Человек термин: 1. «», «», «», «»

Homo sapiens появился на 100 тысяч лет раньше, чем считалось ранее

• Паллаб Гош
• Корреспондент Би-би-си по вопросам науки, Париж

8 июня 2017

Автор фото, Philipp Gunz/MPI EVA Leipzig

Подпись к фото,

Реконструкция черепа самого раннего из известных представителей Homo sapiens, сделанная с помощью сканирования многочисленных останков из Джебель-Ирхуда

Представления о том, что современный человек появился в одной-единственной «колыбели человечества» в восточной Африке около 200 тысяч лет назад, более не состоятельны, говорится в новом исследовании.

Ископаемые останки пяти ранних представителей современного человека, обнаруженные в северной Африке, показывают, что Homo sapiens (Человек разумный) появился по меньшей мере на 100 тысяч лет раньше, чем считалось ранее.

По словам профессора Жан-Жака Юблена из Института эволюционной антропологии Общества Макса Планка в немецком Лейпциге, открытие ученых может привести к переписыванию учебников о происхождении нашего вида.

«Нельзя говорить, что все быстро развивалось в некоем райском Эдеме где-то в Африке. По нашему мнению, развитие было более последовательным, и оно происходило на всем континенте. Так что если и был райский сад, то им была вся Африка», — добавляет он.

Профессор Юблен выступил на пресс-конференции в Коллеж де Франс в Париже, где он с гордостью показал журналистам фрагменты ископаемых человеческих останков, найденных в Джебель-Ирхуд в Марокко. Это черепа, зубы и трубчатые кости.

В 1960-е годы на этой одной из древнейших стоянок человека современного вида были обнаружены останки, возраст которых оценивался в 40 тысяч лет. Они считались африканской формой неандертальцев, близких родственников Homo sapiens.

Однако профессора Юблена всегда беспокоила эта интерпретация, и, начав работать в Институте эволюционной антропологии, он решил дать новую оценку ископаемым останкам из Джебель-Ирхуда. Более чем 10 лет спустя он рассказывает совсем иную историю.

Автор фото, Shannon McPherron/MPI EVA Leipzig

Подпись к фото,

Джебель-Ирхуд известен более полувека из-за находок там ископаемых останков

Используя современные технологии, ему и его коллегам удалось определить, что возраст новых находок колеблется от 300 тысяч до 350 тысяч лет. А найденный череп по своей форме практически такой же, как и у современного человека.

Ряд значительных отличий заметен в несколько более выступающих надбровных дугах и меньших желудочках головного мозга (полостей в головном мозге, заполненных спинномозговой жидкостью).

Раскопки также выявили, что эти древние люди использовали каменные инструменты и научились разводить и добывать огонь. Поэтому они не только выглядели как Homo sapiens, они и вели себя так же.

До настоящего времени самые ранние ископаемые останки подобного вида были обнаружены в Омо-Кибиш в Эфиопии. Их возраст — около 195 тысяч лет.

«Сейчас нам нужно пересмотреть свои представления о том, как появились первые современные люди», — говорит профессор Юблен.

До появления Homo sapiens существовало множество разных примитивных человеческих видов. Каждый из них внешне отличался от других, и у каждого из них были свои сильные и слабые стороны. И каждый из этих видов, как и животные, эволюционировал и постепенно менял внешность. Это происходило на протяжении сотен тысяч лет.

Ранее общепринятой точкой зрения было, что Homo sapiens эволюционировал неожиданно от более примитивных видов в восточной Африке около 200 тысяч лет назад. И к этому моменту в самых общих чертах сформировался современный человек. Более того, только тогда современный вид, как считалось, начал распространяться по территории Африки, а затем и по всей планете.

Однако открытия профессора Юблена могут развеять эти представления.

Автор фото, Jean-Jacques Hublin/MPI-EVA, Leipzig

Подпись к фото,

Фрагмент нижней челюсти Человека разумного, найденный в Джебель-Ирхуде

Возраст находок во многих из мест раскопок в Африке датируется 300 тысячами лет. Много где были обнаружены аналогичные инструменты и свидетельства использования огня. А вот ископаемых останков на них нет.

Поскольку большинство экспертов исходили в своих исследованиях из предположения, что наш вид появился не ранее 200 тысяч лет назад, считалось, что эти места населяли более древние, другие виды человека. Однако находки в Джебель-Ирхуде дают возможность предположить, что на самом деле свой след там оставил именно Homo sapiens.

Автор фото, Mohammed Kamal, MPI EVA Leipzig

Подпись к фото,

Каменные инструменты, найденные командой профессора Юблена

«Это показывает, что по всей Африке было множество мест, где появлялся Homo sapiens. Нам нужно отказаться от предположения, что была одна колыбель человечества», — сказал профессор Крис Стрингер из Музея естествознания в Лондоне, который не участвовал в исследовании.

По его словам, существует высокая вероятность, что Homo sapiens мог даже существовать в это же время и за пределами Африки: «У нас есть ископаемые останки из Израиля, вероятно, такого же возраста, и у них есть черты, подобные чертам Человека разумного».

Профессор Стрингер говорит, что вполне возможно, что примитивные люди с меньшим мозгом, большими лицами, с сильно выраженными надбровными дугами — тем не менее принадлежавшие Homo sapiens — могли существовать и в более ранние времена, возможно даже полмиллиона лет назад. Это невероятное изменение в господствовавших до недавнего времени представлениях о происхождении человека,

«20 лет назад я говорил, что лишь тех, кто похож на нас, можно называть Человеком разумным. Существовало представление, что Homo sapiens неожиданно появился в Африке в определенное время и он положил начало нашему виду. Но сейчас похоже, что я был не прав», — сказал Би-би-си профессор Стрингер.

Если ваш начальник Передаст — Ведомости

Прочитав Серию первую про Сбитого летчика, вы поняли, что ваш начальник или ваш коллега – тоже начальник – не подходит под это определение. Но удовольствия и драйва от работы под руководством этого начальника или рядом с таким коллегой вы не испытываете. Возможно, он не Сбитый Летчик. Возможно он “Передаст”. Не подумайте ничего плохого — это не имеет отношения ни к каким сексуальным меньшинствам, этот термин происходит от глагола “передать” и ничего более.

Передаст – это такой руководитель, который на самом деле не руководитель и не человек, принимающий решение. Он в силу обстоятельств, возможно, волею случая, вырос в организации до серьезного руководящего поста. Он много чего знает и его ценят за знание самой организации и всего того, что в ней происходит. Но он не принимает никаких решений. Он просто “передает” информацию снизу наверх – в обработанном и, в принципе, бывает, даже удобном виде. Получает сверху “обратную связь” и передает ее вниз. Для работы. При этом старается в силу природной склонности к честности не искажать сигналы оттуда и туда. Но и ничего не добавлять к этому. Ничего. Это человек-зеркало.

В чем проблема? 

Главная проблема – отсутствие реального управления и принятия каких-либо решений. Этот человек не способен задавать направление, придумывать что-то новое, он не способен что-то серьезно менять. Вообще. Если у него будут требовать изменений и серьезных решений – он честно примет задачу к исполнению без особых возражений (он же зеркало) и будет пытаться получить эти решения снизу. Транслирует полученные варианты наверх – передал, выполнил свое предназначение. Если какой-то из вариантов прошел и его утвердило руководство – слава богу, сработало до следующего раза. Если ни один из вариантов не принимается, еще одна итерация — и так дальше до бесконечности. Передаст не принимает решений. Он просто передает информацию — туда и обратно, туда и обратно…

Особую проблему создают Передасты, которые еще и кривым зеркалом являются. Это категория Злостных Передастов. Тут очень быстро дело доходит до беды. Потому что сила искажений при нескольких итерациях настолько велика, что это быстро приводит к печальным результатам, очевидным всей организации. Поэтому долго Злостные Передасты на руководящих позициях не задерживаются. Выживают простые Передасты.

Передасты, как и Сбитые Летчики, довольно легко идентифицируются. Они не злые, а зачастую даже очень приятные люди. Но если они попали на лидерские позиции в организации – это опасные люди. Итак, как выявить Передаста.

Биография: Если внимательно посмотреть биографию Передаста, то он последовательно, по маленьким шагам растет, если вы знаете детали его роста, то это облегчает задачу. Как правило, их повышение было связано не с его отличными результатами и победами, а просто потому, что лучше варианта не было и при назначении очень ценилось знание Передаста организации и как все в ней работает.

На совещаниях: Всегда куча цифр, часто глубокое знание деталей, фактов и всякой прочей информации. Но ВАЖНО. На просьбу выделить главное из этого обилия информации Передаст теряется и начинает повторять все заново, предоставляя вам право делать соответствующие выводы, что главное, а что – нет.

На вопрос: “Какое решение вы рекомендуете и предлагаете?” – Передаст начинает перечислять все предложенные варианты с обоснованием каждого из них. Под давлением можно заставить его что-то выбрать, но при этом он все равно скажет, что есть еще другие решения, которые есть у него в презентации. Он просто на бессознательном уровне отстраняется от принятия решений.

Крайне редко говорит “я”, вообще избегает каких-то личных интерпретаций и ссылок на самого себя (зеркало — оно должно быть незаметным). Если его попросить что-то доработать и проработать — с радостью соглашается. И говорит: “Мы это проработаем”. И не обманывает. Проработка будет осуществляться его людьми: самостоятельная проработка и формирование личных суждений и предложений для Передаста – это за гранью возможного.

Как Передаст ведет с себя со своими сотрудниками – не знаю. У меня никогда не было руководителей-Передастов.

Можно ли вылечить?

Не надо мучить человека. Он просто не способен на принятие решений. Конечно, под давлением он что-то может выдавить из себя в качестве решений. И даже, прочитав этот пост, скорректировать свою риторику и поведение. Но сути это не поменяет. Этот человек – просто не лидер, не начальник. Он Передаст.

Что вам с ним делать?

Если вы начальник Передаста Со Злостным Передастом все просто – гоните в шею, бегите как черт от ладана. Это страшно опасный человек. Страшный своей бессмысленностью с точки зрения дела и опасный из-за потрясающе негативного эффекта от его “работы” для культуры всей организации.

С простым и чистым Передастом все менее однозначно. Дайте ему другую роль – снимите с него ответственность за принятие решений. Он может быть хорош в обработке и структурировании информации на экспертной позиции. Если у вас на этой задаче стоит человек, который помимо обработки информации может и решения выдвигать, и приоритизировать, отделять главное от второстепенного, то не надо придумывать Передасту роль – просто сплавьте его по-тихому. Он даже не будет сильно бузить. Он же зеркало.

Если вы новый руководитель и только пришли на позицию и у вас есть в подчинении Передаст на руководящей позиции, то вам может пригодиться его способность доставлять информацию туда и обратно без искажений, знание того, как по-настоящему работает организация. Но достаточно быстро его полезность для нового руководителя сводится к минимуму. Ведь ничего нового Передаст дать не может. Поэтому после интеграции и создания своей системы сбора информации придется расставаться с Передастом.

Если вы коллега Передаста Больших проблем у вас с ним не будет, но если ваша работа зависит от подразделения, возглавляемого Передастом, то ждать прорывов и помощи от него не стоит. Работайте напрямую с его людьми, которые и готовят ему решения. И тогда, может быть, что-то будет работать. Но это так – скорее влачить жалкое существование, чем реально делать дело.

Если у вас начальник Передаст Если у вас начальник Передаст, то вы не сможете сделать каких-либо прорывов, пока он начальник. Вы просто сойдете с ума от бессилия что-то поменять и достучаться до верха. Если чувствуете свои силы и верите, что начальник вашего начальника не Сбитый Летчик или тоже Передаст, идите и предлагайте себя на роль, которую сейчас занимает Передаст. Или становитесь Передастом, даже не успев стать пусть и Сбитым, но Летчиком. Или ищите другое место, где хороший начальник и интересная работа. Валите, короче, отсюда.

Конец второй серии

Желаю не быть Передастом в хорошем смысле этого слова.

Ваш Михаил Слободин

УВКПЧ | Что такое права человека?

Что такое права человека?

Права человека – это права, которыми мы обладаем, просто потому что мы являемся человеческими существами. Они не предоставляются ни одним государством. Всеобщие права человека являются неотъемлемыми правами каждого из нас независимо от гражданства, пола, национальной или этнической принадлежности, цвета кожи, религии, языка или любых других признаков. К ним относятся как основные права, включая право на жизнь, так и права, которые делают нашу жизнь достойной, включая право на питание, образование, труд, здоровье и свободу.

Во Всеобщей декларации прав человека (ВДПЧ), принятой Генеральной Ассамблеей в 1948 году, впервые в истории были провозглашены основные права человека, которые должны защищаться повсеместно. В 2018 году ВДПЧ исполнилось 70 лет*, и она по-прежнему является основой международного права в области прав человека. Статья 30 Всемирной декларации прав человека содержит принципы и важнейшие элементы всех действующих и будущих конвенций, договоров и других правовых инструментов в области прав человека.

ВДПЧ вместе с двумя пактами – Международным пактом о гражданских и политических правах и Международным пактом об экономических, социальных и культурных правах – составляют Международный билль о правах*.

Всеобщие и неотъемлемые

Принцип универсальности прав человека является фундаментом международного права в области прав человека. Это значит, что мы все в равной степени обладаем нашими правами человека. Этот принцип, впервые провозглашенный в ВДПЧ, закреплен во многих международных конвенциях, декларациях и резолюциях в области прав человека.

Права человека являются неотъемлемыми.

Никто не может быть лишен прав, кроме отдельных случаев и в соответствии с надлежащими правовыми процедурами. Например, право на свободу может быть ограничено, если суд признал человека виновным в преступлении.

Неделимые и взаимозависимые

Все права человека являются неделимыми и взаимозависимыми.  Это значит, что одна категория прав не может быть полностью реализована без другой. Например, прогресс в области гражданских и политических прав позволяет лучше реализовать экономические, социальные и культурные права. При этом нарушение экономических, социальных и культурных прав может отрицательно сказаться на многих других правах.

Равенство и недискриминация

В Статье 1 ВДПЧ говорится: «Все люди рождаются свободными и равными в своем достоинстве и правах». Свобода от дискриминации, провозглашенная в Статье 2, обеспечивает это равенство.  

Отсутствие дискриминации является неотъемлемой частью международного права в области прав человека.

Этот принцип содержится во всех основных договорах в области прав человека. Он также лежит в основе двух ключевых документов: Международной конвенции о ликвидации всех форм расовой дискриминации и Конвенции о ликвидации всех форм дискриминации в отношении женщин.  

Права и обязанности

Все государства ратифицировали не менее 1 из 9 основных договоров в области прав человека и не менее 1 из 9 факультативных протоколов. 80% государств ратифицировали 4 или более договоров. Это значит, что в соответствии с международным правом у государств есть обязательства и обязанности соблюдать, защищать и осуществлять права человека.

• Обязательство соблюдать права человека предполагает, что государства должны воздержаться от посягательств на права человека или от попыток ущемить их.
• Обязательство защищать права человека требует от государств защищать отдельных граждан или группы населения от нарушений прав человека.
• Обязательство осуществлять права человека означает, что государства должны принять позитивные меры для того, чтобы обеспечить осуществление основных прав человека.

При этом каждый из нас, обладая правами человека, должен уважать права человека других людей и бороться* за них.

Присоединяйтесь к нам в Фейсбук, Твиттер и Инстаграм. 

