Метод сонди: Тест Сонди. Метод портретных выборов || Пройти тест онлайн

Проективный метод Сонди

Михаил Вигдорчик, кандидат медицинских наук, психолог-аналитик, специалист в области глубинного исследования личности и моделирования динамики поведения личности приглашает на авторский мастер-класс, который состоится в Киеве.

Консультант: Михаил Вигдорчик
Тема: Проективный метод портретных выборов Сонди — ключ к глубинной мотивации персонала.
Форма проведения: мастер-класс
Место проведения: Киев

Информация о консультанте	Автор-постановщик автоматизированного программного комплекса психодиагностических методик «Консул-Интегратор», который успешно используется коммерческими предприятиями и силовыми государственными структурами России.
Целевая аудитория	Директора и менеджеры по управлению персоналом, менеджеры по подбору персонала, специалисты в рекрутинге, специалисты корпоративных оценочных центров, психологи-консультанты
Цель мероприятия	Методика предназначена для диагностики бессознательных мотивов деятельности, скрытых от наблюдателя свойств характера. Широкая практическая область применения результатов методики, от профориентации и отбора персонала, до индивидуального консультирования и терапии. В руках опытного профессионала метод портретных выборов Сонди позволяет в долговременной перспективе прогнозировать мотивацию к деятельности, профессиональную эффективность и социальную успешность.

 Вниманию HR-менеджеров и практических психологов!

Если Вы много времени тратите на интервью с кандидатом, он соответствует требуемому LAB-профилю и обладает нужными компетенциями, но при этом через месяц работы неожиданно увольняется или удивляет Вас другими нежданными поступками? Задумайтесь, насколько глубоко удается познать истинную мотивацию кандидата?
Предлагаем овладеть практической технологией проективного метода Сонди.

Уникальная по качеству и глубине исследования мотивационной сферы методика, которая требует всего 10 минут на процедуру проведения!
Методика предназначена для диагностики бессознательных мотивов деятельности, скрытых от наблюдателя свойств характера. Широкая практическая область применения результатов методики, от профориентации и отбора персонала, до индивидуального консультирования и терапии. В руках опытного профессионала метод портретных выборов Сонди позволяет в долговременной перспективе прогнозировать мотивацию к деятельности, профессиональную эффективность и социальную успешность.
Ведущий мастер-класса, Михаил Вигдорчик, наряду с Л.Собчик и В.Джоссом, является одним из трёх признанных Цюрихским Сонди-институтом специалистов СНГ по теории судьбоанализа Л.Сонди; автор онографии, посвященной технологии интерпретации векторных картин теста Сонди.

В программе мастер-класса

1 блок. Теоретическое обоснование теста Сонди
        Психоаналитические истоки проективного метода
        Тест Сонди как инструмент судьбоанализа
        Ведущие принципы психологии судеб
        Система побуждений человека согласно теории судьбоанализа
        Определение понятий
        Процедура тестирования

2 блок. Психология побудительных факторов (мотивов) теста Сонди. Анализ векторных картин
        Сексуальное побуждение, вектор S. Эрос и танатос.
        Пароксизмальное побуждение, вектор P. Этика и мораль.
        Побуждения «обладать» и «быть», вектор Sch. Интроекция, негация, проекция и инфляция.
        Побуждение к контактам, вектор С. Залипание и поиск, сцепление и отделение.

3 блок. Анализ и интерпретация дополнительных показателей
        Расчет и анализ формулы влечений.
        Класс влечений и классы опасностей. 
        Пропорции мужественности-женственности.
        Индексы социальности

4 блок. Принципы профориентации с помощью теста Сонди

Место проведения тренинга

г. Киев

Тест Сонди. Способы интерпретации | Олег Мальцев

Тест Сонди – это психологический тест, разработанный венгерским и швейцарским психологом, психиатром и психоаналитиком Леопольдом Сонди.

Стоит отметить, что в психологии существуют разные разновидности тестов: психометрические – опросники, двигательные тесты и проективные методики. Тест Сонди относится к последней разновидности.

Проективные методики являются с одной стороны крайне точными в силу того, что дают глубокий срез состояния испытуемого, а с другой стороны – крайне сложны в интерпретации. 

Когда мы говорим о проективной методике Сонди, мы имеем дело с достаточно структурированным тестом. Его стимульный материал состоит из 48 портретов. Метод тестирования заключается в том, что тестируемому предлагается поочередно выбирать из серии портретов мужчин и женщин наиболее и наименее ему симпатичные фотографии. Каждый портрет отражает проявление одного из 8 основных базисных влечений человека, и позволяет определить наличие тех или иных проблем или патологий испытуемого. Результаты теста Сонди достаточно точно показывают, что происходит с человеком. Для более глубокого анализа, с целью выявления тех или иных тенденций проводится десятикратное тестирование.

Результаты теста Сонди представлены в виде 8 факторов влечений, которые, согласно концепции Сонди, являются ведущими жизненными радикалами.

В результате прохождения теста Сонди мы получаем срез, состоящий из 2 таблиц: передний план и задний план, каждый из которых включает в себя показатели 8 факторов влечений. Также при проведении тестирования возможно проанализировать и теоретический план (способы перехода от заднего к переднему плану).

Передний план (ПП) – это то, что есть сейчас, настоящее положение вещей.

Задний план (ЗП) – это то, что предшествовало настоящему – прошлое и вероятностное будущее человека.

Каждый фактор теста Сонди показывает близость к определенному психиатрическому заболеванию.

Сонди говорил, что норма – это разбавленная патология, следовательно, каждый фактор отражает приближение человека к состоянию психиатрии. У каждого фактора есть близость к психиатрии. Представьте себе, что это дорога, по которой человек идет к заболеванию и каждый фактор – это уже психиатрическое заболевание, а человек находиться на каком-то расстоянии от него: кто-то ближе, кто-то дальше. И так по 8 факторам одновременно.

Эти вещи позволяет выявить классическая интерпретация теста Сонди, но она мало что дает не специалисту. То есть, обычный человек не сможет этим воспользоваться в обыденной жизни. Это не дает понимание, что нужно сделать и как сделать. А ведь тест Сонди можно широко использовать как диагностический инструмент, например, в сфере HR-менеджмента, безопасности, бизнеса и т.д.

Огромная заслуга академика УАН, доктора философии, кандидата психологических наук Олега Викторовича Мальцева в данной области заключается в том, что им было разработано более 25 способов интерпретации теста Сонди:

• Метод «Автомата» — это мгновенная интерпретация теста. Этот метод рекомендуется применять в том случае, когда необходимо провести быструю интерпретацию, он показывает только первичный срез.
• Метод «Круга Мальцева» — этот аналитический метод позволяет проанализировать ситуацию, позицию, человека, произвести самоанализ.
• Метод «Факторных картин» — это простая и крайне удобная в использовании интерпретация Сонди. Она жизненная, двигательная и быстро дает понять, что с человеком не так. Эта интерпретация позволяет прогнозировать,  как поведет себя человек в той или иной ситуации, позволяет точно сказать, что человек сможет  делать, а что не сможет сделать.
• Метод «Реакция в поединке» — показывает умение человека справляться с поединками. То есть, можно точно сказать, что он делает с собой, как он будет реагировать в поединке один на один (сделки, контракты и др.). Как он будет себя вести один против группы, и как он будет справляться с системой координат.
• Метод «Управление методом круга Мальцева» — этот способ интерпретации отражает динамическое развитее, то есть, как в жизни у человека все происходило, что происходит и будет происходить, если он ничего в своей жизни не поменяет.
• «Что делают люди, чтоб заболеть». Речь идет о том, что человек находится на какой–то стадии близости к тому или иному психиатрическому заболеванию и метод прихода к этому заболеванию – это то, что человек неосознанно совершает в жизни. Каждый фактор теста в отдельности показывает в какое заболевание человек движется.
• «Постулаты религии общественного сознания». Существует взаимосвязь показателей теста Сонди с видимым поведением человека. Существуют такое понятие, как постулаты религии общественного сознания. Когда мы смотрим на тест Сонди, то мы видим гипертонию, или ярко выраженную тенденцию, или повторяющиеся тенденции, то мы точно можем сказать за какой постулат он держится, что и диктует его поведение.
• «Реакции психики». Зачем нам нужно понимать при работе с людьми, какая у человека преобладающая реакция психики? С помощью этого мы сразу можем выяснить в каком поле мы сможем сработать с человеком — определить, кто перед вами и что с ним делать. С тактической точки зрения в этой интерпретации очень важно, что с помощью ее мы можем определить к какой деятельности человек склонен в первую очередь.
• Связь теста Сонди с тестом Люшера — данный способ интерпретации позволяет переходить от теста Сонди  к другим тестам.  Например, мы можем не проводить тест Люшера, но можем точно сказать какая преобладающая цветовая гамма будет у человека.
• Тактическая интерпретация — это снова работы с людьми. Данный способ интерпретация – незаменимый инструмент для бизнесменов, руководителей, всех тех, кто занимаются людьми, несут ответственность и выполняют  обязательства.
• Подход «Анализ эшелонов» — этот подход применяется к факторным картинам и тактическим интерпретациям и учитывает особенности индивидуальности человека и срабатывание эшелонов аппаратной обороны.
• Прогноз на (7-9 месяцев) — позволяет получить срез личности. С помощью данного метода мы можем спрогнозировать будущее человека. То есть, он достоверно показывает, как человек будет себя вести и что с ним будет происходить в ближайшие 7-9 месяцев. Пока человек этот прогноз не увидит, ему очень сложно что-то поменять, потому что он не знает, что менять.
• Причинно-следственный подход – подход связан с исследованием памяти человека. С точки зрения теста Сонди, причина всего что происходит с человеком кроется на заднем плане, а следствие — на переднем плане. Если мы хотим что-то поменять  в настоящем, то нужно идти вглубь — нужно менять то, что на заднем плане.
• Метод «Колеса судьбы» — это комплексное управление и комплексная диагностика, при этом методе мы выводим ответ на ту задачу, которая перед нами стоит (например, прогноз, профотбор и др.).
• Метод «Психошаблон» — это логика изменения всей жизни, позволяет проанализировать сферу взаимоотношения с людьми (как вы выбираете людей, строите отношения), расшифровать методика тренировки человека.
• «Математические методы исследования памяти» и другие.

Данные способы интерпретации были представлены академиком УАН Олегом Викторовичем Мальцевым в ходе семинара «17 методов интерпретации теста Сонди».

Следует отметить, что мы занимаемся тестом Сонди и делаем диагностику, для того чтобы разобраться в том, как обстоят дела у человека и что с этим можно сделать. При психодиагностике необходимо понимать, что мы будем делать, поэтому и существует не одна интерпретация. Всегда необходимо исходить из задачи, что мы хотим выяснить: направление, перспективу, психологическое состояние, скорость развития потенциала. То есть, в зависимости от того на какие вопросы необходимо ответить, соответственно, ту интерпретацию и следует использовать.

Тест Сонди позволяет видеть человека без прикрас, и то, что мы видим – это его индивидуальность. Здесь мы видим все препятствия, барьеры, конфликты, все то, что ему мешает.

