Диагностическая методика: Диагностические методики — Классному руководителю

Опубликовано 28.05.197019.07.2021 автором alexxlab

Содержание

Диагностические методики — Классному руководителю

Диагностические методики для классных руководителей, педагогов-психологов

Психолого-педагогическая диагностика — это оценочная практика, направленная на изучение индивидуально-психологических особенностей ученика и социально-психологических характеристик детского коллектива с целью оптимизации учебно-воспитательного процесса.

Чтобы воспитать человека во всех отношениях, необходимо знать его во всех отношениях. Начиная или продолжая работу с детским коллективом, классному руководителю приходится уделять большое внимание подбору диагностических методик, которые помогают в становлении и развитии детского коллектива. Отбирая диагностические методики, нужно учитывать следующие:

особенности возраста учащихся класса;
степень сформированности детского коллектива;
особенности взаимоотношений классного руководителя и учащихся;
степень доверия друг другу детей и взрослых.

Работая с диагностическими методиками, классный руководитель должен придерживаться следующих правил:

Содержание диагностической методики должно предполагать ожидаемый результат.
Диагностика должна носить содержательный характер и создавать широкое поле исследовательской деятельности.
Результаты диагностического исследования не должны обсуждаться людьми, не имеющим отношения к делам класса.
Результаты (любые) должны служить не во вред, а во благо учащихся класса.
По результатам диагностического исследования должны вноситься коррективы и планирование воспитательной работы в классе.
Необходимость педагогической диагностики должна учащимся разъясняться.

Для изучения детского коллектива классный руководитель может использовать следующие диагностические методики:

Наблюдение. Наблюдение дает возможность изучить участие каждого учащегося в деятельности без вмешательства в естественный процесс данной деятельности. Наблюдение используют тогда, когда существует конфликтная ситуация или необходимо сформировать мнение о поведении ученика и совершаемых им поступках.

Опросники. Опросник дает возможность изучить мотивацию действий, изучить мотивацию действий учащихся, интересов конкретной группы учащихся или класса в целом, уровень тревожности учащихся класса. Опросник позволяет выявить отношение учащихся к конкретным проблемам и явлениям.

Проективные тесты. Проективные тесты позволяют изучить отношение учащихся к миру, самому себе, значимой, деятельности, будущей профессиональной деятельности и своей социальной роли.

Анкеты. Анкеты дают возможность выявить степень влияния коллектива на личность и личности на коллектив, позиции детей в коллективе и степень их значимости.

Сочинения. Сочинения помогают изучить степень развитости кругозора учащихся, уровня интеллектуального развития учащихся, личностных качеств, отношение к миру.

Графические и рисуночные темы. Данные методики позволяют изучить отношение к коллективу, к педагогам и родителям.

Диагностические методики позволяют решать следующие педагогические задачи:

• Изучение личностных качеств учащихся класса.

• Изучение общих и специальных способностей класса.

• Изучение уровня взаимоотношений учащихся в коллективе.

• Учет индивидуальных особенностей учащихся при планировании и организации классных дел.

• Отбор методов для стимулирования и коррекции норм отношений и поведения учащихся

Диагностические методики изучения классного коллектива

Начиная работу с детским коллективом впервые в жизни или продолжая работу с детьми, классному руководителю всегда очень важно знать, как относятся друг к другу все члены детского коллектива, значим ли для них коллектив, в котором они находятся длительное время вместе.

Диагностическая методика № 1. «Фотография»

Учащимся класса предлагается выступить в роли «фотографов» и сделать снимок своего класса. Для этого каждый ученик класса получает лист бумаги, на котором он должен разместить всех учащихся и классного руководителя, как на групповой фотографии. Каждое «фото» ученик должен подписать именами своих одноклассников. Среди одноклассников он должен расположить свое фото и фото классного руководителя. Анализируя полученные фотографии, классный руководитель должен обратить внимание на то, в каком месте на фотографии ученик располагает себя, своих друзей, своих одноклассников и классного руководителя, с каким настроением он выполняет эту работу.

Диагностическая методика № 2. «Урок физкультуры»

Учащимся предлагается построить класс на урок физкультуры. Главное требование — учащиеся не имеют права строить учащихся по росту. На листах бумаги ребята могут по своему усмотрению, построить весь класс. От них зависит, будут ли стоять ребята друг за другом или в парах.

Данная методика позволяет определить степень самооценки каждого ученика, степень его включенности в жизнь класса.