Грамотный человек знает, какое слово и когда уместно — Российская газета

Для чего зубрить правила, если тебя и так понимают? Зачем нужны словари-динозавры? Зачем быть грамотным, если есть гаджеты, которые исправляют ошибки? На самые каверзные детские вопросы ответила телеканалу «О!» автор стихотворного пособия «Русский без нагрузки», кандидат филологических наук и мама Ксения Туркова. А под занавес объяснила, как играть в знакомую многим игру «Крокодил» с помощью орфографического словаря.

Про истории, которые слушают, затаив дыхание

Что такое грамотность? Это когда знаешь все правила и пишешь без ошибок?

Ксения Туркова: Не только. Есть люди, которые правильно пишут все слова и не забывают ни одного знака препинания, но это совсем не значит, что они грамотные. Представьте себе телеведущего, который говорит четко, красиво и правильно ставит ударения, но при этом произносит фразы типа «Во избежание невыполнения данного решения предусмотрено наказание». Понять, что он сказал, совершенно невозможно. Поэтому и грамотным такого ведущего назвать нельзя.

Грамотный человек — это тот, кто знает, какое слово и в какой ситуации уместно; кто умеет формулировать свои мысли так, чтобы его правильно поняли; кто может рассказать историю так, чтобы все слушали ее, затаив дыхание. А еще по-настоящему грамотным человеком можно назвать того, кто умеет пользоваться словарями.

Про «казнить нельзя помиловать»

Зачем быть грамотным? Даже если не поставлю запятую или сделаю ошибку, меня все равно поймут.

Ксения Туркова: А вот и неправда! Вспомните мультфильм о Вовке в Тридевятом царстве, когда одна запятая («Казнить нельзя помиловать») могла решить судьбу. Неправильно поставленная запятая может полностью изменить смысл предложения.

Кроме того, есть категория ошибок, которые «не прощают». Если, например, поставить лишнюю запятую в обращении и написать «Уважаемый, Иван Иванович!», впечатление может быть испорчено безнадежно. Письмо, написанное без ошибок и с правильно расставленными знаками препинания, — это ваша вежливость. Общаться с людьми и не думать при этом о том, грамотно ли ты пишешь, — это все равно что не здороваться, не говорить «спасибо» и «пожалуйста» и залезать в грязных ботинках на чистый диван.

Представьте, что вы — большой начальник. Вы получаете письмо от того, кто хочет устроиться к вам на работу. Открываете его — а там сплошные ошибки, опечатки, маленькие буквы вместо больших и полно лишних запятых. Что вы подумаете? Скорее всего, будет ужасно неприятно. Возникнет ощущение, что этот человек зашел к вам в кабинет без стука, забыл поздороваться, наступил на ногу, не извинился, а потом еще и потребовал принять его на работу!

Про злобную корову

Для чего учиться писать правильно, если компьютер и телефон исправляют ошибки?

Ксения Туркова: Одна моя подруга однажды попала в смешную и неловкую ситуацию. Ее приятельница, которая давно хотела похудеть, написала ей, что наконец взяла себя в руки, записалась в спортклуб и села на диету. Моя подруга хотела написать ей «Уррра!», но смартфон, который «не знал» такого слова с утроенной «р», отправил вместо этого «Корова!» Гаджеты делают ошибки, они не совершенны. Поэтому и за ними часто нужно перепроверять написанное. Кроме того, гаджеты не помогут вам подобрать нужное слово, чтобы выразить мысль, и не исправят слово из одного стиля на слово из другого.

Про диагноз предложению

Надо ли учить правила пунктуации? Мы в чатах спокойно обходимся без них

Ксения Туркова: Надо! В чатах действительно можно обойтись и без них, потому что в мессенджерах люди, как правило, общаются короткими предложениями. Или даже частями предложения:

Привет
представляешь
у нашего дома опять все перекопали
где в прошлом году плитку новую положили

Тут новая строка фактически заменяет запятую. Мы видим структуру предложения и не можем ошибиться в том, как его понимать. Но если нам понадобится написать сочинение, рассказ или письмо, без знаков препинания не обойтись. Понимать правила пунктуации нужно для того, чтобы понимать, как устроено предложение. Врач не может поставить диагноз и подобрать лечение, не зная анатомии. А мы не можем правильно передать мысль, не зная структуры речи: где главные слова, где второстепенные, что известно, что неизвестно, что мы хотим сказать. Тот, кто пишет без запятых или, наоборот, с запятыми после каждого слова, создает впечатление человека с хаосом в голове.

Про офлайн и офсайд

Зачем запоминать, как пишутся слова, которые пришли из английского языка? Уж лучше просто учить английский

Ксения Туркова: Учить английский, конечно, нужно. Но не менее важно знать, как наш родной язык с ним взаимодействует. Что он берет, а что отвергает; как он приспосабливает слова «под себя». В русском языке есть свои традиции освоения слов. В разное время в наш язык «врывались» слова из тюркских языков, из немецкого, французского, английского. И русский всегда старался с ними подружиться, сделать их более близкими, родными. Как язык это делает? За этим очень интересно наблюдать!

Например, вы можете спросить, почему мы пишем «офлайн» с одной ф, а в английском в этом слове две ф? Но если вы вспомните несколько похожих слов, вы поймете, что такова традиция: офис, офсайд (спортивный термин), офлайн. Во всех этих словах удвоение пропадало, и в русском языке оставалась только одна согласная. Всегда ищите аналогии — и узнаете много интересного.

Про нерусскую избу

Для чего нужны словари? Они тяжелые и неинтересные…

Ксения Туркова: Скажу по секрету: не только дети, но и многие взрослые, к большому сожалению, так считают. И неправильно делают. Во-первых, словари нужны для того, чтобы проверять себя. Я уже рассказывала о том, какое впечатление может произвести неграмотное и наспех составленное письмо, полное ошибок и опечаток. Во-вторых, не все словари тяжелые — ведь есть и электронные версии.

А в-третьих, словари на самом-то деле очень интересные! Я не шучу. Например, этимологический (то есть объясняющий историю слов) словарь Фасмера, из которого можно узнать о том, что «изба» — совсем не исконно русское слово. Или «Словарь улиц Москвы», который подскажет правильное ударение: ВалОвая или ВаловАя? Фразеологический словарь откроет секрет о том, что «бык» и «пчела» — однокоренные слова. А из словарей ударений можно узнать о том, что раньше привычный нам «йОгурт» был «йогУртом».

Кстати, если в доме есть словари, можно играть в знакомую многим игру «Крокодил»: открывать словарь наугад и изображать первое попавшееся слово, а потом сверять с его точным значением. Или устроить словарный баттл! Условия игры такие: два человека становятся друг напротив друга с орфографическими словарями. Ведущий произносит слово, а задача участников баттла — как можно быстрее найти его написание.

Вопросы и ответы о правах человека

Что такое «права человека»?

Права человека – это то, чем, согласно нормам морали, наделен каждый живущий в мире просто в силу того, что он — человек. Добиваясь реализации наших прав, мы обращаемся, как правило, к собственному правительству с позиций морали: так поступать нельзя, потому что это – вторжение в сферу моей морали и оскорбление моего личного достоинства. Никто,  ни человек, ни правительство, никогда не может отобрать у нас наших прав человека.

Откуда они взялись?

Они возникли потому, что человек помимо физической, имеет также моральную и духовную сущность. Права человека нужны для того, чтобы защитить и сохранить человеческую сущность каждого, чтобы обеспечить каждому человеку достойную жизнь – жизнь, которую человек заслуживает.

Почему кто-то «должен» их уважать? 

Прежде всего потому, что человеческая сущность включает и нравственную составляющую. Большинство людей, если им указать на то, что они ущемляют чье-то личное достоинство, постараются этого не делать. Как правило, люди не хотят причинять зла другим. Однако теперь помимо моральных санкций собственной или чужой совести в большинстве стран мира существуют законы, которые обязывают правительства уважать основные права своих граждан, даже если им этого, может быть, и не хочется.  

Кто обладает правами человека? 

Абсолютно все. Преступники, главы государств, дети, мужчины, женщины, африканцы, американцы, европейцы, беженцы, лица без гражданства, безработные, работающие, банкиры, лица, обвиняемые в совершении террористических актов, работники благотворительных учреждений, учителя, танцоры балета, астронавты… 

Даже преступники и главы государств? 

Абсолютно все. Преступники и главы государств — тоже люди. Сила прав человека заключается  в том, что они признают всех равными с точки зрения обладания человеческим достоинства. Кто-то порой может нарушить чьи-либо права или стать угрозой для общества, и поэтому может возникнуть необходимость тем или иным образом ограничить права таких людей, чтобы защитить права других,  но только в определенных пределах. Эти пределы определяются как минимум, необходимый  для сохранения человеческого достоинства.

Почему некоторым группам требуются особые права человека? Означает ли это, что у них больше прав, чем у других людей?

Нет, не означает, но некоторые группы, такие как цыгане-рома в Европе, далиты и определенные касты в Индии так долго подвергались дискриминации в том или ином обществе, что потребовались специальные меры, чтобы обеспечить им равный с другими людьми стандарт прав человека. Было бы смешно полагать, что после долгих лет укоренившейся дискриминации и стереотипов, откровенной ненависти и социальных барьеров будет достаточно просто предоставить им общеприменимые права, полагая, что этого будет достаточно для соблюдения равенства.

Почему речь идет о правах людей, а не об их ответственности? 

Несмотря на то, что некоторые философы и НПО выдвинули веские аргументы в пользу необходимости определить меру ответственности людей и даже представили в защиту этого довода свои «кодексы» и «декларации», сообщество правозащитников в целом хранит молчание по поводу этого спора. Причина в том, что многие правительства ставят «дарование» прав в зависимость от определенных обязанностей, налагаемых на людей правительством или правителем, отчего сама идея прав человека изначально теряет смысл. И все же, разумеется, все мы ‒ отдельные люди и группы людей ‒ должны со всей ответственностью относиться к правам других, не злоупотреблять ими, но уважать, как свои собственные права. И в этом свете статья 29 Всеобщей Декларации прав человека признает, что: «1. Каждый человек имеет обязанности перед обществом, в котором только и возможно свободное и полное развитие его личности. 2. При осуществлении своих прав и свобод каждый человек должен подвергаться только таким ограничениям, какие установлены законом исключительно с целью обеспечения должного признания и уважения прав и свобод других и удовлетворения справедливых требований морали, общественного порядка и общего благосостояния в демократическом обществе».

Кто следит за соблюдением прав человека? 

Все мы должны за этим следить. Существуют законы, как национальные, так и международные, которые ограничивают свободу действий правительств в отношении своих граждан, но если никто им не укажет на то, что своими действиями они нарушают международные нормы, правительства могут безнаказанно продолжать нарушения. Каждый из нас, как личность, должен в повседневной жизни не только уважать права других, но и внимательно следить за действиями наших и не наших правительств. Системы защиты прав существуют для того, чтобы все мы могли ими воспользоваться. 

Как я могу защитить свои права? 

Постарайтесь обратить внимание других на то, что ваши права были нарушены; потребуйте их соблюдения. Дайте противоположной стороне понять: вам известно, что она не имеет права обращаться с вами подобным образом. Выделить соответствующие статьи во Всеобщей декларации прав человека, Конвенции о правах человека или других международных документах. Если соответствующие законы есть в вашей собственной стране, сошлитесь и на них. Сообщите другим о случившемся: дайте сообщение в печать, напишите вашему депутату парламента и главе государства, проинформируйте об этом неправительственные организации, занимающиеся правами человека. Спросите у них совета. Если есть возможность, поговорите с адвокатом. Постарайтесь, чтобы правительству стало известно о ваших действиях.  Дайте ему понять, что вы не собираетесь отступать. Продемонстрируйте поддержку, на которую вы можете рассчитывать. Наконец, если все остальное не помогло, вы можете обратиться в суд. 

Как мне обратиться в Европейский Суд?

Европейская Конвенция о защите прав человека и основных свобод определяет процедуры рассмотрения индивидуальных жалоб. Однако принятие дел к  рассмотрению регламентируется строгими требованиями. Например, до подачи дела в Европейский суд вы должны подтвердить, что ваша жалоба уже подавалась в национальные суды вашей страны (вплоть до самой высшей инстанции!). Если вы хотите попытаться, и полагаете, что ваша жалоба отвечает установленным требованиям, ее можно представить на официальном бланке, который можно получить в Секретариате. Однако вам настоятельно рекомендуется обратиться за советом к юристу или неправительственным организациям, действующим в этой области, и убедиться, действительно ли у вас есть реальный шанс на успех. Имейте в виду, что вынесению окончательного решения может предшествовать длительный и сложный процесс. 

У кого мне требовать соблюдения моих прав?

Соблюдения почти всех основных прав человека, перечисленных в международных соглашениях,  вы должны требовать от правительства вашей страны, или от официальных должностных лиц государства. Права человека защищают ваши интересы от посягательств государства, поэтому вы должны требовать их соблюдения от государства или от его представителей. Если вы считаете, что ваши права нарушаются, например, вашим работодателем или соседом, вы не можете напрямую ссылаться на международные законы о правах человека, за исключением тех случаев, когда правительство вашей страны было обязано принять меры, чтобы не допустить таких действий работодателей или соседей. 

А лежит ли на ком-нибудь обязанность защищать мои права? 

Да. Право не имеет смысла, если на кого-то не возложена соответствующая ответственность и обязанность. Моральная обязанность не посягать на ваше личное достоинство возложена на каждого человека, но правительство вашей страны, подписав международные соглашения, несет не только моральную, но и юридическую ответственность.

Права человека – это проблема только недемократических стран?

Даже сегодня в мире нет такой страны, где бы полностью были соблюдены все права человека. В одних странах нарушения могут происходить чаще, чем в других, затрагивать бóльшую или меньшую часть населения, но всякое, даже единичное нарушение представляет проблему, которая не должна возникать и которой надо заниматься. Человеку, чьи права были нарушены в стране с устоявшейся демократией, вряд ли будет легче от того, что в целом в его стране положение с соблюдением прав человека лучше, чем в других странах мира. 

Добились ли мы прогресса в борьбе с нарушениями прав человека? 

Большого прогресса — даже если порой он и кажется каплей в море. Вспомните об уничтожении рабства, о предоставлении женщинам права голоса, о странах, которые отменили смертную казнь, об освобождении узников совести в результате международного нажима, о крахе режима апартеида в Южной Африке, о делах, рассмотренных в Европейском суде и законах, измененных в результате этого. Задумайтесь над тем, что постепенное развитие культуры международного общения означает, что даже наиболее авторитарным режимам приходится сегодня считаться с правами человека, если они хотят быть принятыми на международной арене. Положительных результатов было достигнуто много, особенно за последние 50 лет, но гораздо больше еще предстоит сделать.

Пожилой человек – не «реликт», а современник | Совет Федерации Федерального Собрания Российской Федерации

Календарь напомнил: 1 октября – Международный день пожилых людей. Прочитав эту запись, задумалась над тем, как изменилось за последние десятилетия и социальное положение тех, кого мы называем пожилыми людьми, и их роль в обществе, да и само понятие «пожилые люди». Сейчас этот термин используют все более осторожно, соотнося с тем, как себя ощущает и определяет сам пожилой человек. И это не просто дань политкорректности. Современные люди, перешагнув порог 60 лет, который официально считается точкой отсчёта пожилого возраста, в большинстве своём не отвечают традиционному представлению о старости. Они бодры, деятельны, энергичны, настроены на продолжение профессиональной деятельности.

