8 векторов: Звуковой вектор | Психологические тренинги и курсы он-лайн. Системно-векторная психология

Содержание

Звуковой вектор | Психологические тренинги и курсы он-лайн. Системно-векторная психология

Ночь — звуковое время суток. В первобытной стае звуковик вслушивался в тишину: не хрустнула ли где-нибудь веточка под лапой леопарда? Поздно вечером и ночью звуковики чувствуют себя гораздо бодрее, чем днем. Им сложно рано вставать, они долго не могут проснуться.

365 1128346 28 Ноября 2011 в 01:55

Автор публикации:
Диана Кирсс, семейный врач
Евгения Алексеева, студентка медицинского факультета
Анастасия Маточинская, лингвист

Характерные речевые обороты:

  • Всё суета сует!
  • Смотри внутрь себя.
    Познай самого себя!
  • Тишина

Общая характеристика

Численность 5%
Архетип Обратная связь с Первопричиной
Видовая роль Ночной охранник стаи
Цвет наибольшего комфорта Синий
Геометрия наибольшего комфорта Отсутствует
Место в квартели Внутренняя часть квартели информации, абсолютный интроверт
Тип интеллекта Абстрактный

 

Особенности психики

Про него говорят: «Не от мира сего... Странный он какой-то, чудаковатый, молчун с избирательным контактом». Это первые определения, часто наблюдаемые окружающими, которые получает звуковой вектор в системно-векторной психологии.

Звуковик — абсолютный эгоцентрик. Он высокомерен, в собственных ощущениях он — самый умный, «выше всех», поэтому его могут считать заносчивым. Это наибольший интроверт, закрытый в панцире собственного тела, всецело сосредоточенный на себе и своих состояниях. Наиболее часто встречающееся слово в речи звуковика — местоимение «Я».

Звуковой ребенок уже в 5-6 лет начинает задавать вопросы о смысле жизни: «Папа, а кто мы? Зачем мы живем? В чем смысл жизни? И что такое смерть? Что будет после того, как мы умрем? Что такое космос? А бесконечность? Почему я в своем теле, а не, например, в теле моего брата?»

В период взросления эти вопросы как бы заглушаются, вытесняются глубоко в бессознательное, давая о себе знать лишь сигналами смутной тоски и депрессии, ощущением «мировой скорби», чтобы во время пубертата и в дальнейшем стать особенно острыми.

Часть звуковиков внутренние вопросы вербализует, а часть не задает их, но как будто что-то все время тянет их в темы, связанные с этими вопросами. Например, физик часто не отдает себе отчета в мотивах своих исследований. Он не скажет вам: «Я изучаю устройство мироздания», — он так не думает. Он думает, что решает прикладную задачу, которую до него еще никто не решал.

В поиске Первопричины звуковики изучают религии и духовные практики. Иногда они идут от обратного и, пытаясь доказать, что Бога нет, становятся атеистами. Только звуковик так яростно может доказывать, что Бога нет, ведь вопрос существования Бога — это только звуковой вопрос.

Звуковой вектор уникален тем, что это единственный вектор, не имеющий материальных желаний. Секс, семья, дети, деньги, карьера, почет и слава, даже знания — ничто из этого не представляет ценности в звуковом векторе. Звуковой вектор — единственный, всеми своими желаниями устремленный к познанию своего Я, Основного Закона Мироздания, Первопричины, Бога.

Его задача — постижение мира метафизического, и все свойства звуковика (кроме базовых физических — есть, пить, дышать, спать) направлены только на это. Звуковой вектор — доминантный, то есть сила желания в звуке — самая большая, гораздо бόльшая, чем в других векторах.

Звуковой вектор асексуален. Все желания звуковика направлены в нематериальную плоскость, это подавляет сексуальное желание. Даже самое большое либидо, обусловленное «нижними» векторами, понижается «верхними» векторами, в особенности Звуком.

Звуковик часто говорит еле слышным, тихим голосом и зачастую не любит звучание своего голоса. Каждый раз перед тем, как ответить на вопрос, он берет тайм-аут: «А? Что? Вы ко мне?..» — переспрашивает, словно не расслышал вопроса. Это дает ему время вынырнуть из себя наружу и уже тогда полноценно ответить. Говоря, он делает паузы, задумывается, зависает.

Живому общению звуковик нередко предпочитает невербальное общение в Интернете: ему проще написать то, что он хочет сообщить другому человеку, даже находящемуся с ним в одном помещении, чем сказать голосом. К тому же в «интернетные беседы» не замешаны запахи и все прочее, отвлекающее от смысла сказанного. Когда говорит, он нередко прикрывает глаза, отключаясь от мира образов, мира снаружи, сосредотачиваясь на звуках, словах, интонациях.

Звуковик предпочитает общаться с такими же, как он сам. Звуковики понимают друг друга без слов, они так и говорят: «Нам приятно помолчать вместе».

Ночь — звуковое время суток. В первобытной стае звуковик выполнял функцию ночного охранника стаи, бодрствовал, когда все остальные спали. Он вслушивался в тишину: не хрустнула ли где-нибудь веточка под лапой леопарда? По сей день вечером и ночью звуковики чувствуют себя гораздо бодрее, чем днем. По этой же причине они предпочитают поздно ложиться спать и с трудом подчиняются обычному режиму: им сложно рано вставать, они долго не могут проснуться.

В современном обществе звуковики по-прежнему «караулят стаю» по ночам, но уже, к примеру, сидя в Интернете, слушая музыку в наушниках, читая книги и размышляя.

Звуковой ребенок тише остальных, не бегает и не шумит на переменках вместе со всеми, предпочитая уединение. Чудаковатый тихоня со взглядом взрослого человека, задумчивый и малообщительный. Лицо звуковика амимично и совсем не отражает эмоций. Вместе с тем эмоции у звуковика ничуть не менее сильные и даже более глубокие, чем у других, только не выносятся наружу. Так что со стороны о них можно даже не догадываться.

То, как проявляет себя звуковой ребенок в школе, во многом говорит о его состоянии. Ребенок с подавленным звуковым вектором замкнут и отчужден. Ему сложно найти общий язык со сверстниками. По ночам он занят своими «делами», живя в своем мире, мире фантастики, идей и музыки, он редко высыпается. Как результат, в первой половине дня он пребывает в состоянии полудремы, проваливая контрольные, которые так часто дают именно на первых уроках. Такой ребенок рискует попасть в разряд неуспевающих, может даже по ошибке получить штамп умственно отсталого.

Тот же звуковой ребенок при адекватном развитии, в хороших для звукового вектора условиях показывает блестящие интеллектуальные способности и хорошую обучаемость. Часто ему особенно легко дается изучение языков. Звуковые дети очень хорошо чувствуют интонации, звучание речи и способны говорить на любом иностранном языке без акцента. Они единственные обладают абстрактным мышлением, могут решать сложнейшие задачи по физике и математике. Лучшие из лучших в этих областях, они становятся призерами олимпиад.

Ключевым моментом становится правильный подход к таким детям. Родители звуковых детей должны обеспечить своему ребенку максимально благоприятную среду: тишину и возможность уединения. Громкие звуки — такие как хлопающие двери и грохот посуды — вредоносны для звукового ребенка. На звукового ребенка ни в коем случае нельзя кричать, его нельзя оскорблять: «Ну что ты за идиот такой, зачем я тебя родила!» Унижение звуковика и частые скандалы между родителями могут значительно снизить его способность к обучению и контакту с другими людьми. Так происходит первый удар по сенсору звуковика. Аутист — это травмированный звуковик, а крайняя степень стресса звукового ребенка оборачивается звуковым неврозом — шизофренией.

Состояние абсолютного комфорта для звуковика — это тишина. Тишина — средство самоуглубления, только в тишине хорошо думается. Звуковик избегает шумных компаний и мест, предпочитая уединение.

Звуковики обладают абстрактным интеллектом, в потенциале самым мощным, способным к постижению абстрактных нематериальных понятий. Идеи, их создание, распространение — это звук. Идеи эти носят глобальный характер, меняют мир вокруг нас и определяют направление движения социальных преобразований и общего развития человечества. От развитости и реализованности звуковика зависит направленность его идей — от человеконенавистнических (при недостаточной развитости и фрустрациях, например, как у Гитлера) до движущих в будущее народ или все человечество (Циолковский, Эйнштейн, Ландау, Тесла и многие другие).

Звуковой вектор — один из трех «читающих» векторов. Звуковики предпочитают поэзию, научную фантастику, книги по философии и психологии. Изучают эзотерику, религии, теологию, физику. По ночам не спят, а философствуют, созерцая ночное небо, могут часами смотреть на звезды, получая от этого своеобразное успокоение.

Звуковики любят музыку, выбирая ту, которая созвучна их внутреннему состоянию. Желание громко слушать тяжелый рок — это попытка уменьшить боль в страдающем от невозможности наполниться звуковом векторе. Музыка — своего рода наполнение нижних уровней желания звукового вектора. Но в последние десятилетия музыка уже не способна полностью наполнить звукового человека, поскольку значительно вырос темперамент, то есть сила желания — вектора. Звуковик, чьи бессознательные желания наполнены, перестает нуждаться в музыке, он предпочитает тишину.

Еще в XX веке звуковик мог наполниться философией, музыкой, поэзией, реализовать себя в качестве философа, теолога, музыканта, физика, поэта, режиссера. В последние же десятилетия ничто не утоляет жажды реальных духовных постижений, и звуковики находятся в тяжелейших условиях, ощущая более или менее осознанный внутренний поиск, который они ничем не могут наполнить.

Широкое распространение зависимости от компьютерных игр (особенно связанных с насилием) — показатель депрессивного звукового вектора. Погружение в мир компьютерных игр лишь усиливает оторванность от реальности и подогревает человеконенавистнические идеи нездоровых звуковиков.

Депрессия — это ненормальное состояние для звуковика, но, увы, сегодня для большинства из них наиболее частое. Выход из депрессии оказывается сложной задачей для людей со звуковым вектором. Не справляясь со своей видовой ролью, терзаясь внутренними вопросами, тоскующие и мятущиеся, они порой решаются на самоубийство, подсознательно надеясь попасть к Богу через «черный ход». Они так и говорят: «Нет смысла в этой жизни, душе тесно и больно в телесной оболочке». Звуковики выпускают душу из тела, надеясь на вечную жизнь в другом измерении... Но это ошибка. Только здесь, в мире физическом, только в теле человек способен выполнить Звуковую задачу постижения своего Я и Мироздания.

Звуковик постоянно погружен в себя. Размышляя о чем-то, он отрешен от происходящего снаружи. Все звуковое Я направлено на внутреннее самосозерцание. Колоссальное сосредоточение звуковика на самом себе — это попытка осознать то, что не осознается, отвоевать путем осознания клочок территории у Бессознательного.

Погружаясь в себя слишком глубоко, он настолько теряет связь с материальным миром, что буквально забывает есть и пить. Почувствовав сильную слабость в теле, он даже не может сразу понять, в чем дело. Его спрашивают:

«Ты ел? Когда ты ел?» А он отвечает: «Не помню... наверное, вчера...» Звуковики — единственные, кто не ощущает тело. Они уверены, что тело само по себе, а они сами по себе. Иногда им кажется, что тело мешает, его тяжело таскать на себе, оно хочет кушать и т. п., в то время как он должен выполнять свою видовую роль. При этом надо понимать, что у звуковика самая тяжелая работа — работа ума. Не существует более тяжелой работы, чем работа ума в звуковом векторе.

Звуковику сложно облечь в слова свои желания, он что-то ищет, но сам точно не знает что. И ни одна материальная сущность не способна наполнить его пустоту. Люди без звукового вектора не могут понять его: «Вася, ну что ты маешься? У тебя же все есть! Что тебе еще надо? Заладил одно и то же — «нет смысла, зачем все», — живи, как все!»

Для звуковика бессознательная нехватка ответов на все его внутренние вопросы — как зубная боль во время праздника: вокруг кипит жизнь, а ему не до нее. Он страдает в поиске смысла и, не находя его, мучается бессмысленностью существования в этом мире, тяготится своим телом.

Не в силах выдержать такое колоссальное внутреннее напряжение, звуковик уходит в депрессии, наркотики, мучается бессонницами, головными болями, в полном отчаянии может решиться на суицид.

Нередко звуковик — в потенциале обладатель самого блестящего абстрактного интеллекта, способный к величественным постижениям духа в масштабе всего человечества, — в неразвитом и нереализованном состоянии так и не находит собственного природного большого пути. Тогда он обречен на блуждания в закоулках мелких, устаревших, несостоятельных, а то и попросту сумасшедших мыслительных заблуждений.

Системно-векторная психология впервые в мире дает ключ знания, который приоткрывает для остальных людей интровертированный, замкнутый внутренний психический объем этого, как его часто называют, «не от мира сего», звукового типажа. А самому звуковому человеку — осознание своей природной заданности и получение наполнения своих природных желаний, реализации свойств. Все это способно вывести его на высоту ни с чем не сравнимой осознанности и осмысленности жизни.

Чтобы узнать больше, регистрируйтесь на бесплатные онлайн-лекции «Системно-векторная психология» Юрия Бурлана.

Корректор: Наталья Коновалова

Автор публикации:
Диана Кирсс, семейный врач
Евгения Алексеева, студентка медицинского факультета
Анастасия Маточинская, лингвист

Статья написана по материалам тренинга «Системно-векторная психология»

Система 8 векторов (кожный вектор и анальный вектор)

8 векторов — 8 психотипов

Система 8 векторов – технология чтения реальности, отвечающая на три вопроса.

  1. Правила
  2. Поведение других игроков
  3. Играть самому.

Как устроен жизненный процесс, ключи к поведению других игроков и ключи к тому,  как построить свою стратегию игры.

8 врожденных психотипов-талантов (векторов):

— у одного человека 5-6 вектров.

— вектор – облако свойств = многообразие жизней.

8 векторов — 8 психотипов личности

Суть системы заключается в том, что человек считается существом, у которого 8 психотипов. Не у всех есть все 8, обычно 5-6 векторов. Представим жизнь как чистый лист бумаги, родился поставили точку на листе, потом он развивается и потихоньку захватывает лист полностью, но это только если он растет. Все растут по-разному, в искусстве, в лечении людей, в строительстве.

Вектор это набор талантов, который помогает завоевывать жизненное пространство.

Их всего 8 и ими написаны все судьбы на планете. Это как ноты  их всего 7 + одна тишина. Все произведения написаны 7 нотами. От древности, до наших дней. И дает все многообразие вселенной.  Все жизненные поступки также описываются 8 элементами.

 

У любого живого существа есть ритм. Даже у камней. Способность к счету.  Каждый считает по разным параметрам, кто-то считает ритм в танцах, кто-то в строительстве, кто-то счет барабана.

 

Ромашка это свойства вектора, есть центральное переживание. Если научитесь центральное переживание, то все остальные свойства вы поймаете. 8 векторов- в каждом основное свойство, которое дает человеку основное счастье, переживание.

 

За 3 дня мини тренинга мы с вами разберем систему 8 векторов. 5 из восьми мы разберем. По зонам в теле кожный, анальный, вагинальный,

Я дам попробовать, чтобы вы научились их видеть. На 3м занятии будем делать диагностику себя и своих знакомых.

 

Повторение

— конфликты – человек играет в игры, учит правила игры в футбол, в домино, но он не учит правила жизни. И мы поэтому проигрываем в самой жизни.

— правила игр, надо понимать правила поведение игроков.

— суть системы.

 

Мы спорим с коллегой по работе. Было ли у вас такое, что на самом деле вы все проговорили и кто-то из вас прав, вы это понимаете, но спор продолжается. И вы уже понимаете, что это уже не спор, а просто доказывание чего-то другого. Он продолжает говорить, но это уже не имеет отношение к спору, это уже к чему-то другому к доказыванию жене, плохого стоматолога, к проигрышу в карты и тд.

1 психотип. Кожный вектор

Зачем надо знать про кожный вектор. Чем это может вам помочь?

5-6 векторов это набор среднестатистического человека, живущего в большом городе.

С помощью этого вектора мы удовлетворяем свои желания, для мужчины позволяет прожить жизнь в состоянии война. Женщине вдохновительнице война.

Центральное переживание в каждом векторе, то к чему он стремиться, что хочет пережить. Самый высший кайф, который он хочет пережить.

Каждый переживает по разному..

В кожном – это то, как человек чувствует жизнь. Это как на гребне волны. Жизнь идет вперед, и вы двигаетесь с ней. Это ощущение роста. Сегодня я больше чем, вчера. Я лучше себя чувствую, главное рост. Жизнь идет вперед, и все растут. Прогресс идет вперед. Он чувствует, как волна жизни идет вперед. Преодоление границ. Преодоление рамок, внешних и внутренних. Выше пост, выше рост, а внутреннего – прокачка характера.

2е центральное переживание –

То новое ощущение. Оно связано с ростом, если я выхожу за рамки текущего. Идете через коридор. Выход на новый уровень, новые ощущения. Азарт, новый уровень. Мастер действия всегда хочет новых ощущений. Он хочется двигаться в этом потоке.

3я Переживание победы, обгона, добыча. Когда стоишь на пьедестале, поливаешь шампанским нижестоящего. Вставая утром, протирая глазки, он выходит на тропу войны. Выходит получать новые ощущения. Открытый к потоку ощущений.  Он выходит за победой. За заработком денег. Это центральное переживание – это желтая серединка у ромашки.  Поймете это, то поймете все.

Есть прожигатели жизни. В богатой семье – дискотеки, клубы девчонки. Прожигать можно по разному. Пар-кур на драйве на азарте, их можно ловить в танце, в восточных единоборствах, весь спорт завязан на интересы кожного человека.

 

Второе это торговля, продай-купи, финансовая свобода, ни от кого не зависеть.

Бизнес. Если у вас развитый кожный вектор, то вы родились чтобы зарабатывать деньги. Здесь все и гибкость и свобода, и деньги и ощущение момента, и насладиться жизнью.

Если вы усвоили желтую серединку. То вы и усвоите то от чего он бежит. Что для него самое не приятное. Это состояние когда жизнь проходит мимо. Морковка сзади. Я проигрываю эту жизнь. Все идет мимо. Все зарабатывают на биткоинах, на форексе, и он страдает, что он не в потоке. Когда он не заработал свои деньги. Не  может купить себе модных тряпок, путешествовать. И если у него этого нет, то он проживает свою жизнь в состоянии страдания, зависти. Основное чем он питается это завистью.  Он рад, что у кого-то не получилось. Это зеленая зависть, он не может спокойно радоваться счастью других.

 

Второе.    Жизненная позиция кожного вектора.

У всех векторов позиции разные. Но кожный вектор чувствует ритм жизни.  Человек с кожным вектором чувствует, что может расти. Он никогда не говорит, что он дорос до своего уровня. Он чувствует всегда, что он способен на большее. Он понимает, что мир пришел в новую точку и меня ждут новые знакомства, новые люди. Он разрешил себе хотеть.  Большинство боятся хотеть.  Кожный вектор — это мастер действия. Он разрешил себе хотеть. Он хочет больше денег и пробует их получить и  пробует снова и снова их получить. Хочет и пробует. Он не хочет прожить эту жизнь, оставшись ни с чем.

Слоган КОКА – бери от жизни все. БРАТЬ. Это кожный человек. Но никак не отдавать.

Поучиться у кожного вектора поведению в конфликте. Понятно, что те, кто распробовал, что такое жизнь, они хотят как можно больше.   А те, кто не понял, они не хотят получить от жизни больше. И кожный вектор может воевать, проигрывать, сделать шаг вперед, отступить. Это движение .Это  волна. У него  нет агрессии, конфликты это плохо, давайте жить дружно.

Он разговаривает в азарте нападения.  Он человека простукивает, как стенку. Просит его сделать что-то за себя, а вдруг прокатит. Почему не попробовать. Легкие во всем. Кожный вектор не пускает близко к сердцу неудачи. Если его кто-то обзывает, он не обижается, он просто огрызнется — сам такой и пойдет дальше.

 

Кожный вектор не ждет, когда его кто-то толкнет локтем. Жизненная позиция – нападение, с одной стороны, а с другой стороны — вдруг подойдет ключик.  Кожный вектор развивается сам. Не  сидит и не ждет у моря погоды. Мы хотим прожить сами хозяевами жизни. Свобода. Попробовать все.

 

Кожный вектор влезет везде. И следит и за дыханием и за едой. У кожного директора  под контролем все: сотрудники, дети, активы, секретарша, деньги. Так кожный вектор ощущает свою свободу. Эта для него свобода, а для кого-то это не свобода.

Кожный вектор задает ритмы. Присматривается и берет все под контроль.

 

Как она легко вытекает из 3х основных переживаний: Обгон, Рост, Новые ощущения.  Оно работает в обе стороны. Если вы хотите пойти в бизнес, то только этими свойствами вы можете в нем преуспеть. И также в танцах и спорте.

 

Кожный вектор не ставит все на карту. Риск небольшой. Действовать азартно, снять сливки с жизни. Кожный вектор в нормальных обстоятельствах плывет с малым риском. Это  все жизни. Это небольшие кредиты на машину, хочешь  жить умей вертеться.  Ощущения – это получить сегодня, а заплатить можно завтра. И  Кожный вектор — это очень ценит.

Три силы Кожного вектора.

Ответственность.  Это 1-я сила. Все  зависит только от меня. Не надо ждать у моря погоды. Дело не в том, что все уже продано, и победа зависит только от меня. Как лыжник, спускаясь с горы, от кочек на пути он отталкивается. Кожный вектор ищет связи сам, не ждет пока придет энергия, настроение,  он не ждет ничего и никого. Он просто начинает двигаться сам.

2-я сила. Кожный вектор чувствует момент. Это люди в тренде. Удобная одежда, минимализм, в девайсах, модное, полезное. То есть везде в тренде.

Кожный вектор чувствует жизнь глубоко и ярко и это позволяет жить в потоке.

3я сила. Это дисциплина.  Умение говорить нет. Дай денег в долг – нет. Почему?  — просто Нет. Потому что — это не соответствует его целям. Когда рука тянется открыть почту, попить чай, почитать  новости. Отсекает те направления, которые не соответствует его цели.

Внутренняя часть дисциплины. Кожному вектору надо заслужить порулить жизнью. И Кожный вектор ищет алгоритмы поведения, чтобы увеличить планку. Дисциплина это способ перепрограммирования  себя, способ поднять планку, внедряет новое медленно, но постоянно.

Если у Кожного вектора включены  все 3 момента, то он имеет свою судьбу и свою победу. И проживает свою жизнь. Заслуженную победу. И получает классный результат.

 

Если его состояния Не развиты — это Халявщик. Тот, кто не хочет платить за результат. Это дисциплина. Это плата за достижения результата. Хочет все реализовать проще. Кожный вектор делает такие штучки. Это в крови. Кожный вектор рождается с этим внутри. Вплоть до того, что обесценивает все. Кожный вектор больше волнуется про зарплату, про соц.пакет, про более земные вещи.

 

Две классные фишки.

Два ключа, чтобы активировать свою энергию. Это не просто. Но вы можете над этим подумать.

  1. Есть заблуждение. Перед действием сидят сиднем, боясь совершить ошибку. Планируют, планируют и потом видят его не совершенство и снова планируют.

Кожный вектор  выигрывает от действия. Тот, кто совершит все ошибки — победил.  Кто совершит все 3000 ошибок, тот и выиграл. Не высчитывать их, а просто быстрее совершить. Это стартовый посыл, чтобы начать действовать. Не бросаетесь в действие без просчета, но тот, кто первый, тот и выигрывает.

 

  1. Перед любой значимой победой есть усилия. Перед получением прав есть два месяца обучения. Усилия вознаграждаются многократно. В 100 раз иногда всего в 10. Два месяца на получение прав и всю жизнь кататься. Три года на язык и всю жизнь говорить на другом языке. Лузер сосредоточен на усилиях, а победитель на результате.

Если ты зациклен на сложностях, то утопаешь в сложностях. А тот, кто на результате, тот все остальное время думает о победе. Он смотрит на победу – смотрите на победу, смотрите дальше. Не на капот машины, а на улицу. Иначе никуда не приедете.