Диагностическая методика № 3. «Дом, в котором я живу»

Учащимся класса предлагается построить на листке бумаги многоэтажный дом и заселить его значимыми для них людьми. Это могут быть и одноклассники и друзья, и родители, и родственники. Такая диагностика поможет изучить привязанность учащихся друг другу, к родным и близким людям, к товарищам.

Диагностическая методика № 4. «Письмо островитянину»

Учащимся класса предлагается представить себе, что они находятся на необитаемом острове. Жизнь на острове трудная, помощи ждать неоткуда. Но вдруг к берегу прибивает бутылку, в которой находится записка: «Обратись с письмом к людям, которым ты доверяешь и которых ты любишь. Они тебе помогут. Письмо отправь с помощью этой же бутылки». Учащиеся должны написать письмо тем людям, которым доверяют. Классному руководителю следует обратить внимание на то, каким будет содержание письма, к кому будут эти письма обращены.

Диагностическая методика № 5. «Дневник моей жизни»

Классный руководитель предлагает учащимся класса каждую неделю подводить итоги прожитых за неделю дней. Ребятам предлагается определить степень значимости данных событий в жизни класса и самого ученика. Дневник можно вести по следующему образцу:

Школьная неделя	Значимые события
	я	класс
1-ая
2-ая

34-ая

Диагностическая методика № 6. «Пьедестал»

Учащимся класса предлагается построить пьедестал для награждения, на который они имеют право поставить своих одноклассников. Для этого ребята должны сами определить, за что они ставят своих одноклассников на ступеньки пьедестала. Всех ступенек — 5. У учащихся есть возможность среди этих пяти ступенек одну определить для себя, если ученик считает нужным это сделать.

Данная методика позволяет увидеть взаимоотношение учащихся в коллективе, их привязанность друг к другу, определить нравственную сторону взаимоотношений учащихся.

Диагностическая методика № 7. «Государство — это мы»

Учащимся класса предлагается представить себе, что класс — это маленькое государство, а все ребята — представители этого государства. Для этого необходимо определить положение, место и предполагаемую должность каждого в этом государстве и свое собственное место. Эта методика позволит классному руководителю увидеть, кого ребята определяют на роль лидера в коллективе и кому отводится место изолированного человека.

Диагностическая методика № 8. «Круги на воде»

Ребятам предлагается листок, на котором нарисованы круги, в которые нужно вписать имена одноклассников «по степени» значимости для себя. В каждый круг ребята должны вписать не более трех имен своих одноклассников.

Диагностическая проективная методика № 9

Учащимся предлагается определить свое отношение к одноклассникам, продолжить следующие предложения:

1. Самый близкий мне человек в классе, это…

2. Ребята, с которыми мне приятно проводить свободное от учебы время, это…

3. Ребята, которых мне приятно видеть в своем доме, это…

4. Ребята, с которыми я хотел бы общаться в школе, это…

5. Ребята, с которыми я хотел бы общаться вне школы, это…

6. Ребята, с которыми я не общаюсь, это…

7. Ребята, с которыми мне приходиться общаться в школе по необходимости, это…

8. Ребята, интересы которых мне чужды, это…

9. Ребята, которые мне неприятны, это…

10. Ребята, которых я избегаю, это…

Диагностическая методика № 10. «Фильм о моем классе»

Учащимся класса предлагается выступить в роли режиссера и снять фильм о своем классе. Каждый кадр фильма должен, быть снабжен текстом. Для того, чтобы фильм получился, каждый должен придумать свою сюжетную линию, время действия в фильме и т.д. Чтобы ребятам было легче снимать фильм, они должны ответить на следующие вопросы:

1. Как называется фильм?

2. Где происходит действие фильма?

3. Кто является главным героем фильма?

4. Кто играет второстепенные роли в фильме?

5. Каким является фильм по жанру?

6. Каков финал фильма?

7. В каком цвете снимался фильм?

Эту диагностическую методику можно использовать в различных вариантах. К примеру, можно провести классный кинофестиваль, на который жюри отберет несколько картин. Эти фильмы можно посмотреть на итоговом классном часу или на родительском собрании. Это исследование весьма информативно и поможет классному руководителю увидеть интересные и не всегда видимые события и мгновения из жизни классного коллектива.

Диагностики изучения личности учащегося

Помимо изучения детского коллектива, классный руководитель должен уделить внимание изучению личности каждого ученика. Классному руководителю необходимо изучать интересы учащихся, особенности характера, душевного состояния и т.д.

