнаружения.Было измерено 353 метаболита во всех трех партиях, из которых 31 метаболит был удален, так как 75% отсутствовали по крайней мере в одной партии (дополнительный рисунок 3). Интересно, что X - 11 795, глицерин 2-фосфат, гамма-глутамилгистидин, форминоглутамат и дисульфид, бензоат, возможно, были удалены из-за различных технологий, используемых в партии 1 и партиях 2 и 3. С другой стороны, многие из другие метаболиты имеют стабильно высокий процент отсутствующих наблюдений во всех партиях (дополнительный рисунок 4).

Индивидуальные аналиты и аналиты, относящиеся к конкретным путям, могут быть получены как из эндогенных, так и из экзогенных (пищевых) источников. Например, путь метаболизма бетаина содержал 12 измеренных метаболитов, причем все метаболиты, кроме двух, были связаны с онтогенезом ( p <0,10). Восемь из 10 метаболитов, связанных с онтогенезом, увеличивались в количестве с возрастом (Таблица 3 и Рисунок 4A). У людей сам бетаин содержится в пище, а также может образовываться эндогенно из холина.Бетаин жизненно важен для трансметилирования и обеспечивает контроль над гидратацией гепатоцеллюлярных клеток и обеспечивает защиту печени от различных форм стресса, включая осмотический стресс (18). Аналогичным образом, в рамках пути метаболизма альфа-линоленовой кислоты и линолевой кислоты, 4 метаболита постоянно увеличивались с возрастом во всех партиях с p <0,10: докозапентаеновая кислота, докозапентаеновая кислота (22n-6), линолевая кислота, гамма-линоленовая кислота и альфа-линоленовая кислота, тогда как арахидоновая кислота присутствовала в более высоких концентрациях у детей младше 1 года по сравнению с более старшими возрастными группами (таблица 3 и рисунок 4B).Альфа-линоленовая кислота (ALA) - это незаменимая жирная кислота омега-3, содержащаяся во многих орехах и растительных маслах, поэтому трудно дифференцировать изменения аналитов, вызванные биологическим созреванием, с внешними факторами, которые также меняются с возрастом.

Одно очевидное различие между младенцами в возрасте до 1 года и детьми старшего возраста / подростками заключается в диете, состоящей из грудного молока и смесей на основе коровьего или соевого молока, которые являются основным источником питания до тех пор, пока твердые пероральные продукты не будут введены позже в первый год жизни.Однако в настоящее время общепризнано, что кишечная микробиота новорожденных отличается от кишечной микробиоты детей более старшего возраста и взрослых, поскольку устанавливается после рождения и зависит не только от способа родоразрешения, вагинального или кесарева сечения, но и в значительной степени от способа родоразрешения. режим кормления. Например, в нескольких исследованиях в настоящее время сообщается о более высоких уровнях Lactobacilli и бифидобактерий в стуле младенцев, находящихся на грудном вскармливании, по сравнению со стулом младенцев на искусственном вскармливании, в котором преобладают более разнообразные виды: Bacteroides, Clostridia, Staphylococci, enterobacteria, Enterococci и Atopobium (19–21).Введение твердой пищи также со временем приводит к увеличению разнообразия кишечной микробиоты. Таким образом, вполне разумно ожидать, что концентрации пищевых компонентов и продуктов метаболизма этих компонентов в результате изменения кишечной микробиоты могут привести к образованию уникального метаболома младенца.

Ожидается, что различия в развитии микробиома кишечника у младенцев младше 1 года и детей более старшего возраста, или, более конкретно, формирование микробиома кишечника после рождения, приведут к изменениям в составе желчных кислот.Например, можно ожидать, что первичные желчные кислоты, полученные в результате эндогенного метаболизма печени, будут выше, а концентрации вторичных желчных кислот, полученных из кишечного микробиома, будут ниже в более молодой группе, со сдвигом в сторону накопления преимущественно вторичных желчных кислот в более старшем возрасте. группы после созревания кишечного микробиома. Более высокие концентрации первичных желчных кислот у недоношенных и доношенных новорожденных по сравнению с более старшим возрастом - хорошо известное явление (22, 23), и наши наблюдения за более низкими концентрациями первичных и вторичных желчных кислот тауродезоксихолата и сульфата гликолитохолата у детей младше 1 года. группа соответствует колонизации и созреванию кишечного микробиома в течение первого года жизни.

Исследования, в которых мышей, свободных от микробов, переносят в обычную среду, имитируют изменение среды, происходящее во время рождения, когда новорожденные попадают во внематочную среду. Клаус и др. (24) применили метаболомные подходы для характеристики метаболической адаптации к бактериальной колонизации кишечника путем переноса стерильных мышей в обычную среду, в которой подстилки, используемые обычными мышами, были предоставлены для воздействия на стерильных животных той же микробной экосистемы.Они наблюдали быстрое увеличение веса в течение первых нескольких дней после колонизации, а также увеличение глюконеогенеза, за которым следовало увеличение синтеза триглицеридов в печени и изменения метаболитов желчных кислот. Интересно отметить, что пять аналитов в нашем наборе данных, которые по-разному присутствовали в возрастных группах <1 года и старше: гем, тауродексихолат, 10-гептадеценоат (17: 1n7), 10-неадеценоат (19: 1n9), и маргарита (17: 0), также наблюдались изменения Claus et al., подтверждая гипотезу о том, что некоторые из наблюдаемых «онтогенетических» изменений в метаболоме являются следствием бактериальной колонизации кишечника после рождения.

В заключение, этот ограниченный набор данных иллюстрирует сложность, лежащую в основе наблюдаемых «онтогенетических» изменений в метаболоме печени, оцененных с помощью снимка изменений в развитии, полученного с помощью метаболомного анализа ткани печени. Первый год жизни характеризуется скоростью изменения роста и веса, превышающей скорость, наблюдаемую у детей старшего возраста, и, таким образом, некоторые изменения в метаболоме отражают процессы роста и развития.Однако очевидно, что другие факторы, такие как изменение диеты и микробиома кишечника с возрастом, также влияют на общую картину. Можно ожидать, что взаимодействие между диетой, микробиомом кишечника и физиологией печени будет лежать в основе изменений в развитии экспрессии ферментов метаболизма лекарств и транспортеров, участвующих в абсорбции, распределении, метаболизме и выведении лекарств, питательных веществ, токсикантов и других чужеродных соединений. Например, соли желчных кислот необходимы для абсорбции жирорастворимых витаминов и плохо растворимых в воде лекарств.Кроме того, расширение пула желчных кислот также сопровождается изменениями в экспрессии гепатоцеллюлярных и желчных транспортеров захвата и оттока (25) и, вероятно, вносит вклад в траектории развития транспортеров, что представляет значительный интерес для моделирования и моделирования распределения лекарств в педиатрии ( 26). Исследования на стерильных мышах, введенных в обычную среду, также привели к увеличению экспрессии ферментов метаболизма лекарств, таких как CYP2C29 и CYP3A11, которые аналогичны траекториям развития важных путей биотрансформации лекарств у людей, таких как CYP2C9 (27) и CYP3A4 ( 28).Таким образом, улучшенное понимание факторов, влияющих на процессы развития, определяющие роль печени и ее взаимодействие с другими системами, улучшит наше понимание не только распределения лекарств в уязвимой, малоизученной группе пациентов, но также поможет в выявлении факторов, которые влиять на распределение наркотиков и реакцию у отдельных детей.

Заявление о доступности данных

Нормализованные и условно исчисленные данные, используемые в анализе вместе с результатами анализа, можно найти по адресу http: // explorerpedpgx.moffitt.org с помощью Google Chrome. Данные после QC также доступны для загрузки в Metabolomic workbench, https://www.metabolomicsworkbench.org/. Эти данные можно найти со следующими номерами исследований: ST001402, ST001403 и ST001404, соответствующими партиям 1, 2, 3 соответственно.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены с использованием этих тканей и классифицированы Советом по наблюдению за педиатрическими учреждениями детской больницы милосердия как исследования с участием людей.Репликационный набор посмертных образцов ткани печени из аутопсий плодов (после терапевтических абортов или мертворожденных) и младенцев был предоставлен Банком тканей медицинского центра Erasmus, Софийской детской больницей, Роттердам, Нидерланды. Совет по этике исследований Медицинского центра Эразмус отказался от формального этического утверждения в соответствии с голландским законом о медицинских исследованиях на людях. Ткань собирали при наличии письменного информированного согласия родителей как на вскрытие, так и на явное использование ткани для исследования.Письменное информированное согласие на участие в этом исследовании было предоставлено законным опекуном / ближайшими родственниками участников.

Авторские взносы

SW и JL разработали и спланировали эксперименты. CW, QL, CB и BF завершили статистический и биоинформатический анализ. JL и BF курировали проект. RG, SW, JL и CB завершили эксперименты. CW, JL и BF написали рукопись. Все авторы просмотрели и отредактировали рукопись.

Финансирование

Это исследование было предоставлено NIH / NICHD U54 HD0, Детской больницей милосердия и Онкологическим центром Моффитта.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Ткань печени была получена из Банка мозга и тканей Университета Мэриленда по расстройствам развития (Балтимор, Мэриленд; финансируется контрактом NIH HHSN275200

1C, номер ссылки N01-HD-9-0011) и Системой распределения клеток ткани печени (финансируется NIH). Номер контракта.N01-DK-7-0004 / HHSN267200700004C). Мы благодарим отделение патологии медицинского центра Erasmus за сбор образцов для тканевого биобанка медицинского центра Erasmus.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fped.2020.00549/full#supplementary-material

Дополнительный рисунок 1. Рядные прямоугольные диаграммы концентрации метаболитов и возраста для 25 биологически и технически подтвержденных метаболитов для каждой из трех партий.

Дополнительный рисунок 2. Пути действия лекарств. Результаты для метаболитов, измеренные в этом исследовании, обозначены красным, что указывает на увеличение количества метаболита с возрастом, и синим, что указывает на уменьшение количества метаболита с возрастом. Метаболиты, не измеренные в пути, обозначены черным цветом. Форма соответствует значимости корреляции Спирмена концентрации метаболита и возраста, где квадрат указывает, что p <0.05, а кружок показывает, что p > 0,05. Для пути действия лекарственного средства один индивидуальный метаболит, который является уникальным для пути действия лекарственного средства, обозначен пурпурной трапецией.

Дополнительный рисунок 3. Диаграмма Венна количества метаболитов, удаленных из анализа, по партиям, потому что 75% наблюдений отсутствовали по крайней мере в одной серии (31 метаболит).

Дополнительный рисунок 4. Тепловая карта процента наблюдений, пропущенных для метаболитов, которые были исключены из анализа из-за того, что более 75% наблюдений отсутствовали не более чем для 2 партий (20 метаболитов).

Дополнительная таблица 1. Результаты для всех 905 метаболитов в партии 2. N младенец = 13, N в раннем детстве = 14, N в позднем детстве = 10, N подросток = 11.

Дополнительная таблица 2. Результаты для всех 914 метаболитов в партии 3. N младенец = 21, N в раннем детстве = 7, N в позднем детстве = 11, N подросток = 11.

Дополнительная таблица 3. Результаты для всех 663 метаболитов в партии 1. N младенец = 13, N в раннем детстве = 14, N в позднем детстве = 10, N подросток = 11.

Дополнительная таблица 4. Результаты для всех 32 путей KEGG и лекарств с минимум 5 метаболитами и охватом путей не менее 50%.