 

Картина мира Кожного вектора  — поле ресурсов – везде есть ресурсы, они разбросаны. В первую очередь модель охотника, любым ресурсом уже кто-то владеет и он смотрит как их выиграть или быстрее собрать.

 

Смысл жизни – люди практичные. Раздельные счета.  Имущество раздельно. Брачные договоры придумали Кожный вектор. Отношения про партнерство.  Нам вместе нравиться проводить время. Но у нас все раздельное.

У Кожного вектора есть партнеры и конкуренты.  Сосед  — это не друг, а просто возможный партнер, ресурс, чем вы можете быть полезны.  Душу можете оставить себе, я на нее не претендую. Живут в реальном мире, не на тонком мире. Не перекладывает ответственность .  С Кожного вектора спросить  бесполезно  — это как с гуся вода.

У Кожного вектора рулит расчет, рациональность. Будет настойчивым пока не получит желаемое.

 

Практика.

Как видится Кожный вектор со стороны. Для слишком справедливых — это не правильные люди. Если  Кожный вектор видит, что это не рационально, он быстро поменяет свою точку зрения.  Изменились обстоятельства и Кожный вектор меняет свое поведение и не важно, что договорились и дали обещание.

Кожный вектор не может быть приклеен своим словом. Это естественное состояние. Жизнь меняется. Он хозяин слова. Слово дал слово забрал. Это работает но это многим кажется не справедливым.

 

 

 

Второй вектор это анальный вектор.

Анальный вектор

Отличие его от Кожного вектора. Кожный вектор – это лыжник, он в потоке на гребне волны. А Анальный вектор — он в другом состоянии.  Он бежит за миром, но не поспевает. Это тяжёлое для него состояние. Когда видят все вокруг, новое все, все растет развивается а они не понимают что это. То ли развод очередной, то ли нет. ощущение по жизни – весь мир сошел с ума. Это спокойные люди.  Без суеты, без беготни. И  в это кожное время очень тяжело. Основное переживание – центр ромашки – это желание защититься от угроз жизни, такой быстрой и такой неуловимой жизни. Они хотят уверенности в завтрашнем дне. Везде бардак. Когда же все устаканиться. Чтобы все было спокойно. Что есть норка, где есть работа, денежка и остальное по минимуму. Важно спокойствие.

 

В переживаниях главное, что они защищены. Что будет завтра, то  к чему готовились, важно людское уважение.

При знакомстве с людьми – тестирование на надежность. Или гнилой. Для анального человека кожник – это сломанный анальный вектор. Он потерял спокойствие, семейственность.  Жизнь анального вектора — это построение защиты. Учиться на 5, чтобы с гарантией взяли в институт. На работу взяли с гарантией. И попадают в ловушку – все надо заслужить.

Всегда в позиции защиты. Работаем над Укреплением своей значимости, заслуженности.  Получаем заслуженное  место после 40 лет.  Крепость чувств также проверяют на надежность.

 

 

Ключи мастерство и нет мелочей ни в чем.

 

Это и есть профессионализм это может сделать только человек с анальным вектором.

 

 

 

 

Анальный вектор живет со совести по справедливости. Они часто уходят от реальности.

 

Еще статьи по теме

Психологическая оценка личности (8 векторов согласно системно-векторной психологии)

Наше психическое бессознательное знает всю правду, правду жизни. Просто мы ее не знаем, мы не допущены в сокрытое бессознательное. Я вас туда допущу. Системно-векторная психология впервые дифференцирует сексуальность человека, впервые! Вы будете точно понимать: вот передо мной человек, у него такая-то сексуальность, она врожденная, для того-то, того-то и того-то, для таких-то действий, у него такие-то сексуальные фантазии, у него такие-то способы возбуждения - и у мальчика, и у девочки.

Приходят девочки и говорят: я хочу замуж. Это нормально. Но она хочет, чтобы он был верный, чтобы он ее любил всю жизнь, но она не знает, что делать. Я говорю: я гарантирую, с одного взгляда на человека вы будете знать его сексуальность. И есть один тип, который называется «моногамная сексуальность». Вот этот моногамный, этот полигамный, этот возбуждается только фактором новизны, потенциалы, степени удовлетворения, у этого такие фантазии, у этого такие и т.д. С одного взгляда.

Это очень важно. Мы очень многого ждем от этого. Наконец это приходит, бывает много разочарований или не очень то что надо, хотелось бы большего, но потом расстраиваются отношения. Следующие отношения – мы уже считаем себя опытными, и опять по рефлекторному кольцу мы получаем то же самое, иногда даже хуже. Ну еще есть порох в пороховницах, в смысле запас во времени, и мы вступаем в следующие отношения… Мужчины становятся угрюмыми, с постоянным упреком на лице, говорят: все бабы… плохие женщины. А женщины – все мужики козлы. Жалуемся: ну где ж нормального мужчину найти, или ну где же встретить порядочную женщину. Смотрите, сколько нас кругом. Мы что, все непорядочные, козлы и плохие женщины? Нет же. Что-то другое нам мешает, что-то другое нам не подходит, не дает создать отношения. Там, где есть состоявшиеся отношения мужчина-женщина, муж-жена, дети, брак – тоже, знаете, любит жену, и она любит мужа, но не все так, как хотелось бы, хотелось бы большего друг от друга. Как этого достичь? Как это сложить, как улучшить, возобновить, дать новое качество сексуальным отношениям?

Я вам гарантирую: вам не надо будет прожить всю жизнь в плохом опыте, вам не надо будет приобретать плохой опыт в следующие три года. Вы с одного взгляда будете видеть весь ваш жизненный сценарий с этим человеком, с одного взгляда...

Время. Субъективная реальность 8 векторов.

Системно-векторная психология Юрия Бурлана.
Время – важный фактор любой человеческой жизни. Ни одного мгновения не купишь ни за какие деньги, ибо оно все равно пройдет. И это только раз. А еще время не повторяется и не возвращается, время – это то, что для человека не имеет ни начала, ни конца. При этом век человека – это только сравнительно краткий отрезок на оси времени.

 

Конечно, предметом веры какого-то числа людей является так называемая машина времени. Но, если подумать, существование такой машины ведет к парадоксам, с которыми жизнь, быть может, и несовместима.

 


вектор 1

В своей работе «Системные описания психологии», изданной в 1984 году, В.А. Ганзен писал: «Любая реальность наблюдаемого мира описывается пространственными, временными, энергетическими и информационными характеристиками».

 

Системно-векторная психология Юрия Бурлана имеет дело с эрогенными зонами человека, которых насчитывает лишь восемь. Каждая мера, или, иначе говоря, вектор, связана со своей эрогенной зоной. Они ограничены рамками Пространства, Времени, Энергии и Информации. Вот их соотношения:

 

— вектор кожный принадлежит внешней части квартели пространства. Экстраверт. Мышление логическое;

 

— вектор анальный принадлежит внутренней части квартели времени. Интроверт. Мышление – системно-аналитическое;

 

— вектор уретральный принадлежит внешней части квартели времени. Экстраверт. Мышление нестандартное, не ограниченное никакими правилами;

 

— вектор мышечный принадлежит внутренней части квартели пространства. Интроверт. Мышление практическое, наглядно-действенное;

 

— вектор зрительный принадлежит к внешней части квартели информации. Экстраверт. Мышление образное;

 

— вектор звуковой принадлежит внутренней части квартели информации. Абсолютный интроверт. Мышление абстрактное;

 

— вектор обонятельный принадлежит внутренней части квартели энергии. Интроверт. Мышление интуитивное, невербальное, стратегическое;

 

— вектор оральный принадлежит внешней части квартели энергии. Экстраверт. Мыслит говорением, так что тип – вербальный.

 

Определим, в каких отношениях со временем находится та или иная мера, или, иначе говоря, тот или иной вектор.

 

Разумеется, все люди живут, подчиняясь временным ритмам. Современный человек до последнего времени не обходился без часов. Правда, с усилением позиций мобильной связи левое запястье теперь чаще всего оказывается свободным. Часы есть везде, они в метро и универсамах, в офисах и дома на кухне, они в школах, поликлиниках, в адвокатских конторах – словом, везде, куда ни кинешь взгляд.

 

Но это часы, а мы говорим об отношениях со временем, и оно у каждого вектора свое.

 

 

Оральный вектор. Человек говорит и так мыслит – у него особенность такая. При развитом состоянии люди с таким вектором говорят красиво и громко. О времени судят по реакции окружающих.

 

Обонятельный вектор. Эти люди мало говорят и если и говорят, то без особого искусства. Зато только у них развита интуиция, и чувство времени у них именно интуитивно.

 

Звуковой вектор. Самый сложный, самый объемный, самый непредсказуемый. Звуковик часто имеет вид отрешенный, он погружен в свои мысли. И жизнь именно звуковик может понимать как мгновение. Никто, кроме него, не знает о Вечности. И не думает о ней. А звуковик думает. Так посудите, до преходящего ли ему?

 


вектор 2

 

Зрительный вектор. Восприятие времени в соответствии с овладевающими эмоциями. И жизнь как миг, и миг как вечность. Скажем, счастье в любви – это миг, хотя это может быть целая жизнь. Счастливая жизнь. Или нападение маньяка – этот миг способен растянуться так, что будет казаться вечным. Так что время для зрительника находится в сугубой зависимости от обстоятельств.

 

Мышечный вектор. Внутренняя часть квартели пространства, как уже было заявлено. Этим все и сказано. Такие люди путают время и пространство. Для них работа от забора до обеда нормальна и ничуть не имеет отношения к юмору.

 

Уретральный вектор. Это экстраверт, устремленный в будущее. Ни прошлого, ни настоящего уретральник не ощущает, для него они не имеют большого значения. Зато стремление вперед, за горизонт – в будущее – является его сутью. Для уретральника время имеет значение именно как преддверие, для него будущее как вечность для звуковика. Только будущее имеет значение. Но ведь без будущего у жизни нет оснований!

 

Анальный вектор. Такой человек ничего не забывает. Ум у него аналитический, и еще прекрасная память. Он медлителен, не торопится дела начинать, не торопится и заканчивать, потому что привык делать все основательно и высокого качества. Он не торопится, а потому частенько оказывается в числе отставших. От времени. Анальный вектор погружен в прошлое.

 

Кожный вектор. Перед нами, наконец, именно тот, чья жизнь размеренная, как часы. Он и время чувствует каким-то шестым своим чувством и, заводя будильник, всегда просыпается за минуту до его звонка. Кожник изобрел часы. Сначала это были теневые часы, потом песочные и далее до наших дней, когда речь уже об особо точном ходе, к примеру, кварцевых часов или атомных. В психическом кожного вектора заложена способность к ограничению, во всем. Ритм хода часов задает гармонию времени, и только кожный вектор способен это ощущать на балансе своего психического.

 


вектор 3

 

* * *

 

Время на протяжении тысяч веков не меняет своего хода. Для нас важно, когда оно есть. Отсутствие времени получило страшное название цейтнот. В шахматах это означает проигрыш вне зависимости от потенциала.

 

Осознанием внутренних процессов в нашем психическом занимается системно-векторная психология Юрия Бурлана. Она свежим ветром врывается в нашу жизнь, позволяя чувствовать эту субстанцию на подсознательном уровне, понимать особенности мировосприятия каждого вектора! Кто знает, может быть, пройдет не так много времени, и мы научимся им управлять?

 

Автор: Юрий Аленко, копирайтер.

 

Статья написана по материалам тренингов по cистемно-векторной психологии Юрия Бурлана.

Просмотров: 333

Поделитесь этим с другими:

В гражданский оборот поступят 7,8 тысячи доз вакцины "Вектора"

https://ria.ru/20201210/vaktsina-1588658208.html

В гражданский оборот поступят 7,8 тысячи доз вакцины "Вектора"

В гражданский оборот поступят 7,8 тысячи доз вакцины "Вектора"

На этой неделе 7,8 тысячи доз вакцины центра "Вектор" поступят в гражданский оборот, заявила вице-премьер РФ Татьяна Голикова. РИА Новости, 10.12.2020

2020-12-10T18:51

2020-12-10T18:51

2020-12-10T18:51

распространение коронавируса

коронавирус в россии

коронавирус covid-19

здоровье - общество

татьяна голикова

общество

/html/head/meta[@name='og:title']/@content

/html/head/meta[@name='og:description']/@content

https://cdn25.img.ria.ru/images/07e4/0c/03/1587562519_0:97:3072:1825_1920x0_80_0_0_ef0c7bb857fe327112cdbfd90489fe2b.jpg

МОСКВА, 10 дек - РИА Новости. На этой неделе 7,8 тысячи доз вакцины центра "Вектор" поступят в гражданский оборот, заявила вице-премьер РФ Татьяна Голикова. "Наряду со "Спутником V" на этой неделе в гражданский оборот поступят 7,8 тысячи доз вакцины "ЭпиВакКорона" государственного научного центра "Вектор", - сказала Голикова в ходе брифинга.

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2020

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdn22.img.ria.ru/images/07e4/0c/03/1587562519_157:0:2888:2048_1920x0_80_0_0_26dbf8831dffa183dc424a2dea6ff856.jpg

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

коронавирус в россии, коронавирус covid-19, здоровье - общество, татьяна голикова, общество

Читать онлайн «Сны подрастающего человечества» - автор Юрий Аленко

Сны подрастающего Человечества

Системно-векторную психологию, это детище Юрия Бурлана, многие за науку не почитают. Да что там, о науке этой не знают! Но все же путь себе СВП проторила. Суть науки СВП в том, чтобы доказать, что человек приходит в мир только для того, чтоб получать от жизни удовлетворение. Человек появляется на свет для того, чтоб стать счастливым!

Введя запрос в Яндекс, без труда получаем ссылки на портал Юрия Бурлана. На портале есть раздел «Форум», где можно почерпнуть информацию, и её много. Речь чаще всего о векторах…

Время. Субъективная реальность 8-ми векторов

Время — важный фактор любой человеческой жизни. Ни одного мгновения не купишь ни за какие деньги, ибо оно все равно пройдет. И это только раз. А еще время не повторяется и не возвращается, время — это то, что для человека не имеет ни начала, ни конца. При этом век человека — это только сравнительно краткий отрезок на оси времени.

Конечно, предметом веры какого-то числа людей является так называемая машина времени. Но, если подумать, существование такой машины ведет к парадоксам, с которыми жизнь, быть может, и несовместима.

В своей работе «Системные описания психологии», изданной в 1984 году, В. А. Ганзен писал: «Любая реальность наблюдаемого мира описывается пространственными, временными, энергетическими и информационными характеристиками».

Системно-векторная психология Юрия Бурлана имеет дело с эрогенными зонами человека, которых насчитывает лишь восемь. Каждая мера, или, иначе говоря, вектор, связана со своей эрогенной зоной. Зоны ограничены рамками Пространства, Времени, Энергии и Информации. Вот соотношения:

— вектор кожный принадлежит внешней части квартели пространства. Экстраверт. Мышление логическое;

— вектор анальный принадлежит внутренней части квартели времени. Интроверт. Мышление — системно-аналитическое;

— вектор уретральный принадлежит внешней части квартели времени. Экстраверт. Мышление нестандартное, не ограниченное никакими правилами;

— вектор мышечный принадлежит внутренней части квартели пространства. Интроверт. Мышление практическое, наглядно-действенное;

— вектор зрительный принадлежит к внешней части квартели информации. Экстраверт. Мышление образное;

— вектор звуковой принадлежит внутренней части квартели информации. Абсолютный интроверт. Мышление абстрактное;

— вектор обонятельный принадлежит внутренней части квартели энергии. Интроверт. Мышление интуитивное, невербальное, стратегическое;

— вектор оральный принадлежит внешней части квартели энергии. Экстраверт. Мыслит говорением, так что тип — вербальный.

Определим, в каких отношениях со временем находится та или иная мера, или, иначе говоря, тот или иной вектор.

Разумеется, все люди живут, подчиняясь временным ритмам. Современный человек до последнего времени не обходился без часов. Правда, с усилением позиций мобильной связи левое запястье теперь чаще всего оказывается свободным. Часы везде, они в метро и универсамах, в офисах и дома на кухне, они в школах, поликлиниках, в адвокатских конторах — словом, везде, куда ни кинешь взгляд.

Но это часы, а мы говорим об отношениях со временем, и оно у каждого вектора свое.

8 векторов = 8 ощущений времени

Оральный вектор. Человек говорит, и так мыслит — у него особенность такая. При развитом состоянии люди с таким вектором говорят красиво и громко. О времени судят по реакции окружающих.

Обонятельный вектор. Эти люди мало говорят и если и говорят, то без особого искусства. Зато только у них развита интуиция, и чувство времени у них именно интуитивно.

Звуковой вектор. Самый сложный, самый объемный, самый непредсказуемый. Звуковик часто имеет вид отрешенный, он погружен в свои мысли. И жизнь именно звуковик может понимать как мгновение. Никто, кроме него, не знает о Вечности. И не думает о ней. А звуковик думает. Так посудите, до преходящего ли мгновения ему?

Зрительный вектор. Восприятие времени в соответствии с овладевающими эмоциями. И жизнь как миг, и миг как вечность. Скажем, счастье в любви — это миг, хотя это может быть целая жизнь. Счастливая жизнь. Или нападение маньяка — этот миг способен растянуться так, что будет казаться вечным. И время для зрительника находится в сугубой зависимости от обстоятельств.

Мышечный вектор. Внутренняя часть квартели пространства, как уже было заявлено. Этим все и сказано. Такие люди путают время и пространство. Для них работа от забора до обеда нормальна и ничуть не имеет отношения к юмору.

Уретральный вектор. Это экстраверт, устремленный в будущее. Ни прошлого, ни настоящего уретральник не ощущает, для него они не имеют большого значения. Зато стремление вперед, за горизонт — в будущее — является его сутью. Для уретральника время имеет значение именно как преддверие, для него будущее как вечность для звуковика. Только будущее имеет значение. Но ведь без будущего у жизни нет оснований!

Анальный вектор. Такой человек ничего не забывает. Ум у него аналитический, и еще прекрасная память. Он медлителен, не торопится дела начинать, не торопится и заканчивать, потому что привык делать все основательно и высокого качества. Он не торопится, а потому частенько оказывается в числе отставших. От времени. Анальный вектор погружен в прошлое.

Кожный вектор. Перед нами, наконец, именно тот, чья жизнь размеренная, как часы. Он и время понимает каким-то шестым своим чувством и, заводя будильник, всегда просыпается за минуту до звонка. Кожник изобрел часы. Сначала это были теневые часы, потом песочные и далее до наших дней, когда речь уже об особо точном ходе. В психике кожного вектора заложена способность к ограничению во всем. Ритм хода часов задает гармонию времени, и только кожный вектор способен это ощущать на балансе психического.

* * *

Время на протяжении тысяч веков не меняет своего хода. Для нас важно, когда оно есть. Отсутствие времени получило страшное название цейтнот. В шахматах это означает проигрыш вне зависимости от потенциала.

Осознанием внутренних процессов в нашем психическом занимается системно-векторная психология Юрия Бурлана. Она свежим ветром врывается в нашу жизнь, позволяя чувствовать эту субстанцию на подсознательном уровне, понимать особенности мировосприятия каждого вектора! Кто знает, может быть, пройдет не так много времени, и мы научимся им управлять?

8 оснований для приязни

Слово «неприязнь» негативно. А что такое приязнь? В словаре Даля определение этого слова есть: «Доброжелательность, благодушие, любовь, милость». И что же изначально дано нам в подсознании: приязнь к соседу или таки неприязнь?

В соответствии с основами системно-векторной психологии Юрия Бурлана, человек, впервые ощутивший ближнего, сразу почувствовал к нему неприязнь. Эта истина принимается с трудом. Мы ведь воспитаны на том, что человек человеку друг, товарищ и брат. Как же при этом согласиться с тем, что к ближнему изначально тебе дано испытывать именно неприязнь? И откуда она берётся?

Основание первое. Кожный вектор

Неприязнь — не что иное, как естественная самозащита. Изначально ближний — это твой конкурент. С претензиями на пищу, на тепло, на внимание. Всё это у него, возможно, даже, есть, а счастья, почему-то нет… Вот это состояние отсутствия счастья и есть главная причина неприязни. А поскольку счастье у каждого своё, то и основания для неприязни соответственно такие же. А уж если нет даже необходимого…

Из этого следует, что приязнь дело нелёгкое и свидетельствует, во-первых, о собственном счастье и полноте реализации, а во-вторых, о понимании места других людей в социуме. В связи с последним особенно важно учитывать вектора.

«Кожная» неприязнь проявляется как зависть к успехам в карьере, бизнесе. Чтобы устранить конкурента, Кожник способен к различного рода подвохам. Кожному присуща неприязнь ко всем, кто ниже по статусу или достатку, с одновременным стремлением водить дружбу со статусными и успешными, исключительно с точки зрения «пользы-выгоды», и зависти к успеху.

Особую неприязнь кожный человек испытывает к уретральному. Уретральник кожника, что называется, «в упор не видит». Кожник всю жизнь добивается лидерских позиций, а уретральнику это дано от рождения. Ну как такое стерпеть?

В свою очередь, к кожным людям испытывают неприязнь все остальные, за их стремление ограничивать в потреблении, в том числе законодательно. Кстати, кожник в «архетипичной» стадии развитости не способен ограничить ни других, ни себя.

Кожа отделяет любого из нас от мира, служа естественной защитой. Кожная мера формирует адаптированных к ландшафту подвижных предприимчивых индивидов, которые по жизни призваны выполнять видовую роль добытчиков. Эти люди умеют приспособиться во всевозможных обстоятельствах, они ловки, они изобретательны.

Добытого мамонта племя съедает без остатка. Всё! Мяса нет, надо добывать еще. А кому? Конечно, охотникам-алиментаторам. Обходить реку во время охоты долго, стадо мамонтов за это время далеко уйдёт… и кожный изобретатель сооружает первый мост, и колесо — для удобства транспортировки мяса в пещеру. Суть кожного вектора — закон, ограничение, экономия, изобретение. В первую очередь для себя, но ведь и для стаи тоже!

Разве это не основание для приязни? А мясо, добытое, доставленное и оставленное про запас? Ведь еда — это жизнь. Без еды, без сохранения запасов энергии жизни нет.

Приязнь или неприязнь. Неприязнь — это изначально. А приязнь — то, что бывает результатом проникновения нуждами ближнего. Ты ешь мясо добытого тобой мамонта, утоляешь голод. Но этим мясом питается и каждый в племени, потому что ты, охотник, принес мясо для всех. Ты проникся общей необходимостью. И в этом основание приязни к тебе у племени.

Времена меняются — задачи усложняются. Но добытчики остаются добытчиками. Не меняется основание для приязни. Чем более добытчики успешны в своей области, чем более они развиты, чем более их развитость направлена во благо социума, а не только себе, чем более востребованы кожники социумом, тем меньше у них оснований для неприязни к социуму. К кому мог испытывать неприязнь Стив Джобс, например? Он кому-то завидовал? Вряд ли. Кто-то мог его подвинуть? Тоже вряд ли. Ну, а если кто-то завидовал Джобсу, то вряд ли его это заботило.

Основание второе. Анальный вектор

По видовой роли он, анальник, — хранитель домашнего очага, тыловик, учитель, а также мастер золотые руки. Перфекционист. Всё делает основательно, качественно. И к другим предъявляет такие же требования. Ошибки ищет во всём — анальное психичекое так устроено. «Всё хорошо, а вот тут запятую не поставил, Вася, недоработочка, недосмотр!» Тяжело анальнику видеть неидеально сделанную работу! Кто ж такое выдержит? Только очень развитый человек.

Либидо мощное, двойное (недифференцированное). Ему небом дана тяга и к женскому полу, и к мужскому. Но тягу к мальчикам ингибирует и становится наставником, учителем. А вот когда анальный человек не развит и не реализован в социуме, когда нет у него женщины и мощнейшее либидо не получает необходимой разрядки и накапливаются фрустрации, все в полной мере могут ощутить неприязнь анального человека.