---

Календарь напомнил: 1 октября – Международный день пожилых людей. Прочитав эту запись, задумалась над тем, как изменилось за последние десятилетия и социальное положение тех, кого мы называем пожилыми людьми, и их роль в обществе, да и само понятие «пожилые люди». Сейчас этот термин используют все более осторожно, соотнося с тем, как себя ощущает и определяет сам пожилой человек. И это не просто дань политкорректности. Современные люди, перешагнув порог 60 лет, который официально считается точкой отсчёта пожилого возраста, в большинстве своём не отвечают традиционному представлению о старости. Они бодры, деятельны, энергичны, настроены на продолжение профессиональной деятельности.

Продление активного периода жизни человека – одно из самых больших достижений современной цивилизации. На протяжении веков старость наступала рано, примерно к 40 годам. Так, у Н. Гоголя читаем: «Дверь нам открыла старушка лет сорока». «Старому» мужу Анны Карениной было менее 50 лет. «Старуха-процентщица» из романа Ф. Достоевского «Преступление и наказание» по нынешним меркам вообще молодая женщина — 42 года. Старость ассоциировалась преимущественно с бедностью, болезнями, одиночеством. Что и закрепилось в известной русской поговорке «Старость – не радость».

Сегодня во многих странах, прежде всего в тех, которые принято называть развитыми, передовыми, картина качественно иная. И связано это с тем, что растущие технологические, экономические, социальные достижения современной цивилизации государство направляет на улучшение жизни пожилых людей. В том числе – на создание условий, позволяющих им и далее чувствовать себя полноценными членами общества, реализовывать свой интеллектуальный, профессиональный, творческий потенциал, играть активную роль в самых различных сферах жизни. Мы читаем тексты, в которых рассказывается о высокой степени социальной защищённости пожилых людей в развитых странах. Телевидение, кинематограф, Интернет демонстрируют фильмы, ролики, фото, на которых эти люди предстают спортивными, бодрыми, ухоженными. Они путешествуют по миру. Часто приобретают товаров и услуг больше, чем молодые.

Всё это правда. Но не вся. Развитые системы пенсионного обеспечения действуют лишь примерно в трети государств, где проживает всего около 30 % населения планеты. Благосостояние пенсионеров во многом складывается за счёт эффективной системы пенсионных накоплений, осуществляемых самими гражданами. При поддержке государства, работодателей. Но главная проблема в том, что поддерживать этот уровень становится всё труднее. Увеличение средней продолжительности жизни способствует «старению» населения как отдельных стран, так и планеты в целом.

Приведу цифры, дающие представление о масштабах этих процессов. С 1950 года число жителей Земли старше 60 лет возросло вчетверо, превысив 810 млн. человек. И ежегодно увеличивается на 58 млн. При сохранении такой динамики число пожилых людей уже к 2020 году достигнет 1 млрд., к 2050 году – 2 млрд. человек. В развитых странах, где средняя продолжительность жизни составляет ныне порядка 78 лет, старение идёт ещё быстрее. Так, в Японии, где средняя продолжительность жизни достигла 80 лет, доля пожилых людей в составе населения составляет 32%. В Швеции, одной из самых «старых» в этом смысле стран Европы, данный показатель — 25%, тоже немало.

Проблема старения населения есть и у нас. Доля пожилых людей в России составляет порядка 19%. Нет никакого сомнения в том, что увеличение средней продолжительности жизни при продлении её активного периода является интегральным показателем эффективности социальной политики государства. Наша страна вправе считать успехом то, что после длительного периода снижения средней продолжительности жизни она вновь начала расти, и в 2015 году превысила 71 год. Мы будем и далее направлять усилия на закрепление и усиление этой тенденции. И вместе с тем должны принимать меры по решению вопросов, которые ставит на повестку дня увеличение и абсолютной численности, и доли пожилых людей в структуре населения.

Основная проблема, по которой мне не раз приходилось выступать, — объективная необходимость повышения возраста выхода на пенсию. Россия стареет: если в 1980-е годы на 10 работающих приходилось два человека пенсионного возраста, то сейчас на 10 работающих приходится 6 пенсионеров. Как я сказала, это мировая тенденция. На планете немного найдётся государств, где бы возраст выхода на пенсию, был бы такой же, как в нашей стране. Как правило, он выше. Так, в Израиле он составляет 67 лет для мужчин и 62 года – для женщин, в Англии соответственно 66 и 66, в Швейцарии – 65 и 64. Каких‑то больших проблем с повышением пенсионного возраста ни в этих государствах, ни в других не возникало. Главное, что помогло такому безболезненному переходу, – это открытый диалог властей с гражданами, прозрачность действий органов власти, постепенность, поэтапность процесса.

Считаю, мы должны действовать также. Я не поддерживаю призывы «горячих голов» во власти начать процесс повышения пенсионного возраста немедленно, уже в будущем году. Но не поддерживаю и тех, кто в принципе противится этому повышению. Нам надо сбалансировать пенсионную систему, обеспечивать достойные пенсии. Но не «революционным скачком», а подготовительной административно-финансовой и разъяснительной работой.

Задачей большой государственной важности считаю расширение возможностей для пожилых людей оставаться востребованными, не сидеть, грубо говоря, на завалинке, продолжать трудиться. Разумеется, речь о тех из них, кто желает и может жить активной жизнью. На мой взгляд, наша страна много теряет из‑за того, что потенциал пожилых людей используется слабо. Одна из основных причин этого – общая атмосфера своего рода недоверия к ним, мол, что они могут? Однако уже в древности было понимание спорности такого взгляда. Выдающийся античный мыслитель и оратор Цицерон писал: «Можно ли сказать, что старость делает нас неспособными к делам? К каким делам именно? К тем, которые свойственны юношеству и требуют сил. Но разве не существует ничего, к чему был бы способен старик, что можно было бы делать при здравом уме и ослабевшем теле?»

В эпоху бурного научно-технического прогресса, сокращения доли физического труда и преобладания труда умственного, эта позиция, высказанная две тысячи лет назад, более чем актуальна. Многие пожилые люди сегодня могут и хотят работать. Нам надо менять не только само отношение к ветеранам в этом плане, но и внимательно посмотреть на существующее законодательство, подзаконные нормативные правовые акты. Продумать меры по созданию условий для данной социальной группы по повышению уровня квалификации, обретения новых профессиональных навыков, расширению практики дистанционной работы и т. д. С тем, чтобы выйти в итоге на оптимальное решение этого вопроса.

Полагаю, необходимо активизировать ту работу, которая в настоящее время ведется законодателями совместно с Правительством РФ, Министерством труда и социальной защиты, другими заинтересованными министерствами и ведомствами во исполнение поручения Президента РФ по итогам заседания президиума Государственного совета «О развитии системы социальной защиты граждан пожилого возраста». Итогом этих усилий должна стать Стратегия действий в интересах граждан пожилого возраста, которая определит государственную политику в этой сфере до 2025 года. Документ должен обозначить систему мер, направленных на рост благосостояния и социально-культурного развития пожилых людей, укрепление их здоровья, повышение продолжительности жизни и активного долголетия.

Конечно же, мы должны также продолжать деятельность по решению других проблем, с которыми сталкиваются пожилые люди в медицине, в здравоохранении, на транспорте, в других местах. Повторю, старение населения идёт, и государство, общество обязано адаптировать общественную среду к этому процессу, гуманизировать её.

Перфекционист, сверхчувствительный, безразличный: почему мы такими становимся

Синдром отличника

Слово «перфекционист» чаще всего употребляют в положительном смысле. Говоря «Я — перфекционист во всем!» или «В работе он — перфекционист», люди хотят подчеркнуть свои или чужие достоинства, стремление сделать все идеально. На самом деле если человек действительно перфекционист, то, скорее всего, в жизни он сталкивается с серьезными проблемами, которые могут сказаться на его психическом и физическом здоровье.  

«Перфекционизм имеет несколько стадий. Первая, в которой можно провести всю жизнь, — стремление делать все наилучшим образом, идеально, и в этом нет ничего плохого, ведь это помогает добиваться поставленных целей, успехов, — объясняет психолог Михаил Хорс. — Но значимая часть перфекционистов уходит на следующую стадию, когда перфекционизм уже становится болезнью, переходит в патоперфекционизм, неврастеническую форму, когда стремление к совершенству переходит во все сферы жизни, на этом этапе появляется страдание, боль, если добиться идеала не получается. Патоперфекционист будет страдать, переживать, если появится угроза тому, что он сможет сделать дело наилучшим образом. Раздражаться, бояться, тревожиться, даже если еще ничего не случилось, испытывать неприятные психические состояния, и они будут забирать его ресурсы сил, и сил не хватит для реализации своих стремлений».

Психолог сравнивает состояние перфекциониста, потерпевшего неудачу, с ломкой наркомана. Жизнь для него становится серой, кажется неправильной.

На эту тему

«Здоровая личность, если у нее не получилось, задает себе вопросы: «Почему не получилось?», «Какие я совершил ошибки?», «Каких ресурсов не хватило?», потом задает вопрос: «Как мне эти ресурсы взять?», «Как не совершать такие ошибки?» — встает, отряхивается и дальше идет к своей цели. У перфекциониста не так. Он летит к своей цели и иногда добивается за счет того, что берет ее нахрапом, но если не получается, он страдает».

Страдания перфекционист испытывает довольно часто не только из-за собственных неудач, но и потому, что он зависим от внешних обстоятельств, на которые не может повлиять.   

«Часто такое состояние называют синдромом отличника, и справедливо: как правило, перфекционисты проявляют себя уже в школе, иногда даже в детском саду», — расссказывает врач-психиатр Михаил Гордеев.

Социально одобряемый перфекционизм на деле не так хорош: людям с завышенными требованиями к себе и окружающим трудно и на работе, и в личной жизни. 

«Ошибочно думать, что перфекционисты — это прирожденные начальники. Часто это плохие руководители, — считает Михаил Гордеев. — Во-первых, потому, что такой начальник требует с подчиненных сверх меры, и у него возникают проблемы с персоналом — люди не выдерживают стандартов начальника, его придирок и уходят. А во-вторых, потому что перфекционист, понимая, что руководит идиотами, взваливает на себя ту работу, которую должен был бы делегировать другим, так как уверен, что никто не сделает ее так хорошо, как он. В результате он надрывается, перегружается».

© UfaBizPhoto/Shutterstock/FOTODOM

Еще одна проблема перфекционистов — сроки. Он может выполнить задание идеально, но потратит на него гораздо больше времени и сил, чем коллеги.  

«Есть такая модель успеха — 20 процентов усилий дают 80 процентов успеха, просто важно найти, на что потратить эти усилия эффективно, — говорит Гордеев. — А для перфекциониста это невозможно, ему надо получить 100 процентов успеха, даже если на это будет потрачено 200, 300 процентов усилий. Они, как правило, становятся хорошими профессионалами, но коллегам с ними очень трудно. Еще одна особенность перфекциониста: если он что-то делает и ему это не удалось, он не будет стараться исправить и идти дальше, а все начнет сначала».

«Помогите научить их жить правильно»

Ситуация, когда на работе человек требователен к себе и персоналу, стремится к идеалу, а в личной жизни с ним легко уживаться, по мнению психологов, редка. Чаще всего проблемы распространяются и на семейные, и межличностные отношения. Михаил Гордеев утверждает, что таким людям сложно создать пару и сохранить семью. 

«Для них понятие «строить семью» означает не создавать, а муштровать, подстраивать под себя. И до какого-то момента партнер терпит, потому что вначале — букетный период, любовь, эмоции, рождаются дети, а потом сил не остается.

Перфекционисты часто приходят к психологу с запросом: «Помогите мне научить их жить правильно». И для них может быть ударом, они могут даже уйти с терапии, когда поймут, что я ничего объяснять не буду, что моя задача — это не найти правого или неправого, а помочь им разобраться. Приходится их поначалу выводить из боевых стоек

Перфекционисты чаще приходят на психотерапию, чем флегматики или люди, спокойно относящиеся к своим успехам, чтобы справиться с повышенной тревожностью, паническими атаками, зависимостями.

«Панические атаки являются следствием перегруженности нервной системы, — объясняет психолог Михаил Хорс. —  Зависимости — следствие избегания реальности, в которой человек испытывает постоянную боль. При этом он не считает, что его перфекционизм — это проблема. И задача психолога — показать ему причину. К сожалению, современные подходы многих моих коллег — это работа со следствиями, которые убирают таблетками, теми же антидепрессантами. А они никак на перфекционизм не повлияют, они влияют на симптом, а не на источник боли. И через какое-то время проблемы вернутся». 

На эту тему

Усиливает тревожность перфекционистов культ успеха и идеи безграничности возможностей, которые активно пропагандируются известными коучами, считает психолог. 

«Например, Тони Роббинс и многие его коллеги учат, что планки возможностей нет. Я не согласен с этим, у каждого человека есть ограничения. Да, мы стараемся, выкладываемся, работаем, но хочется напомнить, что не все в жизни от нас зависит. А бывает, что препятствие в нас самих — страхи, комплексы, незнание чего-то, — они также нас останавливают. Больше половины европейского населения сидит на антидепрессантах, потому что их так накачали, будто они могут все, что они должны улыбаться, быть вечно счастливыми, энергичными, успешными, а они — живые люди. Люди не могут быть вечно счастливы. Современный и популярный подход к тому, что человек не может быть в отрицательных состояниях, приводит к тому, что он запрещает себе их, противоречит своей сущности». 

На терапии перфекционисты учатся спокойно относиться к несовершенствам окружающих, мириться с тем, что мир устроен не так, как им хочется, что люди могут поступать плохо, быть неправыми, плохо себя вести, что они имеют право на убеждения, которые отличны от их собственных убеждений. 

© YAKOBCHUK VIACHESLAV/Shutterstock/FOTODOM

«Таким пациентам нельзя ни в коем случае говорить, что они неправы. Для них это катастрофа, — говорит Гордеев. — Нет, наоборот, он хорош, но может стать еще лучше, если примет, что мир неидеален, что дождь идет не всегда в нужное время и так далее. Говорим о той цене, которую он платит за свое идеалистическое отношение к жизни. Когда речь идет о проблемах в отношениях, я сразу спрашиваю цифры давления пациента, и я не припомню, чтобы они были нормальными хоть когда-то. И человек начинает понимать это. Мы учим спокойно относиться к другому мнению, если оно неидеально, делегировать полномочия, если речь идет о команде, учим ценить плюсы другого».

Как становятся перфекционистами? 

Врач-психиатр Научного центра персонализированной медицины Надежда Соловьева считает, что перфекционизм бывает врожденным и приобретенным. 

«У человека есть эндопсихика — то, что передается по наследству, то, что невозможно исправить, и экзопсихика — то, что человек приобретает в течение жизни и с чем можно работать. У перфекционистов и тех, кто ни за что особо не переживает, есть и та, и та составляющая. Если в генотипе заложена тревожность, если это эндопсихическая составляющая, то человек имеет больше шансов стать перфекционистом. А дальше окружение и воспитание формируют его. Если близкие люди ребенка тревожатся, он будет стараться подражать взрослым. Если окружение расслабленное, флегматичное, ребенок будет подстраиваться под него. Но в подростковом возрасте он уже сам начнет выбирать».

Психиатр Михаил Гордеев считает, что влияние родителей на формирование перфекцониста более сильно, чем наследственность. 