Список литературы

1. Кернс Г.Л., Абдель-Рахман С.М., Аландер С.В., Блоуи Д.Л., Лидер Дж.С., Кауфман Р.Э. Фармакология развития - расположение, действие и терапия лекарств у младенцев и детей. N Engl J Med . (2003) 349: 1157–67. DOI: 10.1056 / NEJMra035092

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

2.Rodieux F, Wilbaux M, Van Den Anker JN, Pfister M. Влияние функции почек на кинетику и дозировку лекарств у новорожденных, младенцев и детей. Клин Фармакокинет . (2015) 54: 1183–204. DOI: 10.1007 / s40262-015-0298-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

4. Хайнс Р.Н. Выражение развития ферментов метаболизма лекарств: влияние на расположение у новорожденных и детей младшего возраста. Int J Pharm . (2013) 452: 3–7. DOI: 10.1016 / j.ijpharm.2012.05.079

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Бхатт Д.К., Мехротра А., Гаедигк А., Чапа Р., Басит А., Чжан Х. и др. Зависящая от возраста и генотипа изменчивость содержания белка и активности шести основных уридиндифосфат-глюкуронозилтрансфераз в печени человека. Clin Pharmacol Ther . (2018) 105: 131–41. DOI: 10.1002 / cpt.1109

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Прасад Б., Гаедигк А., Врана М., Гаедигк Р., Лидер Дж. С., Салфати Л. и др.Онтогенез печеночных переносчиков лекарств, количественно оцененный протеомикой LC-MS / MS. Clin Pharmacol Ther . (2016) 100: 362–70. DOI: 10.1002 / cpt.409

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

7. Price KE, Pearce RE, Garg UC, Heese BA, Smith LD, Sullivan JE, et al. Влияние вальпроевой кислоты на метаболизм органических кислот у детей: исследование профиля метаболизма. Clin Pharmacol Ther . (2011) 89: 867–74. DOI: 10.1038 / clpt.2011.47

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10.Evans AM, Dehaven CD, Barrett T, Mitchell M, Milgram E. Интегрированная, нецеленаправленная платформа тандемной масс-спектрометрии для жидкостной хроматографии высокого разрешения / ионизации с электрораспылением для идентификации и относительной количественной оценки низкомолекулярного набора биологических систем. Анальный Химик . (2009) 81: 6656–67. DOI: 10.1021 / ac6h

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Эванс А.М., Бриджуотер Б.Р., Лю К., Митчелл М.В., Робинсон Р.Дж., Дай Х. и др.Масс-спектрометрия высокого разрешения улучшает количество и качество данных по сравнению с масс-спектрометрией с единичным массовым разрешением в метаболомике с высокопроизводительным профилированием. Метаболомика в открытом доступе . (2014) 4: 1–7. DOI: 10.4172 / 2153-0769.1000132

CrossRef Полный текст | Google Scholar

14. Biernacka JM, Jenkins GD, Wang L, Moyer AM, Fridley BL. Использование гамма-метода для автономного анализа набора генов данных SNP. евро J Hum Genet . (2012) 20: 565–71.DOI: 10.1038 / ejhg.2011.236

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

16. Leeder JS, Meibohm B. Проблемы и возможности для увеличения базы знаний, связанных с биотрансформацией лекарств и фармакокинетикой во время роста и развития. Утилизация наркотиков . (2016) 44: 916–23. DOI: 10.1124 / dmd.116.071159

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

17. Мейер Р., Би К., Гаедигк Р., Херут Д. П., Йе С. К., Лидер Дж. С. и др.Связанные с онтогенезом изменения фармакогена в транскриптоме печени у детей. Фармакогенет Геномика . (2018) 28: 86–94. DOI: 10.1097 / FPC.0000000000000326

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

19. Хилл С.Дж., Линч Д.Б., Мерфи К., Улашевска М., Джеффри И.Б., О'Ши, Калифорния и др. Эволюция состава кишечной микробиоты от рождения до 24 недель в когорте INFANTMET. Микробиом. (2017) 5: 4. DOI: 10.1186 / s40168-016-0213-y

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

20.Стюарт CJ, Ajami NJ, O'brien JL, Hutchinson DS, Smith DP, Wong MC, et al. Временное развитие микробиома кишечника в раннем детстве по данным исследования TEDDY. Природа. (2018) 562: 583–8. DOI: 10.1038 / s41586-018-0617-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

21. Zhuang L, Chen H, Zhang S, Zhuang J, Li Q, Feng Z. Кишечная микробиота в раннем возрасте и ее влияние на здоровье детей. Геномика Протеомика Биоинформатика . (2019) 17: 13–25.DOI: 10.1016 / j.gpb.2018.10.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22. Сухи Ф. Дж., Балистрери В. Ф., Хьюби Дж. Э., Сирси Дж. Э., Левин Р. С.. Физиологический холестаз: повышение концентрации первичной желчной кислоты в сыворотке у здоровых детей. Гастроэнтерология . (1981) 80: 1037–41. DOI: 10.1016 / 0016-5085 (81) -0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

23. Abuhelwa AY, Фостер DJR, Аптон RN. Количественный обзор и метамодели вариабельности и факторов, влияющих на всасывание пероральных лекарств. Часть I: pH желудочно-кишечного тракта. AAPS J . (2016) 18: 1309–21. DOI: 10.1208 / s12248-016-9952-8

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. Клаус С.П., Эллеро С.Л., Бергер Б., Краузе Л., Бруттин А., Молина Дж. И др. Индуцированное колонизацией микробное взаимодействие между хозяином и кишечником. мБио . (2011) 2: e00271-10. DOI: 10.1128 / mBio.00271-10

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

25. Сухы Ф. Я., Букувалас Ю. С., Новак Д. А.. Детерминанты образования желчи в процессе развития: онтогенез метаболизма и транспорта желчных кислот в печени. Semin Liver Dis . (1987) 7: 77–84. DOI: 10.1055 / с-2008-1040567

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

26. Элморси Ю., Барбер Дж., Ростами-Ходжеган А. Онтогенез печеночных переносчиков лекарств и отношение к лекарствам, используемым в педиатрии. Утилизация наркотиков . (2016) 44: 992–8. DOI: 10.1124 / dmd.115.067801

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

27. Кукуритаки С.Б., Манро Дж. Р., Марш С. А., Стивенс Дж. К., Ретти А. Е., Маккарвер Д. Г. и др.Экспрессия CYP2C9 и CYP2C19 человека в печени. Дж. Pharmacol Exp Ther . (2004) 308: 965–74. DOI: 10.1124 / jpet.103.060137

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

28. Стивенс Дж. К., Хайнс Р. Н., Гу К., Кукуритаки С. Б., Манро Дж. Р., Тандлер П. Дж. И др. Экспрессия в процессе развития основных ферментов CYP3A печени человека. Дж. Pharmacol Exp Ther . (2003) 307: 573–82. DOI: 10.1124 / jpet.103.054841

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Биомаркеры трансплантации печени в эпоху метаболизма

Справочная работа, запись

01.06,

    ,
Часть Биомаркеры в болезнях: методы, открытия и применения Книжная серия (BDMDA)

Abstract

Термин биомаркер обычно относится к биохимическим молекулам, используемым в фундаментальных и клинических исследованиях, а также в клинической практике в качестве суррогатных маркеров, которые обладают тем преимуществом, что являются объективным, поддающимся количественной оценке и воспроизводимым показателем. Наиболее распространенные применения биомаркеров включают диагностику, скрининг и мониторинг заболевания, оценку ответа во время терапии, оценку риска и прогноз.Метаболомика или метабономика позволяет определять одновременно сотни небольших молекул, что дает более полную информацию, чем определение одного биомаркера. Использование метаболомики в качестве подхода к поиску биомаркеров поддерживается ее способностями обнаруживать тонкие метаболические изменения, вызванные внешними стимулами или возмущениями. Изменения метаболома довольно динамичны по сравнению с геномикой, транскриптомикой или даже протеомикой. Следовательно, такие изменения метаболитов обнаруживаются на ранней стадии в различных образцах, таких как ткани, клеточные лизаты, кровь, сыворотка, плазма, фекалии, моча и т. Д.Применение метаболомики при трансплантации печени все еще находится на начальной стадии и сосредоточено в основном на изучении трех аспектов: постреперфузионного повреждения и отторжения и дисфункции органа. В нынешнюю эпоху, когда отсутствие органов, пригодных для трансплантации, является наиболее важным ограничивающим фактором, наличие принятой функциональной оценки трансплантатов перед трансплантацией поможет не только восстановить первоначально выброшенные органы, но и оценить методы лечения, используемые для улучшения качества трансплантации. эти органы.Различные метаболические подходы использовались для поиска объективных маркеров функции и качества трансплантата, но дальнейшая аналитическая и клиническая проверка в многоцентровых исследованиях обязательна, прежде чем они будут включены в клиническую практику.

Ключевые слова

Omics биомаркеров Метабономика Метаболомика масс-спектрометрии желчные кислоты вреда здоровью фосфолипиды печени Пересадка Ишемия реперфузии дисфункции трансплантата

Список сокращений

АСТ

аспартатаминотрансферазы

ALT

аланинаминотрансферазы

АДМА

Асимметричный диметиларгинин

BA

Желчные кислоты

DBD

Донорство после смерти мозга

DCD

Al 184 Донорство после смерти мозга

CY

C

Колориметрическое электрохимическое обнаружение массива

CIT

Время холодной ишемии

CS

Холодное хранение

EAD

Ранняя дисфункция аллотрансплантата

ECD

Донор с расширенными критериями

МС FT-ICR

Масс-спектрометрия с ионным циклотронным резонансом с преобразованием Фурье

FXR

IL Фарнезоид X-рецептор

GC GC Газовая хроматография

Жидкостная хроматография гидрофильного взаимодействия

ВЭЖХ

Высокоэффективная жидкостная хроматография

HR-MAS H-ЯМР

Вращение под магическим углом высокого разрешения

H-ЯМР

Протонная магнитная резонансная спектроскопия

IGF

Начальное хорошее функционирование

IP-LC

Ионно-парная жидкостная хроматография

IRI

Реперфузионное повреждение ишемии

JNK 9474
JNK 9472
терминальный LC

Жидкостный хроматограф y

LT

Трансплантат печени

MRM

Мониторинг множественных реакций

NIH

Национальный институт здравоохранения

NO

7 NOS473 оксид азота

NMP

Нормотермическая машина перфузии

OPLS-DA

Дискриминантный анализ ортогональной проекции на латентные структуры

PCA

Анализ главных компонент

по наименьшему квадрату PLS

9047 9471
PLS-DA

Дискриминантный анализ по методу наименьших квадратов

PNF

Первичный нефункциональный

QC

Контроль качества

Q-ToF

9047 Время полета

7

реактивный кислород n видов

Rt

Время удерживания

RP

Обращенная фаза

TQ

Тройной квадруполь

UPLC

World Organization

Ultraperform

Это предварительный просмотр содержимого подписки,

войдите в

, чтобы проверить доступ.

Примечания

Благодарности

Эта работа была поддержана Европейским фондом регионального развития, Институтом здоровья Карлоса III Министерства экономики и конкурентоспособности Испании (PI14 / 0026) и Фондом исследований трансплантации органов Рош. A. L. благодарит за контракт Miguel Servet II (CPII14 / 0004) от вышеупомянутого Министерства / Института здравоохранения Карлоса III.

Ссылки

  1. Angele MK, Rentsch M, Harlt WH, et al. Влияние стеатоза на функцию печени и выживаемость органов после трансплантации печени.Am J Surg. 2008. 195 (2): 214–20.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  2. Arora AS, Jones BJ, Patel TC, et al. Церамид вызывает гибель клеток гепатоцитов из-за нарушения функции митохондрий у крыс. Гепатология. 1997; 25: 958–63.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  3. Bairaktari E, Katopodis K, Siamopoulos KC, et al. Поражение почек, вызванное паракватом, изучено с помощью спектроскопии ЯМР 1Н мочи. Clin Chem. 1998. 44: 1256–61.

    PubMedGoogle Scholar
  4. Beckwith-Hall BM, Nicholson JK, Nicholls A, et al.Спектроскопические исследования ядерного магнитного резонанса и анализ основных компонентов биохимических эффектов трех модельных гепатотоксинов. Chem Res Toxicol. 1998. 11: 260–72.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  5. Бичер CW. Метаболом человека. В: Гарриган Г.Г., Goodacre R, редакторы. Метаболическое профилирование: его роль в открытии биомаркеров и анализе функций генов. Springer; 2003. с. 1–8.

    Google Scholar
  6. Рабочая группа по определению биомаркеров. Биомаркеры и суррогатные конечные точки: предпочтительные определения и концептуальная основа.Clin Pharmacol Ther. 2001; 69: 89–95.