Тут уж анальный человек недостатки не ищет, сам их создаёт. Критиканствует, и по каждому вопросу своё ИМХО высказывает. Не важно, что вопросом он не владеет. Плохо человеку, а выскажи он грязную критику, вроде как легче становится. Правда, ненадолго. И копятся, копятся фрустрации сексуальные, перерастая в гомосексуальные. Неприятная история.

…Природа ничего не дает зря. А то, что дано тебе в подарок, лучше всего отрабатывать. Анальнику природой задано хранить и передавать информацию. Находить ошибки, для того, чтобы улучшить сделанное. Чистоту блюсти, традиции соблюдать. Накопленные человечеством знания сохранять и новым поколениям передавать.

Итак, анальный человек в чистом виде — это верный муж, хороший любящий отец и природный учитель. Он передает информацию, которую тщательно собирает и хранит. У людей с анальным вектором в психике великолепная память и так называемый аналитический ум.

Основание для приязни — это передача знания. Высочайший профессионализм, порядочность, чистоплотность во всех смыслах. Анальник не обязательно в жизни реализуется учителем. Среди представителей анального вектора есть и замечательные художники, и владеющие искусством выдувания стекла, и токаря, и строители. В общем, мастера своего дела, профессионалы.

Основание третье, уретральное

Уретральный вектор природа дает немногим. Рождается их около 5%, а выживает и того меньше (в пределах 1%). Цифры известные, достаточно полистать страницы портала системно-векторной психологии Юрия Бурлана.

Чем же отмечен уретральник? Уретральная мера — единственная из восьми, стремящаяся «вовне», то есть не на себя любимого, а на интересы других людей, на интересы «стаи».

Уретральник живет для мира, для того, чтобы мир был в будущем. Ограничений, накладываемых чем угодно и кем угодно, уретральник принять не может. Любое ограничение уретральник, так или иначе, обходит. Он сам себе власть.

И другим власть. Ранг у него высший по природе. Но это означает лишь то, что он в силу своей власти себе берёт в последнюю очередь. Другим отдаёт по нехваткам. Уретральники — это лучшие правители. Социальные гарантии при них самые большие. А вот преступлений при уретральных правителях меньше.

Уретральник всегда отдает. Это у остальных семи векторов стремление взять себе, а в уретральной мере важно отдать. Разве к отдающему может быть неприязнь? Но вопрос возрастающего человеческого эгоизма — уже особая тема.

Основание четвертое, мышечное

Обладателей мышечного вектора в психике много, в чистом виде их примерно 38 процентов, а в сочетаниях — целых 95. Даже в состоянии война они испытывают ярость, но не неприязнь. Разве что к «чужим»… Для мышечника не существует «я», зато есть «мы». Причем есть «Мы — свои» и «Мы — чужие».

А вот к мышечникам могут испытывать неприязнь другие люди, особенно с «верхними векторами». Мышечника считают простоватым, а порой называют грубым словечком «быдло». Забывая, что мышечники — это кормильцы и генофонд нации.

Мышечники несут бремя тяжелого физического труда. В этом их счастье. Избавьте мышечника от необходимости работать — и он станет несчастным. Не будь мышечников, не было бы и хлеба на столах. Не было бы и домов каменных, да никаких бы не было вообще. Всё живет благодаря их созидательной силе.

А в тяжёлую военную годину они идут на смерть, защищая родину и всех, кто остался за могучей спиной. Это пахари и богатыри. Оплот и основа демографии любой нации.

Основание пятое, зрительное

Фи, какие неприятные эти снобы и истерики. Зрительники неразвитого вектора всего боятся, и все-то им неприятно, не эстетично и опасно.

Если же зрительный вектор развит, человек через сострадание забывает свой страх и получает способность любить. Зрительники (не отдельные персоналии, а все, что были от первобытных амазонок сопровождавших мужчин на войне и охоте, до нынешних актрис, врачей, то есть вся зрительная мера) создали культуру. Это они когда-то ограничили каннибализм. Это кожно-зрительные девочки на фронтах Великой Отечественной выносили раненых с поля боя, не делая порой разницы между своими и чужими.

Зрительный вектор породнил людей с любовью. Именно развитие зрительного вектора дарило миру образцы любви.

Основание шестое, оральное

Интересно, вам понравится, когда кто-либо подойдет сзади и проорет: «Здорово!» — да еще со всего маха хлопнет вас по ушам ладонями? А потом сразу станет ерничать, скабрезничать, выражать себя нецензурно и всегда подхихикивать?

Это вот и есть оральник. Он думает говорением — такой тип психики у него. Когда однажды поймете это, человек станет вам ближе, понятнее. И даже мат оральника в целом беззлобен и, если хотите, несет в себе некую просветительскую функцию, у которой первоначальная задача — дать понять, откуда берутся дети.

У орального человека, как говорится, что на уме, то и на языке, только наоборот. Что на языке, то и на уме. Если знать про эту особенность, человек становится понятен и близок. Да и вообще, он такой шутник и балагур, с ним весело и никогда не скучно. Может быть к такому милому шутнику неприязнь? Разве что осторожность. Секретов не рассказывать. Сплетен не слушать. А вот к развитому, как раз лучше прислушаться. Умные вещи порой проговаривает. Ну, если вы его уже понимаете.

Основание седьмое, обонятельное

Самый сложный в плане приязней — это именно обонятельный вектор. Все мы бессознательно воспринимаем друг друга на уровне… запахов, ну, или феромонов. А обонятельник — это «царь бессознательного». И в своем царстве он про каждого всё знает. Для человека с таким вектором все в мире воняет. Не так уж важно, что именно воняет: экскременты или духи Шанель №5 — все для обонятельной меры одинаково ужасного действия, которое и определено словом: Воняет! Заметьте, не пахнет, а именно воняет, смердит! И люди тоже для него воняют. Особенно недоразвитые. И вообще все люди для обонятельника — ниже него. Даже вождя он лишь терпит, как гаранта защищённости. Не любит он людей, неприятны они ему. И это взаимно.

Обонятельника мало того что не любят, его боятся. Но и здесь наблюдается одна интересная закономерность — чем более человек развит, тем меньший страх и неприязнь он испытывает к обонятельнику. И не случайно. Обонятельник, может, и терпит людей с трудом, но выжить без них, без стаи, в одиночку, не может, А потому, ради собственного сохранения и всю стаю спасёт. Это он своим носом опасность чует. Не будь обонятельника и стая пропадёт. А для стаи важно чтобы что? Чтобы каждая «особь» была максимально развита и реализована «наружу», на пользу той самой единице общества под условным названием «стая».

Основание восьмое, звуковое

Мысль мной думает

Пожалуй, самый сложный и даже проблемный вектор — звуковой. Звуковой вектор — это то, что побуждает человека задумываться о глобальном смысле жизни. Звуковик всегда немножко не от мира сего, рассеян, погружен в себя или в решение какой-нибудь очень важной для человечества проблемы. Пусть далеко не все понимают важность теоремы Пуанкаре, но она существует.

Посмотрите на молодого человека, который, как вам кажется, не проявляет к вам должного внимания («неприятный тип!») — видите, он рассеян, взгляд блуждающий — он вас не видит, потому что занят своими мыслями.

Звуковики, как и все другие люди, могут быть развитыми и не очень. Развитые звуковики — это гении. Неразвитые — морально-нравственные дегенераты, не ощущающие других людей как живых. Люди лишь продолжение его или виртуального мира. Их можно убить, сжечь…. И при этом так ничего и не почувствовать. Но такими звуковики становятся не сами по себе. Такими их делают родители и общество.

Всё, что им от нас нужно, — это тишина. И тогда выведут мир на новый, более высокий и гуманный уровень развития человечества.

Мысль — это оргазм мозга. Тот, кто способен его испытывать, получает удовольствие, а тот, кто не способен, вынужден имитировать.

Если вы поймете других людей, возможно, какие-то из них станут вам ближе, и вы почувствуете к ним приязнь, которую зрительные люди называют (ощущают как) симпатией или даже любовью… Ну, и в целом вы, понимая других, будете способны к терпимости.

Наша чужая жизнь

Системно-векторная психология Юрия Бурлана предлагает дифференцировать людей по заданным им от природы психическим качествам. Имея все основания для такого подхода, Юрий Бурлан показывает, что соответственно заложенным психическим свойствам люди отличаются один от другого, как в животном мире отличаются птицы от рыб, хищники — от травоядных, отличия разительны, и, как правило, в голову не приходит так различать людей.

Восемь мер, восемь векторов, восемь эрогенных зон в различных сочетаниях формируют человека. Четыре из них — нижние меры, четыре — верхние. Нижние эрогенные зоны отвечают за проявления либидо. Верхние вектора, соответственно, определяются зрительной, обонятельной, оральной и звуковой мерами. Узнать о проявлении векторов у людей можно на одном из проводимых бесплатно тренингах по системно-векторной психологии Юрия Бурлана. Тренинги проводятся регулярно, желающие без проблем попадут на него.

Рационализации

Известно давно: у кого что болит, тот про то и говорит. Каждый, иначе говоря, измеряет мир и людей по себе. Зрительнику все вокруг кажутся добрыми, сострадательными, а анальнику кажется, что мир катится в пропасть, что все с годами становится хуже. Звуковик находит окружающее слишком шумным и грубым, ему надо, чтобы шум не вторгался в его внутренний мир, чтоб все было тихо. И каждый полагает, что именно он имеет полное представление о справедливом устройстве ландшафта.

Не имея системного представления о мире, человек вооружается рационализациями и оказывается, образно говоря, у разбитого корыта. Объяснялки идут вразрез с истинными желаниями. И вот о проявлении истинности собственных желаний и судит системно-векторная психология.

Дело в том, что человек, согласно заложенному в нем векторальному набору, имеет некоторые желания, которых не осознает. При этом у любого человека осознаваемые желания и неосознаваемые (подсознательные) могут оказаться совершенно различными. В итоге вместо радости от жизни получаем напряжения, нестыковки, постоянную борьбу с самим собой.

Спору нет, принцип «Сопротивляйся» — велик и действенен. Но зачем же проламывать стену, если рядом в стене имеется распахнутая настежь дверь? Легко представить птичку, старающуюся, нырнув в воду, проплыть стометровку. Или рыбку, изо всех сил работающую плавниками на манер птичьих крыл в стремлении подняться над морем. Но все-таки животные не берут на себя исполнение не свойственных им функций. Отчего же человек тужится в стремлении нести непосильное бремя чужой роли?

Жизнь дана человеку для того, чтоб получать от нее удовольствие, но никак не наоборот. Проживая жизнь без удовольствия, человек ничего не дает миру и покидает его, не выполнив своей роли. Про жизнь, проведенную без удовольствия, говорят, что прожита она впустую. А получая от жизни радость, человек и покидает ее с легким сердцем.

Не понимая своих истинных желаний, человек все же стремится желания «свои» объяснить в рамках известных ему понятий — рационализирует. Но зачастую ошибается, подменяя одно другим. Когда человек подчиняется рационализациям, не осознавая своих истинных желаний, он выполняет несвойственные его психике задачи, и, по сути, страдает, не получая от жизни удовольствия. Он просто живет не своей жизнью.

А зачем она ему такая? В разное время про эту ситуацию ходят анекдоты. Но посмеяться, и ничего не изменить, не исправить дела к радости, значит, вовсе не иметь чувства юмора.

Жизнь пролетает, как пуля сквозь голову… Ты еще ничего не успел понять, а тебя уже нет

Итак, пройдемся по векторам и по бездарно проживаемым жизням.

О видовой роли

Представим вождя. Это человек, которому природой задан уретральный вектор. Для него в радость, когда он живет не для себя. Но вождь имеет право, он распределяет добытое племенем. Отдает «по нехваткам»: тебе надо столько-то — получи! Тебе столько? Получи! А тебе так много не надо, получи необходимое, и не отсвечивай!

Вряд ли можно уретральнику навязать роль, ему не свойственную. Но подавление истинных потребностей сформирует ошибочный сценарий жизни — скажем, уведет в криминальную среду. Нужно особо отметить, что амбициозность кожника уретральной мере чужда, амбициозность в уретральнике выглядит абсурдом. В любом случае, роль, вектору не свойственная, может принести его обладателю только страдание. Другое дело, что представители разных мер в психике по-разному могут освобождаться от навязываемых чужих ролей.

Теперь предположим, перед нами кожная мера. У кожного вектора амбициозность, что называется, в крови. Но когда амбиции приведут его на самую вершину, когда он станет независим, кожник потеряет устойчивость в мире. Для таких людей организуют даже службу доминантриссы, благодаря действию которой хотя бы раз в неделю человека опускают ниже рангом. Потому что не его роль — быть вождем, она ему не по силам!

Для чего амбиции кожной мере? А как иначе? С таким-то куцым либидо кто из женщин, тех самых кожно-зрительных красавиц, обладание которыми столь престижно, обратит внимание на кожника, если у него не будет чего-то в противовес? В противовес низкому либидо у кожной меры может оказаться высокое положение в обществе. Вот красавице и основание для брака по счастливому расчету. А для кожника — для продолжения рода.

У анальной меры мощное двойное недифференцированное либидо. Это означает, что сексуальная тяга может проявляться у таких людей и к противоположному, прекрасному полу, и к своему — к мальчикам. Тяга к мальчикам заложена для передачи молодому поколению опыта старших. Так природа задает развитие человечества. Имеющие анальный вектор — прекрасные учителя, аналитического ума и феноменальной памяти. Анальный вектор — это чистоплотность и верность.

Попробуем представить себе человека, у которого в психике анальная мера, но который старается выполнять не свою видовую роль, а роль того же кожного вектора. Кожной меры человек — это ловкач, это менеджер, это человек, мгновенно на что угодно реагирующий. Инженерия, юриспруденция — это все занятия для кожной меры. Кожники подвижны и априори приспособлены на ландшафте жизни.

Как проявляет себя анальная мера? Это неспешные, дотошные, золотых рук мастера. В стремлении сделать сотворяемое совершенным, они никуда не торопятся. Анальному человеку будущее — источник стрессов; он всегда обращен к прошлому, в прошлом для анальной меры заключены все ценности.

А выполняя видовую роль кожной меры, анальник неизбежно испытывает дискомфорт, страдание, и в итоге терпит фиаско — бизнес не складывается, коллектив неуправляем и т. д. И то же самое будет с кожником: тужится быть терпеливым и дотошным, между тем как природой ему такого не дано! И потому тренинги типа «Стань успешным за 21 день!» — не для анальников. Но и кожнику тренинг без надобности, потому что он и так всюду успевает — это в его психике.

Мышечный вектор базируется на общности. Человек, имеющий в психическом этот вектор, никогда почти не говорит «Я», зато всегда — «Мы». Мышечник не отличает времени от пространства. Попробуйте мышечника заставить так же чувствовать время, как чувствует кожник, и получите мышечный стресс, ступор. Мышечнику проще работать от рассвета до приезда самосвала с бетоном, не сверяясь поминутно с часами, висящими у него не запястье.

Ну, и если поджарый субтильный кожник возьмется выполнять тяжелую физическую работу, с которой без проблем справляется Мышечник, он надорвется. Это не его роль. Он, кожник, исстари — охотник, призванный добывать. А переносить тяжести — дело мышечного большинства.

Про успех и успешность

Мир в своей необъятности может приносить и радость и несчастье. Он полон неуспевающих. Успешных в мире куда меньше. А почему?

Да потому, что люди подчас заняты не своим делом, проживают не свою жизнь, и не могут получить от нее удовольствия. Системно-векторная психология Юрия Бурлана, ни много ни мало, помогает сделать людей счастливыми. Ведь осознавая свои скрытые желания, давая им свободу реализоваться в мире, каждый сообразно своим мерам получает от жизни удовольствие. Внося вклад в копилку счастья. У счастья копилка есть. Несчастья пропадают в лете бесследно.

Прежде всего, хочу отметить, что орфографические ошибки сделаны мной намеренно. За образец взял рассказ А. Чехова «Письмо к ученому соседу». И, наверное, нужно сказать, о чем речь.

Юрий Бурлан, наш великий соотечественник, проживающий в настоящее время в американском городе Нью-Йорк, является автором Системно-векторной психологии. У него довольно обширный по тематике этой науки портал. На портале можно найти историю создания Системно-векторной психологии. Так же можно отыскать информацию о том, что всего векторов восемь.

Юрий Бурлан часто говорит о тех, кто, предлагает платить за знания того, о чем они, по существу, знают так мало, что их действия иначе не назовешь, как профанацией.

Профанатор

Село Профанство-буквоедово

Дорогие люди! Энтузиасты и энтузиастки!

Извените не чаю имен ни отчеств, ничего что так я за просто?

До поры живу себе и знаете по временам все думаю. Несмотря что сельский житель.

А у вас слышно обчество завилось, крутящее окола психо-логии и психо-патии с невропатологическими случаями всякими. Очинно меня всегда занимает. Почему? Потому что мыслями простираюсь.

Интарнет бают развелся уже далее некуды, но я себе как думаю? Он не просто завелси, а причина тому имеется, и в Писании наверняка про то сказано. Так чего теперь рассуждать? Ежли ты ученый человек, ну, или лаборант какой, так должон смириться и внимать. А и то ведь: картинки там, а иные презабавныи! Верно?

Все что не делается — во благо и по воле Его, али разве бывает не так? Это ведь известно все. Ну, а что неизвестно пока, так для того и ученые и ваши эти обчества, чтоб открывать.

Но вы-то слышно вектора стали обыяснять, и на этот счет могу и должон зделать вам замечательную запятую!

Прежде знайте что Дикарт их придумал, у этого славного мужа давно почившего в бозе и славе математической были соображения, а осталося афторское право. И никто акромя его не имеет. И потому называть векторами хотя что не относящее к математике нельзя и преследуется Интерполом. Ай не страшно?

Но я-то с вами со всеми соглашуся здесь. Потому где ж его сыскать, когда он давно уж помер, Дикартушко? Кто может разрешение поставить? А некто! И потому оставим в покое эту склизкую тему. Но у меня вопрос.

Вот вы в своих ученых учениях замечаете и настаиваите на восьмивекторности, но разве такое может быть посудите? Не десять и не двенадцать, даже не любимое Господом нашим Иисусом Христом семь, а именно восемь! Вы что же, милыя, не арифметике училися в школах, колледжах и академиях с ниверситетами и ниверситетками? Не гоже! Не до исследовали!

И потом.

Кожный вектор? — это куда ни шло, но вот анальный! — это для кого ж сие? Для издевательств и глумлениев? Предлагаю предложение основанное на умственности: анальный переименовать в аналитический, а кто буде смущаем, то пусть уже синтетическим зовет сей вздорный вектор!

Теперя. Уретральный — вы что же, совсем уже меня смехом хочете со свету сжить, а? Переименовать! Не чиняся! К примеру, на мужеский: прилично и слуху приятно, а языку — более произносительно.

Координаты и векторы. Исчерпывающий гид (ЕГЭ — 2021)

Нам нужно найти угол между прямыми \( \displaystyle SB\) и \( \displaystyle CD\).

Таким образом, наша задача сводится к поиску координат точек: \( \displaystyle S,B,C,D\).

Координаты последних трех мы найдем по маленькому рисунку, а коодинату вершины \( \displaystyle S\) найдем через координату точки \( \displaystyle O\).

Работы навалом, но надо к ней приступать!

a) Координата \( \displaystyle D\): ясно, что ее аппликата и ордината равны нулю.

Найдем абсциссу. Для этого рассмотрим прямоугольный треугольник \( \displaystyle EDP\). Увы, в нем нам известна только гипотенуза, которая равна \( \displaystyle 1\). Катет \( \displaystyle DP\) мы будем стараться отыскать (ибо ясно, что удвоенная длина катета \( \displaystyle DP\) даст нам абсциссу точки \( \displaystyle D\)). \circ \)

Опять-таки, при решении этой задачи я не использовал никаких изошренных приемов, кроме формулы суммы углов правильного n-угольника, а также определения косинуса и синуса прямоугольного треугольника.

3. Поскольку нам опять не даны длины ребер в пирамиде, то я буду считать их равными единице.

Таким образом, поскольку ВСЕ ребра, а не только боковые, равны между собой, то в основании пирамиды и меня лежит квадрат, а боковые грани – правильные треугольники.

Изобразим такую пирамиду, а также ее основание на плоскости, отметив все данные, приведенные в тексте задачи:

Веб-сайт класса физики

Сложение вектора: 6 + 8 =?

Большинство из нас привыкло к следующему виду математики:

6 + 8 = 14.

Тем не менее, нас очень беспокоит этот вид математики:

6 + 8 = 10

и

6 + 8 = 2

и

6 + 8 = 5.

Когда мы изучаем физику и приближаемся к задаче сложения векторных величин, мы вскоре осознаем тот факт, что сложение двух векторных величин с величинами 6 и 8 не обязательно приведет к ответу 14.Правила сложения векторных величин отличаются от правил арифметического сложения двух величин. Таким образом, сумма векторов с величиной 6 + 8 не обязательно будет равна 14.

Векторы - это количества, которые включают направление. Таким образом, при добавлении двух или более векторов необходимо учитывать, что добавляемые количества имеют характеристику направленности. Существует ряд методов для выполнения сложения двух (или более) векторов. Наиболее распространенным методом является метод "голова к хвосту" сложения векторов.Используя такой метод, первый вектор масштабируется в соответствующем направлении. Затем рисуется второй вектор так, что его хвост располагается в головке (векторная стрелка) первого вектора. Сумма двух таких векторов затем представляется третьим вектором, который простирается от хвоста первого вектора до начала второго вектора. Этот третий вектор известен как результат - это результат сложения двух векторов. В результате получается векторная сумма двух отдельных векторов.Конечно, фактическая величина и направление результирующего зависит от направления, которое имеют два отдельных вектора.

Этот принцип сложения векторов голова к хвосту проиллюстрирован на анимации ниже. В каждом кадре анимации вектор с величиной 6 (зеленый) добавляется к вектору с величиной 8 (синим цветом) . Результирующий изображается черным вектором, который простирается от хвоста первого вектора (8 единиц) до начала второго вектора (6 единиц).

Как видно из этой анимации, 8 + 6 может быть равно 14, но только если два вектора направлены в одном направлении. Все, что можно сказать наверняка, это то, что 8 + 6 может складываться в вектор с максимальной величиной 14 и минимальной величиной 2. Максимум достигается, когда два вектора направлены в одном направлении. Минимум s, полученный, когда два вектора направлены в противоположном направлении.


Для получения дополнительной информации о физических описаниях движения посетите The Physics Classroom Tutorial.Подробная информация доступна по следующим темам:

Векторы и направление

Сложение векторов

Результат

Величина и направление векторов

Величина вектора

Величина вектора п Q → это расстояние между начальной точкой п и конечная точка Q . В символах величина п Q → записывается как | п Q → | .

Если заданы координаты начальной и конечной точек вектора, то Формула расстояния можно использовать для определения его величины.

| п Q → | знак равно ( Икс 2 - Икс 1 ) 2 + ( y 2 - y 1 ) 2

Пример 1:

Найдите величину вектора п Q → чья начальная точка п Я сидел ( 1 , 1 ) и конечная точка находится в Q Я сидел ( 5 , 3 ) .

Решение:

Используйте формулу расстояния.

Подставьте значения Икс 1 , y 1 , Икс 2 , а также y 2 .

| п Q → | знак равно ( 5 - 1 ) 2 + ( 3 - 1 ) 2 знак равно 4 2 + 2 2 знак равно 16 + 4 знак равно 20 ≈ 4. 5

Величина п Q → около 4.5 .

Направление вектора

Направление вектора - это мера угла, который он образует с горизонтальная линия .

Для определения направления вектора можно использовать одну из следующих формул:

загар θ знак равно y Икс , где Икс горизонтальное изменение и y это вертикальное изменение

или же

загар θ знак равно y 2 - y 1 Икс 2 - Икс 1 , где ( Икс 1 , y 1 ) начальная точка и ( Икс 2 , y 2 ) конечная точка.