«Бывает, перфекционисты-родители воспитывают перфекционистов. А иногда родители чего-то сами не смогли добиться в жизни, но считают это очень важным и реализуют свое стремление через ребенка. Этого, по их мнению, должен достичь их ребенок, он должен быть лучшим, несмотря на то, что сам родитель сделать этого не смог».

Михаил Гордеев отмечает, что перфекционисты в детстве подвергались моральным наказаниям за неудачи, например, мама могла несколько дней не разговаривать с ребенком за плохое поведение, двойку или тройку, не выучил урок. 

«Перфекционизм — это состояние, которое воспитывается боязнью наказания, притом речь не только о физических наказаниях. Моральное отвержение может быть гораздо страшнее для ребенка, чем лишение сладостей, запрет на прогулку и мультики, даже физические наказания. И когда перфекционист вырастает, он боится отвержения уже не мамы, а друзей, коллег, возлюбленного, для него наказание — неуважение и неприятие окружающих». 

Перфекционисты боятся не только неуважения, они боятся быть опозоренными. И эти установки тоже закладываются близкими взрослыми. 

«Эти страхи — социальные, они нормальны для нашей жизни, вопрос в том, насколько они сильны, — говорит Михаил Хорс.

Страх социального осуждения, страх выглядеть глупо идет с детства, когда мама говорит ребенку: «Смотри, на тебя все смотрят, смотри, дядя думает: «Какая плохая девочка плачет в магазине!» Или говорит: «Ты меня позоришь перед другими людьми, что скажут родственники, соседи, прохожие!», «Выйдешь к доске, весь класс будет смеяться, что ты ничего не знаешь», «Опозоришься перед всем классом», «Опозоришь школу».

Перфекционисты часто слышат от родителей фразы: «Ты должен быть лучше всех», «Нужно учиться только на пятерки», «Четверка — плохая оценка». 

© LStockStudio/Shutterstock/FOTODOM

 «Таких родителей ведь очень много, — объясняет психолог. — Когда такой ребенок сталкивается с тем, что не всегда он может быть первым, получить от жизни пятерку, сначала идет в достигаторство: «Ах так, не получаетася? Я буду больше работать», но в какой-то момент упирается в планку, сталкивается с ситуацией, что у него не получается. Может, не получается сейчас, а получится через год, но ему надо прямо сейчас. И тогда появляется его боль».

Дети, от которых родители не требуют быть самыми хорошими, растут более гармоничными личностями, считает Хорс.  

«У такого родителя нет этого чувства неполноценности, которое он пытается удовлетворить за счет ребенка, он любит и ценит ребенка вне зависимости от его успехов. Воспитывает его в более реалистично-философской атмосфере, более флегматичной: «Ты молодец, давай, старайся, но если не получится — ничего, ты встанешь, отряхнешься и пойдешь дальше». 

Антипод перфекциониста

Противоположность перфекционизма — расслабленные, флегматичные личности, которые не страдают из-за неудач. Их не особо тревожит, что на работе отругал начальник, что они не могут купить машину мечты, они не будут переживать из-за хамства в общественном транспорте, злиться на домашних за раскиданные носки и игрушки. Но считать их равнодушными, лишенными эмпатии и целей в жизни тоже неправильно, считает Михаил Гордеев. 

«Как и для перфекциониста, для такого человека в жизни что-то  важнее, что-то менее важно.

Для них высшей ценностью может быть свобода. Так было у хиппи, которые уходили жить на природу, отказывались от достижений, карьеры, потому что для них было важнее всего жить свободно, не связывать себя рамками. Это было их идеалом. И в какой-то мере их тоже можно назвать перфекционистами

По мнению Гордеева, школьник, который совершенно не переживает из-за двоек в школе, не успешен в учебе, может потом добиться больших успехов в сфере творчества.

«Возможно, он с детства четко знал, что ему нужно другое, — объясняет Михаил Гордеев. —  Если человек не переживает из-за неуспеха на работе, в учебе, у него, возможно, есть другая сфера интересов. Можно ли назвать равнодушным классического Манилова, который все время думает о чем-то, мечтает, при этом ничего не делает? Сложно сказать, можно назвать его мечтателем. Просто его идеалы обществом не признаются». 

Клиентами психотерапевта могут стать и антиподы перфекционистов, несмотря на более спокойное отношение к чужим и своим ошибкам, считает психиатр Надежда Соловьева. 

«Если говорить о неврозах, малой психиатрии, о преодолении какого-то расстройства, тревожности, панических атаках, то приходят и те, и те. У выраженных перфекционистов проблема  — это тревога. А у так называемых пофигистов — апатия, депрессивные состояния и социопатия. И внутри такие люди могут чувствовать свою несостоятельность и страдать от этого. И на самом деле и перфекционизм, и безразличие — это две защитные реакции психики, которые говорят, что у человека есть проблемы».

Люди «без кожи»

Перфекционисты часто бывают очень чувствительными людьми. Но чувствительные личности — не всегда перфекционисты. Их называют людьми «без кожи», когда ранить может грубое слово, пренебрежительный взгляд, а предательство или расставание надолго выбивает их из колеи и становится трагедией. 

Чувствительность может быть и биологически обусловлена, когда человек рождается с очень нежной, восприимчивой нервной системой, считает Михаил Хорс. Но иногда подобная особенность говорит о «комплексе бога».

«Такой человек не обязательно стремится к успеху, у него может не быть хороших оценок в школе или высшего образования, он может не иметь престижной работы, зарплаты, признания коллег, но при этом у него комплекс всемогущего и всезнающего существа, которое точно знает, как должно быть, каким должен быть мир. И если он устроен по-другому, нежели он себе нафантазировал, то значит, это плохой мир. Таким людям больно жить в мире, который устроен не по их законам. В религии это называется словом «гордыня». Гордыня — это грех, который является матерью всех других грехов». 

Надежда Соловьева считает, что в таком случае речь идет не о перфекционизме, а скорее о нетерпимости. 

«Нельзя ставить знак равно между нетерпимостью и перфекционизмом. Бывают нетерпимые люди, которые не являются перфекционистами, и наоборот».

С «комплексом бога» поможет справиться психотерапевт. Гиперчувствительные люди тоже могут улучшить качество жизни на сеансах терапии и научиться менее болезненно реагировать на травмирующие ситуации и события. 

Противоположности притягиваются? 

Семьи, построенные людьми с разными темпераментами, характерами, считаются более крепкими. Классический пример такого союза — герои Веры Алентовой и Алексея Баталова в фильме «Москва слезам не верит», Наташа Ростова и Пьер Безухов в романе Толстого «Война и мир». Но не в киношной или книжной, а в реальной паре, созданной перфекционистом и его антиподом, по мнению психиатра Михаила Гордеева, возникнут серьезные проблемы. 

«Маловероятно, чтобы они сошлись. И даже большая любовь быстро погаснет, потому что они разные в восприятии мира. Ведь в паре человек часто ставит критерии в отношении партнера. И перфекционист может ставить критерии в продуктивности, пунктуальности, красоте. У него может быть идеал красоты, и ему, скажем, понравится красивая женщина, но утром она все равно проснется с помятым лицом, а это уже нарушение идеала». 

На эту тему

Построить отношения и семью у столь разных людей получится, только если оба признают свои недостатки, готовы идти друг другу на уступки. 

«Они могут ужиться, тут вопрос — стремятся ли они к этому, — считает психолог Михаил Хорс. — К сожалению, в последнее время и перфекционисты, и неперфекционисты все больше и больше, в том числе и под влиянием некоторых моих коллег, считают, что если вдруг в отношениях что-то не так, то нужно уходить и искать то, где получится идеальным образом. Если люди в отношениях ценят что-то еще, кроме своего эго, они, скорее всего, постараются сделать шаги навстречу друг другу».

Более оптимистично оценивает перспективы семьи перфекциониста и его противоположности психиатр Надежда Соловьева: по ее мнению, главное условие успеха в такой паре — отсутствие у обоих категоричности. 

«Есть понятие гармоничности пары. Если перфекционист знает свои недостатки, но не может с ними бороться, он будет ценить недостающие ему качества в партнере. Также и его антиподу будет полезно чему-то научиться у перфекциониста. А перфекционист может стать рядом со своим партнером более расслабленным. Если к перфекционизму и безразличию обоих не примешана категоричность, если оба не ригидны, гибки, пара может получиться замечательная, взаимодополняющая, один будет нивелировать слабые места другого».

Ригидность иными словами — косность, неподатливость изменениям. Они могут произойти с перфекционистом в течение жизни под воздействием психотерапии или какого-то важного события. Случается, что перфекционист даже отказывается от достигаторства, забрасывает карьеру и становится дауншифтером, посвящает себя семье, но такая резкая смена чаще случается после определенных событий. 

«Чтобы что-то изменилось быстро, должна случиться катастрофа. Какое-то большое потрясение в жизни», — считает Михаил Гордеев. 

А вот обратная ситуация, когда безразличный и расслабленный человек превращается в перфекциониста, случается гораздо реже.

«Я такого не встречал, — рассказывает Михаил Хорс. — Если это взрослый человек, у которого личность уже устоялась, вряд ли он может соскочить в перфекционизм. Такое может сделать испытание медными трубами, если он получит власть и приучится к тому, что любое его требование исполняется по щелчку пальцев, а потом он эту власть потеряет, то да, он может пострадать».

По словам Надежды Соловьевой, подобную трансформацию еще можно наблюдать у подростков, которые в переходном возрасте не понимают, чего хотят, а потом берутся за голову. 

«Такое может произойти, если человек в подростковом возрасте протестовал, но на самом деле безразличным к своим успехам и делам он не был. Бывает, что в подростковом возрасте дети забрасывают учебу, институт, а потом вырастают и меняются резко. В таком случае их протест — просто реакция на окружение, моду, а не безразличие и флегматичность».

Карина Салтыкова

Формирование эктопической кости мезенхимальными стволовыми клетками, полученными из плаценты терминального человека и децидуальной оболочки

Abstract

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) — один из наиболее привлекательных типов клеток для восстановления костной ткани на основе клеток. МСК плода и МСК материнского происхождения были выделены из ворсинок хориона плаценты терминальной части человека и decidua basalis , прикрепленных к плаценте после родов, соответственно. MSC, происходящие из хориона (CMSC), и MSC, полученные из децидуальной оболочки (DMSC), полученные в этом исследовании, соответствовали критериям MSC, установленным Международным обществом клеточной терапии.Эти критерии включают: (i) приверженность пластику; (ii)> 90% экспрессии CD73, CD105, CD90, CD146, CD44 и CD166 в сочетании с <5% экспрессией CD45, CD19 и HLA-DR; и (iii) способность дифференцироваться на остеогенные, адипогенные и хондрогенные линии. Подкожная имплантация in vivo мышам SCID показала, что как CMSC, меченные бром-дезоксиуридином (BrdU), так и DMSC, при имплантации вместе с частицами гидроксиапатита / трикальцийфосфата, способны образовывать эктопическую кость через 8 недель после трансплантации.Гистологическая оценка показала экспрессию костных маркеров, остеопонтина (OPN), остеокальцина (OCN), бигликана (BGN), костного сиалопротеина (BSP), а также маркера сосудистой сети, альфа-актина гладких мышц (α-SMA). Это исследование предоставляет доказательства в поддержку CMSC и DMSC в качестве кандидатов в клетки с высокой способностью к формированию кости.

Образец цитирования: Kusuma GD, Menicanin D, Gronthos S, Manuelpillai U, Abumaree MH, Pertile MD, et al. (2015) Формирование эктопической кости мезенхимальными стволовыми клетками, полученными из плаценты и децидуальной оболочки человека.PLoS ONE 10 (10): e0141246. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0141246

Редактор: Мичия Мацусаки, Университет Осаки, ЯПОНИЯ

Поступила: 4 мая 2015 г .; Одобрена: 5 октября 2015 г .; Опубликован: 20 октября 2015 г.

Авторские права: © 2015 Kusuma et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах бумага.

Финансирование: BK и SPB были поддержаны грантами Международного центра медицинских исследований короля Абдаллы (грант № RC08 / 114) и Фонда Королевской женской больницы. GK был поддержан Австралийской премией для аспирантов и стипендией для аспирантов Австралийского центра стволовых клеток. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК), которые также называют мультипотентными стромальными клетками, обнаруживаются во многих тканях. МСК способны к мультипотентной дифференцировке, что позволяет им вносить вклад в регенерацию и восстановление костей, поскольку МСК могут легко дифференцироваться в остеоцитарные клоны [1]. Более того, МСК легко выделяются, их количество может быть значительно увеличено в культуре, криоконсервировано для дальнейшего использования, и, что важно, они обладают низкой иммуногенностью, обладают иммуномодулирующими свойствами и имеют хороший профиль безопасности.Согласно Международному обществу клеточной терапии (ISCT), МСК должны; (i) придерживаться необработанных пластиковых поверхностей; (ii) экспрессируют CD105, CD73 и CD90, но не CD34, CD14, CD19, CD11b, CD79α или HLA-DR, и (iii) дифференцируются в остеогенные, адипогенные и хондрогенные линии in vitro [2].

Человеческий термин «плацента» является обильным, легкодоступным и бесспорным источником МСК. МСК были выделены из тканей плаценты плода, включая амнион, хорион и ворсинки хориона, а также из тканей материнского происхождения, которые прикрепляются к ткани плаценты после родов. I.е. decidua parietalis и decidua basalis [3–7]. Периферическая область плаценты на материнской стороне, которая контактирует со стенкой матки (называемая базальной пластинкой), состоит из ворсинок хориона с одной стороны и материнской decidua basalis с другой. После рождения плаценты decidua basalis остается прикрепленным к материнской стороне плаценты. Таким образом, необходимо провести тщательную подготовку и характеристику, чтобы подтвердить материнское происхождение МСК decidua basalis (DMSC) и эмбриональное происхождение МСК ворсинок хориона (CMSC).Таким образом, в дополнение к критериям, установленным ISCT, Parolini et al. предположили, что CMSCs должны иметь <1% материнских клеток в популяции [8, 9]. Недавно был рассмотрен важный вопрос о наличии материнских клеток в культурах плацентарных МСК человека [10]. Таким образом, первая цель этого исследования состояла в том, чтобы выделить и охарактеризовать CMSC и DMSC в соответствии с критериями, описанными выше, и подтвердить соответствующее фетальное и материнское происхождение этих клеток. Эта характеристика была важной предпосылкой для использования CMSC и DMSC для анализов in vivo .

В то время как исследования сообщили об остеогенезе CMSC и DMSC in vitro , образование кости in vivo не исследовалось. Такие исследования необходимы для оценки функциональных возможностей CMSC и DMSC и их потенциала для клинического применения. Таким образом, мы начали исследование с использованием модели эктопического образования кости на мышах, чтобы изучить возможность того, что изолированные человеческие CMSC и DMSC были способны регенерировать эктопическую костоподобную структуру in vivo .