    CrossRefGoogle Scholar
  7. Bory C, Boulieu R, Chantin C и др. Диагностика алькаптонурии: экспресс-анализ гомогентизиновой кислоты методом ВЭЖХ. Clin Chim Acta. 1990; 189: 7–11.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  8. Bouatra S, Aziat F, Mandal R и др. Метаболом мочи человека. PLoS One. 2013; 8: e73076.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  9. Briceno J, Ciria R. Ранняя дисфункция трансплантата после трансплантации печени.Transplant Proc. 2010; 42: 631–3.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  10. Brindle JT, Antti H, Holmes E, et al. Быстрая и неинвазивная диагностика наличия и тяжести ишемической болезни сердца с использованием метаболомики на основе 1H-ЯМР. Nat Med. 2002; 8: 1439–44.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  11. Busuttil RW, Tanaka K. Использование маргинальных доноров в трансплантации печени. Liver Transpl. 2003; 9: 651–63.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  12. Buszewski B, Noga S.Жидкостная хроматография гидрофильного взаимодействия (HILIC) - мощный метод разделения. Anal Bioanal Chem. 2012; 402: 231–47.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  13. Cajka T, Fiehn O. На пути к объединению нецелевых и целевых методов в метаболомике и липидомике на основе масс-спектрометрии. Anal Chem. 2016; 88: 524–45.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  14. Chagoyen M, Pazos F. MB Роль: обогащающий анализ метаболомных данных. Биоинформатика. 2011; 27: 730–1.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  15. Chan EC, Koh PK, Mal M, et al.Метаболическое профилирование колоректального рака человека с использованием спектроскопии ядерного магнитного резонанса с вращением под магическим углом (HR-MAS ЯМР) с высоким разрешением и масс-спектрометрии с газовой хроматографией (GC / MS). J Proteome Res. 2009. 8: 352–61.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  16. Chen H, Peng CH, Shen BY, et al. Многофакторный анализ исходной плохой функции трансплантата после ортотопической трансплантации печени. Гепатобилиарный панкреат Dis Int. 2007. 6: 141–146.

    PubMedGoogle Scholar
  17. Clarke CJ, Haselden JN.Метаболическое профилирование как инструмент понимания механизмов токсичности. Toxicol Pathol. 2008; 36: 140–7.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  18. Cortes M, Pareja E, Castell JV, et al. Изучение пригодности масс-спектрометрии для изучения метаболомных профилей трансплантата печени человека. Transplant Proc. 2010; 42: 2953–8.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  19. Cortes M, Pareja E, García-Cañaveras JC, et al. Metabolomics раскрывает биомаркеры донорской печени, связанные с ранней дисфункцией аллотрансплантата.J Hepatol. 2014; 61: 564–74.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  20. Dang L, White DW, Gross S, et al. Связанные с раком мутации IDh2 продуцируют 2-гидроксиглутарат. Природа. 2009; 462: 739–44.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  21. Defamie V, Cursio R, Le Brigand K, et al. Профили экспрессии генов трансплантатов печени человека идентифицируют раннюю сигнатуру транскрипции, связанную с начальной плохой функцией трансплантата. Am J Transplant. 2008; 8: 1221–36.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  22. Деттмер К., Аронов А.П., Hammock BD.Метаболомика на основе масс-спектрометрии. Масс-спектром. Ред. 2007; 26: 51–78.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  23. Duarte IF, Stanley EG, Holmes E, et al. Метаболическая оценка трансплантатов печени человека из образцов биопсии на стадии донора и реципиента с использованием спектроскопии 1H ЯМР с вращением под магическим углом высокого разрешения. Anal Chem. 2005; 77: 5570–8.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  24. Dunn WB. Современные тенденции и будущие требования к масс-спектрометрическим исследованиям микробных метаболомов млекопитающих и растений.Phys Biol. 2008; 5: 011001.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  25. Dunn WB, Bailey NJ, Johnson HE. Измерение метаболома: современные аналитические технологии. Аналитик. 2005; 130: 606–25.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  26. Ericzon B, Eusufzai S, Kubota K, et al. Особенности билиарного липидного обмена после трансплантации печени. Гепатология. 1990; 12: 1222–8.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  27. Fahy E, Sud M, Cotter D, et al. LIPID MAPS онлайн-инструменты для исследования липидов.Nucleic Acids Res. 2007; 35: W606–12.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  28. Fan X, Bai J, Shen P. Диагностика рака груди с использованием отпечатков пальцев метаболомики HPLC в сочетании с вычислительными методами. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 2005; 6: 6081–4.

    PubMedGoogle Scholar
  29. Файн О. Метаболомика - связь между генотипами и фенотипами. Завод Мол Биол. 2002. 48: 155–71.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  30. Fondevila C, Hessheimer AJ, Maathuis MH, et al.Превосходное сохранение печени DCD при постоянной нормотермической перфузии. Ann Surg. 2011; 254: 1000–7.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  31. Fouassier L, Beaussier M, Schiffer E, et al. Изменения экспрессии генов гепатобилиарного транспортера крыс, вызванные гипоксией. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2007; 293: G25–35.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  32. Francis H, Meng F, Gaudio E, et al. Гистаминовая регуляция пролиферации желчевыводящих путей. J Hepatol. 2012; 56: 1204–6.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  33. García-Cañaveras JC, Donato MT, Castell JV, et al. Комплексный нецелевой метаболомный анализ стеатозной ткани печени человека с помощью RP- и HILIC-хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией выявляет важные метаболические изменения. J Proteome Res. 2011; 10: 4825–34.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  34. Garcia-Cañaveras JC, Donato MT, Castell JV и др. Целевое профилирование циркулирующих и печеночных желчных кислот у человека, мыши и крысы с использованием метода, утвержденного UPLC-MRM-MS.J Lipid Res. 2012; 53: 2231–41.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  35. García-Cañaveras JC, Jiménez N, Gómez-Lechón MJ, et al. Ненаправленный метаболомный анализ с помощью ЖХ-МС на гепатотоксичность, вызванную лекарственным средством, в клетках HepG2. Электрофорез. 2015; 36: 2294–302.

    CrossRefGoogle Scholar
  36. Garcia-Cañaveras JC, López S, Castell JV, et al. Расширение покрытия метаболомом для нецелевого профилирования метаболитов прикрепленных культивируемых клеток печени. Anal Bioanal Chem. 2016; 408: 1217–30.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  37. Garcia-Valdecasas JC, Tabet J, Valero R, et al. Оценка ишемического повреждения при извлечении печени от доноров без сердечного ритма. Eur Surg Res. 1999; 31: 447–56.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  38. Gibelin H, Eugene M, Hebrard W. и др. Новый подход к оценке функции трансплантата печени с помощью спектроскопии ядерного магнитного резонанса. Сравнительное исследование решений Euro-Collins и Университета Висконсина. Clin Chem Lab Med.2000; 38: 1133–6.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  39. Goldsmith P, Fenton H, Morris-Stiff G, et al. Метаболомика: полезный инструмент для будущего хирурга. J Surg Res. 2010; 160: 122–32.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  40. Gomez-Lechon MJ, Lahoz A, Gombau L, et al. Оценка in vitro потенциальной гепатотоксичности, вызванной лекарствами. Curr Pharm Des. 2010; 16: 1963–77.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  41. Han MS, Park SY, Shinzawa K, et al. Лизофосфатидилхолин как эффектор смерти при липоапоптозе гепатоцитов.J Lipid Res. 2008. 49: 84–97.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  42. Hauet T, Baumert H, Gibelin H, et al. Неинвазивный мониторинг экскреции цитрата, ацетата, лактата и осмолита мозгового вещества с мочой как биомаркеров воздействия ишемического реперфузионного повреждения. Криобиология. 2000; 41: 280–91.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  43. Hedaya MS, El Moghazy WM, Yasutomo Y, et al. Является ли желчная желчная кислота хорошим предиктором острого клеточного отторжения при трансплантации печени от живого донора? Гепатобилиарный панкреат Dis Int.2009; 8: 474–8.

    PubMedGoogle Scholar
  44. Henderson JM. Трансплантация и отторжение печени: обзор. Гепатогастроэнтерология. 1999; 46: 1482–4.

    PubMedGoogle Scholar
  45. Holland NT, Smith MT, Eskenazi B, et al. Сбор и обработка биологических образцов для молекулярно-эпидемиологических исследований. Mutat Res. 2003; 543: 217–34.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  46. Holmes E, Bonner FW, Sweatman BC, et al. Спектроскопия ядерного магнитного резонанса и анализ распознавания образов биохимических процессов, связанных с прогрессированием и восстановлением нефротоксических поражений у крыс, вызванных хлоридом ртути (II) и 2-бромэтанамином.Mol Pharmacol. 1992; 42: 922–30.

    PubMedGoogle Scholar
  47. Horai H, Arita M, Kanaya S, et al. MassBank: публичный репозиторий для обмена масс-спектральными данными для наук о жизни. J. Mass Spectrom. 2010; 45: 703–14.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  48. Ховард П., Мерфи Г. Физиология желчи: теория и практика. Курр Опин Гастроэнтерол. 1990; 6: 657–67.

    CrossRefGoogle Scholar
  49. Hrydziuszko O, Silva MA, Perera MT, et al. Применение метаболомики для исследования процесса ортотопической трансплантации печени человека: исследование, подтверждающее принцип действия.Омикс. 2010; 14: 143–50.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  50. Hylemon PB, Zhou H, Pandak WM, et al. Желчные кислоты как регуляторные молекулы. J Lipid Res. 2009; 50: 1509–20.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  51. Ibanez C, Simo C, Garcia-Canas V, et al. Мультиплатформа CE / LC-MS для широкого метаболомного анализа влияния пищевых полифенолов на пролиферацию клеток рака толстой кишки. Электрофорез. 2012; 33: 2328–36.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  52. Idborg-Bjorkman H, Edlund PO, Kvalheim OM, et al.Скрининг биомаркеров в моче крыс с использованием ЖХ / МС с ионизацией электрораспылением и двустороннего анализа данных. Anal Chem. 2003. 75: 4784–92.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  53. Kaddurah-Daouk R, Kristal BS, Weinshilboum RM. Метаболомика: глобальный биохимический подход к лекарственной реакции и болезни. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2008. 48: 653–83.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  54. Kakisaka K, Cazanave SC, Fingas CD, et al. Механизмы липоапоптоза гепатоцитов, индуцированного лизофосфатидилхолином.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2012; 302: G77–84.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  55. Kukan M, Haddad PS. Роль гепатоцитов и клеток желчных протоков в сохранении реперфузионного повреждения трансплантатов печени. Liver Transpl. 2001; 7: 381–400.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  56. Lahoz A, Gombau L, Donato MT, et al. Скрининг ADME in vitro со средней / высокой пропускной способностью в доклинической разработке лекарств. Mini Rev Med Chem. 2006; 6: 1053–62.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  57. Lenz ME, Wilson ID.Аналитические стратегии в метаболомике. J Proteome Res. 2007. 6: 443–58.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  58. Lenz EM, Bright J, Knight R, et al. Циклоспорин А-индуцированные изменения эндогенных метаболитов в моче крысы: метаболомное исследование с использованием высокопольной 1H-ЯМР-спектроскопии. HPLCTOF / MS и хемометрия. J Pharm Biomed Anal. 2004; 35: 599–608.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  59. Leon Z, Garcıa-Canaveras JC, Donato MT, et al. Метаболомика клеток млекопитающих: экспериментальный план и подготовка образцов.Электрофорез. 2013; 34: 2762–75.

    PubMedGoogle Scholar
  60. Li H, Wang L, Yan X и др. Метод метаболомики протонного ядерного магнитного резонанса для открытия биомаркеров неалкогольной жировой болезни печени. J Proteome Res. 2011; 10: 2797–806.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  61. Lindon JC, Holmes E, Bollard ME, et al. Протонный ядерно-магнитный резонансный анализ печеночной желчи от доноров и реципиентов при трансплантации печени человека. Биомаркеры. 2004; 9: 1–31.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  62. López-Ibáñez J, Pazos F, Chagoyen M.MBROLE 2.0 - функциональное обогащение химическими соединениями. Nucleic Acids Res. 2016; 44: W201–4.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  63. Mao Y, Yu J, Chen J, et al. Диагностика субклинического отторжения почечного аллотрансплантата по фингерпринт-анализу белков мочи. Transpl Immunol. 2008; 18: 255–9.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  64. Martin-Sanz P, Bosca L, Olmedilla L, et al. Наличие ингибитора синтазы оксида азота в оттоке трансплантата во время реперфузии при трансплантации печени человека.Клиническая трансплантация. 1999; 13: 221–30.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  65. Martin-Sanz P, Olmedilla L, Dulin E, et al. Присутствие метилированных производных аргинина при ортотопической трансплантации печени человека: значение для функции печени. Liver Transpl. 2003; 9: 40–8.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  66. Melendez HV, Heaton ND. Понимание. «Маргинальные» трансплантаты печени. Трансплантация. 1999; 68: 469–71.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  67. Melendez HV, Ahmadi D, Parkes HG, et al.Протонный ядерно-магнитный резонансный анализ печеночной желчи от доноров и реципиентов при трансплантации печени человека. Трансплантация. 2001; 72: 855–60.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  68. Мотоки А., Адачи Н., Лю К. и др. Подавление вызванного ишемией высвобождения цитокинов димапритом и уменьшение повреждений печени у крыс. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 2008. 102: 394–8.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  69. Mouly-Bandini A, Vion-Dury J, Viout P, ​​et al. Обнаружение острого сердечного отторжения методом протонной магнитно-резонансной спектроскопии плазмы высокого разрешения.МАГМА. 2000; 11: 27–32.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  70. Navarro-Sabate A, Peralta C, Calvo M, et al. Медиаторы ишемического прекондиционирования печени крыс после консервирования холодом идентифицированы с помощью анализа микрочипов. Liver Transpl. 2006; 12: 1615–25.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  71. Naz S, Vallejo M, García A, et al. Стратегии валидации методов, связанные с нецелевой метаболомикой. J Chromatogra A. 2014; 1: 1353–99.