Разработанные Олегом Викторовичем способы интерпретации позволяют работать с кадрами, принимать решения относительно людей и ситуаций. Логика, выведенная на базе теста Сонди, позволяет человеку не ошибаться. При помощи теста можно проанализировать рынок, найти свободную зону и многое другое. И для этого нужно очень мало времени. Эти методы несут в себе терапевтическую и реализационную функцию, классическая же интерпретация не дает такого потенциала.

---

Данная статья основана на результатах исследований академика УАН Олега Викторовича Мальцева

Тест Сонди — проективный личностный тест c методом портретных выборов, разработанный психиатром и психоаналитиком Леопольдом Сонди в 1947 году, целью которого я

Пользователи также искали:

как обмануть тест сонди, тест сонди это, тест сонди отзывы, тест сонди современный, тест сонди стимульный материал, Сонди, Тест, тест, сонди, Тест Сонди, тест сонди это, как обмануть тест сонди, тест сонди отзывы, тест сонди чьи портреты, тест сонди современный, расшифровка, обмануть, отзывы, портреты, стимульный, материал, вариант, современный, упрощенный, тест сонди расшифровка, тест сонди стимульный материал, тест сонди упрощенный вариант, тест сонди, психологические тесты. тест сонди,

Тест Сонди. Методика восьми влечений. Метод портретных выборов (МПВ), модификация Собчик. Опросник

Описание: Методика восьми влечений или Метод портретных выборов (МПВ, модификация Собчик) это проективный личностный тест, разработанный психоаналитиком и психологом Леопольдом Сонди (Зонди) в середине XX столетия. Тест Сонди также называют судьбоанализом и неспроста: он дает ответ на многие вопросы, в том числе объясняет выбор человека в любви, дружбе, профессии, на работе, и указывает на предрасположенность к определенным заболеваниям.

Тест Сонди делает упор на то, что шило в мешке не утаишь, и генетически заложенное в человеке будет проявляться так или иначе. Причем, нет ни хороших, ни плохих задатков, это две стороны одной медали, вопрос в том, примем ли мы свою истинную сущность и примем как совершенство, проявим себя по полной, сознательно будем делать выбор и извлечем максимум из того, что нам дано природой. Или же по тем или иным причинам сочтем постыдным, неприемлимым и, все равно, будем идти в том же направлении, но уже по темной полосе жизни?..

Судьбоанализ стал связующим звеном между психоанализом Фрейда, где основное внимание уделено индивидуальному бессознательному, и аналитической психологией Юнга, в которой основной акцент сделан на коллективном бессознательном, Леопольд Сонди свой научный интерес направил на исследование феноменов, так называемого семейного или родового бессознательного, основной особенностью которого является проявление его в выборах личности, оставляющих отчетливый след на его жизненном пути. Влечение, одно из основных понятий судьбоанализа, говорит о том, каким образом генетическая информация, определяющая инстинктивную природу человека, проявляет себя в сфере психического. В этом смысле судьбоанализ – это связующее звено между генетикой и психологией. И метод восьми влечений является эффективным средством для применения его в профориентационном консультировании.

Тест предназначен для работы с детьми старше 10 лет и взрослыми. Так как структура влечений, лежащая в основе методики портретных выборов универсальна, тест Сонди может использоваться для людей любой национальности и социально-региональной принадлежности. Время тестирования – 15-20 мин.

Тест Сонди (Методика 8 влечений./ Метод портретных выборов (МПВ), модификация Собчик. / Опросник — судьбоанализ):

Инструкция к тесту Сонди.

Вам будут предлагаться портреты, 6 серий (комплектов) по 8 портретов в каждой. Вглядитесь в них внимательно. Сперва отберите тот, который Вы хотя бы относительно предпочитаете перед остальными (наиболее симпатичный), а затем другой, тоже предпочитаемый, но чуть меньше первого. Если даже это трудно сделать и не нравится ни один из них, то выберите тот, что меньше всех не нравится, а затем – следующий за ним.

Затем Вам необходимо будет выбрать самый несимпатичный портрет (наиболее неприятный), а затем самый несимпатичный портрет из оставшихся. Так необходимо будет повторить шесть раз с каждым из комплектов фотографий. Фотографии в серии обозначаются (нумеруются, маркируются, называются) слева на право, сверху вниз.

Метод глубинного анализа личности: тест Липота Сонди

В статье комплексно рассматривается  история создания проективного теста Сонди, описывается его структура и содержание. Также представлена классификация методов проведения тестирования, верифицируются принципы, лежащие в основе теста. В части практической апробации предоставляется вариативная оценка качества получаемых результатов тестирования.Тестирование как научное явление сегодня многопрофильно и всесторонне интегрировано, поскольку охватывает, практически все сферы жизни и деятельности человека. Подход тестирования на основании проективных методик в принципе позволяет получить достоверную информацию об испытуемом согласно поставленным задачам: например, оценить его потенциал,  психологическое состояние, профессиональные склонности, личные качества, интеллектуальные способности. Подобного рода качественная оценка личности представляет интерес для многих специалистов: психологов, специалистов профориентации, работников кадровой службы, директоров, владельцев бизнеса, а также для самого человека, как минимум, в целях его самореализации.

«Метод портретных выборов» или «тест Сонди» является универсальным инструментом, поскольку не имеет плоскостной ориентации. Более того, он позволяет по факту интерпретации получить многогранную оценку личности. Метод портретных выборов является научным достижением, плодом  многолетних трудов Липота Сонди, валидизированным В Европе и подтверждённым ранее богатой международной экспериментальной базой исследований из различных точек мира (От регионов Экваториальной Африки – до Новой Зеландии, Японии и Канады).

Первые шаги по созданию теста Липотом Сонди были предприняты еще во время его работы в лаборатории под руководством Поля Раншбурга в 1925 году, поскольку именно он познакомил Сонди с научной методикой психологических исследований.

Первая попытка тестирования была предпринята Липотом Сонди совершенно случайно. Описывается случай, когда он пришел в гости к своим друзьям, у которых было двое детей близнецов. Именно они стали первыми испытуемыми Липота Сонди. Суть тестирования заключалось в том, что Сонди предлагал близнецам фотографии, а они должны были дать ответ: «понравилась фотография или нет». Этот эксперимент он проделал несколько раз и каждый раз дети демонстрировали одни и те же результаты: одни фотографии им нравились, а другие были неприятны. Впоследствии эти же эксперименты Липот Сонди начал проводить и со своими пациентами. Для чистоты эксперимента набор фотографий пополнялся новыми лицами людей.

В результате проведенных экспериментов Сонди начал замечать определённые закономерности: люди с одинаковыми диагнозами выбирали одинаковые фотографии, как «понравившиеся» (симпатичные) либо, как неприятные. Изначально набор фотографий для проведения экспериментов состоял из фотографий сводных и родных братьев и сестер самого Липота Сонди, про которых было доподлинно известно, какие они выбирали профессии, какими болезнями болели, какой был их выбор супруга или супруги. В дополнение к этим фотографиям Сонди просил коллег, чтобы они высылали фотографии своих пациентов, при условии, что была известна полная история их заболевания. В результате из нескольких тысяч фотографий было выбрано 48 фотографий, которые и легли в основу создания теста Сонди. В 1937 году тест был готов том виде, в котором мы видим его сегодня.

Безусловно, в 21 веке тестирование осуществляется в компьютерном варианте, но изначально тест проводился вручную, именно этот способ Липот Содни отмечал, как наиболее эффективный, поскольку при нем аналитик получает более качественные и полные ассоциации испытуемого. Стимульный материал теста в изначальном варианте находился в коробке с шестью разделениями, в каждом находилось по восемь фотографий людей, отражающие одно из восьми заболеваний, в результате каждое заболевание было представлено шестью фотографиями. Процедура тестирования заключается в следующем: изначально испытуемый выбирает 12 фотографий, как понравившиеся и 12 фотографий, которые ему неприятны. Результаты первой части тестирования отражают профиль переднего плана (ППП). По результатам второй части тестирования, которая проводиться точно таким же способом, формируется профиль заднего плана (ЗПП).

Результаты теста позволяют выявить следующие аспекты личности:

   1.Наследственные заболевания.

   2. Раскрывает наследственные функции побуждений «Я», которые являются опасными.

   3.Позволяет определить 17 возможных вариантов судьбы индивида, 12 из которых носят опасный характер, а 5 – являются формами защиты.

   4.Определение соотношения опасных форм судьбы и защит, позволяет составить схему терапии.

Структура теста Сонди состоит из четырех влечений – «векторы влечений», вектор означает ограниченную линию, то есть направление:

S-вектор: сексуальное влечение.

Р-вектор: влечение к пароксизмам, к неожиданности, внезапности и сюрпризам ( как можно сильнее поразить другого)

Sch-вектор: Я-влечения

С-вектор: влечения к контактам.

Согласно концепции судьбоанализа два крайних вектора: S-вектор и С-вектор – считаются векторами, отражающими животную сущность индивида, а внутренние векторы: Р-вектор и Sch-вектор – отражают человеческую сущность.

В свою очередь каждый вектор включает в себя две потребности – «факторы влечений», которые соответствуют восьми заболеваниям:

Сексуальные заболевания	гермафродитизм и гомосексуальность	h
	садизм	s
Пароксизмальные заболевания	эпилепсия	е
	истерия	hy
Шизоформные заболевания	кататоническая шизофрения	к
	параноидная шизофрения	р
Циркулярные заболевания	депрессивное состояние	d
	маниакальное состояние	m

Психологическое состояние человека условно можно было выразить тремя стадиями: норма, промежуточное состояние до заболевания и состояние болезни. Понятие нормы в современной психиатрии и психологии имеет весьма расплывчатые границы, поскольку отсутствуют единые критерии.  Исходя из результатов теста Сонди можно определить не только крайнюю точку, то есть, когда человек заболел, но и расстояние до заболевания, то сеть спрогнозировать вероятностное время, через которое человек придет к тому или иному заболеванию. Результаты теста также отражают предрасположенность человека к заболеванию, исходя из его наследственности. 

Восемь факторов теста Сонди включает в себя 16 тенденций влечений:

Фактор	Значение «+»	Значение « – »
h	любовь к человечеству	любовь к конкретному человеку
s	активность	пассивность
е	притязания Авеля	притязания Каина
hy	стыдливость	тщеславие
к	аутизм	отрицание
р	инфляция	проекция
d	поиск	постоянство
m	привязанность	одиночество

В основу теста Сонди заложена система побуждений, которая в своей структуре содержит четыре вида диалектики:

1. Диалектика тенденций между двумя полярно противоположными побудительными тенденциями в каждой побудительной потребности (активность – пассивность).
2. Диалектика факторов, составляющих каждое из побуждений.
3. Диалектика побуждений: между побуждениями края (сексуальное побуждение и побуждение к контактам) и побуждениями середины (пароксизмальное побуждение и «Я») .
4.  Диалектика результатов переднего плана и заднего плана. (2)

Результаты тестирования в конечном варианте выражаются в четырех математических показателях, которые отражают степень удовлетворенности и актуальность отдельного побуждения в жизни индивида:

(0)– нулевая реакция. Нулевая реакция указывает на то, что потребность была удовлетворено в какой-либо форме.