Анализ ортотопического образования кости обычно используется для изучения остеогенеза in vivo . По сравнению с ортотопическим анализом, анализ эктопического формирования кости имеет уникальные преимущества, поскольку отсутствует необходимость в стимуляции костными цитокинами и межклеточном взаимодействии с эндогенными костеобразующими клетками [11]. Кроме того, для имплантации клеток можно использовать множество эктопических участков, включая подкожные и внутримышечные участки, а также капсулу почки [11]. Подкожная имплантация — простейшая экспериментальная модель образования эктопической кости.Мышиные модели предпочтительнее и наиболее широко используются из-за их низкой стоимости, рыхлых кожных складок, которые могут вместить большие имплантаты, и наличия мышей с иммунодефицитом, которые будут принимать имплантированные человеческие клетки. Другим важным соображением является отсутствие естественных костеобразующих стволовых клеток во внутрикожном компартменте, и поэтому вновь образованная кость может быть с уверенностью отнесена к экзогенным стволовым клеткам. Наиболее серьезной проблемой при подкожной имплантации является отсутствие устойчивого роста костей, что может быть связано с плохим кровотоком.Однако формирование подкожной кости можно стимулировать путем включения гидроксиапатита и трикальцийфосфата (HA / TCP) вместе со стволовыми клетками. HA / TCP в настоящее время используются в качестве заменителей костного трансплантата, они биосовместимы и образуют связи между костью и керамическими имплантатами [12]. Вторая и основная цель этого исследования заключалась в оценке in vivo способности костеобразования CMSC и DMSC после подкожной имплантации вместе с HA / TCP.

Материалы и методы

Коллекция тканей

Образцы плаценты были собраны у здоровых женщин с нормальной беременностью после планового кесарева сечения или доношенных родов (n = 6).Ткань плаценты не имела явных признаков кальцификации, инфарктов или окрашивания мекония. Критериями исключения были женщины, которые курили или имели беременность двойней или тройней, лекарственную зависимость, внутриутробную инфекцию, длительный разрыв плодных оболочек или отслойку плаценты. Информированное письменное согласие было получено от всех участников до родов. Исследование было одобрено Комитетом по этике исследований человека Королевской женской больницы.

Изоляция CMSC

CMSC были выделены с использованием метода эксплантов, как описано ранее [7], со следующими модификациями.Вкратце, через плодную оболочку делали разрез около места прикрепления пуповины и получали 1 г ворсинчатой ​​ткани хориона примерно на 1-2 см ниже хорионической пластинки. Кусочки ткани хориона с типичной морфологией ворсинок очищали иглой 21 калибра под препаровальным микроскопом для удаления ворсинок. Очищенные ворсинки были мелко нарезаны и переварены в 0,25% трипсине в течение 40 мин при 37 ° C. Трипсин инактивировали FBS, а ткани промывали PBS.Переваренные ворсинки культивировали в полной среде Amniomax C100 (Life Technologies) в 25 см колбах для тканевых культур ² , поддерживаемых при 37 ° C в увлажненном инкубаторе с 5% CO ₂ . Через 7 дней ворсинчатые ткани удаляли из колбы, и адгезивные клетки, возникающие из эксплантатов (клетки P0), выращивали, по крайней мере, до 80% конфлюэнтности, прежде чем разрастаться до уровня P5.

Изоляция DMSC

Мы ранее сообщали о выделении DMSCs из decidua basalis , прикрепленных к материнской стороне плаценты [13].Около восьми граммов плацентарной ткани отделяли от базальной пластины, четыре раза промывали PBS, тонко измельчали ​​и расщепляли трипсином (0,25%; Life Technologies, Калифорния, США) и ДНКазой 1 (50 мкг / мл; Уортингтон, Нью-Джерси, США). ) при 4 ° C в течение ночи. Фетальную бычью сыворотку (FBS; Thermo Scientific, MA, USA) добавляли для инактивации трипсина, и гидролизат центрифугировали при 200 g в течение 5 минут. Гранулированную ткань переваривали коллагеназой 1 типа (10 мг / мл; Worthington) и ДНКазой 1 (50 мкг / мл, Worthington) в течение 30 мин при 37 ° C и фильтровали через сито из нержавеющей стали 100 мкм.Фильтрат наслаивали на Histopaque (Sigma-Aldrich, Миссури, США) и разделяли центрифугированием в градиенте плотности при 400 g в течение 30 минут. Слои мононуклеарных клеток, содержащие DMSC, аспирировали и центрифугировали при 200 g в течение 5 минут. DMSC поддерживали в среде α-MEM (Sigma-Aldrich) с 10% FBS, пенициллин / стрептомицин (100 Ед / мл и 100 мг / мл соответственно; Life Technologies) и 2 мМ L-глутамина (Sigma-Aldrich). P0 DMSC пассировали после достижения 80% слияния, и клетки увеличивали до P5.

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)

FISH использовали для определения того, были ли DMSC материнскими, а CMSC фетальными по происхождению, как описано в другом месте [6, 13]. Вкратце, доношенные плаценты, родившиеся от беременностей, вынашивающих детей мужского пола (n = 3), использовали для получения DMSC и CMSC. Клетки поднимали с помощью TrypLE Express, промывали забуференным физиологическим раствором Хэнка (HBSS; Life Technologies) и помещали на стеклянные предметные стекла, покрытые поли-L-лизином (Thermo Scientific). После фиксации в метаноле в соотношении 3: 1 к раствору уксусной кислоты при комнатной температуре (RT) клетки гибридизовали с мечеными зондами хромосомы X (Spectrum Green) и хромосомы Y (Spectrum Orange) (Abbott Molecular, MO, USA).Исследовали примерно 200 клеток на предметное стекло.

Проточная цитометрия

Чтобы определить, экспрессируют ли размноженные клетки положительные и отрицательные маркеры, характерные для МСК, клетки анализировали с помощью проточной цитометрии на CD73, CD105, CD90, CD146, CD44 и CD166 и на отсутствие CD45, CD19 и HLA-DR. Клетки инкубировали с каждым из первичных антител или эквивалентными концентрациями соответствующих контролей изотипа (таблица 1), как описано ранее [13]. Затем клетки промывали HBSS, содержащим 2% FBS, и центрифугировали при 1000 об / мин в течение 5 минут.Осадки клеток ресуспендировали в 500 мкл HBSS с 2% FBS и 1 мкг / мл DAPI (Sigma-Aldrich). Клетки анализировали на проточном цитометре LSRII с программным обеспечением FACS Diva (BD Biosciences, Калифорния, США).

In vitro дифференцировка в мезенхимальные линии

Дифференциация DMSC и CMSC на адипогенные, остеогенные и хондрогенные линии была оценена in vitro . Дифференцировку in vitro проводили с помощью наборов маркеров, как описано [5, 6, 13].Адипогенную и остеогенную дифференцировку проводили в базальной среде Mesencult вместе с соответствующими добавками для дифференцировки в соответствии с инструкциями производителя (Stem Cell Technologies, BC, Canada). Хондрогенную дифференциацию проводили в среде DMEM / F12 (Life Technologies) с 1% ITS и хондрогенными добавками (обе от R&D Systems, Миннесота, США) в соответствии с инструкциями производителя. Клетки окрашивали раствором Oil Red O, раствором ализарина красного и Safranin O (Sigma-Aldrich) для визуализации адипогенеза, остеогенеза и хондрогенеза соответственно.

In vivo Анализ эктопического образования кости

CMSC и DMSC (n = 3 каждый) были увеличены до примерно 1 × 10 ⁷ клеток на образец (P2-P3). Приблизительно 2×10 ⁶ МСК от каждого донора смешивали с 40 мг керамических частиц гидроксиапатита / трикальцийфосфата (HA / TCP) (Zimmer Inc., IN, USA), а затем подкожно трансплантировали на спинную поверхность восьминедельных мышей SCID. (Национальные институты здоровья-bg-nu-xid; Harlan Sprague-Dawley, IN, USA), как описано ранее [14, 15].Каждая мышь получила два имплантата. Эти процедуры были выполнены в соответствии с руководящими принципами утвержденного протокола для мелких животных (Комитет по этике патологии животных Южной Австралии № 139/09). Через 8 недель имплантаты были удалены, зафиксированы в 10% формалине в течение ночи при 4 ° C, а затем декальцинированы в течение 2 недель в 0,5 M EDTA перед заливкой в ​​парафин. Для гистологического анализа были приготовлены срезы имплантатов размером 5 мкм и окрашены гематоксилином и эозином (H&E). Экспрессия специфических маркеров остеогенеза остеокальцина (OCN), остеопонтина (OPN), бигликана (BGN) и костного сиалопротеина (BSP) была проанализирована иммуногистохимическим методом с использованием ранее опубликованных методов [16].Имплантированные клетки метили BrdU за 24 и 48 часов до имплантации, чтобы оценить локализацию трансплантированных клеток. Иммуногистохимическое окрашивание с использованием антитела против BrdU проводили, как описано ранее [17].

Результаты

Изоляция и расширение CMSC и DMSC

CMSC были выделены методом эксплантов [5, 7]. CMSC мигрировали из эксплантатов примерно через 7 дней после посева. P0 и увеличенные CMSCs обнаруживают характерную фибробластоподобную морфологию MSCs (Fig 1Ai).DMSC, выделенные из decidua basalis , прикрепленных к ворсинкам хориона терминальной плаценты, прикреплялись к колбам для тканевых культур в течение 24 часов после посева. В соответствии с предыдущими находками [18-20], P0 DMSCs изначально были гетерогенными и становились более гомогенными после расширения и имели фибробластную морфологию, характерную для MSCs (Fig 2Ai). Учитывая, что CMSCs и DMSCs были морфологически неразличимы после пассирования, было критически важно, чтобы CMSCs и DMSCs, используемые в этих экспериментах, были хорошо охарактеризованы в отношении экспрессии их поверхностных маркеров, происхождения и потенциала дифференцировки.

Рис. 1. Фенотипическая характеристика CMSC.

A. (i) Изображение CMSCs в точке P0, полученное с помощью микроскопии в светлом поле. Увеличение 100X, масштабная линейка 100 мкм. (ii) CMSC из плаценты новорожденных мужского пола анализировали с использованием интерфазной FISH на ядрах MSC. CMSC показали сигналы одной хромосомы X (спектр зеленого цвета) и одной хромосомы Y (спектр оранжевого цвета). Ядра клеток окрашивали в синий цвет с помощью DAPI. Увеличение 630X. B. Экспрессия маркеров первичной клеточной поверхности CMSC. Гистограммы репрезентативных первичных CMSC в точке P3, отображающие экспрессию CD90, CD146, CD166, CD44, CD73, CD105, CD45, HLA-DR и CD19.Красная гистограмма показывает окрашивание антител-маркеров MSC, тогда как белая гистограмма показывает окрашивание соответствующих антител изотипического контроля. PE: краситель фикоэритрин, APC: краситель аллофикоцианин, APC-Cy7: краситель аллофикоцианин-Cy7. C. Репрезентативные микрофотографии, показывающие дифференцировку CMSC в мезенхимальные клоны. (i) Остеогенная дифференцировка, окрашивание клеток ализарином красным через 5 недель роста в среде для остеогенной индукции. Стрелки показывают отложения кальция. (ii) Адипогенная дифференцировка, окрашивание Oil Red O в клетках после 14-дневного роста в адипогенной индукционной среде.Стрелками показаны жирные капли. (iii) Хондрогенная дифференцировка, окрашивание сафранином O на отложения протеогликанов в клетках после 21-дневного роста в среде для хондрогенной индукции. На вставке показаны управляющие неиндуцированные CMSC. Масштабная линейка составляет 100 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0141246.g001

Рис. 2. Фенотипическая характеристика DMSC.

A. (i) Изображение DMSC, полученное с помощью микроскопии в светлом поле, в точке P0. Увеличение 100X, масштабная линейка 100 мкм. (ii) DMSC из плаценты новорожденных мужского пола анализировали с использованием интерфазной FISH на ядрах МСК.DMSC показали два сигнала Х-хромосомы (зеленый спектр). Ядра клеток окрашивали в синий цвет с помощью DAPI. Увеличение 630X. Б. Экспрессия маркеров первичной клеточной поверхности DMSC. Гистограммы репрезентативных первичных DMSC в точке P3, отображающие экспрессию CD90, CD146, CD166, CD44, CD73, CD105, CD45, HLA-DR и CD19. Красная гистограмма показывает окрашивание антител-маркеров MSC, тогда как белая гистограмма показывает окрашивание соответствующих антител изотипического контроля. PE: краситель фикоэритрин, APC: краситель аллофикоцианин, APC-Cy7: краситель аллофикоцианин-Cy7.C. Репрезентативные микрофотографии, показывающие дифференцировку DMSC в мезенхимальные клоны. (i) Остеогенная дифференцировка, окрашивание клеток ализарином красным через 5 недель роста в среде для остеогенной индукции. Стрелки показывают отложения кальция. (ii) Адипогенная дифференцировка, окрашивание Oil Red O в клетках после 14-дневного роста в адипогенной индукционной среде. Стрелками показаны жирные капли. (iii) Хондрогенная дифференцировка, окрашивание сафранином O на отложения протеогликанов в клетках после 21-дневного роста в среде для хондрогенной индукции.На вставке показаны контрольные неиндуцированные DMSC. Масштабная линейка составляет 100 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0141246.g002

Фенотипическая характеристика CMSC и DMSC

CMSC и DMSC на P3-P5 были проанализированы с помощью проточной цитометрии на маркеры клеточной поверхности, присутствующие на увеличенных MSC [2, 9]. Более 90% CMSC (рис. 1B и DMSC (рис. 2B) экспрессировали маркеры MSC CD90, CD146, CD166, CD44, CD73 и CD105, тогда как <5% были CD45, CD19 и HLA-DR-положительными. Эти результаты согласуются с профиль экспрессии, предусмотренный для МСК.Клетки за пределами P5 не анализировались, так как исследования показали, что МСК претерпевают клеточную гибель или старение после пяти пассажей [4, 21–23].

Учитывая риск перекрестной контаминации между эмбриональными и материнскими клетками, сначала мы проанализировали CMSC и DMSC с помощью FISH, чтобы убедиться, что были выделены чистые клеточные популяции. CMSC и DMSC были выделены из плаценты женщин, рожавших ребенка мужского пола, и приблизительно 200 клеток каждого типа были проанализированы на наличие сигналов в интерфазных ядрах с использованием зондов X / Y хромосомы.CMSCs показали фенотип XY (хромосомы, меченные Spectrum Green и Orange, соответственно) и, следовательно, были мужскими (рис. 1Aii). Оценка 200 интерфазных ядер показала, что CMSC, использованные в этом исследовании, имели 94% XY (6% XXYY), 100% XY и 99,5% XY (0,5% XXYY). Две хромосомы, меченные спектральным зеленым цветом, были видны в DMSC, и поэтому DMSC были женскими (рис. 2Aii). Оценка 200 интерфазных ядер показала, что DMSC, использованные в этом исследовании, имели 100% XX, 92,5% XX (7,5% XXXX) и 99% XX (1% XXXX). Случаи тетраплоидии всегда были XXYY от фетальных CMSC и XXXX от материнских DMSC.Тетраплоидия является обычным артефактом культивирования клеток и не препятствует использованию клеточных препаратов для дальнейшего анализа [24].

Дифференциация расширенных CMSC и DMSC на остеогенные, адипогенные и хондрогенные клоны также была исследована для дальнейшей проверки их свойств in vitro MSC. Окрашенные ализариновым красным отложения кальция, свидетельствующие об образовании кости, были видны в CMSC, поддерживаемых в среде для остеогенной индукции (рис. 1Ci). Окрашенные Oil Red O липидные капли наблюдались вокруг ядер клеток в CMSC, стимулированных в адипогенной среде дифференцировки (рис. 1Cii).CMSC агрегированы в трехмерную сферическую структуру после примерно 24-часовой стимуляции в среде хондрогенной дифференцировки. Окрашивание сафранином O в срезах, взятых из разных областей клеточного осадка после 3 недель стимуляции, показало присутствие протеогликанов, которые обычно секретируются во внеклеточный матрикс хрящевыми клетками (рис. 1Ciii). Контрольные культуры CMSCs, поддерживаемые в соответствующей базальной среде, не демонстрировали доказательств дифференцировки в эти клоны (вставки на рис. 1Ci – 1Ciii).DMSCs также дифференцировались на остеогенные, адипогенные и хондрогенные мезенхимные клоны (Fig. 2Ci, 2Cii и 2Ciii соответственно) [13].