    Google Scholar
  72. Nicholson JK, Lindon JC.Системная биология: метаболомика. Природа. 2008; 455: 1054–6.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  73. Николсон Дж. К., Линдон Дж. К., Холмс Э. «Метаболомика»: понимание метаболических реакций живых систем на патофизиологические стимулы с помощью многомерного статистического анализа данных биологической ЯМР-спектроскопии. Xenobiotica. 1999; 29: 1181–9.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  74. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, et al. Метаболомика: платформа для изучения токсичности лекарств и функций генов.Nat Rev Drug Discov. 2002; 1: 153–61.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  75. Nowak G, Ungerstedt J, Wernerman J, et al. Метаболические изменения в трансплантате печени постоянно отслеживаются с помощью микродиализа во время трансплантации печени на модели свиньи. Liver Transpl. 2002; 8: 424–32.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  76. Odunsi K, Wollman RM, Ambrosone CB, et al. Обнаружение эпителиального рака яичников с помощью метаболомики на основе 1H-ЯМР. Int J Cancer. 2005. 113: 782–8.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  77. Огата Х, Гото С., Сато К. и др.KEGG: Киотская энциклопедия генов и геномов. Nucleic Acids Res. 1999; 27: 29–34.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  78. Оливер С.Г., Винсон М.К., Келл Д.Б. и др. Систематический функциональный анализ генома дрожжей. Trends Biotechnol. 1998. 16: 373–8.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  79. Olthoff KM, Kulik L, Samstein B, et al. Подтверждение текущего определения ранней дисфункции аллотрансплантата у реципиентов трансплантата печени и анализ факторов риска. Liver Transpl.2010; 16: 943–9.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  80. Pham-Tuan H, Kashavelis L, Daykin CA, et al. Разработка методов высокоэффективной жидкостной хроматографии для высокопроизводительного профилирования и метаболомных исследований образцов биожидкостей. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2003; 789: 283–301.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  81. Plumb RS, Stumpf CL, Gorenstein MV, et al. Метаболомика: использование масс-спектрометрии с электрораспылением в сочетании с обращенно-фазовой жидкостной хроматографией показывает потенциал для скрининга мочи крыс при разработке лекарств.Масс-спектрометр Rapid Commun. 2002; 16: 1991–6.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  82. Psychogios N, Hau DD, Peng J, et al. Метаболом сыворотки человека. PLoS One. 2011; 6: 6e16957.

    CrossRefGoogle Scholar
  83. Puri P, Baillie RA, Wiest MM, et al. Липидомный анализ неалкогольной жировой болезни печени. Гепатология. 2007; 46: 1081–90.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  84. Puri P, Wiest MM, Cheung O, et al. Липидомный признак неалкогольного стеатогепатита в плазме крови.Гепатология. 2009; 50: 1827–38.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  85. Quintás G, Portillo N, García-Cañaveras JC, et al. Хемометрические подходы для улучшения результатов модели PLSDA для прогнозирования неалкогольной жировой болезни печени человека с использованием UPLC-MS в качестве инструмента профилирования метаболизма. Метаболомика. 2012; 8: 86–98.

    CrossRefGoogle Scholar
  86. R Основная команда. R Фонд статистических вычислений V, Австрия. R: язык и среда для статистических вычислений. 2014 г.ISBN 3-1-07-0. URL

    http://www.R-project.org/2012
  87. Raza A, Dikdan G, Desai KK, et al. Глобальные профили экспрессии генов ишемического прекондиционирования при трансплантации печени от умершего донора. Liver Transpl. 2010; 16: 588–99.

    PubMedGoogle Scholar
  88. Rhee EP, Cheng S, Larson MG, et al. Анализ липидного профиля определяет триацилглицериновую сигнатуру инсулинорезистентности и улучшает прогнозирование диабета у людей. J Clin Invest. 2011; 121: 1402–11.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  89. Робертсон Д.Г.Метаболомика в токсикологии: обзор. Toxicol Sci. 2005; 85: 809–22.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  90. Sabatine MS, Liu E, Morrow DA, et al. Метаболомическая идентификация новых биомаркеров ишемии миокарда. Тираж. 2005; 112: 3868–75.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  91. Sakka SG. Оценка функции печени. Curr Opin Crit Care. 2007; 13: 207–14.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  92. Salvalaggio P, Afonso RC, Felga G, et al. Предложение оценить тяжесть ранней дисфункции аллотрансплантата после трансплантации печени.Эйнштейн. 2013; 11: 23–31.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  93. Санин С.М., Николсон Дж. К., Элкомб С. и др. Гипертауринурия, индуцированная гепатотоксином: исследование протонного ЯМР. Arch Toxicol. 1990; 64: 407–11.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  94. Saude EJ, Lacy P, Musat-Marcu S, et al. ЯМР-анализ активации нейтрофилов в образцах мокроты пациентов с муковисцидозом. Magn Reson Med. 2004. 52: 807–14.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  95. Saxena V, Gupta A, Nagana Gowda GA, et al.1H-ЯМР-спектроскопия для прогнозирования терапевтического результата у пациентов с молниеносной печеночной недостаточностью. ЯМР Биомед. 2006; 19: 521–6.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  96. Серкова Н.Дж., Фуллер Т.Ф., Клавиттер Дж. И др. Метаболические признаки легкой и тяжелой ишемии / реперфузии на основе 1H-ЯМР при трансплантации почек крысы. Kidney Int. 2005; 67: 1142–51.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  97. Serracino-Inglott F, Habib NA, Mathie RT. Реперфузионное повреждение при ишемии печени.Am J Surg. 2001. 181: 160–6.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  98. Silva MA, Richards DA, Bramhall SR, et al. Исследование метаболитов ишемического реперфузионного повреждения и выбранных аминокислот в печени с использованием микродиализа во время трансплантации. Трансплантация. 2007. 79: 828–35.

    CrossRefGoogle Scholar
  99. Sinclair MC, Lemmi CA, Moore TC. Повышение экскреции гистамина с мочой после аллотрансплантации почек у крыс. J Surg Res. 1974; 17: 43–4.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  100. Singh HK, Yachha SK, Saxena R et al.Новое измерение 1H-ЯМР-спектроскопии в оценке дисфункции трансплантата печени. ЯМР Биомед. 2003. 16: 185–8.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  101. Smith CA, O’Maille G, Want EJ, et al. МЕТЛИН: база данных масс-спектров метаболитов. Ther Drug Monit. 2005. 27: 747–51.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  102. Сога Т., Баран Р., Суэмацу М. и др. Дифференциальная метаболомика показывает, что офтальмологическая кислота является биомаркером окислительного стресса, указывающим на потребление глутатиона в печени. J Biol Chem.2006. 281: 16768–76.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  103. Sommer T, Larsen JF. Внутрибрюшинный и внутрипросветный микродиализ в выявлении экспериментальной регионарной ишемии кишечника. Br J Surg. 2004. 91: 855–61.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  104. Stenlund H, Madsen R, Vivi A, et al. Наблюдение за пациентами, перенесшими трансплантацию почки, с использованием метаболомики и динамического моделирования. Chemom Intell Lab. 2009; 98: 45–50.

    CrossRefGoogle Scholar
  105. Strimbu K, Tavel JA.Что такое биомаркеры? Curr Opin ВИЧ СПИД. 2010; 5: 463–6.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  106. Suarez I, Bodega G, Fernandez B. Глутаминсинтетаза в мозге: эффект аммиака. Neurochem Int. 2002; 41: 123–42.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  107. Sumner LW, Amberg A, Barrett D, et al. Предлагаемые минимальные стандарты отчетности для химического анализа Инициатива по стандартам метаболомики Рабочей группы по химическому анализу (CAWG) (MSI). Метаболомика. 2007; 3: 211–21.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  108. Tanaka N, Matsubara T, Krausz KW, et al.Нарушение гомеостаза фосфолипидов и желчных кислот у мышей с неалкогольным стеатогепатитом. Гепатология. 2012; 56: 118–29.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  109. Thompson JA, Markey SP. Количественное определение метаболического профиля органических кислот в моче методом газовой хроматографии – масс-спектрометрии: сравнение методов выделения. Anal Chem. 1975; 47: 1313–21.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  110. Tietge UJ, Bahr MJ, Manns MP, et al. Аминокислоты плазмы при циррозе и после трансплантации печени: влияние на функцию печени, печеночную гемодинамику и циркулирующие гормоны.Клиническая трансплантация. 2002; 16: 9–17.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  111. Tripathi P, Bala L, Saxena R, et al. Спектроскопическое исследование сыворотки крови ЯМР 1H для оценки функции печени у пациентов с трансплантатом печени. J Gastrointestin Liver Dis. 2009. 18: 329–36.

    PubMedGoogle Scholar
  112. Trushina E, Dutta T, Persson XM, et al. Идентификация измененных метаболических путей в плазме и спинномозговой жидкости при легких когнитивных нарушениях и болезни Альцгеймера с использованием метаболомики. PLoS One.2013; 8: e63644.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  113. Vilca Melendez H, Gilani S, Cochrane B, et al. Проверенная методика анализа секреции желчных кислот в донорской печени перед трансплантацией. Transpl Int. 1998; 11: 216–22.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  114. Vilca Melendez H, Rela M, Murphy G, et al. Оценка функции трансплантата перед трансплантацией печени: поиски потерянного ковчега? Трансплантация. 2000; 70: 560–5.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  115. Vilca Melendez H, Rela M, Setchell KD, et al.Анализ желчных кислот: инструмент для оценки функции трансплантата при трансплантации печени человека. Transpl Int. 2004; 17: 286–92.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  116. Villas-Boas SG, Mas S, Akesson M, et al. Масс-спектрометрия в анализе метаболома. Масс-спектром. Ред. 2005; 24: 613–46.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  117. Vogel T, Brockmann JG, Coussios C, et al. Роль нормотермической экстракорпоральной перфузии в минимизации ишемического реперфузионного повреждения. Transplant Rev.2012; 26: 156–62.

    CrossRefGoogle Scholar
  118. Wen H, Yoo SS, Kang J, et al. Новый метод метаболомики на основе ЯМР для диагностики рака желчных путей. J Hepatol. 2010. 52: 228–33.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  119. Международная программа ВОЗ по химической безопасности. Биомаркеры и оценка риска: концепции и принципы. 1993.

    http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ehc155.htm
  120. Wishart DS. Метаболомика: принципы и возможности применения в трансплантации.Am J Transplant. 2005; 5: 2814–20.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  121. Wishart DS. Метаболомика: дополнительный инструмент при трансплантации почек. Contrib Nephrol. 2008. 160: 76–87.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  122. Wishart DS, Knox C, Guo AC, et al. Nucleic Acids Res. 2009; 37: D603–10.

    Google Scholar
  123. Wishart DS, Jewison T, Guo AC и др. HMDB 3.0 – База данных метаболизма человека в 2013 году. Nucleic Acids Res. 2013; 41: D801–7.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  124. Wu H, Xue R, Dong L, et al.Метаболомное профилирование мочи человека у пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой с использованием газовой хроматографии / масс-спектрометрии. Анальный Чим Акта. 2009; 648: 98–104.