(+)– положительная реакция. Положительная реакция свидетельствует о накоплении напряженности, то есть актуальности для индивида в настоящий момент времени данного вида потребности.

(-)– отрицательная реакция. Отрицательная реакция свидетельствует об удовлетворении потребности в настоящий момент времени.

(+-)– амбивалентная реакция. Амбивалентная реакция чаще всего свидетельствует о предварительной фазе разрядки.

Исходя из представленной выше информации известно, что каждый вектор состоит из двух факторов влечений с четырьмя возможными реакциями (+,-, 0, +-), то есть 2 (побуждения) *4 (реакции)= 16 возможных векторных картин, а поскольку у нас четыре вектора, то 4 *16, в результате структура теста позволяет выявить 64 различные картины влечений.

Судьбоанализ содержит описание всех 64-х векторных картин, исходя из этого можно было бы предположить, что интерпретация теста Сонди не вызовет затруднений, но, с другой стороны, Липот Сонди пишет:

 «Желающему работать нашим диагностическим методом, вначале необходимо без остатка принять в себя («инкарнировать») сущность и психологию факторов и векторов влечений, а также 64 возможные векторные картины, чтобы уже потом — в качестве второй задачи — научиться выявлять персональный план в судьбе влечений и сферы Я у конкретного человека». (3)

Тест Сонди является одним из самых эффективных психодиагностических инструментов, поскольку относится к проективным методикам, основанных на  комплексном подходе оценке личности, позволяющий получить прогнозные показатели в динамике развития. Однако, именно данный проективный тест требует особой, иногда достаточно длительной, экспертной подготовки в области интерпретирования. Сферы использования, ввиду крайней эффективности и достоверности, имеют весьма широкий спектр: психологическое консультирование, психиатрии; метод портретных выборов применяется в судебно-психологической экспертизе,  профессиональном консультировании.

Список цитируемой литературы:

1. Burp-Meyer K. Leopold Szondi. Eine biographische Skizze. Zurich: Hans-Huber Verlag, 2000.
2. Bürgi-Meyer K. Erzahl dich selbst-Erkenn dich selbst. Der Szondi-Test. Sondiana. 1985.
3. Липот Сонди: Судьбоанализ – выбор любви, дружбы, профессии, болезни и смерти. Бен-но Швабе, Базель, 1944, 1-е издание.
4. Смирнов А.В. Липот Сонди: биографический очерк, в книге: Липот Сонди, Судьбоанализ, М., «Три квадрата», 2007 г.
5. Липот Сонди. Учебник экспериментальной диагностике влечений. Перевод с немецкого В.И. Николаева. Когито-Центр, 2005.

Тест восьми влечений сонди и его модификация — метод портретных выборов мпв

_{СОБЧИК Л. Н.}

МЕТОД ПОРТРЕТНЫХ ВЫБОРОВ — АДАПТИРОВАННЫЙ ТЕСТ СОНДИ

Практическое руководство

РЕЧЬ

Санкт-Петербург

Методика разработана венским психологом Л. Сонди¹ (в других пе­реводах — Зонди, Шонди или Сцонди) в 30-е годы XX столетия. Лео­польд Сонди в процессе своей многолетней практической работы в кли­нике обнаружил определенную закономерность, которой подчиняется из­бирательность человека в общении с окружающими: как оказалось, па­циенты клиники более тесно общаются и создают устойчивые формы отношений (дружба, любовь, женитьба) с лицами, которые страдают ана­логичными формами психических отклонений. Неосознанное влечение к подобным себе лицам несомненно уходит корнями в генетическую пре-диспозицию. На этом и основана концепция судьбоанализа Сонди, со­гласно которой у каждого конкретного человека в течение жизни на по­чве унаследованных генотипических свойств проявляется обусловлен­ный ими выбор (генотропизм) в отношении тех лиц, которые близки его собственному личностному паттерну. В лаборатории эндокринологии и конституциональной патологии им был собран обширный эмпиричес­кий материал с использованием фотографических портретов лиц с серь­езными психологическими проблемами и разными психическими забо­леваниями. Данные клинико-генетического исследования легли в осно­ву теста восьми влечений, интерпретация которого в виде судьбоанали­за базируется на теории бессознательного и психоанализе Зигмунда Фрей­да. Уже много лет тест Сонди используется психиатрами и психологами как проективный личностный тест. Внимание автора данной книги ме­тодика привлекла тем, что Сонди выводит психологические особеннос­ти человека из конституционально-генетического базиса, а также уста­навливает связи между врожденными личностными свойствами и выбором профессиональной деятельности. Это сближает подход Сонди с индивидуально-типологическим подходом автора. Кроме того, посредством этой методики можно выделить 8 факторов, которые при ближайшем рассмотрении оказываются значимо связанными с ведущими тенденци­ями и индивидуально-личностными типами, подробно описанными в пре­дыдущих работах автора². В то же время длительный опыт изучения теста Сонди и научный анализ полученных данных позволили прийти к опре­деленным выводам, в которых, с одной стороны, подтверждается гени­альная прозорливость создателя методики, с другой — обсуждаются и подвергаются критике некоторые его заблуждения.

Процедура исследования состоит в том, что обследуемому лицу предлагается выбрать наиболее и наименее симпатичные портреты разных мужчин и женщин. Каждый портрет по своей физиогномической и психологической сущности отражает в наиболее заостренном виде проявление одного из основных восьми базисных человеческих влечений. Сонди полагает, что типологически разные личностные структуры могут быть представлены различными сочетаниями этих восьми влечений. Каждое из них в зависимости от формализованных показателей выявляет ту или иную патологию или проблему обследуемой личности. Наиболее выраженную силу и психодиагностическое значение имеют портреты, которые соответствуют наиболее значимым потребностям инди­вида, и генетически обусловленным склонностям Портреты распределены на 6 серий по 8 портретов в каждой. Сама идея использовать заостренные патологическим процессом личност­ные свойства не только для дифференциально-диагностических целей, но и для изучения личности — лежит в основе многих психодиагности­ческих методик, высвечивающих умеренными количественными пока­зателями черты характера и свойства личности, которые при высоких показателях интерпретируются как отклонение от нормы. Такую парал­лель проводил еще в начале XX века Кречмер. Этот подход достаточно долго критиковался, однако на практике проблема преморбида и стигма-тизированности всегда была в центре внимания психиатров, а в послед­ние десятилетия стала весьма актуальной для психологов, педагогов и других специалистов, занимающихся индивидуализацией учебного про­цесса, семейным консультированием, профориентацией и расстановкой кадров.

Правомерность такого подхода в свое время подчеркивалась и извест­ным отечественным психологом Б. В. Зейгарник. Она видела широкие воз­можности для изучения личности на примере патологически заостренных черт психически больных людей, рассматривая их как огрубленную модель менее явных, смятенных свойств личностной нормы.

В основе интерпретационного подхода Сонди лежат идеи 3. Фрейда, представлявшего личность в виде сложного взаимосвязанного конструкта, в котором «Я» человека (Ego) формируется, с одной стороны, под воздей­ствием «Оно» (Id), то есть под мощным влиянием инстинктов, неосознава­емых влечений и потребностей, а с другой стороны, под воздействием тре­бований социума, накладывающего запреты, табу на свободное удовлетво­рение эгоистических потребностей. Если социокультурные нормы поведе­ния интериоризируются (усваиваются) человеком, то поведение, которое диктуется бессознательными инстинктами, оттормаживается, берется под контроль его собственным «сверх-Я» (Super-Ego). Выраженный внутрен­ний конфликт между истинными потребностями и интериоризировапными социальными установками индивида (фрустрация) приводит к нервно-пси­хическим нарушениям, которые могут проявляться различным образом: депрессией, нарушениями сна, страхами, физиологическими проявления­ми, неправильным поведением, алкоголизмом, наркоманией, суицидальны­ми тенденциями, вспышками агрессии и т. д. Поскольку одной из ведущих потребностей является потребность в реализации сексуального влечения, то во главу угла многих проблем невротического круга Фрейд ставил фрустрированность сексуальной потребности, иногда в виде зафиксированных в подсознании ранних сексуально-эротических переживаний.

Среди отечественных психологов, проявивших интерес к тесту Сонди и внесших вклад в его освоение, были В. Джое, В. Тютгонник, А. Волкова, Л. Бурлачук, В. Лабунская, С. Морозов, С. Петров, М. Вигдорчик, М. Жда­нова, Д. Лубовский и др. Однако, раскрывая суть методики, многие авторы настолько подпадали под обаяние Сонди, что их трактовка не только полно­стью повторяла удачные аспекты методики, но и оставляла без внимания те ее стороны, которые на практике оказались ошибочными или несозвучными современному уровню развития науки. Как показывает опыт, без опре­деленной коррекции невозможно использовать разработки, относящиеся к началу XX века, если мы уже находимся в XXI веке.

Свою типологию личностных свойств Сонди строит на аналогиях с ми­фологическими образами, которые не всегда близки пониманию отечествен­ных психологов. Кроме того, его основной постулат вытекает из убежденности в том, что доброе или злое начало в человеке является врожденным каче­ством, в то время как опыт показывает, что поступки человека могут оцени­ваться как добрые или злые лишь с позиций морали конкретного социума, то есть в значительной мере прививаются реальным окружением человека в ходе его жизни. Когда говорят, что работа с пациентом с помощью теста Сонди позволяет приблизить его к Богу, то это можно понимать по-разному. В сущности, человек состоит из двух половинок, одна из которых сближает его с животным миром («полуживотное»), другая — с высоконравственной сущ­ностью высшего ранга («полубог»). Примирить человека с реальной действительностью, снять напряженность с той потребностной сферы, которая избы­точно выражена и при этом нереализуема,—— в этом и состоит работа психотерапевта. С этой точки зрения сентенция Сонди более понятна. Однако, рас­суждая на эту тему отвлеченно, Сонди уводит нас в дебри философии, в то время как он гораздо более реалистичен, когда речь идет о конкретном иссле­довании и толковании соотношений между разновыраженными факторами. В целом его интерпретация базируется на признании необходимости равно­ мерного (сбалансированного) распределения «бытийной мощи», то есть уравновешенности разных, в том числе противоречиво направленных, факторов, определяющих индивидуально-личностные свойства. Здесь наши точки зре­ния полностью совпадают. В то же время в те толкования данных, которые на практике не подтвердились, нами внесена определенная коррекция. Критическому анализу подверглись и другие аспекты методики, связанные с избы­ точным расширением возможностей методики по сравнению с ее реальной эффективностью. В частности, это касается теоретически комплементарного заднепланового векторного профиля и описания классов влечений, о чем го­ ворится в соответствующих разделах.

Те специалисты (психологи, врачи, педагоги), которым довелось познакомиться с тестом Сонди, безусловно обратили внимание на своеобразие тезау­руса автора методики и сложность сопоставления полученных с ее помощью данных с результатами других исследований. В значительной степени это свя­зано с чисто психоаналитической базой интерпретационного подхода автора, а также с определенным анахронизмом в понимании психоанализа, который за последние полвека получил свое дальнейшее развитие. В то же время некото­рые трудности в понимании того, что хотел сказать своим читателям автор, специалисты испытывают из-за того, что многие переводы работ Сонди грешат неточностью. Здесь лишний раз подтверждается ставшее уже расхожим мнение о том, что при переводе опыт и знания специалиста в его профессио­нальной сфере не менее важны, чем знание иностранного языка.