In vivo Анализ эктопического образования кости

CMSC и DMSC (n = 3 на группу) были проанализированы на их способность к развитию костноподобной ткани после внематочной трансплантации мышам SCID с частицами HA / TCP в качестве носителя. Все имплантаты показали новое костеобразование на всем протяжении имплантатов. На рис. 3A, 3B, 3E и 3F показаны репрезентативные срезы имплантатов CMSC и DMSC, соответственно окрашенные H&E.Окрашивание H&E было выполнено с помощью ярко-розового окрашивания H&E, указывающего на минерализованную ткань [17]. Новая кость была сформирована (область розового окрашивания) в HA / TCP (обозначена пунктирными линиями) и непосредственно соприкасалась с керамической поверхностью. Новая кость содержит остеоциты, встроенные в матрицу, что указывает на то, что формирование кости было активным и прогрессивным. Дальнейшее гистологическое исследование показало, что новое костное образование окружено наличием адипоцитов (сотовидных структур), фиброзной ткани и мелких кровеносных сосудов.Окрашивание Anti-BrdU продемонстрировало присутствие имплантированных клеток, связанных с областями образования минералов и участками образования плотной фиброзной ткани (рис. 3C, 3D, 3G и 3H). Пересаженные CMSC и DMSC продемонстрировали способность образовывать минерализованные и волокнистые ткани in vivo .

Рис. 3. Гистология трансплантатов CMSC и DMSC.

Поперечные срезы представляют трансплантаты CMSC (A-B) и трансплантаты DMSC (E-F) после 8 недель окрашивания гематоксилином и эозином (H&E).В трансплантате поверхности носителя HA / TCP (пунктирные линии) выстланы новым костным образованием (b), участками незрелой кости (ob) вместе с окружающей фиброзной и кроветворной тканью (a) и кровеносным сосудом (bv). Репрезентативное окрашивание BrdU для локализации имплантированных CMSC (C-D) и DMSC (G-H). Были обнаружены имплантированные клетки, окрашенные BrdU, выстилающие минерализованный матрикс (черные стрелки) и окружающую фиброзную ткань. Коричневое окрашивание ядер указывает на реактивность DAB. В срезах, окрашенных подобранными по изотипу антителами, иммунореактивности не было.HA / TCP: частицы гидроксиапатита / трикальцийфосфата. Увеличение 100X, масштабная линейка 500 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0141246.g003

Иммуногистохимическое окрашивание с использованием нескольких маркеров остеогенеза было выполнено, чтобы подтвердить, что клетки со свойствами остеоцитов были сформированы в трансплантатах. Имплантированные CMSC и DMSC, выстилающие или встроенные в минерализованные поверхности, экспрессировали маркеры, связанные с костной тканью: BSP, OCN, OPN и BGN (рис. 4A – 4H). Реактивность этих маркеров показала, что имплантированные CMSC и DMSC вносят вклад в образование остеогенных клеток.Кроме того, на присутствие новообразованных сосудов в трансплантатах также указывало иммуноокрашивание α-SMA (рис. 4I и 4J). В целом, данные продемонстрировали наличие нового костного образования без очевидных качественных различий между CMSC и DMSC.

Рис. 4. Иммунореактивность маркеров остеогенеза после трансплантации in vivo первичных CMSC и DMSC мышам с ослабленным иммунитетом.

(A-B) BGN: экспрессия бигликана. (C-D) BSP: экспрессия костного сиалопротеина.(E-F) OPN: экспрессия остеопонтина. (G-H) OCN: экспрессия остеокальцина. (I-J) α-SMA: альфа-актин гладких мышц в качестве отрицательного контроля. На вставке показаны репрезентативные контрольные срезы, окрашенные подобранными по изотипу антителами. Обнаружение цвета проводили с использованием реакции DAB. Увеличение составляет 200X, а масштабная линейка — 300 мкм. Черная стрелка показывает костеобразующие поверхности, а красными стрелками показаны кровеносные сосуды.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0141246.g004

Обсуждение

Мы продемонстрировали выделение и распространение двух различных популяций МСК, полученных из плаценты доношенного человека, CMSC плода и DMSC материнского происхождения.Показано, что как CMSC, так и DMSC обладают типичными характеристиками MSC: (а) приверженность пластику; (b) способность дифференцировать in vitro на адипоциты, остеоциты и хондроциты; и (c) экспрессия поверхностных маркеров MSC (CD90, CD146, CD166, CD44, CD73 и CD105). Анализ FISH подтвердил, что чистые популяции фетальных CMSC и материнских DMSC могут быть получены с использованием используемых методов выделения. Таким образом, CMSC и DMSC соответствовали критериям, установленным для плацентарных МСК [2, 9].

МСК из разных источников, таких как жировая ткань, костный мозг и пульпа зуба, были подвергнуты трансплантации в тесте формирования эктопической кости [14, 15, 25, 26].В этом исследовании впервые изучались CMSC и DMSC и было обнаружено, что HA / TCP, имплантированные с этими клетками в подкожное пространство мышей с иммунодефицитом, могут дифференцироваться в новую ткань с характеристиками кости. Это указывает на то, что донорские МСК обладают способностью к долгосрочному выживанию и могут способствовать образованию различных типов тканей in vivo . Эффективность этого анализа in vivo была продемонстрирована в другом исследовании, в котором HA / TCP были имплантированы фибробластами крайней плоти человека, и только контроли HA / TCP были протестированы и показали рост только фиброзной ткани без признаков остеогенеза или гематопоэза [26].

В этом исследовании мы намеревались подтвердить, что имплантированные клетки выжили и способствовали образованию ткани с помощью окрашивания BrdU. В принципе, окраска BrdU включается в ДНК делящихся клеток и уменьшается по мере дальнейшего деления этих клеток. Через 8 недель после имплантации часть МСК, возможно, потеряла экспрессию BrdU из-за их начальной пролиферации in vivo или из-за физического расположения в ткани (т.е. остеоцитов в лакунах), извлечение антигена и протокол денатурирования ДНК не могут достаточно экспонировали антиген для его обнаружения с помощью иммуногистохимии.Хотя мы признаем ограничение использования BrdU для обнаружения имплантированных клеток, этот протокол получил широкое распространение и признание [27–29].

Также интересно отметить, что потенциал развития BMMSC in vivo был подобен CMSCs и DMSCs, в которых клетки вносили вклад в образование новой кости вместе с окружающими фиброзными и адипоцитами накоплением [14, 15, 30]. Наши результаты также подтверждают другие исследования, демонстрирующие MSCs , происходящие из плаценты, in vivo , способность к остеогенезу.Внутрибонная, но не подкожная инъекция адгезивных клеток плаценты мышиной модели потери костной массы, связанной с миеломой, способствовала образованию кости за счет стимуляции дифференцировки остеобластов хозяина [31]. Кроме того, полученные из плаценты МСК, выращенные в каркасе из фиброина шелка / НА, были трансплантированы в модель дефекта лучевой кости кролика и улучшили восстановление кости, о чем свидетельствует образование новой пластинчатой ​​кости, губчатой ​​кости и ряда остеобластов [32]. Кроме того, были доказательства ангиогенеза с доказательством образования новых кровеносных сосудов.Наличие новообразованной сосудистой сети согласуется с предыдущими исследованиями, в которых сообщалось о стволовых клетках пульпы зуба при имплантации с использованием аналогичной модели in vivo на мышах [14, 16]. Другое исследование показало, что полученные из амниона МСК способствовали неоваскуляризации на модели in vivo на мышах [33].

Пористый HA / TCP показал хорошую переносимость тканей без иммунологической или токсической реакции, и что костная ткань могла непосредственно откладываться на их поверхности. Это свойство важно для заменителей костного трансплантата, поскольку без него фиброзная ткань может вмешиваться на границе между костной тканью и трансплантатом и вызывать расшатывание трансплантата [12, 26].Выбор остеоиндуктивных биоматериалов (HA / TCP) в сочетании с соответствующим выбором модели на животных потенциально имеет решающее значение для определения in vivo дифференцировочной способности CMSC и DMSC. В заключение, это первое свидетельство in vivo дифференцировочного потенциала DMSCs и CMSCs после трансплантации на мышиной модели эктопического образования кости.

Выводы

В этом исследовании мы выделили CMSC и DMSC человека, и оба типа клеток продемонстрировали характерный фенотип MSC.Подкожная трансплантация CMSC и DMSC, встроенных в биоматрицу HA / TCP, в мышиную модель эктопического образования кости привела к образованию костеподобной структуры. Мечение BrdU показало, что трансплантированные клетки сохранялись в структуре и способствовали формированию ткани. Костно-специфические маркеры, такие как OPN, OCN, BGN и BSP, присутствовали в обоих трансплантатах без каких-либо качественных различий. Эти данные предполагают, что человеческие CMSC и DMSC обладают мощной способностью к формированию кости in vivo и и могут быть полезными кандидатами для восстановления in vivo костной ткани.

Благодарности

Мы благодарим пациентов, которые согласились предоставить образцы плаценты, и акушерок, проводивших клинические исследования в Королевской женской больнице, Сью Дагган и Мойру Стюарт для сбора тканей. Мы благодарим Мелиссу Дагган и Дебору Сингих за их техническую помощь.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: GDK BK. Проведены эксперименты: ГДК ДМ МДП. Проанализированы данные: ГДК ДМ СГ БК. Внесенные реактивы / материалы / инструменты анализа: GDK DM SG MHA BK MDP.Написал статью: ГДК УМ БК СПБ МГА ДМ СГ МДП.

Ссылки

1. 1. Питтенгер М.Ф., Маккей А.М., Бек С.К., Джайсвал Р.К., Дуглас Р., Моска Д.Д. и др. Многолинейный потенциал мезенхимальных стволовых клеток взрослого человека. Наука. 1999. 284 (5411): 143–7. pmid: 10102814
2. 2. Dominici M, Le Blanc K, Mueller I, Slaper-Cortenbach I, Marini F, Krause D, et al. Минимальные критерии для определения мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток. Заявление о позиции Международного общества клеточной терапии.Цитотерапия. 2006. 8 (4): 315–7. pmid: 16923606
3. 3. In ‘t Anker PS, Scherjon SA, Kleijburg-van der Keur C, de Groot-Swings GM, Claas FH, Fibbe WE и др. Выделение мезенхимальных стволовых клеток плода или матери из плаценты человека. Стволовые клетки. 2004. 22 (7): 1338–45. pmid: 15579651
4. 4. Портманн-Ланц С.Б., Шоберлейн А., Хубер А., Сагер Р., Малек А., Хольцгрев В. и др. Плацентарные мезенхимальные стволовые клетки как потенциальный аутологичный трансплантат для пре- и перинатальной нейрорегенерации.Am J Obstet Gynecol. 2006. 194 (3): 664–73. pmid: 16522395
5. 5. Кастречини Н.М., Мурти П., Гуде Н.М., Эрвич Дж. Дж., Гронтос С., Заннеттино А. и др. Мезенхимальные стволовые клетки в ворсинах хориона плаценты человека располагаются в нише сосудов. Плацента. 2010. 31 (3): 203–12. pmid: 20060164
6. 6. Кастречини Н.М., Мурти П., Цин С., Кусума Г.Д., Уилтон Л., Абумари М. и др. Мезенхимные стромальные клетки, происходящие из Decidua parietalis, располагаются в сосудистой нише внутри хориодецидуальной оболочки.Репродуктивные науки (Таузенд-Оукс, Калифорния). 2012. 19 (12): 1302–14.
7. 7. Абумари М.Х., Аль-Джума М.А., Калионис Б., Джавдат Д., Аль-Халди А., Аль-Талабани А.А. и др. Фенотипическая и функциональная характеристика мезенхимальных стволовых клеток из ворсинок хориона плаценты терминального человека. Stem Cell Rev.2013; 9 (1): 16–31. pmid: 22628114
8. 8. Паролини О., Альвиано Ф., Бергверф И., Бораски Д., Де Бари С., Де Вале П. и др. К клеточной терапии с использованием клеток, полученных из плаценты: механизмы заболевания, клеточная биология, доклинические исследования и регуляторные аспекты за круглым столом.Stem Cells Dev. 2010. 19 (2): 143–54. pmid: 19947828
9. 9. Паролини О., Альвиано Ф., Багнара Г. П., Билич Дж., Буринг Х. Дж., Евангелиста М. и др. Краткий обзор: выделение и характеристика клеток из плаценты человека: результаты первого международного семинара по стволовым клеткам, полученным из плаценты. Стволовые клетки. 2008. 26 (2): 300–11. pmid: 17975221
10. 10. Хизлвуд К.Ф., Шеррелл Х., Райан Дж., Аткинсон К., Уэллс, Калифорния, Фиск, Нью-Мексико. Высокая частота чрезмерного роста контаминирующих материнских клеток в культурах мезенхимальных стволовых / стромальных клеток плаценты человека: систематический обзор.Стволовые клетки Transl Med. 2014. 3 (11): 1305–11. pmid: 25154781
11. 11. Скотт М.А., Леви Б., Аскаринам А., Нгуен А., Ракон Т., Тинг К. и др. Краткий обзор моделей эктопического костеобразования. Stem Cells Dev. 2012. 21 (5): 655–67. pmid: 22085228
12. 12. Огуши Х., Окумура М, Тамай С., Шорс Э.С., Каплан А.И. Остеогенез, индуцированный клетками костного мозга в пористом гидроксиапатите и трикальцийфосфате: сравнительное гистоморфометрическое исследование эктопического образования кости. J Biomed Mater Res.1990. 24 (12): 1563–70. pmid: 2277053
13. 13. Kusuma GD, Manuelpillai U, Abumaree MH, Pertile MD, Brennecke SP, Kalionis B. Мезенхимальные стволовые клетки располагаются в сосудистой нише базальной децидуальной оболочки и отсутствуют в реконструированных спиральных артериолах. Плацента. 2015.
14. 14. Gronthos S, Mankani M, Brahim J, Robey PG, Shi S. Постнатальные стволовые клетки пульпы зуба человека (DPSC) in vitro и in vivo. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2000; 97 (25): 13625–30. pmid: 11087820
15. 15.Gronthos S, Zannettino AC, Hay SJ, Shi S, Graves SE, Kortesidis A, et al. Молекулярная и клеточная характеристика высокоочищенных стромальных стволовых клеток, полученных из костного мозга человека. J Cell Sci. 2003; 116 (Pt 9): 1827–35. pmid: 12665563
16. 16. Menicanin D, Mrozik KM, Wada N, Marino V, Shi S, Bartold PM, et al. Стволовые клетки, полученные из периодонтальных связок, обладают способностью к долгосрочному выживанию, самообновлению и регенерации различных типов тканей in vivo. Stem Cells Dev.2014. 23 (9): 1001–11. pmid: 24351050
17. 17. Хайнс К., Мениканин Д., Мрозик К., Гронтос С., Бартольд П.М. Генерация функциональных мезенхимальных стволовых клеток из различных индуцированных линий плюрипотентных стволовых клеток. Stem Cells Dev. 2014. 23 (10): 1084–96. pmid: 24367908
18. 18. Хуанг Ю.К., Ян З.М., Чен XH, Тан М.Ю., Ван Дж., Ли XQ и др. Выделение мезенхимальных стволовых клеток из базальной децидуальной оболочки плаценты человека и устойчивость к гипоксии и сывороточной депривации. Stem Cell Rev.2009; 5 (3): 247–55.pmid: 19590988
19. 19. Хаяти А. Р., Нур Фариха М. М., Тан Г. С., Тан А. Е., Чуа К. Потенциал стволовых клеток децидуальной оболочки человека для ангиогенеза и нейрогенеза. Архив медицинских исследований. 2011. 42 (4): 291–300. pmid: 21820607
20. 20. Брук Дж., Россетти Т., Пелеканос Р., Илич Н., Мюррей П., Хэнкок С. и др. Производство мезенхимальных стволовых клеток человека, полученных из плаценты, для клинических испытаний. Br J Haematol. 2009. 144 (4): 571–9. pmid: 19077161
21. 21. Сончини М., Вертуа Е., Гибелли Л., Зорзи Ф., Денегри М., Альбертини А. и др.Выделение и характеристика мезенхимальных клеток из плодных оболочек человека. Журнал тканевой инженерии и регенеративной медицины. 2007. 1 (4): 296–305. pmid: 18038420
22. 22. Zhang X, Soda Y, Takahashi K, Bai Y, Mitsuru A, Igura K и др. Успешное иммортализация мезенхимальных клеток-предшественников, полученных из плаценты человека, и способность к дифференцировке иммортализованных клеток. Biochem Biophys Res Commun. 2006. 351 (4): 853–9. pmid: 17094946
23. 23. Почампаллы Р.Анализы колониеобразующих единиц для МСК. Методы молекулярной биологии (Клифтон, Нью-Джерси). 2008; 449: 83–91.
24. 24. Барлоу С., Брук Дж., Чаттерджи К., Прайс Дж., Пелеканос Р., Россетти Т. и др. Сравнение мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток, полученных из плаценты и костного мозга человека. Stem Cells Dev. 2008. 17 (6): 1095–107. pmid: 151
25. 25. Заннеттино А.С., Патон С., Артур А., Хор Ф., Итеску С., Гимбл Дж. М. и др. Мультипотенциальные стромальные стволовые клетки, полученные из жировой ткани человека, проявляют периваскулярный фенотип in vitro и in vivo.J. Cell Physiol. 2008. 214 (2): 413–21. pmid: 17654479
26. 26. Кузнецов С.А., Кребсбах PH, Сатомура К., Керр Дж., Риминуччи М., Бенаяху Д. и др. Штаммы стромальных фибробластов костного мозга человека, полученные из одной колонии, образуют кость после трансплантации in vivo. J Bone Miner Res. 1997. 12 (9): 1335–47. pmid: 9286749
27. 27. Маэшима А., Ямасита С., Нодзима Ю. Идентификация почечных клеток-предшественников канальцев, которые участвуют в процессах регенерации почек. Журнал Американского общества нефрологов: JASN.2003. 14 (12): 3138–46. pmid: 14638912
28. 28. Чан Р.В., Гаргетт CE. Идентификация клеток, сохраняющих метку, в эндометрии мышей. Стволовые клетки. 2006. 24 (6): 1529–38. pmid: 16456137
29. 29. Камеяма Х., Кудо С., Удака Н., Кагаяма М., Хассан В., Хасегава К. и др. Бромдезоксиуридин (BrdU) — метко-удерживающие клетки в терминальных бронхиолах мышей. Гистология и гистопатология. 2014. 29 (5): 659–68. pmid: 24301684
30. 30. Ши С., Гронтос С. Периваскулярная ниша постнатальных мезенхимальных стволовых клеток в костном мозге и пульпе зубов человека.J Bone Miner Res. 2003. 18 (4): 696–704. pmid: 12674330
31. 31. Ли Х, Линг В., Пенниси А., Ван И, Хан С., Хейдаран М. и др. Адгезивные клетки, полученные из плаценты человека, предотвращают потерю костной массы, стимулируют образование костной ткани и подавляют рост множественной миеломы в кости. Стволовые клетки. 2011; 29 (2): 263–73. pmid: 21732484
32. 32. Джин Дж, Ван Дж, Хуанг Дж, Хуанг Ф, Фу Дж, Ян Х и др. Трансплантация мезенхимальных стволовых клеток, полученных из плаценты человека, в каркас из фиброина шелка / гидроксиапатита улучшает восстановление костей у кроликов.Журнал бионауки и биоинженерии. 2014.
33. 33. Кинцер М., Хингерл К., Кениг Дж., Райниш А., Странк Д., Хуппертц Б. и др. Мезенхимальные стромальные клетки из плаценты человека способствуют неоваскуляризации на мышиной модели in vivo. Плацента. 2014; 35 (7): 517–9. pmid: 24814611