    PubMedCrossRefGoogle Scholar
  125. Xia J, Mandal R, Sinelnikov IV, et al. MetaboAnalyst 2.0 - комплексный сервер для анализа метаболомных данных. Nucleic Acids Res. 2012; 40: W127–33.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  126. Xia J, Sinelnikov IV, Han B, Wishart DS. MetaboAnalyst 3.0 - делает метаболомику более значимой.Nucleic Acids Res. 2015; 43: W251–7.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  127. Xu J, Casas-Ferreira AM, Ma Y, et al. Липидомия, сравнивающая аллотрансплантаты печени DCD и DBD, выявляет повышенный уровень лизофосфолипидов у реципиентов, перенесших дисфункцию аллотрансплантата на ранней стадии. Научный доклад 2015; 5: 17737.

    PubMedPubMedCentralCrossRefGoogle Scholar
  128. Ян Дж., Сюй Г, Чжэн И и др. Диагностика рака печени с помощью метаболомики на основе ВЭЖХ, позволяющая избежать ложноположительных результатов от гепатита и гепатоцирроза.J Chromatogr B Anal Technol Biomed Life Sci. 2004; 813: 59–65.

    CrossRefGoogle Scholar

Информация об авторских правах

© Springer Science + Business Media Dordrecht 2017

Авторы и аффилированные лица

  • 2.Unidad de Hepatología Experimental, Unidad AnalíticaInstituto de Investigación Sanitaria, Fundación Hospital La FeValencia, Испания
  • 3.Unidad de Cirugía Hepato-Bilio-Pancreatica y Trasplante HepáticoHospital Universitario
  • Диапазон медицинских исследований в области здравоохранения 9299 в области политики и здоровья человека в области медицины 9299 карциномы

    Печень - одно из основных мест метастазирования рака. 1 Наиболее распространенными первичными злокачественными новообразованиями, вызывающими метастазы в печени, являются карциномы желудочно-кишечного тракта, груди и легких, а также меланома, но рак из любого места может распространяться на печень. 1 Часто это зловещий признак, указывающий на плохой прогноз. 1 Однако было показано, что в случаях рака толстой кишки и, возможно, даже молочной железы с ограниченным числом метастазов частичная гепатэктомия может дать надежду на долгосрочное выживание. 1, 2 Другие методы лечения метастазов в печени включают химиотерапию печеночной артерии, системную химиотерапию, химиоэмболизацию и несколько абляционных методов, таких как инъекция этанола, криоабляция, радиочастотная абляция, микроволновая абляция, интерстициальная лазерная фотокоагуляция и сфокусированный ультразвук высокой интенсивности. 3– 5 Все эти методы имеют некоторый, хотя и ограниченный, успех в увеличении выживаемости пациентов или в паллиативном лечении. 3– 7 Есть также несколько многообещающих новых терапевтических методов, основанных на молекулярной биологии метастазов на различных фазах развития. 8 К ним относятся: антиангиогенезные агенты, ингибиторы металлопротеаз, иммунотерапия и стратегии лечения, основанные на генной терапии. 8

    «Целью нашего настоящего исследования было определить, экспрессируется ли h29 в метастазах печени из ряда карцином человека, с целью установления механистической основы для разработки лечения таких метастазов на основе ДНК»

    h29 - это импринтированный, экспрессируемый материнской тканью ген онкофета, который функционирует как молекула РНК. 9 h29 находится на хромосоме 11p15.5, рядом с локусом гена IGF II (кодирующего инсулиноподобный фактор роста II). 9

    Эти гены реципрокно импринтируются, и их экспрессия связана в тканях плода и взрослого человека. 9 h29 обильно экспрессируется при многих раковых заболеваниях и лишь незначительно почти во всех нормальных тканях взрослого человека. 10 Точная биологическая функция продукта РНК h29 все еще неизвестна. Предыдущие работы показали эффект подавления опухоли как in vitro 11 , так и in vivo, главным образом в опухоли Вильмса. 12, 13 Однако другие исследования, включая наше собственное, показали сверхэкспрессию h29 при многих формах рака (гепатоцеллюлярная карцинома, 9 рака яичек, 14, 15 хориокарцинома, 16, 17 пищевода рак, 18 рак прямой кишки, 18 рак яичников, 19 и рак груди 20– 22 ), с потерей импринтинга или без нее. Adriaenssens с коллегами предположили, что h29 играет роль в эпителиально-мезенхимальных взаимодействиях и, таким образом, в морфогенезе и / или миграции эпителиальных клеток. 23 Мы продемонстрировали активацию h29 в ответ на стресс, и мы постулировали, что она может играть роль в содействии прогрессированию рака, ангиогенезу и метастазированию. 10 Недавние исследования показали, что изменения в метилировании промоторных / энхансерных сайтов являются спусковым механизмом для экспрессии h29 при некоторых видах рака. 24– 28

    Мы показали, что h29 сильно экспрессируется более чем в 80% карцином мочевого пузыря человека и что его экспрессия снижается с потерей дифференцировки опухоли.Это снижение имеет прогностическое значение при прогнозировании раннего рецидива опухоли. 29 Мы также обнаружили экспрессию h29 в 60% карцином эндометрия и продемонстрировали корреляцию между уровнем экспрессии и гистологической степенью. 30

    Хотя связь между экспрессией IGF II и развитием метастазов в печень от колоректального рака была показана, 31 экспрессия h29 при метастазах в печень у людей не изучалась.

    Целью нашего настоящего исследования было определить, экспрессируется ли h29 в метастазах печени из ряда карцином человека, с целью установления механистической основы для разработки лечения таких метастазов на основе ДНК.Недавно было показано, что это лечение уменьшает субкапсулярно индуцированные опухоли печени на метастатической модели карциномы толстой кишки крысы CC531. 32

    Вторичной целью было изучить прогностическое значение экспрессии h29 при метастазах в печени с учетом предыдущих сообщений, которые показали, что экспрессия h29 имеет прогностическое значение в конкретных опухолях (см. Выше).

    Мы обнаружили экспрессию h29 в большой части печеночных метастазов и высокий уровень экспрессии более чем в половине.Однако экспрессия h29 в этих метастазах, по-видимому, не имела прогностического значения.

    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

    Типичные парафиновые восковые блоки метастатической карциномы в печени были выбраны из архивов нескольких отделений патологии в Израиле, включая Медицинский центр Сорока (Беэр-Шева), Медицинский центр Вольфсон (Холон) и Медицинскую организацию Хадасса (Эйн-керем и Ветви горы Скопус, Иерусалим). Эти блоки были собраны из пула рутинно подготовленных блоков из центральной и клиновидной биопсии печени и образцов частичной гепатэктомии, взятых у 80 пациентов с метастазами в печени, полученными из различных карцином.Получено исключение из Хельсинкского комитета Медицинской организации Хадасса.

    Исследования нерадиоактивной гибридизации in situ проводили на срезах из этих блоков с использованием меченного дигоксигенином зонда h29 в соответствии с ранее описанными методами. 9 Ткань плаценты использовали в качестве положительного контроля, а контроли на специфичность гибридизации in situ использовали, как описано ранее. 9 Окрашенные срезы оценивали с помощью светового микроскопа (Axioplan2; Carl Zeiss Jena GmbH, Геттинген, Германия) тремя опытными патологами и фотографировали с помощью камеры CCD (Axiocam, Carl Zeiss Jena GmbH).

    Степень окрашивания метастатической карциномы, прилегающей паренхимы печени и первичной карциномы, если таковая имеется, оценивалась следующим образом: отсутствие окрашивания (степень 0), небольшое количество клеток (<5%) или слабое окрашивание (степень 1 ), до половины клеток и умеренное окрашивание (степень 2), более половины клеток и сильное окрашивание (степень 3). Степень 1 считалась низким уровнем экспрессии h29, а степени 2 и 3 считались высоким уровнем экспрессии h29.

    Демографические и клинические данные, полученные из файлов пациентов, включали пол, тип первичной опухоли и, при наличии, точные даты клинических событий, включая диагноз метастазирования и первичной опухоли, а также смерть в случае наступления смерти.Регистрировали возраст пациентов на все доступные даты клинических событий.

    Для анализа выживаемости без метастазов и общей выживаемости в связи с экспрессией h29 в метастазах использовались

    графиков Каплана-Мейера, логарифмических рангов и тестов Бреслоу. Статистический анализ был выполнен с использованием SPSS для Windows (версия 12; SPSS Inc, Чикаго, Иллинойс, США).

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Мы изучили 80 пациентов, 45 из которых были женщинами и 35 мужчинами. В таблице 1 показаны характеристики пациентов и распределение экспрессии h29 в их метастазах в печени.

    Стол 1

    Краткое описание характеристик пациентов с метастазами в печени, полученных из различных карцином, и уровень экспрессии h29 в образцах парафиновых срезов этих метастазов

    Средний возраст при первичном диагнозе опухоли (известный для 54 пациентов) составлял 59,75 года (стандартное отклонение 14,9). Средний возраст постановки диагноза метастазов составлял 60,8 года (SD, 13,3). Двенадцать из 80 пациентов были живы, 57 умерли.Данные о выживаемости отсутствовали для 11 пациентов. Был известен точный возраст смерти 49 из 57 умерших пациентов. Средний возраст смерти в этой группе составил 62,7 года (SD, 12,3).

    Экспрессия

    h29 наблюдалась в 64 из 80 метастазов (рис. 1). Высокая экспрессия (2 и 3 степени) наблюдалась в 43 из 80 метастазов (рис. 1). Эти пропорции аналогичны при рассмотрении метастазов в печени, происходящих только от первичной колоректальной аденокарциномы (экспрессия h29, 31 из 37; высокая экспрессия h29, 18 из 37).

    Рисунок 1 Экспрессия РНК

    h29 в печеночных метастазах карцином с использованием нерадиоактивного метода гибридизации in situ, выполняемого на срезах, залитых парафином. Положительное окрашивание проявляется в коричневом окрашивании цитоплазмы. Все секции окрашены контрастным красителем Гимза. Са, метастатическая карцинома; Hep, гепатоциты в прилежащей печени; Des, десмопластическая реакция. Первоначальное первичное увеличение всех секций - × 400. (A) Отсутствие окрашивания (степень 0) метастатических клеток карциномы или гепатоцитов.(B, C) Очаговое или очень слабое окрашивание (степень 1) только метастатических клеток карциномы (C, срез первичной карциномы толстой кишки). (D – F) Умеренное окрашивание менее половины клеток метастатической карциномы (степень 2) и некоторое окрашивание соседних гепатоцитов (D, срез первичной карциномы толстой кишки). (G – I) Сильное диффузное окрашивание клеток метастатической карциномы (степень 3) и десмопластическая реакция. Окрашивание соседних гепатоцитов от умеренного до сильного.

    Было сильное окрашивание (2 или 3 степени) в прилегающей паренхиме печени у 26 из 80 метастазов (рис. 1).

    Окрашивание первичной опухоли

    h29 было также доступно для 13 пациентов (рис. 1). В 11 из этих случаев степень окрашивания была аналогична метастазам.

    Точный ход времени от первичного диагноза опухоли до метастазирования в печень (выживаемость без метастазов) был известен для 54 из 80 пациентов. Точный период выживаемости от первичного диагноза опухоли до смерти или до последнего наблюдения (общая выживаемость) был известен для 38 из 80 пациентов.

    Из 54 пациентов в первой группе 29 имели высокий уровень (2 или 3 степени) экспрессии h29 в метастазах, а средняя выживаемость без метастазов составляла 19.18 месяцев (SE, 8,57; 95% доверительный интервал (ДИ), от 2,39 до 35,98; медиана, 0,00). Шестнадцать пациентов имели низкий уровень экспрессии h29 (степень 1) в метастазах, а средняя выживаемость без метастазов составляла 6,71 месяца (SE, 4,44; 95% ДИ, от 0,00 до 15,4; медиана, 0,00). У девяти пациентов были h29 отрицательные метастазы, а средняя выживаемость без метастазов составила 0,25 месяца (SE, 0,18; 95% ДИ, 0,00–0,59; медиана 0,00). Хотя графики Каплана-Мейера (рис. 2A) показывают различия в кумулятивной выживаемости между тремя группами, корреляция между уровнем экспрессии h29 в метастазах и выживаемостью без метастазов не является значимой ни по логарифмическому ранговому критерию (p = 0.12) или по критерию Бреслоу (p = 0,42).