Пример 2:

Найдите направление вектора п Q → чья начальная точка п Я сидел ( 2 , 3 ) и конечная точка находится в Q Я сидел ( 5 , 8 ) .

Даны координаты начальной и конечной точек.Подставьте их в формулу загар θ знак равно y 2 - y 1 Икс 2 - Икс 1 .

загар θ знак равно 8 - 3 5 - 2 знак равно 5 3

Найдите обратный загар и воспользуйтесь калькулятором.

θ знак равно загар - 1 ( 5 3 ) ≈ 59 °

Вектор п Q → имеет направление около 59 ° .

векторов (PreCalculus Curriculum - Unit 8) DISTANCE LEARNING

Vectors (PreCalculus Curriculum - Unit 8) DISTANCE LEARNING

UPDATE: Этот модуль теперь содержит документ Google с:

(1) Ссылки на обучающие видео. Видео создаются коллегами-преподавателями для своих учеников с использованием заметок из модуля. Пожалуйста, сначала просмотрите, прежде чем поделиться со своими учениками. Они не всегда могут быть идеальными, но мы делаем все возможное, чтобы помочь там, где это возможно, в очень ограниченное время.

(2) Ссылка на версию модуля в Google Slides. Каждая страница устанавливается в качестве фона в Google Slides. Нет текстовых полей; это PDF-файл в Google Slides. В настоящее время мы не можем создавать текстовые поля, но надеемся, что это сэкономит вам шаг, если вы хотите использовать их в слайдах!

------------------------------------------------ -------------------------------------------------- -----------------------

Этот комплект включает заметки, домашние задания, две викторины, учебное пособие и модульный тест, которые охватывают следующие темы:

• Именование векторов

• Типы векторов (эквивалентные, параллельные, противоположные)

• Проверяющие векторы эквивалентны

• Компонентная форма вектора

• Определение величины и направления

• Операции с векторами

• Единица Векторы

• Стандартные единичные векторы; Запись векторов в виде линейной комбинации

• Запись вектора в тригонометрической форме

• Приложения: векторы результирующей силы и скорости

• Горизонтальные и вертикальные компоненты вектора

• Точечные произведения

• Ортогональные векторы

• Нахождение Угол между векторами

• Векторные проекции

• Приложения векторных проекций: сила и работа

• Трехмерная система координат

• Векторы в трехмерном пространстве: форма компонентов, линейные комбинации, величина, операции, точечные произведения и угол между Векторы

НОВИНКА: оценки теперь можно РЕДАКТИРОВАТЬ! Теперь вы можете легко создать несколько версий или настроить под свои нужды! Для редактирования этих файлов требуются PowerPoint и редактор формул (обычно встроенный в PowerPoint). При загрузке есть папка с названием «Редактируемые оценки». Здесь вы найдете редактируемые версии каждой викторины и модульного теста.

Этот ресурс включен в следующие комплекты:

Учебный план перед исчислением

Дополнительные блоки перед исчислением:

Блок 1 - Фундаментальные навыки

Блок 2 - Функции и их графики

Блок 3 - Полиномиальные и рациональные функции

Блок 4 - Экспоненциальные и логарифмические функции

Блок 5 - Тригонометрические функции

Блок 6 - Тригонометрические тождества и уравнения 7 - Полярные и параметрические уравнения

Блок 9 - Конические сечения
Блок 10 - Системы уравнений и матриц
Блок 11 - Последовательности и серии

Блок 12 - Введение в вычисления

ЛИЦЕНЗИРОВАНИЕ УСЛОВИЯ: Эта покупка включает лицензию на только на одного учителя на персону Я использую в их классе.Лицензии не подлежат передаче , то есть их нельзя передавать от одного учителя к другому. Никакая часть этого ресурса не может быть передана коллегам или использована в рамках всего класса, школы или округа без приобретения надлежащего количества лицензий. Если вы тренер, директор школы или округ, заинтересованный в передаваемых лицензиях с учетом ежегодных изменений в штате, свяжитесь со мной, чтобы получить расценки по адресу [email protected]

УСЛОВИЯ АВТОРСКОГО ПРАВА: Этот ресурс не может быть загружен в Интернет в какой-либо форме, включая классные / личные веб-сайты или сетевые диски, если сайт не защищен паролем и доступен только студентам.

8 распространенных векторов кибератак и способы их избежать

Если вы профессионал в области кибербезопасности и живете в сегодняшнем кибер-мире, кишащем акулами, ваша миссия - опережать плохих парней и обеспечивать безопасность своего предприятия. Это начинается с понимания ваших уязвимостей, знания множества способов взлома вашей защиты, а затем внедрения средств защиты, необходимых для поддержания безопасного и устойчивого состояния кибербезопасности. Это большая работа, которая критически важна для благополучия вашего предприятия.

Определенная поверхность атаки, векторы атаки и нарушения

Независимо от бизнеса или отрасли, вот три ключевых термина, которые лежат в основе киберзащиты каждого предприятия:

Поверхность атаки

Общая сумма точек в сети, где могут происходить атаки, когда неавторизованный пользователь («злоумышленник») может попытаться манипулировать или извлечь данные, используя множество методов взлома (« векторов кибератак, »). Если вы рассмотрите график, на котором по оси X перечислены все устройства и приложения в вашей сети (инфраструктура, приложения, конечные точки, IoT и т. Д.)), а ось Y - это различные методы взлома, такие как слабые пароли и пароли по умолчанию, повторно используемые пароли, фишинг, социальная инженерия, непропатченное программное обеспечение, неправильная конфигурация и т. д. - сюжет - это поверхность вашей атаки.

Поверхность корпоративной атаки

Вектор кибератаки

Метод или путь злоумышленника может взломать или проникнуть во всю сеть / систему. Векторы атак позволяют хакерам использовать уязвимости системы, в том числе человеческий фактор.

Нарушение безопасности

Любое нарушение безопасности, при котором конфиденциальные, защищенные или конфиденциальные данные доступны или украдены неавторизованной стороной, что ставит под угрозу бренд, клиентов и активы организации.Такие инциденты, как DDoS, майнинг биткойнов и т. Д., Также являются нарушениями безопасности. Нарушения данных являются наиболее распространенными, но не все инциденты безопасности связаны с кражей данных.

8 распространенных векторов кибератак и как их избежать

1. Взломанные учетные данные

Имя пользователя и пароль по-прежнему являются наиболее распространенным типом учетных данных для доступа. Взломанные учетные данные описывают случай, когда учетные данные пользователя, такие как имена пользователей и пароли, открываются неавторизованным объектам. Обычно это происходит, когда ничего не подозревающие пользователи становятся жертвами попыток фишинга и вводят свои учетные данные на поддельных веб-сайтах.В случае потери, кражи или разоблачения скомпрометированные учетные данные могут дать злоумышленнику доступ изнутри. Хотя мониторинг и анализ на предприятии могут выявить подозрительную активность, эти учетные данные эффективно обходят защиту периметра и усложняют обнаружение. Риск, связанный с использованием скомпрометированных учетных данных, зависит от уровня доступа, который они предоставляют. Учетные данные привилегированного доступа, которые предоставляют административный доступ к устройствам и системам, обычно представляют более высокий риск для предприятия, чем учетные данные потребителя.И не только люди обладают полномочиями. Серверы, сетевые устройства и инструменты безопасности часто имеют пароли, которые обеспечивают интеграцию и обмен данными между устройствами. В руках злоумышленника эти учетные данные для межмашинного взаимодействия позволяют перемещаться по предприятию как по вертикали, так и по горизонтали, обеспечивая практически беспрепятственный доступ.

Сделайте это, чтобы этого избежать:
  • Распространенные имена пользователей и ненадежные пароли могут привести к скомпрометированию учетных данных, поэтому важно, чтобы на предприятии были эффективные политики паролей, обеспечивающие необходимую надежность паролей.
  • Совместное использование паролей между службами делает все приложения, которые совместно используют учетные данные, уязвимыми в результате взлома одной службы или приложения в когорте. Не используйте повторно один и тот же пароль для доступа к нескольким приложениям и системам.
  • Использование двухфакторной аутентификации через доверенный второй фактор может уменьшить количество нарушений, которые происходят из-за взлома учетных данных в организации.

2. Слабые и украденные учетные данные

Слабые пароли и повторное использование паролей делают раскрытие учетных данных шлюзом для первоначального доступа и распространения злоумышленников.Недавние атаки вредоносных программ, таких как Mirai, подчеркивают эту угрозу не только для управляемых устройств, но и для устройств, подключенных к Интернету вещей.

Приложения и протоколы, отправляющие учетные данные для входа в сеть, представляют серьезную угрозу безопасности. Злоумышленник, подключенный к вашей сети, может легко найти и использовать эти учетные данные для бокового движения. Например, в атаке Target злоумышленники смогли украсть учетные данные Active Directory и распространить свою атаку на корпоративную платежную сеть.

Сделайте это, чтобы этого избежать:
  • Отслеживайте гигиену паролей и их использование в масштабах всего предприятия для выявления пользователей с высоким уровнем риска и их устройств.

3. Вредоносные инсайдеры

Злонамеренный инсайдер - это сотрудник, который раскрывает информацию частной компании и / или использует уязвимости компании. Вредоносные инсайдеры часто оказываются недовольными сотрудниками. Пользователи, имеющие доступ к конфиденциальным данным и сетям, могут нанести значительный ущерб привилегированным злоупотреблениям и злонамеренным намерениям.

Сделайте это, чтобы этого избежать:
  • Следите за недовольными сотрудниками и отслеживайте данные и доступ к сети для каждого устройства и пользователя, чтобы подвергнуть опасности инсайдерскую информацию.

4. Шифрование отсутствует или плохое шифрование

Шифрование данных переводит данные в другую форму, которую могут прочитать только люди, имеющие доступ к секретному ключу или паролю. Зашифрованные данные обычно называют зашифрованным текстом, а незашифрованные данные - открытым текстом. Целью шифрования данных является защита конфиденциальности цифровых данных, поскольку они хранятся в компьютерных системах и передаются через Интернет или другие компьютерные сети. Надежное шифрование должно применяться к данным в состоянии покоя, в движении и, где это возможно, в процессе обработки.

Отсутствие / плохое шифрование приводит к тому, что конфиденциальная информация, включая учетные данные, передается либо в виде открытого текста, либо с использованием слабых криптографических шифров или протоколов. Это означает, что злоумышленник, перехватывающий хранение, передачу или обработку данных, может получить доступ к конфиденциальным данным, используя методы грубой силы для взлома слабого шифрования.

Сделайте это, чтобы этого избежать:
  • Не полагайтесь исключительно на низкоуровневое шифрование и не предполагайте, что соблюдение нормативных требований означает, что данные надежно зашифрованы.
  • Обеспечьте шифрование конфиденциальных данных при хранении, передаче и обработке.

5. Неверная конфигурация

Неверная конфигурация - это ошибка в конфигурации системы. Например, если страницы настройки включены или пользователь использует имена пользователей и пароли по умолчанию, это может привести к нарушениям. Если конфигурация сервера установки / приложения не отключена, хакер может определить скрытые недостатки и получить дополнительную информацию. Неверно настроенные устройства и приложения представляют собой легкую точку входа для взломщика.

Сделайте это, чтобы этого избежать:
  • Установите процедуры и системы, которые ужесточают процесс настройки, и используйте автоматизацию везде, где это возможно. Мониторинг настроек приложений и устройств и сравнение их с рекомендуемыми передовыми практиками выявляет угрозу для неправильно настроенных устройств, расположенных в вашей сети.

6. Программа-вымогатель

Ransomware - это форма кибер-вымогательства, при которой пользователи не могут получить доступ к своим данным до тех пор, пока не будет уплачен выкуп. Пользователям показаны инструкции о том, как оплатить сбор за получение ключа дешифрования. Стоимость может варьироваться от нескольких сотен до тысяч долларов, выплачиваемых злоумышленникам в биткойнах.

Сделайте это, чтобы этого избежать:
  • Убедитесь, что у вас есть системы, которые защищают все ваши устройства от программ-вымогателей, включая поддержание вашей операционной системы в актуальном состоянии, чтобы уменьшить количество уязвимостей для использования, и не устанавливать программное обеспечение или предоставлять ему административные привилегии, если вы точно не знаете, что это и что он делает.

7. Фишинг

Фишинг - это тактика киберпреступности, при которой с целями связывается по электронной почте, телефону или текстовым сообщением кто-то, выдающий себя за законное учреждение, чтобы побудить людей предоставить конфиденциальные данные, такие как личная информация, данные банковских и кредитных карт, а также пароли.Он продолжает оставаться одним из самых эффективных векторов атак социальной инженерии. Некоторые схемы фишинга невероятно замысловаты и иногда могут выглядеть совершенно невинно. Взлом Office of Personnel Management (OPM) демонстрирует, как фишинг может победить практически все уровни традиционной безопасности, такие как шлюзы электронной почты и средства контроля конечных точек.

Сделайте это, чтобы этого избежать:
  • Измерение активности просмотра веб-страниц и переходов по электронной почте для пользователей и устройств дает ценную информацию о рисках для вашего предприятия.
  • В случае сомнений лучше всего позвонить в организацию, от которой вы получили письмо, и определить, является ли это мошенничеством с фишингом.

8. Доверительные отношения

Доверительные отношения относятся к определенному уровню доверия, существующему между пользователями и системами. Например, доверительные отношения могут соединять два домена, поэтому пользователю нужно войти в систему только один раз, чтобы получить доступ к ресурсам. Два домена в доверительных отношениях - это доверенный домен (домен, который аутентифицирует пользователя в первый раз) и доверенный домен (домен, который полагается на доверенный домен для аутентификации пользователей и предоставляет доступ к своим ресурсам без повторной аутентификации пользователя). Пользователь).Один из распространенных примеров сценария взлома - это когда учетные данные кэшируются на доверенном клиенте, который затем взламывается, нанося ущерб.

Сделайте это, чтобы этого избежать:
  • Управление доверительными отношениями может помочь вам ограничить или устранить воздействие или ущерб, который может нанести злоумышленник. BeyondCorp от Google - это пример практики безопасности с нулевым доверием.

Прочие методы взлома

Уязвимости нулевого дня

Это уязвимость, о которой никто не знает, пока не произойдет нарушение (отсюда и название «нулевой день», поскольку между моментом атаки и обнародованием уязвимости не проходит никакое время).Если разработчик не выпустил патч для уязвимости нулевого дня до того, как хакер воспользуется этой уязвимостью, то следующая атака известна как атака нулевого дня. Наличие у красной команды написания эксплойтов для POC - это способ уменьшить уязвимости нулевого дня.

Грубая атака

Это безжалостная атака, основанная на пробах и ошибках, когда хакер пытается определить пароли или получить доступ к зашифрованным данным. Подобно вору, который пытается взломать сейф, атака методом грубой силы пробует множество различных комбинаций, пока одна, наконец, не сработает.Грубая сила работает со всеми векторами атаки, описанными выше; включая парольные атаки, взлом слабого шифрования и т. д., так что технически это не является вектором атаки сам по себе.

DDoS

Распределенный отказ в обслуживании (DDoS) - это кибератака на сетевой ресурс (например, сервер, веб-сайт) многочисленными скомпрометированными компьютерными системами. Сетевой ресурс переполнен посторонними сообщениями, что приводит к замедлению работы и / или сбоям цели, что делает ее недоступной для авторизованных пользователей и систем.DDoS-атака обычно происходит из-за взлома нескольких систем. Потенциальным методом смягчения этого является использование CDN, обратных прокси-серверов, прокси-серверов высокой доступности и т. Д., Которые устанавливают уровни защиты между системами, обслуживающими контент, и клиентами, запрашивающими контент.

Четыре кадра на экране радара

  1. Программные компоненты с высоким уровнем риска , такие как Java, Flash и IE, подвержены атакам «нулевого дня» из-за большого количества присущих уязвимостей, многие из которых не раскрываются публично.Особенно подвержены атакам устройства, содержащие такое высокорисковое программное обеспечение, которые активно доступны в Интернете.
  2. Неверно настроенные устройства и приложения представляют собой легкую точку входа для взломщика. Мониторинг настроек приложений и устройств и сравнение их с рекомендуемыми передовыми практиками может помочь вам определить неправильно настроенные устройства, расположенные в вашей сети.
  3. Незашифрованные или слабо зашифрованные сетевые соединения и протоколы делают ваше предприятие уязвимым для атак типа «злоумышленник в середине».Кроме того, устройства и пользователи, которые подключаются к небезопасным сетям и приложениям, подвергаются риску и также могут быть скомпрометированы.
  4. Неисправленные уязвимости легко используются вредоносными программами для заражения вашей конечной точки или сервера. Хотя продукты для управления уязвимостями предоставляют список устройств, которые необходимо исправить, реальная проблема состоит в том, чтобы идентифицировать устройства с высоким риском, которые можно легко использовать / захватить для запуска атак. Уязвимости в критически важной инфраструктуре или устройствах с доступом к конфиденциальным данным представляют значительный риск для вашего предприятия

Заключение

Конечная цель злоумышленников и злоумышленников - получить доступ к вашим ценным устройствам, приложениям и данным.Без защиты устройства и пользователи с доступом к конфиденциальным приложениям, данным и сетям будут представлять значительный риск для вашего предприятия.

Чтобы опередить плохих парней, вам нужно начать с понимания своих уязвимостей, знания множества способов прорыва вашей защиты, а затем установить средства защиты, необходимые для поддержания безопасной и устойчивой кибербезопасности. Сохранение как можно меньшего размера поверхности атаки следует рассматривать как базовую меру безопасности и является ключом к поддержанию надежной системы безопасности.Кроме того, управление доверительными отношениями может помочь вам ограничить или устранить воздействие или ущерб, который может нанести злоумышленник.

операций над векторами, сложение векторов, умножение вектора на действительное число.

Рассмотрим вектор v, начальной точкой которого является начало координат в системе координат xy, а конечной точкой является. Мы говорим, что вектор находится в стандартной позиции и называем его вектором позиции. Обратите внимание, что упорядоченная пара однозначно определяет вектор.Таким образом, мы можем использовать для обозначения вектора. Чтобы подчеркнуть, что мы думаем о векторе, и чтобы избежать путаницы с обозначениями упорядоченных пар и интервалов, мы обычно пишем
v =.


Координата a - это скаляр , горизонтальный компонент вектора, а координата b - это скаляр , вертикальный компонент вектора. Под скаляром мы подразумеваем числовую величину , а не векторную величину .Таким образом, считается, что это компонент , форма для v. Обратите внимание, что a и b НЕ являются векторами, и их не следует путать с определением компонента вектора.

Теперь рассмотрим с A = (x 1 , y 1 ) и C = (x 2 , y 2 ). Давайте посмотрим, как найти вектор положения, эквивалентный. Как видно на рисунке ниже, начальная точка A перемещена в начало координат (0, 0). Координаты P находятся путем вычитания координат A из координат C.Таким образом, P = (x 2 - x 1 , y 2 - y 1 ) и вектор положения равен.

Можно показать, что и имеют одинаковую величину и направление и, следовательно, эквивалентны. Таким образом, = = 2 - x 1 , y 2 - y 1 >.

Компонент формирует из с A = (x 1 , y 1 ) и C = (x 2 , y 2 ) составляет
= 2 - x 1 , y 2 - y 1 >.

Пример 1 Найдите форму компонента, если C = (- 4, - 3) и F = (1, 5).

Решение У нас
= =.

Обратите внимание, что вектор эквивалентен вектору положения, как показано на рисунке выше.

Теперь, когда мы знаем, как записывать векторы в компонентной форме, давайте еще раз сформулируем некоторые определения.
Длину вектора v легко определить, когда известны компоненты вектора. Для v = 1, v 2 >, имеем
| v | 2 = v 2 1 + v 2 2 Использование теоремы Пифагора
| v | = √v 2 1 + v 2 2 .

Длина , или величина вектора v = 1, v 2 > задается как | v | = √v 2 1 + v 2 2 .

Два вектора эквивалентны , если они имеют одинаковую величину и одинаковое направление.

Пусть u = 1, u 2 > и v = 1, v 2 >. Тогда
1, u 2 > = 1, v 2 > тогда и только тогда, когда u 1 = v 1 и u 2 = v 2 .

Операции над векторами

Чтобы умножить вектор v на положительное действительное число, мы умножаем его длину на число. Его направление остается прежним. Например, когда вектор v умножается на 2, его длина удваивается и его направление не изменяется. Когда вектор умножается на 1,6, его длина увеличивается на 60%, а его направление остается прежним. Чтобы умножить вектор v на отрицательное действительное число, мы умножаем его длину на число и меняем его направление на обратное. Когда вектор умножается на 2, его длина удваивается, а его направление меняется на противоположное.Поскольку действительные числа работают как коэффициенты масштабирования при векторном умножении, мы называем их скалярами , а произведения kv называются скалярными кратными v.

Для действительного числа k и вектора v = 1, v 2 >, скалярное произведение k и v равно
kv = k.1, v 2 > = 1, kv 2 >.
Вектор kv представляет собой скалярное кратное вектора v.

Пример 2 Пусть u = и w =.Найдите - 7w, 3u и - 1w.

Решение
- 7w = - 7. =,
3u = 3. =,
- 1w = - 1. =.

Теперь мы можем сложить два вектора с помощью компонентов. Чтобы сложить два вектора, представленных в форме компонентов, мы добавляем соответствующие компоненты. Пусть u = 1, u 2 > и v = 1, v 2 >. Тогда
u + v = 1 + v 1 , u 2 + v 2 >

Например, если v = и w =, то
v + w = ​​=

Если u = 1, u 2 > и v = 1, v 2 >, то
u + v = 1 + v 1 , u 2 + v 2 >.

Прежде чем мы определим вычитание вектора, нам нужно определить - v. Противоположное v = 1, v 2 >, показанное ниже, это
- v = (- 1). V = (- 1) 1, v 2 > = 1, - v 2 >

Вычитание вектора, такое как u - v, включает вычитание соответствующих компонентов. Покажем это, переписав u - v как u + (- v). Если u = 1, u 2 > и v = 1, v 2 >, то
u - v = u + (- v) = 1, u 2 > + 1, - v 2 > = 1 + (- v 1 ), u 2 + (- v 2 )> = 1 - v 1 , u 2 - v 2 >

Мы можем проиллюстрировать векторное вычитание с помощью параллелограммов, точно так же, как мы делали векторное сложение.

Вычитание вектора

Если u = 1, u 2 > и v = 1, v 2 >, то
u - v = 1 - v 1 , u 2 - v 2 >.

Интересно сравнить сумму двух векторов с разностью тех же двух векторов в одном параллелограмме. Векторы u + v и u - v - диагонали параллелограмма.

Пример 3 Выполните следующие вычисления, где u = и v =.
a) u + v
b) u - 6v
c) 3u + 4v
d) | 5v - 2u |

Решение
а) u + v = + = =;
б) и - 6в = - 6. = - =;
в) 3u + 4v = 3. + 4. = + =;
d) | 5v - 2u | = | 5. - 2. | = | - | = || = √ (- 29) 2 + 21 2 = √1282 ≈ 35,8

Прежде чем мы сформулируем свойства сложения векторов и скалярного умножения, нам нужно определить другой специальный вектор - нулевой вектор. Вектор, у которого обе точки являются начальной и конечной, - это нулевой вектор , обозначенный буквой O или.Его величина равна 0. Помимо вектора, нулевой вектор является аддитивным вектором идентичности:
v + O = v. 1, v 2 > + = 1, v 2 >
Операции над векторами имеют много общих черт. свойства как операции с действительными числами.

Свойства сложения векторов и скалярного умножения

Для всех векторов u, v и w и для всех скаляров b и c:
1. u + v = v + u.
2. и + (v + w) = (u + v) + w.
3. v + O = v.
4 1.v = v; 0. v = 0.
5. v + (- v) = 0.
6. b (cv) = (bc) v.
7. (b + c) v = bv + cv.
8. b (u + v) = bu + bv.