Все эти трудности привели к необходимости модификации как самой процедуры обследования, так и толкования результатов. В первую очередь, несмотря на стремление максимально сохранить специфику стиля Сонди, временами приходилось прибегать к более понятной современному пси­хологу терминологии. Что касается интерпретации, то в модифицирован­ном варианте она базируется на сопоставлении восьми факторов с восьмью индивидуально-типологическим свойствами на базе упомянутой выше те­ории ведущих тенденций, которая рассматривает личность как образова­ние, уходящее корнями в генетически заданную предиспозицию. Веду­щие тенденции — это те устойчивые судьбореализующие факторы, кото­рые пронизывают все уровни личности и во многом предопределяют стиль жизни, выбор профессиональной деятельности, сферы социальной актив­ности, а также существенно влияют на формирование индивидуальной иерархии ценностей.

В модифицированном варианте¹ все портреты были выполнены заново известным и весьма талантливым художником Б. И. Энским, много десятков лет работавшим иллюстратором в самых популярных советс­ких журналах и газетах. При этом особая роль отводилась сохранению их психологической сущности и сходству с оригиналом. Затем валидность теста была проверена в эксперименте на репрезентативных груп­пах нормы (765 человека) и на контингенте больных с пограничными психическими расстройствами (282 человека). В ходе дальнейшею ис­пользования данной методики численность обеих выборок многократно увеличилась.

Тест в сущности не является таким количественным методом, в кото­ром рестандартизация могла бы уточнить популяционные нормативы. Сам Сонди на основании экспериментальных данных утверждает, что этничес­кие и культурно-социальные аспекты не влияют на результаты тестирова­ния, так как структура влечений, лежащая в основе перцепции материала методики, универсальна для людей любой национальности и социально-региональной принадлежности. Поэтому адаптация теста сводилась в ос­новном к подтверждению и уточнению реальной феноменологической сущ­ности факторов теста путем сопоставления полученных данных с результа­тами других психодиагностических тестов и данными объективного (в том числе клинического) наблюдения.

Список методик

Соглашение о предоставлении согласия на обработку персональных данных

Данным документом я предоставляю Физическому лицу — предпринимателю Тихомировой Татьяне Анатольевне, Выписка из ЕГРПОУ и ФЛП №281582 серии АБ, (далее – Владелец базы персональных данных) свое согласие на обработку (сбор, накопление, систематизацию, хранение, уточнение, использование, распространение, обезличивание, блокирование, уничтожение) моих персональных данных. Персональные данные я предоставлю Владельцу базы персональных данных лично, либо путем заполнения регистрационной формы, либо путем ответов на вопросы, размещенные на сайте Владельца базы персональных данных (адрес: www.consul-navigator.com ), либо любым иным способом, не запрещенным действующим законодательством. Такие данные включают, но не ограничиваются, указанием Ф.И.О., даты рождения, пола, данных о месте работы и т.п.Я предоставляю свое согласие на обработку персональных данных без ограничения их объема и содержания, а также сроков их обработки.

Обработка персональных данных в базе персональных данных Владельца базы персональных данных «Клиенты» осуществляется любым способом в соответствии с Законом Украины «О защите персональных данных».

Целью обработки персональных данных Клиентов является обеспечение реализации отношений в сфере экономических и информационных услуг.

Владелец базы персональных данных без моего согласия и без направления мне уведомления, в рамках Закона Украины «О защите персональных данных»,вправе передавать мои персональные данные третьим лицам для их обработки в соответствии с указанной целью обработки для реализации договорных отношений с третьими лицами, привлеченными для содействия Владельцу базы персональных данных в организации предоставляемых ею услуг.

Я также подтверждаю, что данным документом я уведомлен о внесении моих персональных данных в базу персональных данных «Клиенты», владельце базы персональных данных; составе и содержании персональных данных, которые собираются с целью их обработки; о своих правах, связанных с хранением и обработкой моих персональных данных в соответствии с Законом Украины «О защите персональных данных»; о лицах, которым передаются персональные данные; о цели сбора моих персональных данных.

Данное согласие на обработку персональных данных является безусловным, безотзывным и с неограниченным сроком действия.

Кексы со сметаной, укропом и чеддером

Создание «обычного» рецепта с использованием заменителей без глютена может быть очень подробной наукой. Вы должны подумать о корректировке соотношений, добавлении дополнительных ингредиентов, свойствах каждого безглютенового заменителя и о том, как это повлияет на готовый продукт. Я просто заменяю обычные рецепты мукой без глютена или безмолочными альтернативами в соотношении 1: 1 и надеюсь на лучшее. Возможно, это не лучший метод, но в большинстве случаев он работает.

Когда я закончил замесить тесто для этих кексов, я забеспокоился, что они могут оказаться в мусоре. Это был густой мутный месиво даже для безглютенового теста, которое, как правило, более липкое, чем с глютеном. Я боялся, что моя удача на замену закончилась.

Я почувствовал облегчение после того, как первый раз откусил и обнаружил, что они восхитительны! Я обычно предпочитаю сладкие кексы соленым, но они были очень мягкими и вкусными, в то время как укроп (которого у меня было много после приготовления картофельного салата с травами) был сдержанным и прекрасным.Думаю, это моя новая любимая трава — последнее время я добавляю ее ко всему! Они также очень хорошо разморозились — на вкус свежеиспеченные из морозильной камеры.

Были ли у вас проблемы с заменителем глютена? И как вы их устраняли?

Кексы со сметаной, укропом и чеддером
Адаптировано из Seasaltwithfood

1 стакан коричневой рисовой муки
1 стакан муки гарфава
¼ стакана муки тапиоки
2 ½ чайных ложки разрыхлителя
1 чайная ложка пищевой соды
1 ¼ чайной ложки соли
1 чайная ложка ксантановой камеди
½ стакана свежего укропа
заменитель яиц, эквивалентный двум яйцам
4 столовые ложки растопленного веганского маргарина
1 ¼ стакана веганской сметаны
½ стакана соевого молока
½ стакана веганского сыра дайя (по желанию)

Метод

Разогрейте духовку до 350 градусов по Фаренгейту.Смешайте муку, разрыхлитель, пищевую соду, соль ксантановой камеди в большой миске и аккуратно перемешайте.

В другой миске смешайте нарезанный укроп, заменитель яиц, растопленный маргарин, сметану и молоко и взбивайте, пока смесь хорошо не смешается.

Затем вылейте влажную смесь в мучную смесь и аккуратно перемешайте, чтобы получилось мягкое тесто. Добавьте веганский сыр, если используете.

Равномерно разделите тесто между чашками для кексов. Выпекайте примерно 20-25 минут или до тех пор, пока верхушки не вернутся назад, если их осторожно коснуться в центре.

Выньте противень из духовки и поставьте на решетку для охлаждения. Этих кексов хватит на неделю, если их хорошо завернуть и хранить в герметичном контейнере, а затем поставить в холодильник, как только они остынут.

Журналы, авторы, подписчики, издатели, оповещение

		Наши журналы
		Как крупный международный издатель академических и исследовательских журналов Science Alert издает и разрабатывает названия в партнерстве с самыми престижные научные общества и издатели.Наша цель заключается в том, чтобы максимально широко использовать качественные исследования. аудитория.
		Авторам
		Мы прилагаем все усилия, чтобы поддержать исследователей которые публикуют в наших журналах. Есть масса информации здесь, чтобы помочь вам публиковаться вместе с нами, а также ценные услуги для авторов, которые уже публиковались у нас.
		Подписчикам
		2021 цены уже доступны. Ты может получить личную / институциональную подписку перечисленных журналы прямо из Science Alert. В качестве альтернативы вы возможно, пожелает связаться с выбранным вами агентством по подписке. Направляйте заказы, платежи и запросы в службу поддержки. в службу поддержки клиентов журнала Science Alert.
		Для обществ
		Science Alert гордится своей тесные и прозрачные отношения с обществом. В виде некоммерческий издатель, мы стремимся к самым широким возможное распространение публикуемых нами материалов и на предоставление услуг высочайшего качества нашим издательские партнеры.
		Справочный центр
		Здесь вы найдете ответы на наиболее часто задаваемые вопросы (FAQ), которые мы получили по электронной почте или через контактную форму в Интернете. В зависимости от характера вопросов мы разделили часто задаваемые вопросы на разные категории.
		База данных ASCI
		Азиатский индекс научного цитирования (ASCI) стремится предоставить авторитетный, надежный и значимая информация по освещению наиболее важных и влиятельные журналы для удовлетворения потребностей мировых научное сообщество.База данных ASCI также предоставляет ссылку к полнотекстовым статьям до более чем 25000 записей с ссылка на цитированные ссылки.

ЯМР 19F-исследование лейцин-специфического связывающего белка Escherichia coli: мутагенез и отнесение остатков, меченных 5-фтортриптофаном | Белковая инженерия, дизайн и отбор

Аннотация

Рецептор l-лейцина Escherichia coli представляет собой водный белок и первый компонент в отдельном пути переноса гидрофобных аминокислот.Связывание L-лейцина вызывает конформационное изменение, которое позволяет рецептору стыковаться с компонентами мембраны. Чтобы исследовать индуцированные лигандом конформационные изменения и связывающие свойства этого белка, мы использовали ЯМР ¹⁹ F для исследования четырех остатков триптофана, расположенных в двух долях белка. Четыре остатка триптофана были помечены 5-фтортриптофаном и назначены сайт-направленным мутагенезом. Спектры ЯМР ¹⁹ F частично свободных от лигандов белков показывают расширенные пики, которые становятся более резкими при связывании l-лейцина, показывая, что меченый белок дикого типа и мутанты являются функциональными.Титрование 1-фенилаланина в белок дикого типа, меченный 5-фтортриптофаном, показывает наличие закрытых и открытых конформеров. Исследования денатурации, вызванной мочевиной, подтверждают результаты ЯМР, согласно которым белок дикого типа связывает l-фенилаланин по-другому с l-лейцином. Наши исследования показали, что мутации триптофана и фенилаланина в структурных единицах, связанных со связывающим карманом, вызывают тонкие изменения в окружении Trp18, расположенного непосредственно в связывающей щели.

Введение

Периплазматические рецепторы Escherichia coli — идеальные белки, которыми можно манипулировать с целью изучения способа связывания гидрофобных лигандов, представляющих интерес в фармацевтической промышленности и области медицины.Особенно интересны два периплазматических компонента транспортной системы аминокислот с разветвленной цепью в E.coli , а именно лейцин-изолейцин-валин-связывающий белок (LIV) и лейцин-специфический связывающий белок (LS). Эти водорастворимые рецепторы локализуются в периплазматическом пространстве и перемещают небольшие молекулы в цитоплазму бактерий. Метод транспортировки основан на распознавании связывающего белка с мембраносвязанными компонентами. Изменение третичной структуры от открытой к закрытой форме жизненно важно для этого взаимодействия (Luck and Falke, 1991a; Shilton et al ., 1996). Механизм закрытия расщелины — тема всей природы. Таким образом, LIV использовался в качестве модели для многочисленных исследований требовательных человеческих белков, таких как N-концевой домен метаботропных рецепторов глутамата группы I и рецептор N -метил-d-аспартата (Bessis et al ., 2000; Паолетти и др. ., 2000; Линч и Гуттманн, 2001).