Очистка, характеристика и дифференциация in vitro цитотрофобластов из плаценты человека * | Endocrinology

Высокоочищенные функциональные цитотрофобласты были получены из плаценты человеческого терминала путем добавления стадии центрифугирования в градиенте Перколла к стандартному методу диспергирования трипсин-ДНКазы.Выделенные мононуклеарные трофобласты в среднем имели диаметр 10 мкм и мкм, а отдельные клетки — до 20–30 мкм мкм. Жизнеспособность была более 90%. Просвечивающая электронная микроскопия показала, что клетки имеют тонкие структурные особенности, типичные для трофобластов. В отличие от синцитиальных трофобластов интактных доношенных плацент, эти клетки не окрашивали ХГЧ, плацентарный лактоген человека, специфический для беременности α ₁ -гликопротеин или низкомолекулярные цитокератины иммунопероксидазными методами.Эндотелиальные клетки, фибробласты или макрофаги не загрязняли очищенные цитотрофобласты, о чем свидетельствует отсутствие иммунопероксидазного окрашивания антителами против виментина или α ₁ -антихимотрипсина. Клетки продуцировали прогестерон (1 нг / 106 клеток-4 ч), и синтез прогестерона стимулировался до 8 раз в присутствии 25-гидроксихолестерина (20 мкг мкг / мл). Они также продуцировали эстрогены (1360 пг / 10 ⁶ клеток-4 ч) при добавлении андростендиона (1 нг / мл) в качестве предшественника.При помещении в культуру цитотрофобласты последовательно образовывали агрегаты, которые впоследствии трансформировались в синцитии в течение 24–48 часов после посева. Замедленная кинематография показала, что этот процесс происходит путем слияния клеток. Предполагаемые синцитиальные группы оказались истинными синцитиями с помощью микроинъекции флуоресцентно меченного y9-актинина, который полностью диффундировал по синцитиальной цитоплазме в течение 30 минут. Иммунопероксидазное окрашивание культивируемых трофобластов между 3,5 и 72 часами после посева выявило прогрессирующее увеличение цитоплазматических специфичных для беременности β ₁ -гликопротеинов, ХГЧ и плацентарного лактогена человека, сопровождающееся увеличением количества агрегатов и синцитий.Во всех исследованных временных точках были выявлены случайные единичные клетки, положительные по этим маркерам. РИА использованной культуральной среды для ХГЧ выявил значительное увеличение секретируемого ХГЧ, параллельное увеличению количества ХГЧ-положительных клеток и синцитий, идентифицированных иммунопероксидазными методами. Мы пришли к выводу, что цитотрофобласты человека дифференцируются в культуре и сливаются с образованием функциональных синцитиотрофобластов. { Эндокринология 118 : 1567–1582,1986)

Этот контент доступен только в формате PDF.

Выделение, очистка и дифференцировка in vitro клеток цитотрофобластов из плаценты доношенного человека | Репродуктивная биология и эндокринология

Это исследование было одобрено Институтом наблюдательного совета медицинских наук Университета Миссури. Экспериментальные процедуры проводились в период с июля 2014 года по май 2015 года.

Реагенты

Диспаза II, коллагеназа I, фосфатно-солевой буфер Дульбекко (DPBS) без кальция и магния, модифицированная Дульбекко среда Игла (DMEM), пенициллин и стрептомицин, фетальный теленок сыворотка (FBS), бычий сывороточный альбумин (BSA), Alexa Fluor® 488 осла против кроличьего IgG, Alexa Fluor® 488 осла против козьего IgG, Alexa Fluor® 594 осла против кроличьего IgG и Alexa Fluor® 488 осла антимышиная IgG (H + L) были получены от Life Technologies (Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США).PE-конъюгированные анти-HLA-ABC, микрошарики против PE и буфер для разделения MACS были приобретены у Miltenyi Biotec (Bergisch Gladbach, Германия). APC-конъюгированные анти-HLA-G, APC / Cy7-конъюгированные анти-CD45, PE / Cy7-конъюгированные анти-CD163 и согласованные флуоресцентно-меченые контрольные антитела изотипа были получены от BioLegend (Сан-Диего, Калифорния, США). Конъюгированные с PerCP-eFluor® 710 анти-CD31 и согласованные флуоресцентно-меченные контрольные антитела изотипа были получены от eBioscience (Сан-Диего, Калифорния, США). Alexa Fluor® 488-конъюгированный антивиментин, PE-конъюгированный анти-цитокератин-7, согласованные флуоресцентно-меченые контрольные антитела изотипа, буфер для фиксации и промывочный буфер для повышения проницаемости были приобретены у BD Biosciences (Сан-Хосе, Калифорния, США).Козье антитело против человеческого цитокератина-7 и кроличье антитело против человеческого синцитина было получено от Santa Cruz Biotechnology (Даллас, Техас, США). Кроличьи антитела против человеческого β-ХГЧ и мышиные антитела против человеческих глиальных клеток отсутствуют-1 (GCM1) были приобретены у Abcam (Кембридж, Великобритания). Кроличьи антитела против Е-кадгерина человека были приобретены в компании Cell Signaling (Данверс, Массачусетс, США). ДНКаза I была получена от Roche (Базель, Швейцария). Перколл был приобретен в GE Healthcare (Питтсбург, Пенсильвания, США). Маригель был получен от Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США).Среда для закрепления VECTASHIELD® с DAPI была приобретена в Vector Laboratories (Burlingame, CA, USA).

Протокол изоляции

Плаценты доношенных людей были получены от нормальных вагинальных родов или кесарева сечения, выполненных факультетом отделения акушерства, гинекологии и женского здоровья в женской и детской больнице штата Миссури Медицинской школы Университета Миссури. Все образцы были обработаны сразу после доставки. Резко удалены несколько кубических миллиметров поверхности базальной пластинки.Ворсинчатую ткань осторожно соскребали с сосудов и соединительной ткани тупым краем скальпеля. После тщательной промывки DPBS ткань разрезали на мелкие кусочки. Каждый влажный грамм измельченной ткани трижды переваривали в 5 мл ферментной среды для расщепления, содержащей 1 мг / мл диспазы II, 0,5 мг / мл коллагеназы I и 0,1 мг / мл ДНКазы I в среде DMEM при 37 ° C в течение 20 минут каждый цикл. на водяной бане со встряхиванием. Ферментативную деградацию останавливали добавлением равного объема полной DMEM, содержащей 10% FBS, 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина.Смесь фильтровали через сетчатый фильтр 100 мкм (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), а затем через фильтр 40 мкм (Thermo Fisher Scientific) для удаления загрязняющих остатков ткани. Суспензии клеток собирали и центрифугировали при 350 g в течение 10 мин при 4 ° C. Осадки клеток ресуспендировали в 5 мл полной среды DMEM, наслаивали на поверхность предварительно сформированного градиента Перколла (65%, 55%, 50%, 45%, 35%, 30% и 25%) и центрифугировали при 730 g при 4 °. C без торможения 30 мин. Слой между 45% и 35% аликвотами Перколла, содержащими клетки трофобласта (плотность 1.050-1,060 г / мл), суспендировали в полной среде DMEM и центрифугировали при 350 g при 4 ° C в течение 10 минут. Полученный осадок клеток ресуспендировали в PBS, клетки подсчитывали и суспензию повторно центрифугировали при 350 g при 4 ° C в течение 10 мин.

Иммуноочистка клеток цитотрофобласта

Перед первичным культивированием контаминанты клеток, не являющихся трофобластами, удаляли с помощью PE-конъюгированных HLA-ABC-антител и микрогранул против PE в соответствии с инструкциями производителя (Miltenyi Biotec).Вкратце, осадок клеток ресуспендировали в 100 мкл буфера для разделения MACS на 10 ⁷ клеток и инкубировали с 10 мкл PE-конъюгированного антитела против HLA-ABC в течение 10 мин при 4 ° C. После отмывки клетки ресуспендировали в 80 мкл буфера и инкубировали с 20 мкл микрогранул против PE в течение 15 мин при 4 ° C. Осадки клеток промывали и ресуспендировали в 500 мкл буфера. Клетки HLA-ABC ⁺ были истощены с использованием колонки MS и сепаратора MiniMACS ^TM (Miltenyi Biotec). Подсчитывали оставшуюся фракцию клеток трофобласта и оценивали жизнеспособность клеток по исключению трипанового синего.

Первичная культура выделенных клеток цитотрофобласта

Изолированные клетки высевали на культуральную поверхность, покрытую матригелем с плотностью 4 × 10 ⁵ клеток / см ² в полной среде DMEM при 37 ° C в 5% CO ₂ . После предоставления клеткам возможности прикрепиться в течение 4 часов среду и неприкрепленные клетки удаляли, чтобы удалить предварительно сформированные синцитиальные фрагменты, которые не выжили бы при расширенной культуре.

Проточная цитометрия

Аликвоты 10 ⁶ клеток в 50 мкл DPBS инкубировали с APC-конъюгированными анти-HLA-G (5 мкл), APC / Cy7-конъюгированными анти-CD45 (5 мкл), PE / Cy7- конъюгированные анти-CD163 (5 мкл) или конъюгированные с PerCP-eFluor® 710 анти-CD31 (5 мкл) антитела в течение 30 мин при 4 ° C.После двукратной промывки DPBS клетки фиксировали в буфере для фиксации. Для окрашивания внутриклеточных цитокинов клетки фиксировали в буфере для фиксации и инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре. После промывки DPBS клетки ресуспендировали в промывочном буфере для повышения проницаемости и инкубировали с конъюгированными с Alexa Fluor® 488 анти-виментином (5 мкл) и PE-конъюгированными антителами против цитокератина-7 (20 мкл). Контроли изотипа были установлены с использованием сопоставленных флуоресцентно меченных контрольных антител изотипа и эквивалентных условий иммуноокрашивания.Иммуноокрашенные клетки анализировали на проточном цитометре CyAn ADP (Beckman Coulter, Brea, CA, USA) с использованием программного обеспечения Summit 5.2 (Beckman Coulter). Уровни экспрессии цитокератина-7, виментина, CD45, CD 163, HLA-G и CD31 в очищенных клетках цитотрофобласта были измерены и нанесены на график.