    Рисунок 2

    Корреляция между выживаемостью и экспрессией h29 в печеночных метастазах, полученных из карцином, представленных графиками Каплана-Мейера. (A) Выживаемость от первичного диагноза опухоли до диагностики метастазов (выживаемость без метастазов). p = 0,12 по логарифмическому ранговому тесту и 0,42 по критерию Бреслоу. (B) Выживаемость от первичного диагноза опухоли до смерти или до последнего наблюдения (общая выживаемость). p = 0,61 по логарифмическому ранговому тесту и 0.82 по тесту Бреслоу.

    Из 38 пациентов во второй группе у 22 был высокий уровень экспрессии h29 в метастазах, средняя общая выживаемость составила 83,61 месяца (SE, 36,40; 95% ДИ, от 12,27 до 154,95 (ограничено 409,11)) и средний общий показатель. выживаемость 24,87 месяцев (SE, 11,75; 95% ДИ, 1,84–47,90). У десяти пациентов был низкий уровень экспрессии h29 в метастазах, средняя общая выживаемость составила 51,97 месяцев (SE, 11,73; 95% ДИ, от 28,97 до 74,97 (ограничено 83,85)), а средняя общая выживаемость составила 80.26 месяцев (SE, 48,04; 95% ДИ, от 0,00 до 174,42). У шести пациентов были h29 отрицательные метастазы, средняя общая выживаемость составила 34,52 месяца (SE, 11,65; 95% ДИ, от 11,69 до 57,36), а медиана общей выживаемости составила 28,06 месяцев (SE, 24,12; 95% ДИ, от 0,00 до 75,34). Хотя графики Каплана-Мейера (рис. 2B) показывают различия в кумулятивной выживаемости между тремя группами, корреляция между уровнем экспрессии h29 в метастазах и общей выживаемостью снова не является значимой ни при логарифмическом ранговом тесте (p = 0.61) или тестом Бреслоу (p = 0,82).

    ОБСУЖДЕНИЕ

    h29, импринтированный, материнско экспрессируемый онкофетальный ген, который функционирует как молекула РНК, 9 широко экспрессируется при многих раковых заболеваниях. 10 Его точная биологическая роль в значительной степени неизвестна, но, вероятно, он участвует в развитии рака, ангиогенезе и метастазировании. 10

    Нас интересовала экспрессия h29 в метастазах печени, происходящих из карцином, потому что печень является одним из основных мест метастазирования рака. 1 Как описано, мы оценили экспрессию h29 в залитых парафином срезах 80 метастатических карцином в печени, используя нерадиоактивную гибридизацию in situ. Мы рассматривали метастазы в печени как заболевание печени, 1 , и поэтому мы не пытались сознательно отбирать образцы в соответствии с точным статистическим распределением первичных карцином. Хотя колоректальная карцинома является основной первичной карциномой с метастазами в печень, 1 и является основной первичной опухолью в нашей группе (37 из 80; таблица 1), распределение первичных опухолей, вероятно, смещено, потому что большинство частичных гепатэктомий выполняются по метастатические колоректальные карциномы.Кроме того, большинство первичных опухолей во второй по величине группе (первичные опухоли неизвестны или неизвестны; таблица 1), вероятно, являются колоректальными карциномами.

    «Мы пришли к выводу, что вектор цепь А дифтерийного токсина – h29 является очень хорошим кандидатом для ориентированного на пациента лечения метастатической карциномы в печени на основе ДНК»

    Экспрессия

    h29 наблюдалась в 64 из 80 метастазов, с высоким уровнем экспрессии (степень 2–3) у 43.Это похоже на его проявление в некоторых первичных карциномах. 9, 14, 18, 19, 21, 29, 30 Действительно, экспрессия h29 наблюдалась в большинстве подгрупп первичных опухолей (таблица 1). Эти результаты предполагают, что метастатические карциномы в печени, происходящие из различных первичных опухолей, экспрессируют h29, тем самым устанавливая механистическую основу для разработки лечения на основе ДНК, направленного на такие метастазы, без учета первичной карциномы.

    Экспрессия

    h29, по-видимому, не имела прогностической ценности с точки зрения выживаемости без метастазов (рис. 2A) или общей выживаемости (рис. 2B). Однако на результаты могло повлиять отсутствие точных данных для многих пациентов. В идеале тесты на прогностическую значимость должны проводиться на более широкой популяции со стратификацией по полу, возрасту и первичному подтипу опухоли.

    Что касается использования экспрессии h29 в метастазах печени для специфического лечения антиметастазами на основе ДНК, мы разработали векторы, несущие ген цепи А дифтерийного токсина под контролем промоторов 3 и 4 IGF-II и регуляторные последовательности h29, и показали, что эти векторы избирательно разрушают опухолевые клетки и ингибируют рост опухоли in vitro и in vivo 33, 34 - например, в модели рака мочевого пузыря у крыс, 35 в переходно-клеточной карциноме человека, 35 и в уменьшении субкапсулярной индуцированные опухоли печени в метастатической модели карциномы толстой кишки крысы CC531. 32 Поскольку мы показали здесь, что h29 обильно экспрессируется в печеночных метастазах, происходящих из ряда карцином, вместе с вышеупомянутыми открытиями, мы пришли к выводу, что вектор цепи А дифтерийного токсина – h29, по-видимому, является очень хорошим кандидатом на роль ориентированное на пациента лечение метастатической карциномы в печени на основе ДНК. Наши результаты лечения пациентов с переходно-клеточными карциномами 35 и одного пациента с метастазами в печени, вызванными карциномой толстой кишки (неопубликованные данные; A Hochberg, 2004), предполагают, что это относительно безопасное лечение.

    Во многих метастазах наблюдалась значительная десмопластическая реакция, которая в основном показывала окраску, аналогичную окраске соседней метастатической карциномы. Это неудивительно, поскольку известно, что h29 экспрессируется как в эпителиальном, так и в стромальном компонентах инвазивных аденокарцином. 20– 22 Окрашивание десмопластической реакции также может быть связано с предполагаемым вкладом h29 в эпителиально-мезенхимальные взаимодействия. 23

    Примерно в трети случаев наблюдалось значительное окрашивание (2 или 3 степени) в прилежащей печени.Экспрессия факторов роста (таких как IGF-I и IGF-II) и факторов, способствующих ангиогенезу (таких как ангиопоэтин 2), органами хозяина с метастазами является хорошо известным явлением. 36 Сверхэкспрессия IGF-II гепатоцитами, прилегающими к метастазам в печени, происходящим из колоректальной карциномы, предполагает его возможный вклад в развитие таких метастазов. 31 Более того, h29 связан с IGF-II и, вероятно, играет роль в ангиогенезе. 10, 23 Этим можно объяснить его экспрессию в гепатоцитах, прилегающих к метастазам.Экспрессия h29 в прилегающей ткани печени вряд ли будет представлять проблему для предлагаемого лечения на основе ДНК (см. Выше), потому что для эффективного уничтожения опухоли ее микросреда также должна быть разрушена, 36 , а лечение является высокоспецифичным и должно вводиться непосредственно в метастаз (неопубликованные данные; A Hochberg, 2004).

    Забрать домой сообщения
    • h29 - это импринтированный, экспрессируемый материнским организмом онкофетальный ген, широко экспрессирующийся при многих раковых заболеваниях и лишь незначительно в нормальных тканях взрослого человека

    • Мы обнаружили, что h29 высоко экспрессируется более чем в половине печеночных метастазов, происходящих от ряда карцином

    • Таким образом, эти метастазы могут быть подходящими кандидатами для лечения на основе ДНК h29, такими как векторы, несущие ген цепи А дифтерийного токсина под контролем промотора h29

    • Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, имеет ли экспрессия h29 прогностическое значение при метастатическом поражении печени с использованием большего количества конкретных подтипов первичной карциномы

    У небольшого числа пациентов также было доступно окрашивание первичной опухоли на h29, и в большинстве этих случаев интенсивность окрашивания была аналогична интенсивности окрашивания метастазов.Хотя наши результаты требуют проверки в крупномасштабных исследованиях, возможно, что знание профиля экспрессии h29 в первичной опухоли может в конечном итоге оказаться достаточным для принятия клинического решения о том, следует ли использовать лечение на основе h29 против метастазов в печени.

    Благодарности

    Доктору К. Меиру и доктору Э. Пикарски из отделения патологии Медицинской организации Хадасса, Иерусалим, Израиль за их важные советы и вклад.

    ССЫЛКИ

    1. Ishac KG , Goodman ZD, Stocker JT, ред.Метастатические опухоли. В: Опухоли печени и внутрипеченочных желчных протоков. Атлас опухолевой патологии, 3-я серия, глава 31. Вашингтон, округ Колумбия: Институт патологии вооруженных сил, 2001: 343–9.

    2. Elias D , Maisonnette F, Druet-Cabanac M, et al. Попытка уточнить показания к гепатэктомии при метастазах рака груди в печень. Am J Surg 2003; 185: 158–64.

    3. Bhattacharya R , Rao S, Kowdley KV.Поражение печени у пациентов с солидными опухолями непеченочного происхождения. Clin Liver Dis, 2002; 6: 1033–43.

    4. Erce C , Parks RW. Интерстициальные абляционные методы при опухолях печени. Br J Surg2003; 90: 272–89.

    5. Бонетти А . Инфузия печеночной артерии при метастазах в печень колоректального рака [комментарий]. Lancet2003; 361: 358–9.

    6. Adam R , Lucidi V, Bismuth H.Колоректальные метастазы в печени: методы улучшения резектабельности. Surg Clin North Am2004; 84: 659–71.

    7. Khatri VP , McGahan J. Нерезекционные подходы при колоректальных метастазах в печени. Surg Clin North Am2004; 84: 587–606.

    8. Аллендорф Дж. , Иппагунта Н., Эмонд Дж. Лечение метастазов в печени: новые горизонты биологической терапии. J Surg Res, 2004; 117: 144–53.

    9. Ariel I , Miao HQ, Ji XR, и др. Импринтированная онкофетальная РНК h29 является кандидатом опухолевых маркеров гепатоцеллюлярной карциномы. Мол Патол 1998; 51: 21–5.

    10. Ayesh S , Matouk I, Schneider T, et al. Возможная физиологическая роль РНК h29. Мол Carcinog 2002; 35: 63–74.

    11. Hao Y , Crenshaw T., Moulton T, et al. Опухоль-супрессорная активность РНК h29. Nature 1993; 365: 764–7.

    12. Moulton T , Crenshaw T, Hao Y, et al. Эпигенетические поражения в локусе h29 у пациентов с опухолью Вильмса. Нат Генет 1994; 7: 440–7.

    13. Танигучи Т , Салливан М.Дж., Огава О., и др. Эпигенетические изменения, охватывающие локус IGF2 / h29, связанные с расслаблением импринтинга IGF2 и замалчиванием h29 в опухоли Вильмса.Proc Natl Acad Sci U S A, 1995; 92: 2159–63.

    14. van Gurp RJ , Oosterhuis JW, Kalscheuer V, et al. Двуаллельная экспрессия генов h29 и IGF2 в опухолях половых клеток яичка человека. J Natl Cancer Inst 1994; 86: 1070–5.

    15. Verterk AJMH , Ariel I, Dekker MC, и др. Уникальные паттерны экспрессии h29 при раке яичка человека различной этиологии.Онкоген 1997; 14: 95–107.

    16. Ariel I , Lustig O, Oyer CE, et al. Расслабление импринтинга при трофобластической болезни. Гинеколь Онкол 1994; 53: 212–19.

    17. Lustig-Yariv O , Schulze E, Komitowski D, et al. Экспрессия импринтированных генов h29 и IGF-2 в клеточных линиях хориокарциномы. Является ли h29 геном-супрессором опухоли? Онкоген 1997; 15: 169–77.

    18. Hibi K , Nakamura H, Hirai A, et al. Потеря импринтинга h29 при раке пищевода. Cancer Res 1996; 56: 480–2.

    19. Tanos V , Prus D, Ayesh S, et al. Экспрессия импринтированной онкофетальной РНК h29 при эпителиальном раке яичников. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 1999; 85: 7–11.

    20. Dugimont T , Curgy JJ, Wernert N, et al. Ген h29 экспрессируется как в эпителиальном, так и в стромальном компонентах инвазивных аденокарцином человека. Biol Cell 1995; 85: 117–24.