LIV и LS примерно на 80% идентичны по содержанию аминокислот и имеют практически одинаковую трехмерную структуру в нелигандированной форме (Sack et al ., 1989b). Однако два периплазматических рецептора имеют разные специфичности в отношении лигандов, а диапазон лигандов для LS намного шире, чем первоначально наблюдалось при первоначальных исследованиях белков (Landick and Oxender, 1985; Adams et al ., 1991). LS связывает лейцин и фенилаланин, а также фторированные аналоги обеих этих аминокислот (Rahmanian et al ., 1973; Adams et al ., 1991; Luck and Johnson, 2000). LIV распознает лейцин, изолейцин и валин и, в меньшей степени, треонин, серин и аланин, но на сегодняшний день не было показано, что LIV связывает какие-либо фторированные аналоги аминокислот.LS был исследован методом рентгеновской кристаллографии, но только в открытом виде без лиганда. LIV также был исследован как не связанный с лигандом белок вместе с лигандированной «открытой» формой, где лейцин связан только с N-концевой долей белка (Sack et al ., 1989a). Не опубликовано ни одной закрытой структуры, и механизм связывания лиганда неизвестен.

Эти периплазматические рецепторы предлагают уникальную возможность исследовать тонкие различия в субстратной специфичности в лиганд-связывающем кармане.Кроме того, у нас есть уникальная возможность изучить конструкцию специфического связывающего кармана для размещения интересующего лиганда. Поскольку LS связывает фторированные субстраты, мы можем расширить диапазон связывания в щели, чтобы включить фторированные вещества, такие как те, которые используются в биологической войне. Таким образом, наш периплазматический связывающий белок может быть использован в качестве основы для создания биомолекулярных поглотителей этих агентов.

В свете этого мы собираем биофизическую информацию об этих белках.Одним из наших методов изучения динамики этих важных белков является ¹⁹ F ЯМР. ¹⁹ F ЯМР — это проверенный метод изучения структуры и динамики белков, поскольку ядро ​​фтора легко включается в определенные места внутри белков, где оно обеспечивает чувствительный зонд для получения структурной информации с низким разрешением (Luck and Falke, 1991a, b) . Для белков, слишком больших или нестабильных для полного определения структуры ЯМР, ¹⁹ F ЯМР дает ценную информацию о конформационных изменениях, поскольку ядро ​​способно обнаруживать изменения в локальной конформационной среде, включая взаимодействия ван-дер-ваальсова упаковки и локальные электростатические поля.Биосинтетическое включение фтора в остатки триптофана в рецепторных белках показало, что фтор мало влияет на структуру и функцию белка (Danielson and Falke, 1996). Каждый из четырех остатков Trp в LS находится в интересной области структуры (рис. 1): один в связывающей щели, которая может взаимодействовать непосредственно с лигандом, один рядом с шарниром, соединяющим два домена, один скрыт в N- терминальный домен и единственный Trp, расположенный в C-домене. С помощью этих зондов можно исследовать как события связывания в щели, так и глобальные конформационные изменения в этом белке.В этой работе мы получили сайт-специфические мутанты по всем четырем остаткам Trp. Мы пометили LS дикого типа и четыре мутанта Trp to Phe 5-фтортриптофаном (5F-Trp) и приписали ¹⁹ F ЯМР-резонансов специфическим остаткам Trp, что позволило нам изучить динамику и связывание субстрата.

Материалы и методы

Получение мутантов

Плазмида pK Sty , содержащая livK , ген, кодирующий лейцин-специфический связывающий белок (LS) из E.coli , был получен из лаборатории Oxender, штат Мичиган (Oxender et al ., 1980; Adams et al ., 1991). Белок LS содержит четыре остатка Trp в положениях 18, 278, 320 и 336 (рисунок 1). Для создания мутантов с Trp, замененным на Phe в последовательности праймера, кодон триптофана TGG в положениях, упомянутых выше, был заменен кодоном фенилаланина TTC. Два праймера для каждого мутанта (таблица I) были синтезированы на заказ компанией Integrated DNA Technlogies (Coralville, IA).Сайт-направленный мутагенез проводили с помощью набора для мутагенеза Quick-Change (Stratagene, La Jolla, CA). Мутанты W18F и W336F подвергали скринингу путем переваривания рестриктазой Tsp RI, а мутанты W278F и W320F подвергали скринингу с использованием Dpn I и Taq I, соответственно. Кроме того, все мутанты были подтверждены секвенированием ДНК с использованием автоматического секвенатора ДНК Applied Biosystems 373S Model в Институте Трюдо (Саранак-Лейк, штат Нью-Йорк).

Производство белка

Плазмида pK Sty дикого типа и мутантные плазмиды трансформировали в штамм BL21 (DE3) E.coli. Клетки выращивали при 37 ° C до OD ₆₀₀ = 0,7 в среде LB с добавлением ампициллина (100 мг / мл). Клетки собирали, промывали 100 мл среды M9 и ресуспендировали в 1 л среды M9 с добавлением 2 мМ MgSO ₄ , 0,1 мМ CaCl ₂ , 0,04% глюкозы, 1% казаминокислоты, 0,1% тиамина, 1%. глицерин, 100 мг / мл ампициллина и 1 г 5F-Trp. Культуры инкубировали для истощения остаточного Trp в среде в течение 30 мин, затем добавляли изопропил-β-d-тиогалактозид (IPTG) до конечной концентрации 0.5 мМ. Клетки осаждали через 4 часа и белки выделяли с использованием стандартной осмотической процедуры. Белки LS дикого типа и мутанты дополнительно очищали ионообменной хроматографией на колонке DEAE-Sephacel с использованием градиента 0–0,25 М NaCl в 10 мМ Трис-буфере, pH 7,5. Очищенные белки диализовали в 10 мМ калий-фосфатном буфере, pH 6,9, с добавлением 0,02% NaN ₃ . Белки подвергали скринингу с помощью SDS-PAGE и визуализировали окрашиванием кумасси бриллиантовым синим.

Линейная комбинация спектров

Для определения эффективности включения 5F-Trp в LS дикого типа и мутантного LS мы использовали линейную комбинацию УФ-спектрального поглощения (LINCS) (Zemsky et al ., 1999; Senear et al ., 2002).

Измерения ЯМР

¹⁹ F Спектры ЯМР получали при 470 МГц на спектрометре Varian Model 500 с зондом 5 мм ¹⁹ F / ¹ H. Образцы, содержащие 0,3–0,7 мМ 5F-Trp-меченых белков в 10 мМ фосфатном буфере, pH 6,9, получали добавлением 10% (об. / Об.) D ₂ O в качестве фиксирующего растворителя в конечном диализном буфере. ¹⁹ F-резонанс отнесен к 3-фторфенилаланину при –38 пп.вечера. как внешний стандарт. Параметры измерения включали температуру 30 ° C, задержку релаксации 2 с, ширину развертки 9000 Гц и спектральную обработку с уширением линии 25 Гц.

Измерения флуоресценции

Экспериментальные растворы для определения связывания и экспериментов по конформационной стабильности готовили из концентрированных исходных растворов 20 мМ Трис, pH 7,1 и 10 М мочевины, каждый из которых содержал 0,5 мкМ белка. Для исследований с лигандами белки инкубировали с концентрацией 50 мМ, чтобы гарантировать насыщение белков.Перед регистрацией спектров флуоресценции растворы уравновешивали в течение 12 ч при комнатной температуре и температуре 25 ° C. Все измерения флуоресценции проводили при температуре окружающей среды с использованием люминесцентного спектрофотометра Perkin-Elmer (Norwalk, CT) LS 50B. Ширина полосы возбуждения и излучения была установлена ​​на 5 нм. Образцы облучали при 278 нм, а эмиссию контролировали от 300 до 390 нм. Интенсивность флуоресценции при 323 нм для всех образцов строили как функцию концентрации мочевины для создания разворачивающейся кривой.Мы нашли разворачивающиеся переходы программой Origin от MicroCal (Нортгемптон, Массачусетс). Подгонка нелинейной регрессии модели с двумя или тремя состояниями проводилась с использованием той же программы.

Результаты и обсуждение

Производство белка

Большинство лабораторий использовали штаммы ауксотрофов E.coli для производства белков, меченных 5F-Trp (Danielson and Falke, 1996). Мы биосинтетически включили фторную метку в белки LS, дикого типа и мутанты, путем экспрессии гена livK в E.coli , BL21 (DE3). Клеточная линия ауксотрофов триптофана W3110 не вырабатывала высоких уровней LS. Кроме того, мы наблюдали деградацию белка после индукции IPTG. Мы также наблюдали более низкую эффективность мечения в этой клеточной линии ауксотрофов.

Замена Trp на Phe в мутантных белках не влияла на экспрессию или очистку белка, и в результате выходы составляли 50–80 мг меченного 5F-Trp белка на литр. На основании исследований LINCS, уровни включения 5F-Trp в LS и мутантные белки составляли от 90 до 100% (таблица II).Эти результаты намного выше, чем результаты, наблюдаемые для других белков, экспрессируемых промотором Т7 (Ross et al ., 2000).

Эффект мечения фтором на общую структурную стабильность LS и мутантов был исследован с использованием собственной флуоресценции триптофана для мониторинга денатурации мочевины. Свободная энергия разворачивания как для немеченого, так и для меченного 5F-Trp LS дикого типа без лиганда дала ΔG ° _Uh3O = 38,0 ± 4 кДж / моль (Skeels, 2001). Результаты показывают, что включение фтора не нарушает общую структурную целостность белка.

¹⁹ Отнесения F ЯМР для остатков 5F-Trp в LS

Спектр меченного 5F-Trp дикого типа LS с лейцином в кармане связывания сравнивали с индивидуальными спектрами меченных 5F-Trp мутантов с одной заменой, также с лейцином в кармане связывания (рис. 2). Наблюдение за тем, какой пик в спектре дикого типа был устранен в спектре каждого мутанта, привело к однозначному отнесению резонансов 5F-Trp в спектре ЯМР ¹⁹ F.В спектре дикого типа можно четко идентифицировать все четыре резонанса 5F-Trp. Есть два хорошо разрешенных пика при –47,8 и –50,3 м.д. соответствующие 5F-Trp18 и 5F-Trp336 соответственно. Резонансы для 5F-Trp320 и 5F-Trp278 немного перекрываются, указывая на то, что они находятся в аналогичной химической среде. Малый резонанс при –49,6 м.д. в спектре дикого типа представляет собой небольшую фракцию развернутого или деградированного белка, которая имеет ту же частоту, что и наблюдаемая для подвергнутого воздействию растворителя 5F-Trp (Luck and Falk, 1991a).