Единичные векторы

Вектор величины или длины 1 называется единичным вектором . Вектор v = является единичным вектором, потому что
| v | = || = √ (- 3/5) 2 + (4/5) 2 = √9 / 25 + 16/25 = √25 / 25 = √1 = 1.

Пример 4 Найдите единичный вектор, который имеет то же направление, что и вектор w =.

Решение Сначала мы находим длину w:
| w | = √ (- 3) 2 + 5 2 = √34. Таким образом, нам нужен вектор, длина которого равна 1 / √34 от w, а направление совпадает с направлением вектора w. Этот вектор равен
u = w / √34 = / √34 = 34, 5 / √34>.
Вектор u является единичным вектором, поскольку
| u | = | w / √34 | = = √34 / 34 = √1 = 1.

Если v - вектор и v ≠ O, то
(1 / | v |) • v или v / | v |,
- это единичный вектор в направлении v.

Хотя единичные векторы могут иметь любое направление, единичные векторы, параллельные осям x и y, особенно полезны. Они определены как
i = и j =.

Любой вектор может быть выражен как линейная комбинация единичных векторов i и j. Например, пусть v = 1, v 2 >. Тогда
v = 1, v 2 > = 1, 0> + 2> = v 1 + v 2 = v 1 i + v 2 j.

Пример 5 Выразите вектор r = как линейную комбинацию i и j.

Решение
r = = 2i + (- 6) j = 2i - 6j.

Пример 6 Запишите вектор q = - i + 7j в компонентной форме.

Решение q = - i + 7j = -1i + 7j =

Операции с векторами также могут выполняться, когда векторы записываются как линейные комбинации i и j.

Пример 7 Если a = 5i - 2j и b = -i + 8j, найти 3a - b.

Решение
3a - b = 3 (5i - 2j) - (- i + 8j) = 15i - 6j + i - 8j = 16i - 14j.

Углы направления

Конечная точка P единичного вектора в стандартном положении - это точка на единичной окружности, обозначенная (cosθ, sinθ). Таким образом, единичный вектор может быть выражен в форме компонентов,
u =,
или как линейная комбинация единичных векторов i и j,
u = (cosθ) i + (sinθ) j,
, где компоненты u являются функциями угла направления θ, измеренного против часовой стрелки от оси x к вектору. Поскольку θ изменяется от 0 до 2π, точка P следует по окружности x 2 + y 2 = 1. Это принимает все возможные направления для единичных векторов, поэтому уравнение u = (cosθ) i + (sinθ) j описывает все возможные единичные векторы на плоскости.

Пример 8 Вычислите и нарисуйте единичный вектор u = (cosθ) i + (sinθ) j для θ = 2π / 3. Включите единичный круг в свой эскиз.

Решение
u = (cos (2π / 3)) i + (sin (2π / 3)) j = (- 1/2) i + (√3 / 2) j

Пусть v = 1, v 2 > с направленным углом θ. Используя определение касательной функции, мы можем определить угол направления из компонентов v:

Пример 9 Определите угол направления θ вектора w = - 4i - 3j.

Решение Мы знаем, что
w = - 4i - 3j =.
Таким образом, мы имеем
tanθ = (- 3) / (- 4) = 3/4 и θ = tan - 1 (3/4).
Поскольку w находится в третьем квадранте, мы знаем, что θ - угол третьего квадранта. Опорный угол составляет
тангенса - 1 (3/4) ≈ 37 °, а θ ≈ 180 ° + 37 °, или 217 °.

Для работы с прикладными задачами и для последующих курсов, таких как математика, удобно иметь способ выразить вектор так, чтобы его величину и направление можно было легко определить или прочитать.Пусть v вектор. Тогда v / | v | является единичным вектором в том же направлении, что и v. Таким образом, мы имеем
v / | v | = (cosθ) i + (sinθ) j
v = | v | [(cosθ) i + (sinθ) j] Умножение на | v |
v = | v | (cosθ) i + | v | (sinθ) j.

Пример 10 Скорость и направление самолета. Самолет движется по пеленгу 100 ° со скоростью 190 км / ч, а ветер дует 48 км / ч со скоростью 220 °. Найдите путевую скорость самолета и направление его траектории или курса относительно земли.

Решение Сначала делаем рисунок. Ветер представлен как, а вектор скорости самолета - как. Результирующий вектор скорости равен v, сумме двух векторов:
v = +.

Пеленг (отсчитываемый от севера) вектора воздушной скорости равен 100 °. Угол направления (измеренный против часовой стрелки от положительной оси x) составляет 350 °. Пеленг (отсчитываемый от севера) вектора ветра составляет 220 °. Угол направления (измеренный против часовой стрелки от положительной оси x) составляет 50 °.Величины и равны 190 и 48 соответственно. Имеем
= 190 (cos350 °) i + 190 (sin350 & deg) j и
= 48 (cos50 °) i + 48 (sin50 & deg) j.
Таким образом,
v = +
= [190 (cos350 °) i + 190 (sin350 & deg) j] + [48 (cos50 °) i + 48 (sin50 & deg) j]
= [190 (cos350 °) i + 48 ( cos50 °) i] + [190 (sin350 & deg) j + 48 (sin50 & deg) j]
≈ 217,97i + 3,78j.
Из этой формы мы можем определить путевую скорость и курс:
Путевая скорость ≈ √ (217,97) 2 + (3,78) 2 ≈ 218 км / ч.
Пусть α будет направленным углом v. Тогда
tgα = 3,78 / 217,97
α = tan - 1 3,78 / 217,97 ≈ 1 °.
Таким образом, курс самолета (направление с севера) составляет 90 ° - 1 °, или 89 °.

Угол между векторами

Когда вектор умножается на скаляр, результатом является вектор. Когда два вектора складываются, результат также является вектором. Таким образом, мы могли бы ожидать, что произведение двух векторов также будет вектором, но это не так. скалярное произведение двух векторов является действительным числом или скаляром.Этот продукт полезен для определения угла между двумя векторами и определения того, являются ли два вектора перпендикулярными.

Точечное произведение двух векторов u = 1, u 2 > и v = 1, v 2 > равно
u • v = u 1 .v 1 + u 2 .v. 2
(Обратите внимание, что u 1 v 1 + u 2 v 2 - это скаляр , а не вектор.)

Пример 11 Найдите указанное скалярное произведение, когда
u =, v = и w =.
a) u • w
b) w • v

Решение
а) u • w = 2 (- 3) + (- 5) 1 = - 6 - 5 = - 11;
б) w • v = (- 3) 0 + 1 (4) = 0 + 4 = 4.

Скалярное произведение можно использовать для определения угла между двумя векторами. Угол между двумя векторами является наименьшим положительным углом, образованным двумя направленными отрезками линии. Таким образом, угол θ между u и v равен углу между v и u, а 0 ≤ θ ≤ π.

Если θ - угол между двумя ненулевыми векторами u и v, то
cosθ = (u • v) / | u || v |.

Пример 12 Найдите угол между u = и v =.

Решение Начнем с нахождения u • v, | u | и | v |:
u • v = 3 (- 4) + 7 (2) = 2,
| u | = √3 2 + 7 2 = √58 и
| v | = √ (- 4) 2 + 2 2 = √20.
Тогда
cosα = (u • v) / | u || v | = 2 / √58.√20
α = cos - 1 (2 / √58.√20)
α ≈ 86,6 °.

Силы в равновесии

Когда несколько сил действуют через одну и ту же точку на объект, их векторная сумма должна быть равна нулю, чтобы произошло равновесие.Когда происходит равновесие, объект либо неподвижен, либо движется по прямой без ускорения. Тот факт, что векторная сумма должна быть равна нулю для баланса, и наоборот, позволяет нам решать многие прикладные задачи, связанные с силами.

Пример 13 Подвесной блок. Блок весом 350 фунтов подвешен на двух тросах, как показано слева. В точке A действуют три силы: W, тянущий вниз блок, и R и S, два троса, тянущие вверх и наружу. Найдите натяжение каждого троса.

Решение Мы рисуем силовую диаграмму с начальными точками каждого вектора в начале координат. Для обеспечения баланса векторная сумма должна быть вектором O:

R + S + W = O.
Мы можем выразить каждый вектор через его величину и угол направления:
R = | R | [( cos125 °) i + (sin125 °) j],
S = | S | [(cos37 °) i + (sin37 °) j] и
W = | W | [(cos270 °) i + (sin270 °) j]
= 350 (cos270 °) i + 350 (sin270 °) j
= -350j cos270 ° = 0; sin270 ° = - 1.
Подставляя R, S и W в R + S + W + O, мы получаем
[| R | (cos125 °) + | S | (cos37 °)] i + [| R | (sin125 °) + | S | (sin37 °) - 350] j = 0i + 0j.
Это дает нам систему уравнений:
| R | (cos125 °) + | S | (cos37 °) = 0,
| R | (sin125 °) + | S | (sin37 °) - 350 = 0.
Решая эту систему, получаем
| R | ≈ 280 и | S | ≈ 201.
Натяжение тросов составляет 280 фунтов и 201 фунт

Неограниченная трансдукция гепатоцитов с помощью векторов аденоассоциированного вируса серотипа 8 у мышей

РЕЗЮМЕ

Векторы рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) могут опосредовать долгосрочную стабильную трансдукцию в различных тканях-мишенях.Однако с векторами rAAV серотипа 2 (rAAV2) печеночная трансдукция ограничивается лишь небольшой частью гепатоцитов даже после введения чрезвычайно высоких доз вектора. Чтобы исследовать, демонстрируют ли векторы rAAV других серотипов аналогичную ограниченную трансдукцию печени, мы провели исследование зависимости реакции от дозы путем инъекции мышам экспрессирующих β-галактозидазу векторов rAAV1 и rAAV8 через воротную вену. Вектор rAAV1 показал притупленную доза-ответную реакцию, аналогичную таковой для rAAV2 при высоких дозах, в то время как доза-реакция вектора rAAV8 оставалась неизменной при любой дозе и в конечном итоге могла трансдуцировать все гепатоциты при дозе 7.2 × 10 12 векторных геномов / мышь без токсичности. Это указывает на то, что все гепатоциты обладают способностью преобразовывать входящие однонитевые векторные геномы в дуплексную ДНК. Однократная инъекция вектора rAAV8 в хвостовую вену была так же эффективна, как и инъекция в воротную вену при любой дозе. Кроме того, внутрисосудистое введение вектора rAAV8 в высокой дозе трансдуцировало все скелетные мышцы по всему телу, включая диафрагму, всю сердечную мышцу и значительное количество клеток поджелудочной железы, гладких мышц и мозга.Таким образом, rAAV8 является надежным вектором для переноса генов в печень и представляет собой многообещающий исследовательский инструмент для доставки генов к различным органам-мишеням. Кроме того, вектор rAAV8 может предлагать потенциальный терапевтический агент для различных заболеваний, поражающих непеченочные ткани, но требуется большая осторожность в отношении распространения вектора и жесткого контроля тканеспецифической экспрессии генов.

Направленный печенью перенос генов с помощью вирусных и невирусных векторов был исследован для лечения множества наследственных и приобретенных заболеваний, включая гемофилию (51), различные метаболические заболевания, такие как мукополисахаридоз (42), гиперлипидемия (24), тирозинемия ( 41), сахарный диабет (25) и хронический вирусный гепатит (29).Среди векторов, используемых для доставки генов в гепатоциты in vivo, векторы рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) являются одним из наиболее многообещающих носителей, поскольку они основаны на непатогенных вирусах, трансдуцируют как делящиеся, так и неделящиеся клетки и обеспечивают долгосрочную стабильность трансгена. экспрессия с минимальной токсичностью и клеточным иммунным ответом у животных.

AAV представляет собой небольшой непатогенный парвовирус с дефектной репликацией с геномом одноцепочечной ДНК. Среди различных серотипов AAV векторы rAAV на основе серотипа 2 AAV (rAAV2) наиболее широко исследовались в качестве векторов доставки генов in vivo, демонстрируя эффективность и безопасность.Основываясь на успешных результатах серии доклинических исследований rAAV2-опосредованной генной терапии, было начато несколько клинических испытаний для лечения наследственных заболеваний, включая гемофилию B (22).

Несмотря на такие недавние достижения, передача гена в печени, опосредованная rAAV2, все еще остается неоптимальной, а эффективность трансдукции в печени остается неудовлетворительной, особенно в случаях, когда требуется более высокая эффективность трансдукции. Одним из основных недостатков этой системы является то, что только ≈10% гепатоцитов стабильно трансдуцируются векторами rAAV2 (5, 39, 59).Другими словами, невозможно увеличить эффективность трансдукции у мышей (ни количество трансдуцированных гепатоцитов, ни экспрессию трансгенных продуктов) пропорционально заданным дозам при введении векторных доз 3,0 × 10 11 векторных геномов (vg) или более. за мышь. Трансдукция печени становится насыщенной при более высоких дозах, при этом эффективность трансдукции составляет около 10% от общего числа гепатоцитов (39). Механизм этой ограниченной трансдукции печени не выяснен, но он не связан с нарушением захвата векторных частиц гепатоцитами, поскольку векторные геномы rAAV2 обнаруживаются в большинстве гепатоцитов в течение 24 часов после инфузии вектора (32).На основании наших наблюдений мы пришли к выводу, что в печени есть две различные субпопуляции гепатоцитов с разными метаболическими состояниями. То есть только небольшая подгруппа гепатоцитов имеет все механизмы, необходимые для установления стабильной трансдукции rAAV2, в то время как другая подгруппа лишена какого-либо механизма для процесса или имеет некоторый ингибирующий механизм, который предотвращает процесс (32). Недавно Thomas et al. предложили модель, в которой скорость отслоения капсида определяет эффективность трансдукции rAAV-векторами в печени (54).

За последние 5 лет произошло несколько крупных прорывов в технологиях векторов rAAV, которые включают производство векторов rAAV, полученных из альтернативных серотипов (6, 7, 15, 17, 46, 47, 60), и развитие самокомплементарных (или двухцепочечные) векторы rAAV (13, 30, 31, 57). К настоящему времени выделено более сотни различных последовательностей AAV от человека и нечеловеческих приматов (14). Их рекомбинанты были тщательно исследованы на предмет тканевого тропизма и эффективности трансдукции, что позволило резко повысить эффективность трансдукции (4, 14, 15) и изменить тропизм ткани или типа клеток или паттерны распределения вектора в данной ткани (7, 53, 56). ).Теперь поиск оптимальных серотипов AAV для эффективной и тканеспецифической трансдукции стал императивом для успешной генной терапии. Другой прорыв, упаковка двухцепочечных векторных геномов в вирионы, т.е. самокомплементарный rAAV, значительно повысил эффективность трансдукции, хотя векторы могут удерживать только половину генома.

Мы и другие разработали метод, с помощью которого геномы вектора rAAV2 могут быть перекрестно упакованы в гетерологичные капсидные белки, полученные из альтернативных серотипов, с получением химерных вирионов, так называемых псевдосеротипированных векторов rAAV (17, 46).Это позволило нам провести тщательное параллельное исследование для сравнения эффективности трансдукции печени среди различных псевдосеротипированных векторов rAAV, типов 1–6, у мышей. Хотя векторы rAAV1, -2 и -6 достигли аналогичных уровней экспрессии, и ни один из других серотипов не привел к резкому увеличению стабильной эффективности трансдукции печени (17), каждый вектор rAAV1, -2 и -6 показал различную дозу: профили ответов (17). Мы установили в двух независимых исследованиях, что rAAV2-опосредованная стабильная трансдукция печени пропорциональна заданным дозам вектора в диапазоне от 2 до 4 × 10 9 до 3–4 × 10 11 мкг / мышь (17, 39).Интересно, что, в отличие от вектора rAAV2, введение вектора rAAV1 в печень приводило к непропорционально большему увеличению стабильной трансдукции печени, поскольку дозы вектора увеличивались в том же диапазоне доз (17), хотя этот профиль доза-ответ для rAAV1 притуплялся при дозах выше, чем 4 × 10 11 vg / мышь. Поскольку в предыдущем исследовании мы определяли количественно продукт трансгена, а не количество трансдуцированных гепатоцитов, неизвестно, ограничивается ли rAAV1-опосредованная трансдукция печени небольшой популяцией гепатоцитов.

В настоящем исследовании мы исследовали, имеет ли ограниченная трансдукция печени также случай псевдосеротипированных векторов rAAV1 и rAAV8. Вектор rAAV1 был выбран потому, что он демонстрировал отчетливый профиль доза-ответ, в то время как вектор rAAV8 был выбран потому, что было показано, что он трансдуцирует гепатоциты мыши лучше, чем rAAV2 (15, 49, 54). В результате, в отличие от векторов rAAV2, мы обнаружили, что все гепатоциты допускают стабильную трансдукцию rAAV8 и ≈100% трансдукция гепатоцитов достижима путем инъекции в воротную вену в дозе 7.2 × 10 12 вг / мышь. Кроме того, и в отличие от ситуации с векторами rAAV2, мы обнаружили, что такая высокая эффективность трансдукции достижима путем инъекции в одну хвостовую вену векторов rAAV8. Наконец, мы выяснили, что вектор rAAV8 может трансдуцировать скелетные мышцы по всему телу, всю сердечную мышцу и значительное количество клеток поджелудочной железы, гладкомышечных клеток и клеток мозга после внутривенной инъекции. Эти наблюдения не только помогают нам понять механизмы трансдукции векторов rAAV, но также подчеркивают как полезность, так и неразборчивость векторов rAAV8.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Конструирование векторов rAAV. Конструирование и получение векторов rAAV2 AAV2-EF1α-nlslacZ, AAV2-hF.IX16 и AAV2-CMV-lacZ описаны в других работах (23, 37, 39, 40) , хотя в наших предыдущих публикациях мы не указывали четко серотип в названиях векторов. Вкратце, AAV2-EF1α-nlslacZ представляет собой бактериальный экспрессирующий β-галактозидазу вектор rAAV2, несущий энхансер-промотор человеческого фактора элонгации 1α (EF1α), ген lacZ Escherichia coli с сигналом ядерной локализации (nls) и обезьяний вирус. 40 poly (A) сигнал.AAV2-hF.IX16 представляет собой вектор rAAV2, экспрессирующий фактор свертывания крови IX (hF.IX) человека, содержащий печеночно-специфический промотор (область контроля локуса печени аполипопротеина Е - промотор гена α1-антитрипсина человека) (32), миниген hF.IX (содержащий фрагмент ДНК размером 1,4 т.п.н. первого интрона гена hF.IX) и сигнал поли (А) бычьего гормона роста. AAV2-CMV-lacZ представляет собой экспрессирующий -галактозидазу вектор rAAV2, несущий энхансер-промотор цитомегаловируса человека с интроном гена гормона роста человека, цитозольным геном lacZ и сигналом поли (A) обезьяньего вируса 40.

Для AAV1-EF1α-nlslacZ, AAV8-EF1α-nlslacZ и AAV8-CMV-lacZ геномы вектора rAAV2 были перекрестно упакованы в капсиды, полученные из серотипа 1 или 8 AAV, с соответствующими вспомогательными плазмидами AAV (15, 17) ( вспомогательная плазмида AAV8 была любезно предоставлена ​​Джеймсом М. Уилсоном). Все векторы были получены методом тройной трансфекции, очищены двумя циклами центрифугирования в градиенте хлорида цезия и сконцентрированы, как описано в других местах (3, 17). Конечные вирусные препараты хранили в фосфатно-солевом буфере (PBS), содержащем 5% сорбита.Титры физических частиц определяли количественным методом дот-блоттинга.

Процедура на животных. Самцов мышей C57BL / 6 и C57BL / 6 rag-1 в возрасте от шести до восьми недель были приобретены в лаборатории Джексона (Бар-Харбор, Мэн). Инъекции препаратов вектора rAAV в воротную вену и хвостовую вену выполняли, как описано ранее (34, 35). В качестве контроля использовали наивных мышей, которым не вводили инъекцию, или мышей, которым вводили только наполнитель (PBS-5% сорбитол). Периодически брали образцы крови из ретроорбитального сплетения.Все эксперименты на животных проводились в соответствии с рекомендациями по уходу за животными Стэнфордского университета.

Анализ белка. Мы экстрагировали общие белки печени и определили уровни экспрессии β-галактозидазы в печени мышей, трансдуцированных вектором rAAV, с помощью набора для иммуноферментного анализа β-галактозидазы (Roche Molecular Biochemicals, Индианаполис, штат Индиана), как описано ранее ( 37). Мы нормализовали уровни β-галактозидазы с общей концентрацией белка, определенной с помощью анализа Лоури, с использованием набора для анализа белка DC (Bio-Rad, Hercules, Calif.), и описал значения как пикограммы β-галактозидазы на миллиграмм белка. Мы измерили уровни человеческого фактора свертывания крови IX в плазме мышей с помощью иммуноферментного анализа, специфичного для человеческого фактора свертывания крови IX. Мы измерили уровни сывороточной аланинаминотрансферазы (ALT) с помощью набора реагентов ALT (Teco Diagnostics, Anaheim, CA).

Гистологический анализ. Кусочки долей печени мыши помещали в состав Tissue-Tek Optimal Cutting Temperature (Sakura Finetek USA, Inc., Торранс, Калифорния) и замораживали на сухом льду. В некоторых случаях различные ткани мышей, кроме печени, т. Е. Головной мозг, легкие, сердце, селезенка, почки, кишечник, семенники, поджелудочная железа и скелетные мышцы (четырехглавые мышцы, передняя большеберцовая мышца или язык), также собирались и обрабатывались в так же. Для гистохимического определения экспрессии β-галактозидазы вырезали срезы размером 10 мкм, фиксировали 1,25% глутаровым альдегидом, окрашивали 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфатом (X-Gal), как описано (21), и контрастировали светом. гематоксилин или ядерно-быстрый красный.Для определения эффективности трансдукции в печени по крайней мере 2000 ядер на срез были исследованы на экспрессию β-галактозидазы от каждого животного.

Для определения типов клеток мозга, трансдуцированных вектором rAAV8, мы провели иммуногистохимический анализ срезов мозга. Блоки разрезались на корональные срезы толщиной 12 мкм с помощью криостата. Срезы помещали на покрытые желатином предметные стекла и сушили при комнатной температуре в течение 30 мин. Срезы фиксировали в 4% параформальдегиде в течение 15 мин и трижды промывали PBS в течение 5 мин.Срезы блокировали PBS, содержащим 5% козью сыворотку, при комнатной температуре в течение 30 мин. Срезы инкубировали с первичными антителами против β-галактозидазы (1: 200; фракция кроличьего иммуноглобулина G; Invitrogen, Carlsbad, CA), со смесью мышиных моноклональных антител против NeuN (1: 200; Chemicon International Inc.), или мышиное моноклональное антитело против глиального фибриллярного кислого белка (GFAP) (1: 200; Chemicon International Inc.) в PBS, содержащем 5% козьей сыворотки, при комнатной температуре в течение 1 часа.NeuN и GFAP служили маркерами нейронов и астроцитов соответственно. Срезы промывали 3 раза в PBS в течение 5 мин. Затем их инкубировали с конъюгированным с Alexa Fluor 488 козьим антикроличьим иммуноглобулином G (2 мкг / мл; Invitrogen) и конъюгированным с Alexa Fluor 594 козьим антимышиным иммуноглобулином G (2 мкг / мл; Invitrogen) в PBS при комнатной температуре в течение 30 минут. Срезы трижды промывали PBS в течение 5 мин. Наконец, секции были смонтированы в Vectashield (Vector Laboratories, Burlingame, Calif.). Иммунореактивность оценивали и просматривали под конфокальным лазерным сканирующим микроскопом (TCS NT; Leica).