Иммуноцитохимия

Изолированные клетки первичных цитотрофобластов культивировали в течение 72 часов. Затем клетки фиксировали в 4% параформальдегиде в течение 15 мин при комнатной температуре. После трехкратной промывки DPBS клетки были проницаемы с помощью DPBS, содержащего 0.1% тритона в течение 20 минут при комнатной температуре, затем инкубируют с DPBS, содержащим 5% BSA, в течение 1 часа при комнатной температуре для блокирования неспецифического окрашивания. Образцы промывали DPBS и инкубировали с кроличьими антителами к человеческому E-кадгерину (1/100), козьими антителами против человеческого цитокератина-7 (1/100) и кроличьими антителами против человеческого β-ХГЧ (1/100), мышиными антителами к человеческому цитокератину-7 (1/100). GCM1 человека (1/100) или кроличий синцитин против человека (1/100) в увлажненном боксе в течение ночи при 4 ° C. Затем клетки трижды промывали DPBS и инкубировали с ослиным IgG против кролика Alexa Fluor® 488 (1/300), Alexa Fluor® 488 ослиным анти-козьим IgG (1/300) и Alexa Fluor® 594 ослиным анти-кроличьим IgG. (1/300), Alexa Fluor® 488 осла против IgG мыши (H + L) (1/300) или Alexa Fluor® 594 осла против человеческого кроличьего IgG (1/300) в течение 1 ч при комнатной температуре.После трехкратной промывки DPBS клетки помещали в монтажную среду VECTASHIELD® с DAPI. Образцы наблюдали под конфокальным лазерным сканирующим микроскопом Leica TCP SP8 MP (Leica Microsystems, Вецлар, Германия) с использованием программного обеспечения Leica LAS AF Lite (Leica Microsystems).

Статистический анализ

Все статистические анализы были выполнены с использованием программного обеспечения SPSS 19.0 (IBM, Армонк, Нью-Йорк, США). Данные были проанализированы с использованием однофакторного дисперсионного анализа с пост-тестированием Бонферрони. Результаты выражали как среднее ± стандартное отклонение.Значение p <0,05 считалось значимым.

Глоссарий терминов — HRC

Союзник | Термин, используемый для описания человека, активно поддерживающего ЛГБТК. Он включает в себя прямых и цисгендерных союзников, а также тех из сообщества ЛГБТ, которые поддерживают друг друга (например, лесбиянки, которые являются союзниками бисексуального сообщества).

Бесполое | Отсутствие сексуального влечения или желания к другим людям.

Бифобия | Страх и ненависть или дискомфорт по отношению к людям, которые любят и испытывают сексуальное влечение к более чем одному полу.

Бисексуал | Лицо эмоционально, романтически или сексуально влечет к более чем одному полу, полу или гендерной идентичности, хотя не обязательно одновременно, одинаково или в одинаковой степени. Иногда используется как синоним пансексуала.

Цисгендеры | Термин, используемый для описания человека, гендерная идентичность которого совпадает с половой идентичностью, которая обычно ассоциируется с полом, присвоенным им при рождении.

Выход | Процесс, в котором человек сначала признает, принимает и ценит свою сексуальную ориентацию или гендерную идентичность и начинает делиться этим с другими.

Гей | Человек, которого эмоционально, романтически или сексуально привлекают представители того же пола. Мужчины, женщины и небинарные люди могут использовать этот термин для описания себя.

Пол двоичный | Система, в которой пол разделен на две строгие категории: мужской и женский. Ожидается, что гендерная идентичность будет соответствовать полу, назначенному при рождении, а гендерные выражения и роли соответствуют традиционным ожиданиям.

Гендерная дисфория | Клинически значимое расстройство, вызванное тем, что назначенный человеку пол при рождении не совпадает с тем, с которым он себя идентифицирует.

Гендерный подход | Человек с более широким и гибким диапазоном гендерной идентичности и / или самовыражения, чем обычно ассоциируется с бинарной гендерной системой. Часто используется как общий термин для обозначения молодых людей, которые все еще исследуют возможности своего гендерного самовыражения и / или гендерной идентичности.

Гендерное выражение | Внешний вид гендерной идентичности, обычно выражающийся в поведении, одежде, характеристиках тела или голосе, который может соответствовать или не соответствовать социально определенным формам поведения и характеристикам, обычно связанным с мужской или женской принадлежностью.

Гендер-флюид | Человек, который не идентифицирует себя с одним фиксированным полом или имеет подвижную или нефиксированную гендерную идентичность.

Гендерная идентичность | Внутреннее представление о себе как о мужчине, женщине, смеси того и другого или ни того, ни другого — как люди воспринимают себя и то, что они называют собой. Гендерная идентичность может быть такой же, как и при рождении, или отличаться от нее.

Гендерное несоответствие | Широкий термин, относящийся к людям, которые ведут себя не так, как это соответствует традиционным ожиданиям их пола, или чье гендерное выражение не вписывается в определенную категорию.Хотя многие также идентифицируют себя как трансгендеры, не все гендерно неконформные люди это делают.

Genderqueer | Гендерные люди обычно отвергают представления о статических категориях пола и принимают изменчивость гендерной идентичности и часто, хотя и не всегда, сексуальной ориентации. Люди, идентифицирующие себя как «гендерки», могут считать себя одновременно мужчинами и женщинами, ни мужчинами, ни женщинами, или полностью выпадающими из этих категорий.

Гомофобия | Страх, ненависть или дискомфорт по отношению к людям, которых привлекают представители того же пола.

Интерсекс | Интерсексуалы рождаются с самыми разными половыми признаками и репродуктивной анатомией. Существует множество различий между интерсексуальными вариациями, включая различия в гениталиях, хромосомах, гонадах, внутренних половых органах, выработке гормонов, гормональной реакции и / или вторичных половых признаках.

Лесбиянки | Женщина, испытывающая эмоциональное, романтическое или сексуальное влечение к другим женщинам. Женщины и небинарные люди могут использовать этот термин для описания себя.

LGBTQ | Аббревиатура от слова «лесбиянки, геи, бисексуалы, трансгендеры и гомосексуалисты».

Недвоичный | Прилагательное, описывающее человека, который не идентифицирует себя исключительно как мужчина или женщина. Небинарные люди могут идентифицировать себя как мужчину и женщину, где-то посередине, или как полностью выпадающих из этих категорий. Хотя многие также идентифицируют себя как трансгендеры, не все небинарные люди. Небинарный термин также может использоваться как общий термин, охватывающий такие идентичности, как агендер, бигендер, гендер-гендер или гендер-флюид.

Прогулка | Раскрытие чьей-либо лесбиянки, гея, бисексуального трансгендера или гендерной небинарной идентичности другим без их разрешения. Уход кого-то может иметь серьезные последствия для занятости, экономической стабильности, личной безопасности или религиозных или семейных ситуаций.

Пансексуал | Описывает человека, обладающего потенциалом эмоционального, романтического или сексуального влечения к людям любого пола, хотя и не обязательно одновременно, одинаково или в одинаковой степени.Иногда используется как синоним бисексуала.

Квир | Термин, который люди часто используют для обозначения спектра идентичностей и ориентаций, противоречащих общепринятому течению. Квир часто используется в качестве универсального средства для включения многих людей, в том числе тех, кто не идентифицирует себя как исключительно гетеросексуалов, и / или людей с небинарной или гендерно-экспансивной идентичностью. Этот термин ранее использовался как оскорбление, но был возвращен многими частями ЛГБТ-движения.

Опрос | Термин, используемый для описания людей, которые исследуют свою сексуальную ориентацию или гендерную идентичность.

Однополые любящие | Термин, который некоторые предпочитают использовать вместо лесбиянок, геев или бисексуалов для выражения влечения и любви к людям того же пола.

Пол при рождении | Пол, мужской, женский или интерсекс, который врач или акушерка использует для описания ребенка при рождении на основе его внешней анатомии.

Сексуальная ориентация | Врожденное или неизменное длительное эмоциональное, романтическое или сексуальное влечение к другим людям. Примечание: сексуальная ориентация человека не зависит от его гендерной идентичности.

Трансгендеры | Общий термин для людей, гендерная идентичность и / или самовыражение которых отличается от культурных ожиданий в зависимости от пола, который им был назначен при рождении. Трансгендерность не предполагает какой-либо конкретной сексуальной ориентации. Следовательно, трансгендеры могут идентифицировать себя как натуралы, геи, лесбиянки, бисексуалы и т. Д.

Переходный | Серия процессов, которые могут пройти некоторые трансгендеры, чтобы жить более полноценно, как их истинный пол.Это обычно включает социальный переход, такой как изменение имени и местоимения, медицинский переход, который может включать гормональную терапию или операции по подтверждению пола, и правовой переход, который может включать изменение официального имени и пола в государственных документах, удостоверяющих личность. Трансгендеры могут решить пройти некоторые, все или ни одного из этих процессов.

Перенос холестерина матери и плода при доношенных беременностях

https://doi.org/10.1016/j.placenta.2019.09.001 Получить права и контент

Основные моменты

•

Холестерин как из ЛПНП, так и из ЛПВП был высвобожден из плацента в пуповину и попадает в организм доношенного плода.

•

Поглощение плодом холестерина из ЛПВП было выше, чем из ЛПНП.

•

Поглощение холестерина плодом не зависело от уровня холестерина в организме матери.

•

Поглощение холестерина плодом коррелировало с поглощением холестерина из ЛПНП маткой и плацентой в кровотоке матери.

•

Плацента, по-видимому, влияет на передачу холестерина от матери к плоду в срок.

Реферат

Цели

Степень, в которой человеческий доношенный плод использует холестерин, выделяемый из плаценты, остается неуловимой.

Нашей целью было оценить чистую массу холестерина, поглощенного маточно-плацентарной единицей, высвобождаемого плацентой и поглощаемого плодом. Таким образом, мы стремились изучить передачу холестерина от матери к плоду и выдвинули гипотезу о том, что материнские уровни и поглощение маточно-плацентарным путем коррелировали с поглощением холестерина плодом.

Методы

Поперечное исследование in vivo 179 здоровых женщин натощак с неосложненной одноплодной беременностью. Кровоток в маточной артерии (n = 70) и пупочной вене (n = 125) измеряли с помощью ультразвуковой допплерографии. Образцы крови из лучевой артерии матери, антекубитальной вены и маточной вены, а также пупочной артерии и вены были взяты во время кесарева сечения. Холестерин определяли ферментативно.

Результаты

Мы обнаружили значительное маточно-плацентарное поглощение (медиана [Q1, Q3]) от общего (3.50 [-36,8,61,1]) и холестерина ЛПВП (6,69 [-3,78,17,9]) мкмоль / мин, а также поглощение плодом HDL (8,07 [4,48,12,59]), LDL (5,97 [2,77,8,92]) и всего холестерин (13,2 [8,06,21,58]) мкмоль / мин. Уровни материнского холестерина не коррелировали с поглощением холестерина плодом. Была обнаружена корреляция между поглощением всего маточно-плацентарным (rho 0,35, p 0,003) и холестерина ЛПНП (rho 0,25, p 0,03) и поглощением плода холестерина ЛПНП из пупочного кровотока. Поглощение плодом холестерина из ЛПВП было выше, чем из ЛПНП (p <0.001).

Заключение

Поглощение холестерина плода не зависит от материнского уровня холестерина, но связано с поглощением холестерина из ЛПНП маточно-плацентарным путем. Это говорит о том, что плацента влияет на передачу холестерина от матери к плоду в срок.

Ключевые слова

Метаболизм холестерина

Плацента

Человек

Поглощение плодом

Поглощение маточно-плацентарным

Перенос от матери к плоду

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

v9

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

SD Департамент социальных служб

Долгосрочное обслуживание и поддержка

Миссия Отдела долгосрочных услуг и поддержки (LTSS) заключается в том, чтобы «предоставить возможности пожилым жителям Южной Дакоты и взрослым инвалидам вести независимую, значимую и достойную жизнь, сохраняя при этом тесные семейные и общественные связи, продвигая долгосрочные услуги и поддержка для предотвращения или отсрочки преждевременной или ненадлежащей институционализации.«

LTSS предоставляет услуги на дому и по месту жительства лицам в возрасте 60 лет и старше и лицам с ограниченными возможностями в возрасте 18 лет и старше. В соответствии с Законом о пожилых американцах и другими применимыми законами штата и федеральными законами LTSS предоставляет или покупает услуги для жителей Южной Дакоты, соответствующих критериям участия в программе.

В каждом отделении по долгосрочному обслуживанию и поддержке находятся специалисты по долгосрочному обслуживанию и поддержке, которые предоставляют информацию и справочные услуги, помощь в доступе к услугам на дому и по месту жительства, оценку потребностей, постоянное ведение пациентов, разработку плана ухода и защиту взрослых. услуги лицам, проживающим в общинах Южной Дакоты.

Южная Дакота имеет множество поставщиков, доступных по всему штату, для оказания услуг на дому и по месту жительства, услуг центра престарелых и медицинских учреждений.

Используйте онлайн-каталог ресурсов Dakota at Home, чтобы найти информацию, ресурсы, а также определить местонахождение домашних и местных агентств, организаций и поставщиков услуг.

Продление отказа от прав HOPE

Отказ от права на предоставление услуг для дома и сообщества в Южной Дакоте и индивидуально ориентированного превосходства (HOPE), управляемый Отделом долгосрочных услуг и поддержки (LTSS), должен быть продлен 1 июля 2021 года с ожидаемой датой вступления в силу 1 октября 2021 года. до 30 сентября 2026 г.Целью отказа от HOPE Waiver является предоставление услуг на дому и в общине жителям Южной Дакоты в возрасте 65 лет и старше, а также лицам в возрасте 18 лет и старше, которые имеют определенную инвалидность, позволяющую им оставаться дома или в наименее ограничивающей среде. доступный. Нажмите сюда, для получения дополнительной информации.

Государственный план по проблемам старения

Отдел долгосрочного обслуживания и поддержки Департамента социальных служб штата Южная Дакота запрашивает публичные комментарии по Плану штата Южная Дакота по проблемам старения.Комментарии принимаются до закрытия рабочего дня 18 июня 2021 г. Комментарии могут быть отправлены по электронной почте Брук Темплтон и Донна Фишер. Чтобы просмотреть план, щелкните здесь.

Вы можете просмотреть Государственный план по проблемам старения на 2017–2021 годы, перейдя по следующим ссылкам:

Людей при доношенной беременности Децидуальные NK-клетки вызывают отчетливую цитотоксическую реакцию

Ключевые моменты

• ДНК при доношенной беременности вызывают различные цитолитические ответы на K562, PMA / I и HCMV.

• В отличие от dNK первого триместра, dNK при доношенной беременности не искажены для распознавания HLA-C.

• Профили белков и мРНК свидетельствуют о том, что доношенные дНК при доношенной беременности являются отдельным типом NK-клеток.

Abstract

Децидуальные NK-клетки (dNK) являются основной популяцией лимфоцитов децидуальной слизистой оболочки на ранних сроках беременности. Хотя dNK уменьшаются во время беременности, они остаются в децидуальных тканях в срок. DNK в первом триместре облегчают инвазию трофобластов, обеспечивают защиту от инфекций и, как было показано, имеют много различий в экспрессии NKR, цитокинов и цитолитической способности по сравнению с NK-клетками периферической крови (pNK).Однако имеются лишь ограниченные данные о фенотипе и функции dNK доношенной беременности. В этом исследовании dNK из тканей decidua basalis и decidua parietalis человека при доношенной беременности сравнивали с pNK и dNK первого триместра. Были обнаружены глубокие различия, в том числе: 1) dNK при доношенной беременности имеют повышенный ответ дегрануляции на K562 и PMA / иономицин, но меньшую способность реагировать на клетки, инфицированные CMV человека; 2) dNK при доношенной беременности не склонны к распознаванию HLA-C, как было ранее показано для dNK в первом триместре; и 3) профили экспрессии белков и генов выявили множественные различия между pNK, dNK первого триместра и доношенной беременностью, предполагая, что dNK доношенной беременности являются отдельным типом NK-клеток.