Влияние мутаций Trp на Phe на

¹⁹ F ЯМР химические сдвиги

Спектры ЯМР ¹⁹ F мутантов аналогичны спектрам нативного рецептора, меченного 5F-Trp, за исключением того, что удален единственный резонанс, связанный с отсутствием Trp. Помимо удаленных резонансов, замена Trp в положении 278 вызвала небольшие структурные нарушения в положении 18 в связывающем кармане.

Как показано на рисунке 1, N-домен LS содержит Trp320, Trp278 и Trp18, которые также обнаруживаются в щели связывания.В C-домене находится единственный Trp336. В спектре ЯМР ¹⁹ F на фиг. 2 мы видим, что на резонанс, соответствующий 5F-Trp336, не влияет однократная замена других остатков Trp. Кроме того, на резонансы остатков 5F-Trp в положениях 320 и 278 не влияет мутация Trp336. Однако есть небольшие изменения в химическом сдвиге резонанса для 5F-Trp18 в мутанте W278F по сравнению с соответствующим резонансом в спектре дикого типа.Это изменение химического сдвига 5F-Trp18 в мутанте W278F без каких-либо других спектральных отличий от дикого типа предполагает, что мутации Trp в Phe на самом деле нарушают структуру белка в области связывающего кармана. Без замкнутой формы кристаллической структуры со связанным лейцином мы можем только предполагать, что это изменение положения резонанса происходит из-за сдвигов вторичных элементов в N-концевом домене. Trp278 скрыт внутри доменной структуры и разделяет структурные компоненты с остатками связывающего кармана.Уменьшение размера кольца триптофана до фенилаланина может хорошо влиять на локальные взаимодействия на Trp278, которые, в свою очередь, могут нарушать локальное окружение Trp18 в кармане связывания через общие элементы. Подобные возмущения резонансов 5F-Trp в мутантах от Trp до Phe наблюдаются в растворимом тканевом факторе (Zemsky et al ., 1999) и в белке, связывающем глюкозу и галактозу (Luck and Falke, 1991a).

Структурные эффекты связывания L-лейцина

Приведенное выше назначение позволяет использовать четыре резонанса 5F-Trp в качестве зондов структурных изменений в четырех известных положениях в нативном белке.Спектр белка 5F-Trp дикого типа после обширного диализа в фосфатном буфере показан на рисунке 3а. Даже несмотря на то, что белок подвергали ЯМР в течение 15 минут после удаления из диализа, присутствует остаточный лиганд. Есть восемь уширенных пиков для четырех меченых Trps в белке, что указывает на множественные конформеры в этом образце. На рисунке 3b показан тот же белок после добавления избытка L-лейцина. Стрелки на фиг. 3a указывают положения закрытого конформера с лигандами, а линии, проведенные на фиг. 3a-b, показывают структурные эффекты, наблюдаемые в положениях 5F-Trp при связывании l-лейцина.

Структурные эффекты, наблюдаемые при связывании l-лейцина с мутантами, дают аналогичную картину. По этим данным мы смогли идентифицировать частотные сдвиги для каждого из четырех меченых остатков Trp. На рис. 4 показаны три мутанта, LSW18F, LSW320F и LSW336F, с субстехиометрическими количествами лиганда (рис. 4a, c и e) и связанными с l-лейцином (рис. 4b, d и f). Когда к белку добавляется l-лейцин, спектры (рис. 4b, d и f) показывают значительное усиление резонансов. Это указывает на то, что лиганд связан и мутанты функциональны.Помимо доказательства функциональности мутантов, отсутствующие резонансы в спектрах мутантов с субстехиометрическими количествами лиганда позволяют приписать резонансы в спектре экстенсивно диализованного образца LS (рис. 3а) и идентифицировать химические сдвиги всех из них. 5Ф-Трпс.

Резонанс 5F-Trp18, расположенного в кармане связывания, показывает наибольшее изменение частоты при связывании с l-лейцином. Trp18 находится непосредственно в открытой щели связывающего кармана и, как предполагается, непосредственно взаимодействует с лигандом (Sack et al ., 1989b). Этот триптофан подвергается воздействию растворителя, но после связывания l-лейцина этот остаток будет захоронен в щели. Химический сдвиг Trp18 в нелигандированном состоянии при –49,6 м.д. такой же, как у свободного 5F-Trp в растворителе (Luck and Falke, 1991b). Химический сдвиг с –49,6 до –47,8 p.pm. как наблюдалось, когда l-лейцин связан, это указывало бы на то, что Trp18 переместился в совершенно другую химическую среду. Это изменение химического сдвига подразумевает закрытие щели и прямое структурное взаимодействие между 5F-Trp18 и l-лейцином.

Структурные эффекты l-фенилаланина на LS

Титрование l-фенилаланина в частично пустой LS, меченный 5F-Trp, показано на рисунке 5. С каждым добавлением лиганда резонансы в спектрах ЯМР ¹⁹ F становятся более резкими и приобретают вид спектров l -связанный с лейцином рецептор, показанный на рисунке 2, за исключением широкого пика при -49,6 ppm Этот резонанс имеет химический сдвиг 5F-Trp, подвергнутого воздействию растворителя, и является довольно широким при наличии насыщающих количеств лиганда.Можно было предположить, что белок обменивается между закрытой формой и открытой формой. Возможно, l-фенилаланин способен связываться с белком в щели, но не имеет контактов, чтобы удерживать белок в закрытой форме. Спектр указывает на область потока в белке около Trp18. Таким образом, мы видим химические сдвиги для трех из четырех Trps в закрытых положениях и обмена Trp18 между двумя положениями. Эти резонансы находятся в медленном обмене на шкале времени ЯМР. Добавление стехиометрического количества l-лейцина к образцу с помощью 1.025 мМ 1-фенилаланин дает спектр, идентичный спектру на фиг. 3b, который подтверждает, что 1-лейцин связывает рецептор 5F-Trp более легко, чем 1-фенилаланин.

Исследования в нашей лаборатории показали на основе данных флуоресценции, что l-фенилаланин связывается с немеченым LS (Luck and Johnson, 2000). Наши данные показывают, что K _d s 0,4 и 0,18 мМ для 1-лейцина и 1-фенилаланина соответственно. Были проведены исследования денатурации мочевины LS без и с лигандами, l-лейцином и l-фенилаланином.На рисунке 6 показано, что требуется большее количество мочевины для денатурирования белков, когда l-лейцин и l-фенилаланин связаны в щели для связывания субстрата. Несвязанный белок и связанный с 1-фенилаланином белок демонстрируют сигмоидальную кривую, обозначающую процесс денатурации с двумя состояниями (Skeels, 2001). Однако белок, связанный с l-лейцином, показанный в виде треугольников, дает кривую денатурации с тремя состояниями. Эти данные дополнительно подтверждают, что l-фенилаланин связывается с белком, но не так, как l-лейцин.Мы исследуем это дополнительно с помощью рентгеновской кристаллографии, и наша цель в будущем — получить полную структуру с помощью ЯМР.

На сегодняшний день мы знаем, что каждый из мутантов Trp-Phe связывает лейцин, но K _d s не были определены. Калориметрические исследования для получения данных о связывании как меченых, так и немеченых LS и мутантов продолжаются. В последующих статьях будет рассказано о связывающих свойствах мутантов. В настоящее время мы однозначно приписали резонансы спектра ЯМР ¹⁹ F LS дикого типа и показали, что мутанты действительно функциональны.Мы показали, что мутации Trp в Phe вдали от кармана связывания могут влиять на структуру кармана, и это необходимо учитывать при разработке новых белков. Мы показали с помощью ЯМР ¹⁹ F, что 1-фенилаланин связывается с рецептором 5F-Trp, но по-другому с l-лейцином. Это было дополнительно подтверждено исследованиями денатурации мочевины на LS.

Таблица I.