Для обнаружения островковых клеток поджелудочной железы мы выполнили двойное окрашивание X-Gal и инсулином, как описано ранее (55). Для обнаружения клеток Купфера в печени мы выполнили двойное окрашивание X-Gal и F8 / 40. Вкратце, замороженные срезы в компаунде с оптимальной температурой резания разрезали толщиной 10 мкм, сушили на воздухе в течение 15 минут и хранили при -20 ° C. Образцы оттаивали в течение 1,5 ч, а затем фиксировали в охлажденном ацетоне при -20 ° C в течение 20 мин.Образцы сушили в течение 6 минут и регидратировали в PBS в течение 10 минут. Слайды окрашивали на X-Gal в течение ночи и трижды промывали PBS в течение 5 минут. Образцы инкубировали в 0,3% перекиси водорода в метаноле в течение 10 мин, промывали водой и снова промывали PBS. Срезы блокировали в 10% нормальной кроличьей сыворотке (Vector Laboratories) с помощью авидина (набор для блокирования авидина / биотина, Vector Laboratories) в PBS-1% бычьем сывороточном альбумине в течение 45 мин. Срезы промокали и инкубировали с F4 / 80 (разведение 1:50; Serotec, Оксфорд, Великобритания) с биотином в PBS-1% бычьем сывороточном альбумине при комнатной температуре в течение 1 часа.Образцы промывали PBS и инкубировали в течение 30 мин в антикрысином иммуноглобулине G (Vector Laboratories) в разведении 1: 500 в PBS-1% бычьем сывороточном альбумине. Срезы промывали PBS и инкубировали в течение 30 мин в наборе Vectastain Elite ABC (Vector Laboratories) в соответствии с инструкциями производителя. Срезы промывали PBS, промывали водой и проявляли диаминобензидином с помощью набора диаминобензидиновых субстратов (Vector Laboratories) в течение 2-5 мин. Затем предметные стекла контрастировали гематоксилином, обезвоживали и наносили на них покровные стекла.

Анализ ДНК. Мы экстрагировали полную геномную ДНК из каждой ткани стандартным фенол-хлороформным методом. Мы выполнили Саузерн-блот-анализ для определения числа копий двухцепочечного векторного генома на диплоидный геномный эквивалент (ds-vg / dge) и для анализа векторных форм в трансдуцированных тканях, как описано ранее (35, 39). Вкратце, мы переваривали 10 мкг полной геномной ДНК с помощью BglI, который разрезает векторный геном семь раз, и разделяли перевариваемые вещества на 0,8% агарозных гелях, переносили ДНК на нейлоновые мембраны и гибридизовали блоттированную мембрану с 2.Зонд lacZ , специфичный к последовательности радиоактивного вектора размером 1 т.п.н. (фрагмент BglI / BglI размером 2,1 т.п.н., положения нуклеотидов с 1518 по 3639 генома вектора AAV2-EF1α-nlslacZ на 4828 оснований). Мы обнаружили и количественно оценили сигналы с помощью программного обеспечения Phosphorimager и Quantity One ( Bio-Rad ). Для анализа молекулярных форм векторных геномов мы переваривали образец ДНК с помощью BamHI, одного резака, который асимметрично расщепляет 4828-базовый векторный геном в положении нуклеотида 1362, или KpnI, который не разрезает векторный геном, и исследовали с помощью Тот же зонд lacZ .Стандарты количества копий двухцепочечного векторного генома получали добавлением эквивалентного количества плазмидных молекул pAAV-EF1α-nlslacZ (37) к 10 мкг общей геномной ДНК, экстрагированной из печени наивных мышей. Общее число копий вектора на гепатоцит представляет собой количество геномов двухцепочечного вектора на трансдуцированный гепатоцит и рассчитывается на основе предположения, что геномы двухцепочечного вектора в печени переносятся только трансдуцированными гепатоцитами (33, 52).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Все гепатоциты были доступны для трансдукции стабильного вектора rAAV8.Ранее мы продемонстрировали, что только небольшая часть гепатоцитов допускает трансдукцию стабильного вектора rAAV2, что ограничивает линейный вектор доза-ответ при дозах выше 3,0 × 10 11 мкг / мышь (39). Максимальное количество стабильно трансдуцируемых гепатоцитов может варьироваться в зависимости от условий эксперимента, но обычно оно составляет около 10% от общего числа гепатоцитов. Чтобы исследовать корреляцию между дозой вектора и эффективностью трансдукции с другими псевдосеротипированными векторами rAAV, мы вводили мышам AAV1-EF1α-nlslacZ или AAV8-EF1α-nlslacZ через воротную вену в четырех различных дозах в диапазоне от 5.0 × 10 10 до 7,2 × 10 12 мкг / мышь, т. Е. 5,0 × 10 10 , 3,0 × 10 11 , 1,8 × 10 12 и 7,2 × 10 12 мкг / мышь ( n = от 3 до 6 на группу). В качестве ссылки мы также вводили шести мышам 3,0 × 10 11 мкг AAV2-EF1α-nlslacZ. Контрольным мышам вводили только эксципиент (PBS-5% сорбитол) ( n = 3). Через шесть недель после инъекции вектора мы собрали образцы печени и определили эффективность трансдукции путем подсчета экспрессирующих β-галактозидазу гепатоцитов, измерения уровней антигена β-галактозидазы с помощью иммуноферментного анализа и количественного определения количества копий генома двухцепочечного вектора в печени. по Саузерн-блот.Результаты сведены в Таблицу 1 и Фиг.1, а типичные микроскопические изображения показаны на Фиг.2.

Фиг. 1.

Векторные профили доза-ответ в печени мышей, трансдуцированных AAV1, AAV2 и AAV8-EF1α-nlslacZ. Процент трансдуцированных гепатоцитов в печени (A), общие уровни антигена β-галактозидазы (B) и количество двухцепочечных векторных геномов на диплоидный геномный эквивалент (ds-vg / dge) (C) показаны как функция от вводили векторные дозы. Сплошные маркеры представляют значения, полученные в настоящем исследовании.Профили доза-ответ при опосредованной AAV2-EF1α-nlslacZ трансдукции печени были получены из нашего предыдущего исследования (39) для сравнения и показаны пустыми кружками. Значения представляют собой средние значения ± стандартное отклонение.

РИС. 2.

Трансдукция в печени с использованием 7,2 × 10 12 мкг AAV8-EF1α-nlslacZ, доставленного через воротную вену. Печень собирали через 6 недель после инъекции и окрашивали X-Gal и легким гематоксилином. Показан типичный результат (A и B). Практически все гепатоциты были трансдуцированы rAAV8 по всей печени.Печень была окрашена X-Gal неоднородно, при этом площади центральных вен были менее интенсивными. (C) Окрашенные X-Gal гепатоциты вокруг области центральной вены. Хотя экспрессия генов около центральных вен была не такой сильной, как в портальных областях, большинство гепатоцитов экспрессируют трансген. (D) Двойное окрашивание X-Gal и F4 / 80. Ни одна из клеток Купфера (коричневые) не трансдуцировалась. Небольшие ядра, положительные по β-галактозидазе, обозначены стрелками на панелях B и D. Они могут быть частями ядер гепатоцитов или представлять собой непаренхимные клетки, трансдуцированные rAAV8, помимо клеток Купфера.Шкала 100 мкм.

ТАБЛИЦА 1.

Трансдукция гепатоцитов с помощью AAV1-, AAV2- или AAV8-EF1α-nlslacZ через 6 недель после инъекции

Как показано, все гепатоциты были устойчивы к стабильной трансдукции вектором rAAV8, достигая ≈100% трансдукции гепатоцитов при 7,2 × 10 12 вг / мышь. Положительные по β-галактозидазе клетки с небольшим ядром иногда обнаруживались в печени, трансдуцированной rAAV8 (рис. 2В). Двойное окрашивание X-Gal / клеток Купфера не выявило трансдукции в клетках Купфера (рис.2D). Происхождение небольших ядер, положительных по β-галактозидазе, не может быть определено окончательно. Они могут быть частями ядер гепатоцитов или представлять собой непаренхимные клетки, трансдуцированные rAAV8, помимо клеток Купфера. Число гепатоцитов, трансдуцированных вектором rAAV1, составило 24% при дозе 7,2 × 10 12 мкг / мышь. Поскольку введение дозы вектора выше 10 13 мкг / мышь было невозможно, было невозможно определить максимальное количество гепатоцитов, допускающих стабильную трансдукцию rAAV1.Тем не менее, результаты показывают, что все гепатоциты могут преобразовывать входящие однонитевые векторные геномы rAAV в экспрессируемые трансгеном двухцепочечные геномы без внешней помощи для увеличения трансдукции, такой как обеспечение вспомогательных функций аденовируса (11, 12), генотоксическое лечение (1, 2) или принудительной биохимической модификации одноцепочечных ДНК-связывающих белков (43-45, 61).

Профиль доза-ответ с вектором rAAV8 не изменялся до тех пор, пока не были трансдуцированы все гепатоциты.При rAAV2-опосредованной трансдукции печени пропорциональный профиль доза-ответ не изменяется при дозах менее 3,0 × 10 11 мкг / мышь, но доза-ответ вектора достигает насыщения при более высоких дозах (39). Аналогичным образом, наши предыдущие и настоящие исследования показали, что профиль доза-ответ при rAAV1-опосредованной трансдукции печени изменяется между диапазоном низких доз (демонстрируя непропорционально большую дозу-ответ) и диапазоном высоких доз (показывающий притупленный доза-ответ) (17 ) (Рис. 1Б).

В случае трансдукции печени, опосредованной rAAV8, графики log / log доз вектора и количества трансдуцированных гепатоцитов (рис.1A) или уровень экспрессии трансгена (фиг. 1B) демонстрировал линейность для данных доз вектора с коэффициентами регрессии ( r ) 0,945 (фиг. 1A) и 0,995 (фиг. 1B). Наклон кривой доза-ответ log y / log x составлял 0,450 (фиг. 1A) и 0,585 (фиг. 1B). Угол наклона log y / log x для пропорциональной доза-реакция должен составлять ≈1,0. Следовательно, ни ответная реакция на дозу, определенная путем измерения количества трансдуцированных гепатоцитов, ни та, которая определена путем измерения продукта трансгенного белка, не была прямо пропорциональна различным дозам вектора.Сходные значения обоих наклонов (оба около 0,5) означают, что общее количество продукта трансгена и количество трансдуцированных гепатоцитов коррелируют друг с другом. Хотя доза-ответ с rAAV8 не был пропорциональным, как количество трансдуцированных гепатоцитов, так и уровни экспрессии трансгена предсказуемо увеличивались с постоянным фактором exp (≈0,5). Другими словами, когда вектор AAV8-EF1α-nlslacZ вводят мышам в дозах 5,0 × 10 10 мкг / мышь или выше, увеличение дозы вектора в x раз приводит к x ≈0 .5 -кратное увеличение количества трансдуцированных гепатоцитов и экспрессии трансгена до тех пор, пока все гепатоциты не будут трансдуцированы.

Общее количество стабильно трансдуцированных геномов двухцепочечных векторов в печени увеличивалось пропорционально введенным дозам вектора независимо от серотипа. Затем мы определили количество копий двухцепочечного векторного генома на диплоидный геномный эквивалент (ds-vg / dge) в печени. методом саузерн-блоттинга. Результаты приведены в таблице 1 и на рис. 1C. На рис. 1C все векторы показали одинаковые наклоны log y / log x , близкие к 1.0 (т.е. 0,775, 1,005 и 1,119 для rAAV8, rAAV1 и rAAV2, соответственно) с коэффициентом регрессии ( r ) 0,999 в каждом случае до тех пор, пока наклон кривых доза-ответ не начал уменьшаться. Это демонстрирует, что общее количество стабильно трансдуцированных геномов двухцепочечных векторов в печени увеличивалось пропорционально независимо от серотипа до тех пор, пока не была достигнута насыщающая доза. Принимая во внимание, что каждый из трех серотипов демонстрирует различные профили доза-ответ, можно предположить, что качество или состояние, но не абсолютное количество геномов двухцепочечных векторов в гепатоцитах определяют профили доза-ответ.

Снижение специфической активности векторных геномов в печени было согласовано с появлением конкатемеров векторных геномов. Удельную активность двухцепочечных векторных геномов можно определить, разделив уровни экспрессии β-галактозидазы на количество копий векторного генома (таблица 1). При трансдукции печени, опосредованной rAAV1 или rAAV8, специфическая активность векторного генома снижалась по мере увеличения дозы вектора. Так было и с векторами rAAV2 (39). Механизм этого снижения специфической активности генома еще не ясен, но, вероятно, связан с образованием менее активных двухцепочечных векторных молекул, предположительно конкатемеров (39).Настоящее исследование в сочетании с результатами нашего предыдущего исследования (39) показало, что снижение специфической активности векторного генома согласуется с появлением конкатемеров. При самой низкой дозе, 5,0 × 10 10 мкг / мышь, геномы вектора rAAV8 образовывали существенные конкатемеры, в то время как rAAV1 и rAAV2 образовывали исключительно кольцевые мономеры (рис. 3) (39). Специфические для векторного генома активности rAAV1, rAAV2 и rAAV8 при этой дозе составляли 377, 489 и 223 (пг / мг белка) / (ds-vg / dge), соответственно, что согласуется с нашим предположением, что образование конкатемеров уменьшается специфическая активность векторного генома.

РИС. 3.

Саузерн-блот-анализ геномов вектора rAAV в печени, трансдуцированных AAV1- или AAV8-EF1α-nlslacZ в различных дозах. На левой и правой панелях показаны результаты, полученные с мышами, которым инъецировали AAV1-EF1α-nlslacZ- и AAV8-EF1α-nlslacZ. Полную геномную ДНК экстрагировали из печени, собранной через 6 недель после инъекции, и разделяли на 0,8% агарозном геле после переваривания BamHI или KpnI. BamHI расщепляет векторный геном только один раз в положении нуклеотида 1362, в то время как KpnI не разрезает геном из 4828 оснований.Векторные геномы детектировали с помощью зонда lacZ размером 2,1 т.п.н. (положения нуклеотидов с 1518 по 3639). Каждая дорожка представляет собой отдельную мышь. Дозы введенного вектора (vg на мышь) указаны над каждой полосой. Для результатов, полученных от мышей, которым инъецировали 5,0 × 10 10 мкг / мышь, также показано, что полоски из передержанных блотов демонстрируют присутствие или отсутствие конкатемеров. Они обозначены более толстыми линиями над полосами движения. Открытые и сплошные стрелки указывают молекулы голова к хвосту и хвост к хвосту соответственно.Незакрашенные и сплошные стрелки указывают геномы и конкатемеры суперспиральных двухцепочечных кольцевых мономерных векторов соответственно. Молекулы «голова к хвосту» включают как кольцевые мономерные геномы, так и конкатемеры, тогда как молекулы «хвост к хвосту» представляют собой исключительно конкатемеры. Таким образом, интенсивность молекул «хвост к хвосту» хорошо коррелирует с количеством конкатемеров.

Сравнение инъекции векторов rAAV8 в хвостовую (периферическую) вену и воротную вену. Недавно Sarkar et al. сообщили, что инъекция в хвостовую вену была так же эффективна, как и инъекция в воротную вену, в контексте вектора rAAV8, экспрессирующего фактор свертывания крови VIII собак, в дозе 1.0 × 10 11 вг / мышь (49). В наших предыдущих исследованиях мы обнаружили, что для нескольких серотипов трансдукция rAAV была более эффективной при доставке через воротную вену по сравнению с хвостовой веной (17, 35). Для дальнейшего решения этой проблемы мы вводили самцам мышей C57BL / 6 3,0 × 10 11 vg вектора rAAV8-hF.IX16 через воротную вену или хвостовую вену и контролировали уровни человеческого фактора свертывания крови IX в плазме. На рис. 4А представлены результаты. Оба пути инъекции привели к быстрой и устойчивой экспрессии человеческого фактора свертывания крови IX в плазме мышей без существенной разницы в экспрессии трансгена (тест Стьюдента t , P = 0.28, со значениями 4-недельных временных точек). Экспрессия фактора IX свертывания крови человека достигла пика через 4 недели после инъекции на уровнях около 200 мкг / мл, что на один логарифм выше, чем тот, который можно получить с соответствующим вектором rAAV2, AAV2-hF.IX16 (17, 39). Однако после этого экспрессия трансгена снизилась до уровней от 40 до 50 мкг / мл. Такое снижение экспрессии человеческого фактора свертывания IX не наблюдалось с AAV2-hF.IX16. Механизм снижения в настоящее время неизвестен.

РИС. 4.

Сравнение эффективности rAAV8-опосредованной трансдукции печени между инъекциями в хвостовую вену и воротную вену.(A) Уровни человеческого фактора свертывания IX (hF.IX) в плазме после инъекции AAV8-hF.IX16 в хвостовую вену (TV) или воротную вену (PV) самцам мышей C57BL / 6. Устойчивая экспрессия человеческого фактора свертывания IX без лаг-фазы наблюдалась при обоих путях. Экспрессия достигла пика через 4 недели после инъекции, после чего последовало существенное (≈75%) снижение. Вертикальные полосы указывают стандартные отклонения. (B) Число копий векторного генома (ds-vg / dge) в печени, трансдуцированной AAV8-EF1α-nlslacZ через хвостовую вену или инъекцию в воротную вену на 3.0 × 10 11 или 7,2 × 10 12 мкг / мышь. Полную ДНК печени экстрагировали через 6 недель после инъекции и 10 мкг ДНК анализировали с помощью Саузерн-блоттинга с расщеплением BglI и зондом lacZ размером 2,1 т.п.н. (фрагмент BglI-BglI). Левый и правый блоты анализировали отдельно с использованием различных серий стандартов числа копий вектора. Стандарты количества копий двухцепочечного вектора (от 0 до 100 и от 0 до 1000 ds-vg / dge) получали путем добавления соответствующего количества плазмиды pAAV-EF1α-nlslacZ к 10 мкг ДНК печени, экстрагированной из наивной мыши.Каждая дорожка представляет собой отдельную мышь. Способы введения и векторные дозы указаны над полосами.

Затем, чтобы определить эффективность трансдукции rAAV8 в печени, мы вводили самцам мышей C57BL / 6 rag-1 две разные дозы AAV8-EF1α-nlslacZ (3,0 × 10 11 и 7,2 × 10 12 мкг / мышь) двумя разными путями (хвостовая вена и воротная вена, n = 4 каждый) и определили эффективность трансдукции печени через 6 недель после инъекции с помощью гистохимического и молекулярного анализов.Контрольные мыши получали только наполнитель. Образцы сыворотки собирали для измерения уровней АЛТ на 1, 3 и 10 дни после инъекции. Как показано в таблице 2, эффективность трансдукции в печень была сопоставима между двумя путями инъекции при любой дозе вектора (тест Стьюдента t , P = 0,27 и 0,47 для доз 3,0 × 10 11 и 7,2 × 10 . 12 мкг / мышь, соответственно), достигая эффективности трансдукции ≈90% с 7,2 × 10 12 мкг / мышь.Эти результаты были подобны, но не идентичны эффективности трансдукции, обнаруженной в исследовании «доза-ответ» (таблица 1). Предполагалось, что это было результатом вариации двух векторных препаратов от партии к партии и / или использования разных партий животных.

ТАБЛИЦА 2.

Сравнение инъекции AAV8-EF1α-nlslacZ в воротную вену и хвостовую вену через 6 недель после инъекции

Саузерн-блот-анализ ДНК печени для оценки числа копий генома вектора в печени также подтвердил гистологические наблюдения (рис.4Б). Среднее число копий вектора, определенное денситометрическим анализом, составило 37,6 ± 8,8 (хвостовая вена, 3,0 × 10 11 мкг / мышь), 47,1 ± 6,0 (воротная вена, 3,0 × 10 11 мкг / мышь), 815,6 ± 203,7 ( хвостовая вена, 7,2 × 10 12 мкг / мышь) и 1044,3 ± 410,2 (воротная вена, 7,2 × 10 12 мкг / мышь) (среднее ± стандартное отклонение). Статистической разницы в количестве копий векторного генома между инъекциями в хвостовую вену и воротную вену не было (тест Стьюдента t , P = 0.12 и 0,36 для 3,0 × 10 11 и 7,2 × 10 12 мкг / мышь соответственно). Важно отметить, что мы не наблюдали какого-либо значительного увеличения уровней АЛТ в любой момент времени (данные не показаны), что позволяет предположить, что эти векторные дозы не вызывали повреждения печени. Кроме того, все мыши хорошо переносили такую ​​высокую дозу, и мы не обнаружили никаких гистологических свидетельств повреждения клеток или воспаления в печени.

Инъекция высокой дозы rAAV8 со значительной эффективностью трансдуцировала несколько органов.Экспериментальные результаты, описанные выше, позволяют предположить, что инъекция в периферические вены вектора rAAV8 является многообещающей стратегией, которая может безопасно обеспечить 100% трансдукцию гепатоцитов. Хотя результаты имеют отношение к будущим испытаниям генной терапии, мы должны принять во внимание, что эта стратегия может увеличить вероятность распространения вектора в непеченочные ткани при этих более высоких дозах. Чтобы решить эту проблему, мы провели исследование распределения тканей у мышей, которым через хвостовую вену или воротную вену вводили две разные дозы (3.0 × 10 11 и 7,2 × 10 12 мкг / мышь) AAV8-EF1α-nlslacZ (четыре различных комбинации, как показано в таблице 2). Через шесть недель после инъекции в дополнение к печени исследовали мозг, легкие, сердце, селезенку, почки, поджелудочную железу, яички, кишечник и скелетные мышцы. Распределение тканей оценивали как гистологическим окрашиванием срезов ткани X-Gal, так и анализом Саузерн-блоттинга векторных геномов в ДНК ткани. Первоначально мы использовали человеческий маркерный ген, управляемый энхансером-промотором EF1α, поскольку было показано, что он повсеместно экспрессируется у трансгенных животных в широком диапазоне типов клеток мыши (18).Типичные результаты окрашивания X-Gal каждой ткани, взятой у мышей, которым инъецировали только наполнитель (контроль) и 7,2 × 10 12 мкг / мышь через хвостовую вену, показаны на фиг. 5A и B.

Фиг. 5.

Репрезентативные микрофотографии срезов различных тканей мыши через 6 недель после инъекции AAV8-EF1α-nlslacZ в хвостовую вену в дозе 7,2 × 10 12 мкг / мышь (от A до D) или через 3 недели после инъекции AAV8 в хвостовую вену -CMV-lacZ в дозе 3,0 × 10 11 или 7.2 × 10 12 вг / мышь (E). Срезы окрашивали либо X-Gal (A, B, D и E), либо указанными антителами (C). (A) Тканевое распределение β-галактозидаза-положительных клеток: lu, легкое; h, сердце; с, селезенка; k - почка; я, кишечник; т, семенник; p - поджелудочная железа; и m, скелетная мышца (четырехглавая мышца). В верхнем ряду представлены ткани от мышей, которым вводили только наполнитель, а в нижнем ряду показаны образцы от мышей, которым вводили вектор. (B) Трансдукция мозга с помощью rAAV8. (а) Кора головного мозга.Положительные клетки разбросаны по всему региону. (б) Гиппокамп. Положительные клетки наблюдаются как в гранулярном, так и в пирамидальном слое клеток. (c) полосатое тело. (d) Миндалевидное тело. (e) Гипоталамус. β-Галактозидаза-положительные нейроны и глиальные клетки сгруппированы в дугообразном ядре и срединном возвышении. Некоторые клетки эпендимы третьего желудочка также положительны. (е) Мозжечок. Клетки Пуркинье регионально хорошо трансдуцируются. (C) Конфокальная микроскопия для оценки совместной локализации β-галактозидазы и либо NeuN (маркер нейронов), либо GFAP (маркер астроцитов) для определения типов клеток, трансдуцированных rAAV8, в коре головного мозга.И нейроны, и глиальные клетки трансдуцировались rAAV8. Масштабные линейки 5 мкм. (D) Трансдукция гладкомышечных клеток сосудов в стенках ветви коронарной артерии (а) и ветви селезеночной артерии (б). (E) Тканевое распределение β-галактозидаза-положительных клеток у мышей, которым вводили AAV8-CMV-lacZ через хвостовую вену. Векторные дозы (vg / мышь) указаны над изображениями. Срез поджелудочной железы также окрашивали антиинсулиновыми антителами (коричневые клетки). Масштабные линейки (дублированные линии), 250 мкм.lv, печень; t.a., большеберцовая мышца передней конечности. Ткани на панелях A, B, D и E контрастировали с ядерно-быстрым красным или светлым гематоксилином. Масштабные линейки соответствуют 100 мкм, если не указано иное.