    21. Adriaenssens E , Dumont L, Lottin S, et al. Сверхэкспрессия h29 в стромальных клетках аденокарциномы молочной железы связана со значениями опухоли и статусом стероидных рецепторов, но не зависит от экспрессии P53 и Ki-67. Ам Дж. Патол 1998; 153: 1597–607.

    22. Lottin S , Adriaenssens E, Dupressoir T, et al. Сверхэкспрессия эктопического гена h29 усиливает онкогенные свойства клеток рака груди. Канцероген 2002; 23: 1885–95.

    23. Adriaenssens E , Lottin S, Berteaux N, et al. Перекрестное взаимодействие между мезенхимой и эпителием увеличивает экспрессию гена h29 во время рассеяния и морфогенеза эпителиальных клеток. Exp Cell Res 2002; 275: 215–29.

    24. Lynch CA , Tycko B, Bestor TH, и др. Реактивация заглушенного гена h29 при рабдомиосаркоме человека деметилированием ДНК, но не гиперацетилированием гистонов. Молочный рак 2002; 1: 2.

    25. Kanduri C , Kanduri M, Liu L, et al. Кинетика дерегуляции экспрессии за счет метилирования de novo контрольной области импринтинга h29 в раковых клетках. Cancer Res 2002; 62: 4545–8.

    26. Ulaner GA , Vu TH, Li T, et al. Потеря импринтинга IGF2 и h29 при остеосаркоме сопровождается изменениями реципрокного метилирования сайта связывания CTCF. Hum Mol Genet 2003; 12: 535–49.

    27. Ng A , Tang JP, Goh CHK, et al. Регуляция экспрессии импринтирующего гена h29 в карциноме носоглотки человека путем метилирования. Int J Cancer 2003; 104: 179–87.

    28. Vernucci M , Cerrato F, Pedone PV, и др. Онтогенетически регулируемые функции дифференциально метилированного домена h29. Hum Mol Genet 2004; 13: 353–61.

    29. Ariel I , Sughayer M, Fellig Y, et al. Импринтированный ген h29 является маркером раннего рецидива рака мочевого пузыря человека. Мол Патол 2000; 53: 320–3.

    30. Tanos V , Ariel I, Prus D, et al. Экспрессия генов h29 и IGF2 в нормальном, гиперпластическом и злокачественном эндометрии человека.Int J Gynecol Cancer 2004; 14: 521–5.

    31. Кавамото К. , Онодера Х., Кан С., и др. Возможный паракринный механизм инсулиноподобного фактора роста-2 в развитии метастазов в печень от колоректальной карциномы. Рак 1999; 85: 18–25.

    32. Ohana P , Schachter P, Ayesh B, et al. Регуляторные последовательности генов h29 и IGF2 в ДНК-терапии колоректальных метастазов в печени крыс.Дж. Джин Мед 2005; 7: 366–74.

    33. Ohana P , Bibi O, Matouk I, et al. Использование регуляторных последовательностей h29 для направленной генной терапии рака. Int J Cancer 2002; 98: 645–50.

    34. Ayesh B , Matouk I, Ohana P, et al. Ингибирование роста опухоли с помощью DT-A, экспрессируемого под контролем промоторных последовательностей P3 и P4 IGF2. Мол Тер 2003; 7: 535–41.

    35. Охана П. , Гофрит О., Айеш С., и др. Регуляторные последовательности гена h29 в терапии рака мочевого пузыря на основе ДНК. Джин Тер Мол Биол 2004; 8: 181–92.

    36. Богенридер Т , Херлин М. Ось зла: молекулярные механизмы метастазирования рака. Онкоген 2003; 22: 6524–36.

    CD90 + клетки рака печени модулируют фенотип эндотелиальных клеток посредством высвобождения экзосом, содержащих днРНК h29 | Молекулярный рак

  • 1.

    Форнер А., Лловет Дж. М., Брюикс Дж. Гепатоцеллюлярная карцинома. Ланцет. 2012. 379 (9822): 1245–55. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (11) 61347-0S0140-6736 (11) 61347-0.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 2.

    Учино К., Татейши Р., Шиина С., Канда М., Масудзаки Р., Кондо Й и др. Гепатоцеллюлярная карцинома с внепеченочными метастазами: клинические особенности и прогностические факторы. Рак. 2011. 117 (19): 4475–83. DOI: 10.1002 / cncr.25960.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 3.

    Yoo DJ, Kim KM, Jin YJ, Shim JH, Ko GY, Yoon HK и др. Клинические результаты 251 пациента с внепеченочными метастазами при первоначальном диагнозе гепатоцеллюлярной карциномы: улучшает ли трансартериальная химиоэмболизация выживаемость у этих пациентов? J Gastroenterol Hepatol. 2011; 26 (1): 145–54. DOI: 10.1111 / j.1440-1746.2010.06341.x.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 4.

    Ронкалли М., Парк Ю.Н., Ди Томмазо Л. Гистопатологическая классификация гепатоцеллюлярной карциномы.Заболевания органов пищеварения и печени. Off J Italian Soc Gastroenterol Italian Assoc Study Liver. 2010; 42 Приложение 3: S228–34. DOI: 10.1016 / S1590-8658 (10) 60510-5.

    Google Scholar

  • 5.

    Suzuki A, Zheng Y, Kondo R, Kusakabe M, Takada Y, Fukao K и др. Проточно-цитометрическое разделение и обогащение печеночных клеток-предшественников в развивающейся печени мыши. Гепатология. 2000. 32 (6): 1230–9. DOI: 10.1053 / jhep.2000.20349.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 6.

    Оиси Н., Ямасита Т., Канеко С. Молекулярная биология стволовых клеток рака печени. Рак печени. 2014. 3 (2): 71–84. DOI: 10,1159 / 000343863.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 7.

    Юн СК. Биология раковых стволовых клеток и ее клиническое значение при гепатоцеллюлярной карциноме. Кишечная печень. 2012; 6 (1): 29–40. DOI: 10.5009 / gnl.2012.6.1.29.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 8.

    Яо З., Мишра Л. Раковые стволовые клетки и гепатоцеллюлярная карцинома. Биологическая терапия рака. 2009. 8 (18): 1691–8.

    CAS Статья Google Scholar

  • 9.

    Chiba T., Kita K, Zheng YW, Yokosuka O, Saisho H, Iwama A, et al. Боковая популяция, очищенная от клеток гепатоцеллюлярной карциномы, обладает свойствами, подобными раковым стволовым клеткам. Гепатология. 2006. 44 (1): 240–51. DOI: 10.1002 / hep.21227.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 10.

    Ма С., Тан К. Х., Чан Ю. П., Ли Т. К., Кван П. С., Кастильо А. и др. miR-130b способствует росту CD133 (+) клеток печени, инициирующих опухоль, и самообновлению посредством индуцированного опухолевым белком 53 ядерного белка 1. Стволовая клетка клетки. 2010. 7 (6): 694–707. DOI: 10.1016 / j.stem.2010.11.010.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 11.

    Ян З.Ф., Хо Д.В., Нг М.Н., Лау С.К., Ю.В.К., Нгаи П. и др. Значение раковых стволовых клеток CD90 + при раке печени человека.Раковая клетка. 2008. 13 (2): 153–66. DOI: 10.1016 / j.ccr.2008.01.013.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 12.

    Ямасита Т., Хонда М., Накамото И., Баба М., Нио К., Хара Ю. и др. Дискретная природа раковых стволовых клеток EpCAM + и CD90 + в гепатоцеллюлярной карциноме человека. Гепатология. 2013; 57 (4): 1484–97. DOI: 10.1002 / hep.26168.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 13.

    Rege TA, Hagood JS. Thy-1, универсальный модулятор передачи сигналов, влияющий на клеточную адгезию, пролиферацию, выживаемость и ответы цитокинов / факторов роста. Biochim Biophys Acta. 2006; 1763 (10): 991–9. DOI: 10.1016 / j.bbamcr.2006.08.008.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 14.

    Эррера М.Б., Бруно С., Буттильери С., Тетта С., Гатти С., Дерегибус М.С. и др. Выделение и характеристика популяции стволовых клеток из печени взрослого человека.Стволовые клетки. 2006. 24 (12): 2840–50. DOI: 10.1634 / стволовые клетки.2006-0114.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 15.

    Sukowati CH, Anfuso B, Torre G, Francalanci P, Croce LS, Tiribelli C. Экспрессия CD90 / Thy-1 в гепатоцеллюлярной карциноме: исследование in vivo и in vitro. PLoS One. 2013; 8 (10): e76830. DOI: 10.1371 / journal.pone.0076830.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 16.

    Lingala S, Cui YY, Chen X, Ruebner BH, Qian XF, Zern MA и др. Иммуногистохимическое окрашивание маркеров раковых стволовых клеток при гепатоцеллюлярной карциноме. Опыт Мол Патол. 2010. 89 (1): 27–35. DOI: 10.1016 / j.yexmp.2010.05.005.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 17.

    Yu XH, Xu LB, Liu C, Zhang R, Wang J. Клинико-патологические характеристики 20 случаев гепатоцеллюлярной карциномы с тромбами опухоли желчных протоков.Dig Dis Sci. 2011; 56 (1): 252–9. DOI: 10.1007 / s10620-010-1256-8.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 18.

    Лу Дж. В., Чанг Дж. Г., Йе К. Т., Чен Р. М., Цай Дж. Дж., Ху Р. М.. Сверхэкспрессия Thy1 / CD90 при гепатоцеллюлярной карциноме человека связана с инфекцией HBV и плохим прогнозом. Acta Histochem. 2011. 113 (8): 833–8. DOI: 10.1016 / j.acthis.2011.01.001.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 19.

    Ян З.Ф., Нгаи П., Хо Д.В., Ю.В.К., Нг М.Н., Лау С.К. и др. Идентификация местных и циркулирующих раковых стволовых клеток при раке печени человека. Гепатология. 2008. 47 (3): 919–28. DOI: 10.1002 / hep.22082.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 20.

    Гуо З, Ли LQ, Цзян Дж. Х., Оу Ц, Цзэн LX, Сян Б. Д.. Маркеры раковых стволовых клеток коррелируют с ранним рецидивом и выживаемостью при гепатоцеллюлярной карциноме. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2014. 20 (8): 2098–106.DOI: 10.3748 / wjg.v20.i8.2098.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

  • 21.

    Fang L, Zhang HB, Li H, Fu Y, Yang GS. miR-548c-5p подавляет пролиферацию и миграцию и способствует апоптозу в клетках CD90 (+) HepG2. Радиол Онкол. 2012. 46 (3): 233–41. DOI: 10.2478 / v10019-012-0025-z.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 22.

    Фонтана С., Сайева Л., Таверна С., Алессандро Р. Вклад протеомики в понимание роли экзосом опухолевого происхождения в прогрессировании рака: современное состояние и новые перспективы. Протеомика. 2013; 13 (10-11): 1581–94. DOI: 10.1002 / pmic.201200398.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 23.

    Thery C, Amigorena S, Raposo G, Clayton A. Выделение и характеристика экзосом из супернатантов клеточных культур и биологических жидкостей.Текущие протоколы в клеточной биологии / редколлегия, Хуан С. Бонифачино [и др.]. 2006; Глава 3: Раздел 3 22. doi: 10.1002 / 0471143030.cb0322s30.

  • 24.

    Braicu C, Tomuleasa C, Monroig P, Cucuianu A, Berindan-Neagoe I, Calin GA. Экзосомы как божественные посланники: являются ли они Гермесом современной молекулярной онкологии? Смерть клетки отличается. 2015; 22 (1): 34–45. DOI: 10.1038 / cdd.2014.130.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 25.

    Когуре Т., Ян И.К., Лин В.Л., Патель Т. Опосредованный внеклеточными пузырьками перенос новой длинной некодирующей РНК TUC339: механизм межклеточной передачи сигналов при гепатоцеллюлярном раке человека. Гены рака. 2013; 4 (7-8): 261–72. DOI: 10.1177 / 1947601

    9020.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 26.

    Taverna S, Flugy A, Saieva L, Kohn EC, Santoro A, Meraviglia S, et al. Роль экзосом, высвобождаемых клетками хронического миелолейкоза в ангиогенезе.Int J Cancer. 2012; 130 (9): 2033–43. DOI: 10.1002 / ijc.26217.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 27.