Праймеры, используемые для сайт-направленного мутагенеза белков LS

Белок .	Праймер I .	Праймер II .
W18F	5′-CGATTGCCCAGTTCGGCGATATGGA-3 ‘	5′-ATTCCATATCGCCGAACTGGGCAATC-3′
W278TATF	5′-GGGCCT	W278TATF	5′-GGCCGAT	5′-GGCCGAT
W320F	5′-TGGGCCGCTGAACTTCGATGAAA-3 ‘	5′-TTTCATCGAAGTTCAGCGGCCCA-3′
W336F	5′-TCTTCCAGTCCACGCCGAC-3 ‘900G46 90GTCCACGACGCCGAC-3’ 9G46 900G46 900GCA 900GC4 900G46 900G46 900GCA 900GC4
Белок .	Праймер I .	Праймер II .
W18F	5′-CGATTGCCCAGTTCGGCGATATGGA-3 ‘	5′-ATTCCATATCGCCGAACTGGGCAATC-3′
W278TATF	5′-GGGCCT	W278TATF	5′-GGCCGAT	5′-GGCCGAT
W320F	5′-TGGGCCGCTGAACTTCGATGAAA-3 ‘	5′-TTTCATCGAAGTTCAGCGGCCCA-3′
W336F	5′-TCTTCCAGTCCAGTCCACGCCGAC-3 ‘900GAC53 90GACTGAC-3’ 46 900GAC53 900GTCCACGCCGAC-3 ’46 900G46 900GTGTCCACGCCGAC-3 ’46 Я. Праймеры, используемые для сайт-направленного мутагенеза белков LS Белок . Праймер I . Праймер II . W18F 5′-CGATTGCCCAGTTCGGCGATATGGA-3 ‘ 5′-ATTCCATATCGCCGAACTGGGCAATC-3′ W278TATF 5′-GGGCCT W278TATF 5′-GGCCGAT 5′-GGCCGAT W320F 5′-TGGGCCGCTGAACTTCGATGAAA-3 ‘ 5′-TTTCATCGAAGTTCAGCGGCCCA-3′ W336F 5′-TCTTCCAGTCCACGCCGAC-3 ‘900G46 90GTCCACGACGCCGAC-3’ 9G46 900G46 900GCA 900GC4 900G46 900G46 900GCA 900GC4 Белок . Праймер I . Праймер II . W18F 5′-CGATTGCCCAGTTCGGCGATATGGA-3 ‘ 5′-ATTCCATATCGCCGAACTGGGCAATC-3′ W278TATF 5′-GGGCCT W278TATF 5′-GGCCGAT 5′-GGCCGAT W320F 5′-TGGGCCGCTGAACTTCGATGAAA-3 ‘ 5′-TTTCATCGAAGTTCAGCGGCCCA-3′ W336F 5′-TCTTCCAGTCCACGCCGAC-5′-TCTCCACGA-ACGCCGAC-3 ‘900GC53 900GAC53 900GAC53 900GA 900G46 900GAC53 900GC53 Таблица II. Эффективность включения 5F-Trp в белки LS, полученные с помощью LINCS Белок . Включение 5F-Trp (%) . Ошибка (%) . WT 100 2,9 W18F 99 1,3 W278F 100 5,2 W320F 98 2.7 W336F 92 0,9 Белок . Включение 5F-Trp (%) . Ошибка (%) . WT 100 2,9 W18F 99 1,3 W278F 100 5,2 W320F 98 2.7 W336F 92 0,9 Таблица II. Эффективность включения 5F-Trp в белки LS, полученные с помощью LINCS Белок . Включение 5F-Trp (%) . Ошибка (%) . WT 100 2,9 W18F 99 1.3 W278F 100 5,2 W320F 98 2,7 W336F 92 0,9 Белок . Включение 5F-Trp (%) . Ошибка (%) . WT 100 2,9 W18F 99 1.3 W278F 100 5,2 W320F 98 2,7 W336F 92 0,9 Рис. 1. Структура белка, связывающего l-лейцин E.coli . Показана структура α-углеродного скелета рецептора (Sack et al ., 1989b). Структура показывает четыре остатка триптофана, которые были помечены 5-фтортриптофаном в настоящем исследовании. Рис. 1. Структура белка, связывающего l-лейцин E.coli . Показана структура α-углеродного скелета рецептора (Sack et al ., 1989b). Структура показывает четыре остатка триптофана, которые были помечены 5-фтортриптофаном в настоящем исследовании. Рис. 2. Отнесение резонансов 5-фтортриптофана в спектре ЯМР 19 F с помощью сайт-направленного мутагенеза.Показаны рецепторы дикого типа и указанные мутантные рецепторы, каждый из которых мечен 5-фтортриптофаном и связан с избытком l-лейцина. Все образцы содержат 10 мМ фосфата, pH 6,9 и 10% D 2 О. Спектры были внешне привязаны к 3-фторфенилаланину при –38.00 p.pm. Спектры записывали при 470 МГц и 30 ° C. Рис. 2. Отнесение резонансов 5-фтортриптофана в спектре ЯМР 19 F с помощью сайт-направленного мутагенеза. Показаны рецепторы дикого типа и указанные мутантные рецепторы, каждый из которых мечен 5-фтортриптофаном и связан с избытком l-лейцина.Все образцы содержат 10 мМ фосфата, pH 6,9 и 10% D 2 О. Спектры были внешне привязаны к 3-фторфенилаланину при –38.00 p.pm. Спектры записывали при 470 МГц и 30 ° C. Рис. 3. Влияние связывания l-лейцина на 19 F ЯМР-резонансы 5F-Trp-меченного LS. Показаны спектры LS, меченного 5F-Trp, с экстенсивным диализом в фосфатном буфере ( a ) и LS с добавлением избытка l-лейцина ( b ).Условия буфера и параметры ЯМР соответствуют фиг. 2. Стрелки указывают связанные формы белка. Линиями обозначены частотные сдвиги, вызванные связыванием лиганда. Рис. 3. Влияние связывания l-лейцина на 19 F ЯМР-резонансы 5F-Trp-меченного LS. Показаны спектры LS, меченного 5F-Trp, с экстенсивным диализом в фосфатном буфере ( a ) и LS с добавлением избытка l-лейцина ( b ). Условия буфера и параметры ЯМР показаны на рисунке 2.Стрелки указывают на связанные формы белка. Линиями обозначены частотные сдвиги, вызванные связыванием лиганда. Рис. 4. Влияние связывания l-лейцина на 19 F ЯМР-резонансы 5F-Trp-меченных мутантов LS. Показаны спектры ( a ) LSW18F частично без лиганда, ( b ) LSW18F с избытком l-лейцина, ( c ) LSW320F частично без лиганда, ( d ) LSW320F с избытком l-лейцина, ( e ) LSW336F частично без лиганда и ( f ) LSW336F с избытком l-лейцина.Стрелки указывают на связанные формы белка. Условия такие же, как на рис. 2. Рис. 4. Влияние связывания l-лейцина на 19 F ЯМР-резонансы 5F-Trp-меченых мутантов LS. Показаны спектры ( a ) LSW18F частично без лиганда, ( b ) LSW18F с избытком l-лейцина, ( c ) LSW320F частично без лиганда, ( d ) LSW320F с избытком l-лейцина, ( e ) LSW336F частично без лиганда и ( f ) LSW336F с избытком l-лейцина.Стрелки указывают на связанные формы белка. Условия такие же, как на Рисунке 2. Рис. 5. Титрование 1-фенилаланина в частично свободный от лиганда 5F-Trp-меченый LS. Все образцы содержат 0,4 мМ белка, а условия соответствуют фиг. 2. Указаны количества 1-фенилаланина. Стрелки указывают на резонансы, обычно обнаруживаемые в форме белка, связанной с l-лейцином. Рис. 5. Титрование 1-фенилаланина в частично свободный от лиганда 5F-Trp-меченный LS.Все образцы содержат 0,4 мМ белка, а условия соответствуют фиг. 2. Указаны количества 1-фенилаланина. Стрелки указывают на резонансы, обычно обнаруживаемые в форме белка, связанной с l-лейцином. Рис. 6. Влияние l-лейцина и l-фенилаланина на равновесное развертывание LS. Денатурация белков мочевиной с лигандами и без них показана в виде графика развернутой фракции в зависимости от концентрации мочевины. LS без лиганда (▪), LS с избытком l-лейцина () и LS с избытком l-фенилаланина (•).Кривые были построены с помощью нелинейной регрессии модели с тремя состояниями (Eftink, 1995), выполненной с использованием Origin (Microcal, Northhampton, MA). Рис. 6. Влияние l-лейцина и l-фенилаланина на равновесное развертывание LS. Денатурация белков мочевиной с лигандами и без них показана в виде графика развернутой фракции в зависимости от концентрации мочевины. LS без лиганда (▪), LS с избытком l-лейцина () и LS с избытком l-фенилаланина (•).Кривые были построены с помощью нелинейной регрессии модели с тремя состояниями (Eftink, 1995), выполненной с использованием Origin (Microcal, Northhampton, MA). Авторы благодарят Памелу Скотт Адамс из Института секвенирования ДНК Трюдо, а также Деррика Шварца и Мэтью Скилса за исследования флуоресценции. Они также благодарны Дж. Б. Александру Россу и Елене Русиновой за измерения LINCS на 5F-Trp LS и мутантах. Это исследование было частично выполнено в Национальной лаборатории сильного магнитного поля при поддержке Национального научного фонда в рамках соглашения о сотрудничестве DMR-0084173.Работа поддержана Фондом нефтяных исследований (36825-AC4). Список литературы Адамс, доктор медицины, Магуайр, Д.Дж. и Oxender, D.L. ( 1991 ) J. Biol. Chem. , 266 , 6209 –6214. Бессис, А.С., Бертран, Х.О., Гавез, Т., ДеКолле, К., Пин, Дж. П. и Ахер, Ф. ( 2000 ) Protein Sci. , 9 , 2200 –2209. Дэниэлсон, М.А. и Фальке, Дж. Дж. ( 1996 ) Анну.Rev. Biophys. Biomol. Struct. , 25 , 163 –195. Эфтинк, М. ( 1995 ) Methods Enzymol. , 259 , 487 –512. Ландик, Р. и Oxender, D.L. ( 1985 ) J. Biol. Chem. , 260 , 8257 –8261. Удача, Лос-Анджелес. и Фальке, Дж. Дж. ( 1991 ) Биохимия , 30 , 4248 –4256. Удача, Лос-Анджелес. и Фальке, Дж. Дж. ( 1991 ) Биохимия , 30 , 4257 –4261. Удача, Лос-Анджелес. и Джонсон, С. ( 2000 ) Protein Sci. , 9 , 2573 –2576. Линч, Д. и Гуттманн, Р. ( 2001 ) Curr. Drug Targets , 2 , 215 –231. Оксендер, Д.Л., Андерсон, Дж. Дж., Дэниелс, К. Дж., Ландик, Р., Гансалус, Р. П., Зуравски, Г. и Яновский, С. ( 1980 ) Proc. Natl Acad. Sci. США , 77 , 2005 –2009. Паолетти, П., Перин-Дюро, Ф., Файязуддин, А., Ле Гофф, А. и Нейтон Дж. ( 2000 ) Neuron , 28 , 911 –925. Рахманян М., Клаус Д. и Oxender, D.L. ( 1973 ) Бактериология , 116 , 1258 –1266. Росс Дж.Б.А., Русинова Э., Удача Л.А. и Rousslang, K.W. (2000) В Lakowicz, J.R. (ред.), Topics in Fluorescence Spectroscopy, Vol. 6. Флуоресценция белка . Kluwer Academic / Plenum Press, Нью-Йорк, стр. 17–42. Мешок, Дж. С., Сапер, М.А. и Quiocho, F.A. ( 1989 ) J. Mol. Биол. , 206 , 171 –191. Мешок, Дж. С., Траханов, С. Д., Цыганник, И. и Quiocho, F.A. ( 1989 ) J. Mol. Биол. , 206 , 193 –207. Сеньар Д.Ф., Мендельсон Р.А., Стоун Д.Б., Удача Л.А., Русинова Э. и Росс, А.Дж. ( 2002 ) Анал. Биохим. , 300 , 77 –86. Шилтон, Б.Х., Флокко М.М., Нильссон М. и Моубрей С.Л. ( 1996 ) J. Mol. Биол. , 264 , 350 –363. Skeels, M.C. (2001) докторская диссертация, Университет Кларксона, Потсдам, Нью-Йорк. Земский Ю., Русинова Э., Немерсон Ю., Удача Л.А. и Росс, J.B.A. ( 1999 ) Белки , 37 , 709 –716. © Издательство Оксфордского университета Антибактериальная активность наночастиц серебра, полученных методом химического восстановления 1. К. Х. Чо, Дж. Э. Парк, Т. Осака и С. Г. Парк, Electrochimica Acta , 51 , 956 (2005). Артикул CAS Google Scholar 2. Л. С. Наир и К. Т. Лауренсин, J. Biomed. Nanotechnol. , 3, , 301 (2007). Артикул CAS Google Scholar 3. М. Зигрист, М. Э. Кузен, Х. Кастенхольц и А.Вик, Аппетит , 49 , 459 (2007). Артикул Google Scholar 4. К. Дермендра, Дж. Б. Тивари и П. Сен, World Appl. Sci. J. , 3 , 417 (2008). Google Scholar 5. Х. Цзян, С. Манолаче, А. К. Л. Вонг и Ф. С. Денес, J. Appl. Polym. Sci. , 93 , 1411 (2004). Артикул CAS Google Scholar 6. Р. Йоксан, С. Чирачанчай, Матем. Chem. Phys. , 115 , 296 (2009). Артикул CAS Google Scholar 7. K. S. Chou, Y.C. Лу и Х. Х. Ли, Mater. Chem. Phys. , 94, , 429 (2005). Артикул CAS Google Scholar 8. W. C. Lin, M. C. Yang, Macromol. Rapid Commun. , 26, , 1942 (2005). Артикул CAS Google Scholar 9. Х. С. Шин, Х. Дж. Ян, С. Б. Ким и М. С. Ли, J. Colloid Interf. Sci. , 274, , 89 (2004). Артикул CAS Google Scholar 10. K.D. Ким, Д.Н. Хан, Х.Т. Kim, Chem. Англ. J. , 104 , 55 (2004). Артикул CAS Google Scholar 11. Д. Г. Ю, Коллоиды Прибой. B: Биоинтерф. , 59, , 171 (2007). Артикул CAS Google Scholar 12. К. С. Сонг, С. М. Ли, Т. С. Парк и Б. С. Ли, Korean J. Chem. Англ. , 26 (1), 153 (2009). Артикул CAS Google Scholar 13. Дж. П. Чен и Л. Л. Лим, Chemosphere , 49 , 363 (2002). Артикул CAS Google Scholar 14. А. Дж. Кора, Р. Манджуша и Дж. Аруначалам, Мат. Sci. Англ. C , В печати (2009). 