Исследование показало, что при 3,0 × 10 11 мкг / мышь очень мало трансдуцированных клеток, экспрессирующих β-галактозидазу, наблюдалось вне печени. Однако при 7,2 × 10 12 мкг / мышь несколько органов содержали много клеток, экспрессирующих β-галактозидазу (фиг. 5A и B). В частности, относительно хорошо трансдуцировались мозг, сердце и гладкие мышцы стенки кишечника.Легкое и поджелудочная железа также содержали значительное количество положительных клеток. Кроме того, гладкомышечные клетки сосудов в различных тканях часто оказывались строго положительными (рис. 5D). В поджелудочной железе большинство положительных клеток были ацинарными клетками и были обнаружены за пределами островков Лангерганса. Не было различий в распределении между инъекциями в хвостовую вену и воротную вену (данные не показаны).

В головном мозге иммуногистохимический анализ показал, что трансдуцировались как нейроны, так и глиальные клетки (рис.5С). Трансдуцированные клетки были распределены по всему мозгу, включая кору головного мозга, полосатое тело, гиппокамп, таламус и мозжечок. Было несколько небольших очагов, в которых собирались трансдуцированные клетки (рис. 5Be). К таким очагам относятся срединное возвышение и дугообразное ядро ​​гипоталамуса и базолатеральное ядро ​​миндалины. Клетки Пуркинье в мозжечке были регионально хорошо трансдуцированы (рис. 5Bf), как ранее сообщалось другими с использованием векторов rAAV2 (13, 20).

В семенниках иногда наблюдались β-галактозидаза-положительные клетки, но ограничивались клетками, находящимися в интерстициальном пространстве.Ни одна из клеток в семенных канальцах не была положительной по активности β-галактозидазы.

Саузерн-блот-анализ ДНК, выделенной из этих тканей, показал, что двухцепочечные векторные геномы были обнаружены во всех проанализированных тканях на относительно высоких уровнях (рис. 6). Среднее число копий двунитевого вектора в каждой ткани составляло 19,6 ds-vg / dge в сердце, 19,0 ds-vg / dge в скелетных мышцах, 14,4 ds-vg / dge в легких, 13,7 ds-vg / dge в легких. почка, 7,6 ds-vg / dge в яичках, 5.1 ds-vg / dge в кишечнике, 4,2 ds-vg / dge в селезенке, 2,7 ds-vg / dge в головном мозге и 2,1 ds-vg / dge в поджелудочной железе (от самого высокого до самого низкого). Следует отметить, что даже в тканях с небольшим количеством положительных клеток, таких как селезенка, семенники и скелетные мышцы, геномы двухцепочечного вектора rAAV8 были обнаружены на уровнях, сопоставимых с уровнями в тканях с множеством экспрессирующих β-галактозидазу клеток. предполагая, что степень экспрессии β-галактозидазы не обязательно коррелирует с уровнем распространения генома вектора.

РИС. 6.

Анализ распределения тканей методом Саузерн-блоттинга. Различные ткани собирали от мышей, которым инъецировали 7,2 × 10 12 мкг AAV8-EF1α-nlslacZ через хвостовую вену или воротную вену (по одной мыши каждой). Тотальную геномную ДНК экстрагировали из тканей, и 10 мкг каждой ДНК обрабатывали BglI и разделяли на 0,8% агарозном геле. Векторные геномы детектировали с помощью зонда BglI-BglI lacZ размером 2,1 т.п.н. Стандарты количества копий двухцепочечного векторного генома (от 0 до 30 ds-vg / dge) получали, как описано в легенде к фиг.4. Сокращения: б - мозг; лу, легкое; h, сердце; с, селезенка; k - почка; я, кишечник; т, семенник; p - поджелудочная железа; и м, скелетная мышца. В каждом наборе тканей левая и правая полосы представляют образцы от мышей, которым инъецировали через хвостовую вену и воротную вену, соответственно. Для денситометрического анализа см. Раздел «Результаты».

Периферическая инъекция вектора rAAV8 трансдуцировала все скелетные и сердечные мышцы и большинство клеток поджелудочной железы в контексте промотора цитомегаловируса.Для дальнейшего устранения несоответствия результатов гистологического и саузерн-блоттинга в контексте вектора AAV8-EF1α-nlslacZ мы повторили исследование распределения тканей с вектором AAV8-CMV-lacZ. Мы вводили самцам мышей C57BL / 6 rag-1 через хвостовую вену вектор AAV8-CMV-lacZ в дозе 3,0 × 10 11 или 7,2 × 10 12 мкг / мышь ( n = 2 каждый). Через три недели после инъекции вектора мы проанализировали различные ткани с помощью окрашивания X-Gal. В дозе 3.0 × 10 11 мкг / мышь, гепатоциты трансдуцировались на уровнях, сопоставимых с уровнем AAV8-EF1α-nlslacZ. Однако, что интересно, лучше всего трансдуцированным органом была не печень, а сердце. Большинство кардиомиоцитов трансдуцировали AAV8-CMV-lacZ в дозе 3,0 × 10 11 мкг / мышь (рис. 5E), хотя в других непеченочных тканях, включая скелетные, наблюдали не так много положительных клеток, экспрессирующих β-галактозидазу. мышца.

При дозе 7,2 × 10 12 мкг / мышь трансдуцировалась вся печень (рис.5E). Удивительно, но AAV8-CMV-lacZ трансдуцировал сердце и скелетные мышцы с чрезвычайно высокой эффективностью в этой дозе. Трансдуцировалась вся сердечная мышца и трансдуцировались практически все миофибриллы в скелетных мышцах (рис. 5E). Окрашивание всего тела X-Gal мыши, инъецированной внутривенно AAV8-CMV-lacZ, показало, что все скелетные мышцы по всему телу, включая диафрагму, были полностью преобразованы (данные не показаны). Кроме того, мы наблюдали значительную трансдукцию ацинарных клеток и островковых клеток поджелудочной железы (рис.5E).

Таким образом, вектор rAAV8 имеет сильный тропизм к печени, но при системном введении высоких доз вектора тропизм становится беспорядочным, что приводит к нежелательной трансдукции в нецелевых тканях, особенно в сердце, скелетных мышцах, гладких мышцах, поджелудочной железе и головном мозге. . Однако это открывает новую возможность того, что системное введение вектора rAAV8 может привести к широко распространенной трансдукции со значительной эффективностью данной ткани-мишени.

ОБСУЖДЕНИЕ

Настоящее исследование было проведено для изучения того, могут ли векторы rAAV альтернативных серотипов стабильно трансдуцировать все гепатоциты при введении высокой дозы вектора.Чтобы решить эту проблему, мы выбрали векторы rAAV1 и rAAV8 и выполнили исследование доза-ответ с ядерным локализующим вектором, экспрессирующим LacZ. Было показано, что оба вектора обладают кинетикой трансдукции в печень, отличной от кинетики векторов rAAV2 (15, 17, 54). Хотя вектор rAAV1 не смог трансдуцировать все гепатоциты из-за притупления зависимости доза-ответ при высоких дозах вектора, настоящее исследование ясно продемонстрировало, что профиль доза-ответ rAAV8 оставался неизменным в широком диапазоне доз вектора, пока все гепатоциты не были стабильными. преобразовано на 7.2 × 10 12 вг / мышь. За исключением самокомплементарных векторов, обсуждаемых ниже, это первое сообщение о том, что вектор rAAV может давать ≈100% -ную трансдукцию гепатоцитов без явной токсичности после простой неинвазивной инъекции в периферическую вену. Кроме того, мы продемонстрировали, что внутривенная инъекция вектора rAAV8 мышам может трансдуцировать целые скелетные мышцы по всему телу, всю сердечную мышцу и значительное количество клеток поджелудочной железы, гладкомышечных клеток и клеток мозга.

Наши знания о механизмах трансдукции rAAV все еще очень ограничены. Мы изучали, почему векторы rAAV2 могут стабильно трансдуцировать только часть гепатоцитов. Нарушение захвата вектора в подмножестве гепатоцитов не может объяснить это наблюдение, поскольку векторные геномы были обнаружены в большинстве гепатоцитов на следующий день после введения вектора (32). Следовательно, блоки на уровне поствекторального процессинга должны вносить вклад в ограниченную печеночную трансдукцию с помощью rAAV2.Такие барьеры включают эндосомный процессинг и модификацию вирусной оболочки, которая включает систему убиквитин / протеасома (9, 19), цитоплазматический транспорт (48, 50), проникновение в ядро, непокрытие (54), преобразование одноцепочечных векторных геномов в двухцепочечные. (11, 12, 38), процессинг двухцепочечных векторных геномов в транскрипционно активные молекулы посредством рекомбинации векторного генома (8, 36) и стабильное пребывание в ядерном окружении, что делает возможной экспрессию трансгена. В настоящее время нелегко согласовать различные наблюдения с некоторыми противоречиями в разных лабораториях, но несколько недавних наблюдений или нововведений предоставили несколько важных ключей к разгадке этого вопроса.

Недавно были разработаны самокомплементарные или двухцепочечные векторы rAAV (13, 30, 31, 57). Самокомплементарные векторы rAAV обладают геномами двухцепочечных векторов, подобных шпильке половинного размера. Важной особенностью этого вектора является то, что он не требует образования дуплексной ДНК из одноцепочечных векторных геномов, что является одним из основных ограничивающих этапов трансдукции вектора rAAV (11, 12). Недавно было показано, что ≈90% гепатоцитов могут быть стабильно трансдуцированы, когда самокомплементарный вектор rAAV серотипа 2, несущий маркерный ген, вводят в печень мышей (57).Это предполагает, что высвобождение векторных геномов из вирусных вирионов происходит в большинстве гепатоцитов, и поэтому механизмы ограниченной трансдукции печени должны быть связаны с неэффективностью образования дуплексной ДНК из одноцепочечных векторных геномов. Однако, что важно, это не обязательно исключает возможность того, что факторы, предшествующие образованию дуплексной ДНК, могут вносить вклад в неэффективность трансдукции печени с помощью rAAV2.

По крайней мере, две модели были предложены для решения проблемы неэффективного образования дуплексной ДНК при rAAV2-опосредованной трансдукции печени.Первая модель включает клеточный аппарат, который непосредственно регулирует формирование генома дуплексного вектора. Недавно Zhong et al. продемонстрировали, что у трансгенных мышей с Т-клеточным белком тирозинфосфата и мышей с нокаутом FKBP52 вектор rAAV2 трансдуцировал в 12-16 раз больше гепатоцитов, чем аналоги дикого типа (61). В этих мышиных моделях фосфорилированные формы FKBP52, которые, как известно, связываются с инвертированным концевым повтором AAV и блокируют синтез второй цепи (43), подавлены или недостаточны. Из своих наблюдений они утверждали, что нарушение образования дуплексной ДНК за счет синтеза второй цепи (11, 12) препятствует эффективной трансдукции.Вторая модель включает в себя восходящий фактор, то есть скорость отслоения капсида косвенно определяет эффективность образования дуплексной ДНК. В этой модели, предложенной Thomas et al. (54), более медленное раскрытие капсида rAAV2, чем rAAV8, ограничивает образование дуплексной ДНК в гепатоцитах за счет отжига комплементарных плюс и минус одноцепочечных геномов rAAV2 (38), что приводит к неэффективной трансдукции печени с помощью векторов rAAV2. Однако в настоящее время у нас нет четкого ответа, который объясняет, почему стабильная трансдукция печени с помощью rAAV2, но не rAAV8, ограничена фракцией гепатоцитов.

Тем не менее, настоящее исследование продемонстрировало, что все гепатоциты способны преобразовывать одноцепочечные геномы rAAV2 (доставляемые с капсидами AAV8) в дуплексную ДНК. Это означает, что белки вирусного капсида, а не клеточные факторы сами по себе, существенно влияют на эффективность образования дуплексной ДНК в каждом гепатоците на уровне поствекторного процессинга векторов rAAV. Другими словами, в rAAV2-непермиссивных гепатоцитах, которые составляют ≈90% от общего числа гепатоцитов и могут поглощать векторы rAAV2, но не экспрессировать продукт трансгена, формирование генома дуплексного вектора rAAV2 нарушается на уровне поствектора, когда векторные геномы нарушены. поставляются с капсидами AAV2, но не нарушаются, когда они поставляются с капсидами AAV8.

Профиль биораспределения тканей после системного введения вектора rAAV8 был описан в исследовании на мышиной модели гемофилии А (49). Они вводили мышам от 10 90 487 10 90 488 до 10 90 487 11 90 488 мкг вектора, экспрессирующего фактор свертывания крови собак VIII, и количественно определяли число копий генома вектора с помощью TaqMan PCR. Они пришли к выводу, что rAAV8 имеет сильный тропизм к печени, но не наблюдалось явного распространения векторного генома, хотя они обнаружили сигналы от 0,26 до 0,70 копий / клеток в сердцах 2 из 21 исследованных мышей и 0.От 41 до 0,77 копий / клеточных сигналов в легких 3 из 21 исследованного животного, значимость которых не обсуждалась в их отчете. Следует отметить, что эти два органа входят в число четырех органов, которые в нашем исследовании имели векторные геномы на уровнях более 10 ds-vg / dge.

В нашем исследовании мы ясно продемонстрировали, что в контексте промотора цитомегаловируса rAAV8 трансдуцировал сердце с чрезвычайно высокой эффективностью даже при дозе 3,0 × 10 11 мкг / мышь, и сердце было лучшим. -трансдуцированная ткань среди всех проанализированных тканей, включая печень в точке 3.0 × 10 11 vg / мышь. При дозе 7,2 × 10 12 мкг / мышь трансдуцировалось 100% кардиомиоцитов. Хотя мы не смогли определить минимальную дозу вектора rAAV8, необходимую для 100% трансдукции кардиомиоцитов, предполагается, что она намного меньше, чем 7,2 × 10 12 мкг / мышь, учитывая, что 3,0 × 10 11 мкг / мышь было достаточно для трансдукции большинство кардиомиоцитов. Скелетные мышцы также хорошо трансдуцировались при высокой дозе вектора. При дозе 7,2 × 10 12 мкг / мышь трансдуцировались практически все миофибриллы во всей системе скелетных мышц по всему телу, хотя они были менее восприимчивы к rAAV8, чем сердечная мышца, учитывая, что не многие миофибриллы трансдуцировались в доза 3.0 × 10 11 vg / мышь. Недавно Gregorevic et al. показали, что внутрисосудистое введение векторов rAAV6 привело к широко распространенной трансдукции скелетных мышц и трансдукции всей сердечной мышцы, как мы наблюдали с rAAV8 в нашем настоящем исследовании, и они также установили доказательство принципа того, что системное введение вектора rAAV6 может использоваться для лечить мышечную дистрофию Дюшенна (16). Следует отметить, что для увеличения проницаемости периферических микрососудов их метод требовал одновременной инъекции фактора роста эндотелия сосудов, что не было необходимо в контексте векторов rAAV8.

Интересно также, что мы наблюдали обширную трансдукцию в поджелудочной железе с помощью rAAV8 без каких-либо гистологических свидетельств, указывающих на повреждение клеток или воспаление. В соответствии с предыдущим отчетом о rAAV8 (55), ацинарные клетки поджелудочной железы были основной мишенью, но продуцирующие инсулин островковые клетки поджелудочной железы также в определенной степени трансдуцировались. Наше исследование продемонстрировало, что системное введение векторов rAAV8 может обеспечить панкреатическую трансдукцию на уровнях, эквивалентных или даже превышающих уровни, достигаемые с помощью аденовирусных векторов (55).

Для нас было удивительно, что инъекция вектора rAAV8 в хвостовую вену или воротную вену может трансдуктировать широкие области мозга, поскольку в целом невозможно трансдуктировать этот орган с помощью системного внутривенного введения вирусных векторов из-за присутствия вируса. гематоэнцефалический барьер. В доклинических исследованиях тканевого распределения иногда сообщалось о выделении вектора rAAV с незначительными уровнями в головном мозге (10, 17, 32, 49, 58). Однако ни одно из этих исследований не изучало происхождение положительных сигналов ПЦР.Прошел ли rAAV гематоэнцефалический барьер и трансдуцировал нейроны и глиальные клетки или остался в соединительных тканях, включая кровеносные сосуды, не изучено. Интересно, что срединное возвышение и дугообразное ядро ​​гипоталамуса и базолатеральное ядро ​​миндалевидного тела были локально преобразованы с высокой эффективностью. Механизм (ы), лежащий в основе очаговой высокой трансдукции, не ясен, но может быть связан с обильным кровоснабжением. Интересно, что в гипоталамусе имеются фенестрированные капилляры с множеством мелких пор, увеличивающих проницаемость сосудов.

Распространение вирусных векторов в мозг является серьезной проблемой с точки зрения генной терапии печени, но доставка генов к нейронам и глиальным клеткам вирусными векторами имеет большие перспективы для генной терапии заболеваний центральной нервной системы. Прямая внутричерепная инъекция векторов обеспечивает эффективную трансдукцию ткани мозга, но трансдукция обычно ограничивается окрестностями места инъекции. Многие заболевания центральной нервной системы широко влияют на ткани головного мозга, поэтому глобальная трансдукция мозга с помощью альтернативных подходов часто является предпочтительной.Однако наличие гематоэнцефалического барьера предотвратило широко распространенную трансдукцию мозга. Недавно было показано, что две стратегии, внутриутробный перенос гена (26, 27) и системное или региональное вирусное введение после инфузии маннита (13, 28), успешно преодолевают это препятствие. Первый подход использует незрелость гематоэнцефалического барьера плода с повышенной проницаемостью, а второй временно нарушает гематоэнцефалический барьер, создавая гиперосмотическую среду в капиллярах мозга.Механизмы, с помощью которых rAAV8 может эффективно преодолевать неповрежденный гематоэнцефалический барьер, еще предстоит выяснить, и были ли частицы rAAV8 активно сопровождены еще не определенной системой или высокая доза вектора rAAV8 сама по себе повредила гематоэнцефалический барьер. необходимо решить.

Следует отметить, что вирусный препарат, который мы использовали для этого исследования, содержал 5% сорбита в PBS. Сорбитол представляет собой углевод с той же молекулярной массой, что и маннит, и используется в клинических условиях для создания гиперосмотической среды.Fu et al. сообщили, что для открытия гематоэнцефалического барьера и трансдукции ткани мозга мыши с внутривенным введением rAAV2 требовалась предварительная инфузия 200 мкл 25% маннита (соответствует 50 мг маннита) и одновременная инфузия такого же количества 12,5 % маннита (соответствует 25 мг) не оказали никакого действия. В нашем исследовании мы вводили 300 мкл векторных препаратов (что эквивалентно 15 мг маннита), и поэтому маловероятно, что наш наполнитель способствовал временному нарушению гематоэнцефалического барьера.Тем не менее, наше исследование ясно продемонстрировало, что внутривенное введение векторов rAAV8 может трансдуктировать нейроны и глиальные клетки в широких областях мозга взрослых мышей без какого-либо лечения, которое нарушает гематоэнцефалический барьер. Хотя механизм не ясен, rAAV8 предложит альтернативный подход к глобальной доставке генов центральной нервной системы в сочетании с доступными в настоящее время стратегиями.

За исключением печени, прямая инъекция в ткань-мишень является стандартным подходом для трансдукции векторами rAAV.Такой подход желателен, потому что он может минимизировать возможность распространения вектора на удаленные органы. Однако он часто страдает от ограничения векторов в месте инъекции, что препятствует распространенной трансдукции в органе-мишени. В связи с этим, rAAV8 может применяться для глобальной трансдукции в данном непеченочном органе-мишени. Все проанализированные ткани имели геномы двухцепочечных векторов rAAV8 на уровнях не менее 2 ds-vg / dge. Важно подчеркнуть, что диссеминация вектора определялась саузерн-блот-анализом геномной ДНК, а не анализом на основе ПЦР.Этот метод лучше всего подходит для обнаружения геномов двухцепочечных векторов, сформированных внутри клеток. Следует отметить, что эффективность трансдукции, определяемая экспрессией трансгена и числом копий векторного генома, не коррелировала. Предположительно активность промотора варьируется в зависимости от тканей, и возможно, что ткани с ограниченным количеством β-галактозидазопозитивных клеток в контексте EF1α или промотора-энхансера цитомегаловируса будут иметь существенную трансдукцию, если используется другой энхансер-промотор. .Для устранения этих расхождений потребуется дальнейшее расследование.

Таким образом, мы демонстрируем, что все гепатоциты способны преобразовывать входящие однонитевые векторные геномы в дуплексную ДНК и допускают стабильную трансдукцию с векторами rAAV8. В отличие от векторов rAAV2, с помощью вектора rAAV8 можно было достичь ≈100% трансдукции гепатоцитов, и несколько органов можно было трансдуктировать с чрезвычайно высокой эффективностью после инъекции в периферическую вену, просто увеличив дозу вектора.Эти результаты не только дают новое представление о механизмах трансдукции в печени с помощью векторов rAAV, но также открывают новые возможности применения векторов rAAV8 в генной терапии, функциональной геномике и создании различных моделей заболеваний на животных, хотя с точки зрения безопасности высокий Стратегия системной инъекции вектора rAAV8 должна учитывать беспорядочный тропизм этого вектора.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим Макото Ямакадо за гистологический анализ.

Эта работа была поддержана Премией развития карьеры Национального фонда гемофилии Х.N. и грант NIH HL66948 M.A.K.

СНОСКИ

    • Получено 18 мая 2004 г.
    • Принято 20 августа 2004 г.
  • Copyright © 2005 Американское общество микробиологии

СПРАВОЧНИКИ

  1. 92936 Александер , и А.Д. Миллер. 1994. Агенты, повреждающие ДНК, значительно увеличивают трансдукцию неделящихся клеток аденоассоциированными вирусными векторами. J. Virol. 68, : , 8282-8287.

  2. 2.

    Александер И. Э., Д. В. Рассел, А. М. Спенс и А. Д. Миллер. 1996. Влияние гамма-излучения на трансдукцию делящихся и неделящихся клеток в головном мозге и мышцах крыс аденоассоциированными вирусными векторами. Гм. Gene Ther.7 : 841-850.

  3. 3.↵

    Burton, M., H. Nakai, P. Colosi, J. Cunningham, R. Mitchell и L. Couto. 1999. Совместная экспрессия аденоассоциированных вирусных векторов тяжелой и легкой цепи фактора VIII продуцирует биологически активный белок.Proc. Natl. Акад. Sci. USA96 : 12725-12730.

  4. 4.↵

    Чао, Х., Ю. Лю, Дж. Рабиновиц, К. Ли, Р. Дж. Самульски и К. Э. Уолш. 2000. Увеличение в несколько логарифмов доставки терапевтического трансгена с помощью различных векторов аденоассоциированного вирусного серотипа. Мол. Ther.2 : 619-623.

  5. 5.

    Чен, С. Дж., Дж. Тазелаар и Дж. М. Уилсон. 2001. Селективная репопуляция нормальной печени мыши гепатоцитами, трансдуцированными in vivo рекомбинантным аденоассоциированным вирусом.Гм. Gene Ther.12 : 45-50.

  6. 6.↵

    Chiorini, J. A., L. Yang, Y. Liu, B. Safer и R.M. Kotin. 1997. Клонирование аденоассоциированного вируса типа 4 (AAV4) и получение рекомбинантных частиц AAV4. J. Virol.71 : 6823-6833.

  7. 7.↵

    Дэвидсон, Б. Л., К. С. Стейн, Дж. А. Хет, И. Мартинс, Р. М. Котин, Т. А. Дерксен, Дж. Забнер, А. Годси и Дж. А. Чиорини. 2000. Рекомбинантные векторы аденоассоциированного вируса 2, 4 и 5 типов: трансдукция различных типов и областей клеток в центральной нервной системе млекопитающих.Proc. Natl. Акад. Sci. USA97 : 3428-3432.