    Corrado C, Raimondo S, Saieva L, Flugy AM, De Leo G, Alessandro R. Опосредованное экзосомами перекрестное взаимодействие между клетками хронического миелогенного лейкоза и стромальными клетками костного мозга человека запускает интерлейкин-8-зависимое выживание лейкозных клеток . Cancer Lett. 2014; 348 (1-2): 71–6. DOI: 10.1016 / j.canlet.2014.03.009.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 28.

    Webber J, Yeung V, Clayton A. Внеклеточные везикулы как модуляторы микросреды рака. Semin Cell Dev Biol. 2015; 40: 27–34. DOI: 10.1016 / j.semcdb.2015.01.013.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 29.

    Eun JR, Jung YJ, Zhang Y, Zhang Y, Tschudy-Seney B., Ramsamooj R, et al.Клетки гепатомы SK Hep-1 обладают характеристиками онкогенных мезенхимальных стволовых клеток с высокой метастатической способностью. PLoS One. 2014; 9 (10): e110744. DOI: 10.1371 / journal.pone.0110744.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

  • 30.

    Ю Ф.Дж., Чжэн Дж.Дж., Донг П.Х., Фан Х.М. Длинные некодирующие РНК и гепатоцеллюлярная карцинома. Мол Клин Онкол. 2015; 3 (1): 13–7. DOI: 10.3892 / mco.2014.429.

    PubMed Central PubMed Google Scholar

  • 31.

    Sun J, Bie B, Zhang S, Yang J, Li Z. Длинные некодирующие РНК: критические игроки в гепатоцеллюлярной карциноме. Int J Mol Sci. 2014; 15 (11): 20434–48. DOI: 10.3390 / ijms151120434.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 32.

    Pan YF, Qin T, Feng L, Yu ZJ. Профиль экспрессии измененных длинных некодирующих РНК у пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой, ассоциированной с HBV. J Huazhong Univ Sci Technol Med sci Hua zhong ke ji da xue xue xue bao Yi xue Ying De wen ban = Huazhong keji daxue xuebao Yixue Yingdewen запрет.2013. 33 (1): 96–101. DOI: 10.1007 / s11596-013-1078-у.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 33.

    Ян X, Xie X, Xiao YF, Xie R, Hu CJ, Tang B et al. Возникновение длинных некодирующих РНК в онкогенезе гепатоцеллюлярной карциномы. Письма о раке. 2015. doi: 10.1016 / j.canlet.2015.02.035

  • 34.

    Джордж Дж., Патель Т. Некодирующие РНК как терапевтические мишени для гепатоцеллюлярной карциномы. Semin Liver Dis.2015; 35 (1): 63–74. DOI: 10,1055 / с-0034-1397350.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 35.

    Ma C, Nong K, Zhu H, Wang W, Huang X, Yuan Z и др. h29 способствует метастазированию рака поджелудочной железы, подавляя подавление let-7 его мишени, опосредованной HMGA2, EMT. Биология опухоли. J Int Soc Oncodev Biol Med. 2014; 35 (9): 9163–9. DOI: 10.1007 / s13277-014-2185-5.

    CAS Статья Google Scholar

  • 36.

    Matouk IJ, Raveh E, Abu-lail R, Mezan S, Gilon M, Gershtain E, et al. Онкофетальная РНК h29 способствует метастазированию опухоли. Biochim Biophys Acta. 2014; 1843 (7): 1414–26. DOI: 10.1016 / j.bbamcr.2014.03.023.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 37.

    Такахаши К., Ян И.К., Когуре Т., Хага Х., Патель Т. Опосредованный внеклеточными пузырьками перенос длинной некодирующей РНК ROR модулирует химиочувствительность при гепатоцеллюлярном раке человека.FEBS open Bio. 2014; 4: 458–67. DOI: 10.1016 / j.fob.2014.04.007.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 38.

    Йе Дж, Ву Д., Ву П., Чен З, Хуанг Дж. Ниша раковых стволовых клеток: перекрестная связь между раковыми стволовыми клетками и их микросредой. Биология опухоли. J Int Soc Oncodev Biol Med. 2014; 35 (5): 3945–51. DOI: 10.1007 / s13277-013-1561-х.

    CAS Статья Google Scholar

  • 39.

    Kahlert C, Kalluri R. Экзосомы в микросреде опухоли влияют на прогрессирование рака и метастазирование. J Mol Med (Берл). 2013. 91 (4): 431–7. DOI: 10.1007 / s00109-013-1020-6.

    CAS Статья Google Scholar

  • 40.

    Такахаши К., Ян И.К., Хага Х., Патель Т. Модуляция сигнальных путей гипоксии с помощью внеклеточного linc-RoR. J Cell Sci. 2014; 127 (Pt 7): 1585–94. DOI: 10.1242 / jcs.141069.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 41.

    Моран В.А., Перера Р.Дж., Халил А.М. Новые функциональные и механистические парадигмы длинных некодирующих РНК млекопитающих. Nucleic Acids Res. 2012. 40 (14): 6391–400. DOI: 10.1093 / nar / gks296.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 42.

    Zhang Y, Tycko B. Моноаллельная экспрессия гена h29 человека. Нат Жене. 1992; 1 (1): 40–4. DOI: 10,1038 / NG0492-40.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 43.

    Hark AT, Schoenherr CJ, Katz DJ, Ingram RS, Levorse JM, Tilghman SM. CTCF опосредует чувствительную к метилированию активность по блокированию энхансеров в локусе h29 / Igf2. Природа. 2000. 405 (6785): 486–9. DOI: 10,1038 / 35013106.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 44.

    Dey BK, Pfeifer K, Dutta A. Длинная некодирующая РНК h29 дает начало микроРНК miR-675-3p и miR-675-5p, способствующих дифференцировке и регенерации скелетных мышц.Genes Dev. 2014; 28 (5): 491–501. DOI: 10.1101 / gad.234419.113.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

  • 45.

    Kallen AN, Zhou XB, Xu J, Qiao C, Ma J, Yan L, et al. Запечатленная днРНК h29 противодействует микроРНК let-7. Mol Cell. 2013; 52 (1): 101–12. DOI: 10.1016 / j.molcel.2013.08.027.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 46.

    Ян Ф, Би Дж, Сюэ Х, Чжэн Л., Чжи К., Хуа Дж и др.Активированная длинная некодирующая РНК h29 способствует пролиферации клеток рака желудка. FEBS J. 2012; 279 (17): 3159–65. DOI: 10.1111 / j.1742-4658.2012.08694.x.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 47.

    Луо М., Ли З., Ван В., Цзэн Ю., Лю З., Цю Дж. Длинная некодирующая РНК h29 увеличивает метастазирование рака мочевого пузыря, связываясь с EZh3 и подавляя экспрессию E-кадгерина. Cancer Lett. 2013. 333 (2): 213–21. DOI: 10.1016 / j.canlet.2013.01.033.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 48.

    Matouk IJ, DeGroot N, Mezan S, Ayesh S, Abu-lail R, Hochberg A, et al. Некодирующая РНК h29 необходима для роста опухоли человека. PLoS One. 2007; 2 (9): e845. DOI: 10.1371 / journal.pone.0000845.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

  • 49.

    Феллиг Ю., Ариэль И., Охана П., Шахтер П., Синельников И., Бирман Т. и др.Экспрессия h29 при метастазах в печень из ряда карцином человека. J Clin Pathol. 2005. 58 (10): 1064–8. DOI: 10.1136 / jcp.2004.023648.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 50.

    Ким Д.К., Чжан Л., Дзау В.Дж., Пратт Р.Э. h29, ген, регулируемый развитием, повторно экспрессируется в клетках гладких мышц сосудов крысы после повреждения. J Clin Invest. 1994; 93 (1): 355–60. DOI: 10.1172 / JCI116967.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 51.

    Han DK, Khaing ZZ, Pollock RA, Haudenschild CC, Liau G. h29, маркер перехода в развитии, повторно экспрессируется в атеросклеротических бляшках человека и регулируется инсулиновым семейством факторов роста в культивируемых гладкомышечных клетках кролика. J Clin Invest. 1996. 97 (5): 1276–85. DOI: 10,1172 / JCI118543.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 52.

    Noto R, Santangelo MG, Ricagno S, Mangione MR, Levantino M, Pezzullo M, et al.Закаленная полимеризация нейросерпина человека. PLoS One. 2012; 7 (3): e32444. DOI: 10.1371 / journal.pone.0032444.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

  • Сывороточные аминотрансферазы при неалкогольной жировой болезни печени являются признаком метаболических нарушений печени на уровне аминокислот и цикла Кребса

    Важность Все больше данных свидетельствует о важной роли функции печени в патофизиологии болезни Альцгеймера (БА).Печень является основным центром обмена веществ; Таким образом, исследование связи функции печени с биомаркерами БА, когнитивными функциями, нейровизуализацией и ЦСЖ улучшило бы понимание роли метаболической дисфункции в БА. Цель Изучить, связаны ли маркеры функции печени с когнитивной дисфункцией и биомаркеры A / T / N (амилоид, тау-белок и нейродегенерация) для AD. Дизайн, сеттинг и участники В этом когортном исследовании маркеры функции печени на основе сыворотки измерялись с 1 сентября 2005 г. по 31 августа 2013 г. у участников Neuroimaging Initiative 1581 г. н.э. наряду с когнитивными показателями, биомаркерами спинномозговой жидкости (CSF), атрофией мозга, метаболизмом глюкозы в головном мозге, и накопление амилоида-β.Связь маркеров функции печени с клиническими маркерами AD и биомаркерами A / T / N оценивалась с использованием обобщенных линейных моделей, скорректированных с учетом смешивающих переменных и множественных сравнений. Статистический анализ проводился с 1 ноября 2017 г. по 28 февраля 2019 г. Экспозиции В качестве переменных воздействия использовались пять сывороточных маркеров функции печени (общий билирубин, альбумин, щелочная фосфатаза, аланинаминотрансфераза и аспартатаминотрансфераза) от участников AD Neuroimaging Initiative.Основные результаты и меры Первичные результаты включали диагностику БА, совокупные баллы исполнительного функционирования и памяти, биомаркеры спинномозговой жидкости, атрофию, измеренную с помощью магнитно-резонансной томографии, метаболизм глюкозы в головном мозге, измеренный с помощью позитронно-эмиссионной томографии флудезоксиглюкозы F 18 (¹⁸F), и накопление амилоида-β, измеренное с помощью [¹⁸F] позитронно-эмиссионная томография флорбетапира. Полученные результаты Среди участников AD Neuroimaging Initiative (n = 1581; 697 женщин и 884 мужчин; средний [SD] возраст 73,4 [7,2] года) было 407 когнитивно нормальных пожилых людей, 20 со значительными проблемами памяти, 298 с ранними легкими когнитивными нарушениями, 544 с поздним легким когнитивным нарушением и 312 с AD.Повышенное соотношение аспартатаминотрансферазы (AST) к аланинаминотрансферазе (ALT) и более низкие уровни ALT были связаны с диагнозом AD (отношение AST к ALT: отношение шансов, 7,932 [95% ДИ, 1,673-37,617]; P = 0,03; ALT : отношение шансов, 0,133 [95% ДИ, 0,042–0,422]; P = 0,004) и плохая когнитивная деятельность (отношение AST к ALT: β [SE], -0,465 [0,180]; P = 0,02 для совокупной оценки памяти; β [SE], -0,679 [0,215]; P = 0,006 для составной оценки управляющих функций; ALT: β [SE], 0,397 [0,128]; P = 0,006 для составной оценки памяти; β [SE], 0.637 [0,152]; P <0,001 для сводной оценки управляющих функций). Повышенные значения отношения AST к ALT были связаны с более низкими уровнями амилоида-β 1-42 в спинномозговой жидкости (β [SE], -0,170 [0,061]; P = 0,04) и повышенным отложением амилоида-β (амилоидные биомаркеры), более высоким уровнем фосфорилированного в спинномозговой жидкости тау-белка 181 (β [SE], 0,175 [0,055]; P = 0,02) (биомаркеры тау) и более высокие уровни общего тау в спинномозговой жидкости (β [SE], 0,160 [0,049]; P = 0,02) и снижение метаболизма глюкозы в головном мозге (β [ SE], -0,123 [0,042]; P = 0,03) (биомаркеры нейродегенерации).