15. А. Кумар, Х. Джоши, Р. Пасрича, А. Б. Мандейл и М. Састри, J. Colloids Interf. Sci. , 264, , 396 (2003). Артикул CAS Google Scholar 16. И. Сонди и Б.Салопек-Сонди, J. Colloids Interf. Sci. , 275, , 177 (2004). Артикул CAS Google Scholar Прочие виды деятельности — PhytoBraCro Анна Смолко защита докторской диссертации, 17.09.2019 913г. часть выполнена в рамках проекта PhytoBraCro.Ее научным руководителем была Бранка Салопек Сонди, а член команды профессор Наташа Бауэр была членом диссертационного комитета. Четвертая встреча проектной группы Четвертая встреча проектной группы была проведена в Институте Руджера Бошковича в Загребе. Члены команды Бранка Салопек Сонди, Снежана Михальевич, Наташа Бауэр, Дуня Шамец, Валерия Вуйчич, Сандра Радич Брканац, Ана Смолко, Сельма Млинарич, Ясенка Антунович Дуйч и Ида Линич представили свои результаты и планы на будущее.Кроме того, Бранка представил финансовый отчет и финансовый план на следующий год. Федерация европейских обществ биологии растений (FESPB) представила нашу недавнюю статью в IJMS в социальных сетях Федерация европейских обществ биологии растений (FESPB), крупнейшее и наиболее широко представительное общество ученых-растений в Европе , представил нашу недавно опубликованную статью в Международном журнале молекулярных наук в социальных сетях.Федерация на своих страницах публиковала самые интересные статьи в области биологии растений, опубликованные европейскими исследователями. Ида Линич, трехмесячная стажировка в Университете Палацкого в Оломоуце С марта по май 2018 года. Ида Линич остается в нашем учреждении, сотрудничающем с Университетом Палацкого в Оломоуце, где она выполняет анализ фенольной кислоты и флавоноидов с помощью UPLC-MS. РС. Ее пребывание поддерживается программой ERASMUS +, предназначенной для мобильности аспирантов. Студенческая практика, 2017/2018 учебный год. Дора Грбавац, Снежана Кодба, Люсия Котарски, Вида Куфрин и Танита Демир, студенты третьего курса факультета молекулярной биологии факультета естественных наук, выступают под руководством студентки Загребского университета. Бранка Салопек Сонди. Они помогают оценить стрессовую реакцию (соленость и осмотичность) мутантов Arabidopsis thaliana . Третье собрание команды проекта, 17.10.2017. Третье совещание проектной группы состоялось в Институте Руджера Бошковича в Загребе. Члены команды Бранка Салопек Сонди, Снежана Михальевич, Наташа Бауэр, Дуня Шамец, Валерия Вуйчич, Сандра Радич Брканац, Ана Смолко, Ива Павлович и Ида Линич представили свои результаты и планы на будущее. Кроме того, Бранка представил финансовый отчет и финансовый план на следующий год. Проф. Ютта Людвиг-Мюллер посещение института Руджера Бошковича, 25.-29.09. 2017. Профессор Ютта Людвиг-Мюллер, наш сотрудник из Института ботаники Технического университета Дрездена в Дрездене, Германия, посетила Институт Руджера Бошковича. В сотрудничестве с Хорватским обществом биологов растений она прочитала лекцию « Ауксиновый гомеостаз в развитии плодов томата в нормальных условиях и тепловом стрессе », которую посетили члены команды PhytoBraCro. Также во время своего пребывания она участвовала в нескольких встречах и обсуждениях с членами команды PhytoBracro о будущих направлениях исследований. Ива Павлович, второй визит в Университет Палацкого в Оломоуце, август 2017 г. . В августе 2017 года ., Согласно графику проекта, Ива Павлович посетила Лабораторию регуляторов роста, совместное предприятие факультета естественных наук, Университета Палацкого и Институт экспериментальной ботаники Академии наук Чешской Республики в Оломоуце.Основной целью ее пребывания была разработка метода UPLC-MS / MS для анализа глюкозинолатов в образцах Brassica . Ее экспериментами руководил профессор Ондржей Новак. Ива Павлович, защита докторской диссертации, 09.06.2017 Пятница 6 июня была счастливым днем ​​для команды PhytoBraCro. Ива Павлович защищает докторскую диссертацию под руководством Бранки Салопек Сонди. Член группы профессор Сандра Радич Брканац была председателем диссертационного комитета, и многие другие члены команды присутствовали на презентации.После удачной защиты все мы наслаждались расслабляющим пикником. Проф. Ондржей Новак Визит в Институт Руджера Бошковича, 24.-28. 04. 2017. Профессор Ондржей Новак, наш сотрудник факультета естественных наук Университета Палацкого в Оломоуце, Чешская Республика, посетил Институт Руджера Бошковича. Во время своего пребывания он прочитал лекцию « Тканевый и клеточно-специфический анализ фитогормона », организованную в сотрудничестве с Хорватским обществом биологов растений . Члены команды PhytoBraCro также приняли участие в круглом столе, где они представили свои результаты и обсудили планы на будущее с профессором Новаком. Вторая встреча проектной группы , 2. 12. 2016 . Вторая встреча проектной группы состоялась в Институте Руджера Бошковича в Загребе. После презентации результатов членов команды было проведено обсуждение и составление планов на будущее. На встрече присутствовали Бранка Салопек Сонди, Снежана Михальевич, Наташа Бауэр, Хрвое Лепедуш, Валерия Вуйчич, Ана Смолко и Ива Павлович. Визит Ивы Павлович в Университет Палацкого в Оломоуце, апрель 2016 г. . Ива Павлович посетила Лабораторию регуляторов роста, совместное предприятие факультета естественных наук Университета Палацкого и Института экспериментальной ботаники Академии наук Чешской Республики в Оломоуце. Исследователи LGR занимаются в основном различными группами регуляторов роста растений. Во время своего пребывания она выполнила анализ растительных гормонов и фенольных кислот методами UPLC-MS / MS под руководством сотрудника проекта проф.Ондржей Новак. Стартовая встреча, 18.09.2015. Стартовая встреча была проведена в Институте Руджера Бошковича в Загребе. Главный исследователь Бранка Салопек Сонди представил присутствующим членам команды работу и финансовый план проекта. На встрече присутствовали Бранка Салопек Сонди, Снежана Михальевич, Наташа Бауэр, Сандра Радич Брканац, Хрвое Лепедуш, Ясенка Антунович Дунич, Сельма Млинарич, Валерия Вуйчич, Ана Смолко и Ива Павлович. Датская пивоварня Carlsberg решает проблему перелива дрожжевой пены Ферментация включает в себя превращение глюкозы в сусле дрожжами в спирт и CO2.По завершении процесса через 4-6 дней большая часть дрожжей оседает на дно бродильных чанов. Эти дрожжи затем удаляются и повторно используются несколько раз перед хранением в резервуаре для излишков дрожжей — затем они продаются в качестве корма для животных. «На этом заключительном этапе заполнения резервуаров для излишков дрожжей компания Carlsberg столкнулась с проблемами перелива из-за сильного накопления пены, которая препятствовала срабатыванию вибрационных вилок традиционного уровня [на фото внизу]». Технология «частотной развертки» Компания Carlsberg решила эту проблему с помощью переключателя Baumer CleverLevel LBFS / LFFS (фото слева) для определения уровня заполнения дрожжевых резервуаров.При этом используется технология «частотной развертки» и подходит для влажных, сухих и липких сред или пены. Баумер сказал, что этот переключатель более эффективен, чем традиционные вилки, поскольку для липких, сухих и влажных сред требуется только одна версия — CleverLevel можно использовать на протяжении всего процесса производства пива от поступления ячменя в резервуары для хранения до готового пива. Переключатель не требует обслуживания, имеет небольшую монтажную глубину 15 мм и может быть настроен визуально с помощью прилагаемого программного обеспечения и «FlexProgrammer» для подавления или не подавления пены. Может решить проблемы Carlsberg CIP Переключатель CleverLevel также может использоваться для обнаружения загрязнений в среде (например, остатков чистящих средств) и защиты насосов от работы всухую. Лоне Хойбьерг Петерсон, координатор технического обслуживания в Carlsberg Denmark, сказал: «Переключатель CleverLevel решил наши проблемы с переполнением излишков дрожжевых резервуаров благодаря своим уникальным и простым вариантам конфигурации». Выгоды для Carlsberg включают меньшее количество дрожжей, попадающих в канализацию — экологическое преимущество — и экономию средств за счет оптимизации процесса и сокращения затрат на техническое обслуживание. «Сейчас мы рассматриваем возможность его использования в наших резервуарах для каустика CIP, где мы испытываем аналогичные проблемы с пеной и переливом», — добавил Peterson. Значение имени Сонди, о Барбадосской девушке Имя Сонди Ваше имя Сонди? Посмотреть значение, нумерологию и подробности имени девушки из Барбадоса Сонди Sondi — это имя American Girl, значение которого — « TBD ». Исходя из нумерологического значения 7, Sondi является аналитичным, понимающим, знающим, прилежным, независимым, бесстрашным, исследовательским, ориентированным на доказательства, практичным. Духовный, умный, сдержанный, таинственный и интуитивный.Ниже приведены некоторые сведения об имени Sondi на основе нумерологического значения — Качества Философское, духовное Счастливый цвет Зеленый Правящая планета Нептун Счастливое число 7 Анализ каждой буквы имени « Sondi » в каждом имени каждая буква имеет определенное значение, которое описывает природу имени.Ниже в таблице описана каждая буква имени Sondi . Письма Описание S Вы настоящий чародей. Обладая чувством тепла и преданности, вы также глубоко чувствуете вещи. это может привести к чрезмерно драматическим реакциям и интенсивной внутренней жизни. O Вы знаете, где находится высокий моральный уровень, и всегда принимаете его.Это потому, что ваши духовные убеждения так же сильны, как и ваша воля. Вам нравятся границы, законы и правила, но вы также чувствительны и очень глубоко чувствуете вещи. N Вы — человек нестандартного мышления, творческий и оригинальный. У вас также есть сильная воля к тому, чтобы мнения совпадали. D Вы обоснованы и прагматичны.У вас есть отличные системы для выполнения задач, и это здорово, потому что у вас сильное чувство решимости. Я Вы сострадательный человек, глубоко переживающий. В таком случае логично, что вы также артистичны и креативны, разбираетесь во всем, от моды до композиции. Метод расчета нумерологии имени « Sondi » Алфавит Итого по алфавиту. (например: U = 21 = 2 + 1 = 3) S 1 O 6 N 5 D 4 Я 9 Всего 25 Итого из 25 7 Расчетная нумерология 7 Найдите значение своего имени Искать имена с помощью расширенного поиска . Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сайт