  8. 8.↵

    Дуан, Д., П. Шарма, Дж. Ян, Ю. Юэ, Л. Дудус, Ю. Чжан, К. Дж. Фишер и Дж. Ф. Энгельгардт. 1998. Циркулярные промежуточные соединения рекомбинантного аденоассоциированного вируса определили структурные характеристики, ответственные за длительную эписомальную стойкость в мышечной ткани. J. Virol.72 : 8568-8577.

  9. 9.↵

    Дуань Д., Ю. Юэ, З. Ян, Дж. Ян и Дж.Ф. Энгельгардт. 2000. Эндосомный процессинг ограничивает перенос генов в поляризованный эпителий дыхательных путей аденоассоциированным вирусом. J. Clin. Исследование 105 : 1573-1587.

  10. 10.↵

    Фавр, Д., Н. Провост, В. Блуэн, Г. Бланшо, Й. Шерель, А. Сальветти и П. Мулье. 2001. Немедленная и долгосрочная безопасность инъекции рекомбинантного аденоассоциированного вируса в мышцу нечеловеческого примата. Мол. Ther.4 : 559-566.

  11. 11.№

    Феррари, Ф. К., Т. Самульски, Т. Шенк и Р. Дж. Самульски. 1996. Синтез второй цепи является лимитирующей стадией для эффективной трансдукции рекомбинантными аденоассоциированными вирусными векторами. J. Virol.70 : 3227-3234.

  12. 12.

    Фишер, К. Дж., Г. П. Гао, М. Д. Вайцман, Р. Де Маттео, Дж. Ф. Бурда и Дж. М. Уилсон. 1996. Трансдукция рекомбинантным аденоассоциированным вирусом для генной терапии ограничена синтезом ведущей цепи.J. Virol. 70, : , 520-532.

  13. 13.

    Fu, H., J. Muenzer, R. J. Samulski, G. Breese, J. Sifford, X. Zeng и D. M. McCarty. 2003. Самокомплементарный вектор серотипа 2 аденоассоциированного вируса: глобальное распространение и широкая дисперсия AAV-опосредованной экспрессии трансгена в мозге мышей. Мол. Ther.8 : 911-917.

  14. 14.↵

    Гао, Г., Л. Х. Ванденберге, М. Р. Альвира, Ю. Лу, Р. Кальседо, Х. Чжоу и Дж.М. Уилсон. 2004. Клады аденоассоциированных вирусов широко распространены в тканях человека. J. Virol.78 : 6381-6388.

  15. 15.

    Гао, Г. П., М. Р. Альвира, Л. Ван, Р. Кальседо, Дж. Джонстон и Дж. М. Уилсон. 2002. Новые аденоассоциированные вирусы макак-резусов как векторы для генной терапии человека. Proc. Natl. Акад. Sci. USA99 : 11854-11859.

  16. 16.↵

    Грегоревич П., М. Дж. Бланкиншип, Дж.М. Аллен, Р. В. Кроуфорд, Л. Мёз, Д. Г. Миллер, Д. В. Рассел и Дж. С. Чемберлен. 2004. Системная доставка генов к поперечно-полосатым мышцам с использованием аденоассоциированных вирусных векторов. Nat. Med. 10 : 828-834.

  17. 17.↵

    Гримм, Д., С. Чжоу, Х. Накаи, К. Э. Томас, Т. А. Сторм, С. Фюесс, Т. Мацусита, Дж. Аллен, Р. Суроски, М. Лочри, Л. Meuse, A. McClelland, P. Colosi и MA Kay. 2003. Доклиническая оценка in vivo псевдотипированных аденоассоциированных вирусных векторов для генной терапии печени.Blood102 : 2412-2419.

  18. 18.↵

    Ханаока, К., М. Хаясака, Т. Уэцуки, А. Фудзисава-Сехара и Ю. Набешима. 1991. Стабильный клеточный маркер для анализа химер мышей: бактериальный ген хлорамфениколацетилтрансферазы, управляемый промотором человеческого фактора элонгации 1α. Дифференциация 48, : , 183-189.

  19. 19.↵

    Хансен, Дж., К. Цин и А. Шривастава. 2001. Перенос генов, опосредованный аденоассоциированным вирусом типа 2: измененный процессинг эндоцитов увеличивает эффективность трансдукции в мышиных фибробластах.J. Virol. 75, : 4080-4090.

  20. 20.↵

    Кеммерер, В. Ф., Р. Дж. Редди, К. А. Уорлик, С. Д. Хартунг, Р. С. Макайвор и В. К. Лоу. 2000. Трансдукция in vivo клеток Пуркинье мозжечка с использованием аденоассоциированных вирусных векторов. Мол. Ther.2 : 446-457.

  21. 21.

    Кей, М. А., К. Ли, Т. Дж. Лю, Ф. Леланд, К. Томан, М. Файнголд и С. Л. Ву. 1992. Печеночная генная терапия: стойкая экспрессия человеческого α1-антитрипсина у мышей после прямой доставки гена in vivo.Гм. Gene Ther.3 : 641-647.

  22. 22.↵

    Кей, Массачусетс, М.А., Манно, М.В. Рагни, П.Дж. Ларсон, Л.Б. Коуту, А. МакКлелланд, Б. Глэдер, А.Дж. Чу, С.Дж. Тай, Р.В. Херцог, В. Арруда, Ф. Джонсон , C. Scallan, E. Skarsgard, AW Flake и KA High. 2000. Доказательства переноса генов и экспрессии фактора IX у пациентов с гемофилией B, леченных вектором AAV. Nat. Genet.24 : 257-261.

  23. 23.↵

    Кесслер, П.Д., Г. М. Подсакофф, X. Чен, С. А. МакКвистон, П. К. Колози, Л. А. Мателис, Г. Дж. Курцман и Б. Дж. Бирн. 1996. Доставка гена в скелетные мышцы приводит к устойчивой экспрессии и системной доставке терапевтического белка. Proc. Natl. Акад. Sci. USA93 : 14082-14087.

  24. 24.↵

    Kim, I.H., A. Jozkowicz, P.A. Piedra, K. Oka, L. Chan. 2001. Прижизненная коррекция генетического дефицита у мышей однократной инъекцией хелпер-зависимого аденовирусного вектора.Proc. Natl. Акад. Sci. USA98 : 13282-13287.

  25. 25.↵

    Кодзима, Х., М. Фудзимия, К. Мацумура, П. Юнан, Х. Имаеда, М. Маэда и Л. Чан. 2003. Генная терапия нейро-D-бетацеллюлином индуцирует регенерацию островков в печени и обращает вспять диабет у мышей. Nat. Med.9 : 596-603.

  26. 26.↵

    Лай, Л., Б. Б. Дэвисон, Р. С. Визи, К. Дж. Фишер и Г. Б. Баскин. 2002. Предварительная оценка биораспределения рекомбинантного аденоассоциированного вируса у макак-резусов после внутрипеченочной инокуляции в утробе матери.Гм. Gene Ther.13 : 2027-2039.

  27. 27.↵

    Липшутц, Г. С., Д. Титр, М. Бриндл, А. Р. Бисконте, К. Х. Контаг и К. М. Гаенслер. 2003. Сравнение экспрессии генов после внутрибрюшинной доставки AAV2 или AAV5 в утробе матери. Мол. Ther.8 : 90-98.

  28. 28.↵

    Мастаков, М. Ю., К. Баер, Р. Сюй, Х. Фитцсимонс и М. Дж. Во время. 2001. Комбинированная инъекция rAAV с маннитом усиливает экспрессию генов в головном мозге крысы.Мол. Ther.3 : 225-232.

  29. 29.↵

    McCaffrey, A. P., H. Nakai, K. Pandey, Z. Huang, F. H. Salazar, H. Xu, S. F. Wieland, P. L. Marion и M. A. Kay. 2003. Ингибирование вируса гепатита В у мышей с помощью РНК-интерференции. Nat. Biotechnol.21 : 639-644.

  30. 30.

    Маккарти, Д. М., Х. Фу, П. Э. Монахан, К. Э. Тулсон, П. Найк и Р. Дж. Самульски. 2003. Мутант с концевым повтором аденоассоциированного вируса (TR) генерирует самокомплементарные векторы, чтобы преодолеть лимитирующую стадию трансдукции in vivo.Gene Ther.10 : 2112-2118.

  31. 31.↵

    Маккарти, Д. М., П. Э. Монахан и Р. Дж. Самульски. 2001. Самокомплементарные векторы рекомбинантного аденоассоциированного вируса (scAAV) способствуют эффективной трансдукции независимо от синтеза ДНК. Gene Ther.8 : 1248-1254.

  32. 32.↵

    Мяо, К. Х., Х. Накаи, А. Р. Томпсон, Т. А. Сторм, В. Чиу, Р. О. Снайдер и М. А. Кей. 2000. Неслучайная трансдукция рекомбинантных аденоассоциированных вирусных векторов в гепатоциты мыши in vivo: клеточный цикл не влияет на трансдукцию гепатоцитов.J. Virol. 74, : , 3793-3803.

  33. 33.↵

    Мяо, К. Х., Р. О. Снайдер, Д. Б. Шовальтер, Г. А. Патейн, Б. Донахью, Б. Винтер и М. А. Кей. 1998. Кинетика интеграции rAAV в печени. Nat. Genet.19 : 13-15.

  34. 34.↵

    Nakai, H., RW Herzog, JN Hagstrom, J. Walter, SH Kung, EY Yang, SJ Tai, Y. Iwaki, GJ Kurtzman, KJ Fisher, P. Colosi, LB Couto , и KA High. 1998. Опосредованный аденоассоциированным вирусным вектором перенос гена фактора свертывания крови IX человека в печень мыши. Blood91 : 4600-4607.

  35. 35.↵

    Nakai, H., Y. Iwaki, M. A. Kay и L. B. Couto. 1999. Выделение рекомбинантных соединений аденоассоциированного вируса вектор-клеточная ДНК из печени мыши. J. Virol.73 : 5438-5447.

  36. 36.↵

    Nakai, H., T.A. Storm, S. Fuess, and M.A. Kay. 2003. Пути удаления свободных ДНК-векторов заканчиваются в нормальных и ДНК-PKcs-дефицитных гепатоцитах мышей SCID, трансдуцированных rAAV-векторами. Гм. Gene Ther.14 : 871-881.

  37. 37.↵

    Накаи, Х., Т.А. Сторм и М.А. Кей. 2000. Увеличение размера rAAV-опосредованных кассет экспрессии in vivo за счет межмолекулярного соединения двух комплементарных векторов. Nat. Biotechnol. 18, : , 527-532.

  38. 38.↵

    Накай, Х., Т.А. Сторм и М.А. Кей. 2000. Набор геномов одноцепочечных рекомбинантных аденоассоциированных вирусов и межмолекулярная рекомбинация ответственны за стабильную трансдукцию печени in vivo. J. Virol. 74 : 9451-9463.

  39. 39.↵

    Накай, Х., К. Э. Томас, Т. А. Сторм, С. Фьюсс, С. Пауэлл, У. Дж. Ф. и М. А. Кей. 2002. Ограниченное количество трансдуцибельных гепатоцитов ограничивает широкий диапазон линейных векторных дозозависимых реакций при rAAV-опосредованной трансдукции печени.J. Virol. 76, : , 11343-11349.

  40. 40.↵

    Накаи, Х., С. Р. Янт, Т. А. Сторм, С. Фюсс, Л. Мёз и М. А. Кей. 2001. Геномы вектора внехромосомных рекомбинантных аденоассоциированных вирусов в первую очередь ответственны за стабильную трансдукцию печени in vivo. J. Virol. 75, : 6969-6976.

  41. 41.↵

    Овертурф, К., М. Аль-Далими, Р. Тангуай, М. Брантли, К. Н. Оу, М. Финеголд и М. Громпе. 1996. Гепатоциты, скорректированные с помощью генной терапии, отбираются in vivo на мышиной модели наследственной тирозинемии типа I.Nat. Genet.12 : 266-273.

  42. 42.↵

    Ponder, KP, JR Melniczek, L. Xu, MA Weil, TM O'Malley, PA O'Donnell, VW Knox, GD Aguirre, H. Mazrier, NM Ellinwood, M. Sleeper , AM Maguire, SW Volk, RL Mango, J. Zweigle, JH Wolfe и ME Haskins. 2002. Лечебная неонатальная генная терапия печени у собак с мукополисахаридозом VII. Proc. Natl. Акад. Sci. USA99 : 13102-13107.

  43. 43.↵

    Цин, К., Дж. Хансен, К. А. Вейгель-Келли, М. Тан, С. Чжоу и А. Шривастава. 2001. Перенос гена, опосредованный аденоассоциированным вирусом типа 2: роль клеточного белка FKBP52 в экспрессии трансгена. J. Virol. 75, : , 8968-8976.

  44. 44.

    Цин, К., В. Ли, Л. Чжун, М. Тан, Дж. Хансен, К. А. Вейгель-Келли, Л. Чен, М. К. Йодер и А. Шривастава. 2003. Перенос гена, опосредованный аденоассоциированным вирусом типа 2: роль клеточного Т-клеточного протеина тирозинфосфатазы в экспрессии трансгена в установившихся клеточных линиях in vitro и трансгенных мышах in vivo.J. Virol. 77 : 2741-2746.

  45. 45.

    Цин К., X. С. Ван, Д. М. Кубе, С. Поннажаган, А. Баджпай и А. Шривастава. 1997. Роль фосфорилирования тирозина клеточного белка в экспрессии трансгена, опосредованной аденоассоциированным вирусом 2. Proc. Natl. Акад. Sci. USA94 : 10879-10884.

  46. 46.↵

    Rabinowitz, J. E., F. Rolling, C. Li, H. Conrath, W. Xiao, X. Xiao, and R. J. Samulski. 2002 г.Перекрестная упаковка генома одного вектора аденоассоциированного вируса (AAV) типа 2 в несколько серотипов AAV обеспечивает трансдукцию с широкой специфичностью. J. Virol. 76 : 791-801.

  47. 47.↵

    Ратледж, Э. А., К. Л. Халберт и Д. В. Рассел. 1998. Инфекционные клоны и векторы, полученные из серотипов аденоассоциированного вируса (AAV), отличных от AAV типа 2. J. Virol.72 : 309-319.

  48. 48.↵

    Санлыоглу, С., П. К. Бенсон, Дж. Ян, Э. М. Аткинсон, Т. Рейнольдс и Дж. Ф. Энгельхардт. 2000. Эндоцитоз и ядерный перенос аденоассоциированного вируса типа 2 контролируются активацией rac1 и фосфатидилинозитол-3 киназ. J. Virol. 74 : 9184-9196.

  49. 49.↵

    Саркар, Р., Р. Тетро, ​​Г. Гао, Л. Ван, П. Белл, Р. Чендлер, Дж. М. Уилсон и Х. Х. Казазян, младший 2004. Полная коррекция гемофилии A у мышей с собачьим FVIII с использованием серотипа AAV 8.Blood103 : 1253-1260.

  50. 50.↵

    Зайзенбергер, Г., М. У. Рид, Т. Эндресс, Х. Бунинг, М. Халлек и К. Брахле. 2001. Визуализация одной молекулы в реальном времени пути заражения аденоассоциированным вирусом. Science294 : 1929-1932.

  51. 51.↵

    Снайдер, Р. О., К. Мяо, Л. Мёз, Дж. Табб, Б. А. Донахью, Х. Ф. Лин, Д. В. Стаффорд, С. Патель, А. Р. Томпсон, Т. Николс, М. С. Рид, Д. А. Беллинджер, К.М. Бринкхаус и М. А. Кей. 1999. Коррекция гемофилии B на моделях собак и мышей с использованием рекомбинантных аденоассоциированных вирусных векторов. Nat. Мед. 5 : 64-70.

  52. 52.↵

    Снайдер, Р. О., С. К. Мяо, Г. А. Патейн, С. К. Спратт, О. Данос, Д. Надь, А. М. Гоун, Б. Винтер, Л. Мёз, Л. К. Коэн, А. Р. Томпсон и Массачусетс Кей. 1997. Постоянные и терапевтические концентрации человеческого фактора IX у мышей после переноса гена в печень рекомбинантных векторов AAV.Nat. Genet.16 : 270-276.

  53. 53.↵

    Tenenbaum, L., A. Chtarto, E. Lehtonen, T. Velu, J. Brotchi и M. Levivier. 2004. Доставка гена в центральную нервную систему, опосредованная рекомбинантным AAV. J. Gene Med. 6 (Дополнение 1) : S212-S222.

  54. 54.↵

    Thomas, C. E., T. A. Storm, Z. Huang, and M. A. Kay. 2004. Быстрое снятие оболочки с векторных геномов является ключом к эффективной трансдукции печени псевдотипированными аденоассоциированными вирусными векторами.J. Virol. 78, : , 3110-3122.

  55. 55.↵

    Wang, A. Y., P. D. Peng, A. Ehrhardt, T. A. Storm и M. A. Kay. 2004. Сравнение аденовирусных и аденоассоциированных вирусных векторов для доставки гена поджелудочной железы in vivo. Гм. Gene Ther.15 : 405-413.

  56. 56.↵

    Ван, К., К. М. Ван, К. Р. Кларк и Т. Дж. Сферра. 2003. Эффективность трансдукции рекомбинантного AAV серотипа 1 и тропизм в мозге мышей.Gene Ther.10 : 1528-1534.

  57. 57.↵

    Ван, З., Х. И. Ма, Дж. Ли, Л. Сунь, Дж. Чжан и Х. Сяо. 2003. Быстрая и высокоэффективная трансдукция двухцепочечными аденоассоциированными вирусными векторами in vitro и in vivo. Gene Ther.10 : 2105-2111.

  58. 58.↵

    Уайт, С. Дж., С. А. Никлин, Х. Бунинг, М. Дж. Броснан, К. Лейке, Е. Д. Пападакис, М. Халлек и А. Х. Бейкер. 2004. Нацеленная доставка генов в сосудистую ткань in vivo с помощью векторов аденоассоциированного вируса, модифицированных тропизмом.Circulation109 : 513-519.

  59. 59.↵

    Xiao, W., S. C. Berta, M. M. Lu, A. D. Moscioni, J. Tazelaar, and J. M. Wilson. 1998. Аденоассоциированный вирус как вектор для генной терапии, направленной на печень. J. Virol.72 : 10222-10226.

  60. 60.↵

    Xiao, W., N. Chirmule, S. C. Berta, B. McCullough, G. Gao, and J. M. Wilson. 1999. Векторы генной терапии на основе аденоассоциированного вируса 1 типа. J. Virol.73 : 3994-4003.

  61. 61.↵

    Чжун, Л., В. Ли, З. Ян, Л. Чен, Ю. Ли, К. Цин, К. А. Вейгель-Келли, М. С. Йодер, В. Шоу и А. Шривастава. 2004. Улучшенная трансдукция первичных гепатоцитов мыши рекомбинантными векторами аденоассоциированного вируса 2 in vivo. Gene Ther.11 : 1165-1169.

7. Векторы в трехмерном пространстве

Ранее мы видели, как представить двумерные векторы на плоскости x - y .

Теперь мы расширяем идею представления трехмерных векторов с помощью осей x - y - z . (См. «Трехмерную систему координат» для справки по этому поводу). 2) = 6.16 \ "единиц" `

Добавление трехмерных векторов

Ранее мы видели, как складывать двумерные векторы. Теперь мы расширим идею для трехмерных векторов.

Мы просто складываем компоненты i вместе, затем компоненты j и, наконец, компоненты k .

Пример 1

Два якоря удерживают судно на месте, и их силы, действующие на судно, представлены векторами A и B следующим образом:

A = 2 i + 5 j - 4 k и B = −2 i - 3 j - 5 k

Если бы мы заменили 2 якоря на 1 якорь, какой вектор представляет этот единственный вектор?

Ответ

Задача просто требует, чтобы мы сложили векторы, чтобы получить единственный результирующий вектор.

A + B

= (2 + −2) i + (5 - 3) j + (−4 - 5) k

= 0 i + 2 j - 9 k

= 2 j - 9 k

Точечное произведение трехмерных векторов

Чтобы найти скалярное произведение (или скалярное произведение) трехмерных векторов, мы просто расширяем идеи скалярного произведения в двух измерениях, с которыми мы встречались ранее.

Пример 2 - Точечное произведение с использованием величины и угла

Найдите скалярное произведение векторов P и Q , учитывая, что угол между двумя векторами составляет 35 ° и

.

| P | = 25 ед. с и | Q | = 4 шт.

Ответ

Используя нашу формулу для скалярного произведения:

P • Q = | P | | Q | cos θ

имеем:

P • Q

= | P | | Q | cos θ

= 25 × 4 × cos 35 °

= 81.92

Пример 3 - Точечное произведение, если векторы являются кратными единичным векторам

Найдите скалярное произведение векторов A и B (они взяты из нашего примера привязки выше):

A = 2 i + 5 j - 4 k и B = −2 i - 3 j - 5 k

Ответ

A • B

= (2 i + 5 j - 4 k ) (−2 i - 3 j - 5 k )

= (2 × −2) + (5 × −3) + (−4 × −5)

= −4 + ​​−15 + 20

= 1

Направляющие косинусы

Предположим, у нас есть вектор OA с начальной точкой в ​​начале координат и конечной точкой в ​​A.

Предположим также, что у нас есть единичный вектор в том же направлении, что и OA . (См. Напоминание об единичных векторах).

Пусть наш единичный вектор будет:

u = u 1 i + u 2 j + u 3 k

На графике u - это единичный вектор (черный), указывающий в том же направлении, что и вектор OA , и i , j и k (единичные векторы в x-, y- и z- соответственно) отмечены зеленым.

Теперь мы увеличиваем вектор и и немного меняем ориентацию, как показано ниже:

Теперь, если на диаграмме выше,

α - это угол между u и осью x (темно-красным),
β - угол между u и осью y (зеленый) и
γ - угол между u и z - ось (розового цвета),

, то мы можем использовать скалярное произведение и записать:

u 1

= u i

= 1 × 1 × cos α

= cos α

u 2

= u j

= 1 × 1 × cos β

= cos β

u 3

= u k

= 1 × 1 × cos γ

= cos γ

Итак, мы можем записать единичный вектор и как:

u = cos α i + cos β j + cos γ k

Эти 3 косинуса называются направляющими косинусами .

Угол между трехмерными векторами

Ранее мы видели, как найти угол между двумерными векторами. Мы используем ту же формулу для трехмерных векторов:

`theta = arccos ((P * Q) / (| P || Q |))`

Пример 4

Найдите угол между векторами P = 4 i + 0 j + 7 k и Q = -2 i + j + 3 k . 2)`

`= sqrt (65) sqrt (14)`

`= 30.166 \ "единиц" `

Так

θ = arccos (13 ÷ 30,166)

Следовательно, угол между векторами P и Q равен

.

θ = 64,47 °

Упражнение

Найдите угол между векторами P = 3 i + 4 j -7 k и Q = -2 i + j + 3 k .

Ответ

По формуле

`theta = arccos ((P * Q) / (| P || Q |))`

сначала находим скалярное произведение:

P • Q

= (3 i + 4 j - 7 j ) (−2 i + j + 3 k)

= (3 × −2) + (4 × 1) + (−7 × 3)

= −23

А теперь знаменатель:

| P | | Q |

= √ (3 2 + 4 2 + (−7) 2 ) × √ ((- 2) 2 + 1 2 + 3 2 )

= 32.187

Так

θ = arccos (−23 ÷ 32,187)

Следовательно, угол между векторами P и Q равен

.

θ = 135,6 °

Приложение

У нас есть куб ABCO PQRS, у которого есть нить по диагонали куба от B до S, а другая по другой диагонали от C до P

Какой угол между двумя струнами?

Ответ

Для удобства предположим, что у нас есть единиц куба (каждая сторона имеет длину 1 единицу), и мы разместим его так, чтобы один угол куба находился в начале координат.