Предложенные ниже методики изучения личности и коллектива дадут результат, если классный руководитель будет внимателен при их анализе, будет справедлив и не предвзят в оценке высказываний учащихся, будет использовать полученные результаты неформально. Используя данные методики, можно сделать процесс воспитания увлекательным, значимым не только для учащихся, но и для их родителей и для педагогического коллектива школы в целом.

Диагностика № 1. «Памятные даты моей жизни»

Учащимся предлагается написать самые памятные даты своей жизни, начиная с того времени, с которого они себя осмысленно помнят. Ребята должны выполнять работу по следующему образцу:

Данная диагностика позволяет классному руководителю увидеть нравственную суть значимых для ученика поступков, приоткрыть занавес в атмосферу семьи и внутреннего мира ученика.

Диагностика № 2. «Мой портрет в интерьере»

Учащимся предлагается нарисовать свой портрет на фоне определенного интерьера. Для выполнения работы учащиеся получают лист бумаги ,на котором в центре ученик должен расположить свой автопортрет, а на пустых листах он располагает то, что для него значимо и без чего его автопортрет не значим. Это и станет интерьером его автопортрета.

Диагностика № 3. «Мое состояние»

Ребятам предлагается вглядеться в 16 символов. Эти символы объединены в четыре группы: движение, спокойствие, уверенность, неуверенность. Из каждой группы символов нужно выбрать по одному, который лучше всего передает состояние движения, спокойствия, уверенности и неуверенности. Каждая группа символов изображается на доске и имеет буквенное обозначение. На своих листочках ребята записывают буквы выбранного символа.

Затем можно перейти к подсчету результатов:

Движение	Спокойствие	Уверенность	неуверенность
А-4	А-10	А-10	А-10
Б-8	Б-8	Б-8	Б-8
В-2	В-2	В-6	В-2
Г-10	Г-4	Г-2	Г-6

Интерпретация результатов выглядит так:

от 0 до 13 очков: Твое поведение зависит от окружающих. Ты легко падаешь духом, с трудом занимается тем, что тебе не нравится. На тебя оказывает влияние окружающая обстановка. Ты не всегда являешься хозяином своих решений, зависишь от настроения своего и чужого, бываешь слишком эмоционален.

от 14 до 20 очков: Ты плывешь по течению, но пытаешься найти себя. Ты умеешь критически мыслить и окружающие не могут повлиять на тебя, не имея аргументов. Если принятое тобою решение тебе вредит, по можешь от него отказаться.

от 21 до 27 очков: Ты считаешь себя непогрешимым, но пытаешься найти золотую середину между собственными взглядами, убеждениями и жизненными ситуациями. Хорошо развитая интуиция помогает выбирать первый путь и принимать верное решение.

от 28 до 34 очков: Тебе трудно отказываться от своих принципов и от своих решений. Ты умеешь быть упорным, но с трудом признаешь превосходство других над собой. Ты являешься достаточно избирательным человеком.

от 35 до 40 очков: Ты всегда строго следуешь поставленной цели. Ты можешь совершать безрассудные поступки из-за собственного упрямства. У тебя всегда на все свое мнение, тебя трудно переубедить.

Диагностика № 4. «Моих 10 — Я»

Учащимся предлагается написать на листочке бумаги 10 раз букву «Я» и дать определение этим «Я», рассказывая о себе и своих качествах по образцу:

1-я — 4-я — 7-я — 10-я —

2-я — 5-я — 8-я —

3-я — 6-я — 9-я —

Затем учащиеся должны проранжировать все свои десять «Я» в зависимости от степени их значимости для ученика.

Диагностика № 5. «Недописанный тезис»

Учащимся предлагается закончить каждый тезис. При желании каждый тезис можно развить, привести в подтверждение тезиса различные доказательства.

Я считаю, что я…
Главное в моей жизни — это…
Мне хорошо, когда…
Мне плохо, когда…
Мне нравится, когда взрослые…
Мне не нравится, когда взрослые…
В свободное время я…
Самая большая радость моей жизни…
Самая моя большая ошибка…
Иногда мне хочется…

Диагностика № 6. Блиц — опрос

В течение одной минуты учащимся предлагается ответы на заранее приготовленные классным руководителем вопросы. Такого же типа вопросы учащиеся могут задать классному руководителю

1. Любимое имя

2. Любимая пора года

3. Любимый цвет

4. Любимая книга

5. Любимое дерево

6. Любимый цветок

7. Любимая группа

8. Любимая песня

9. Любимая одежда

10. Любимый праздник

11. Любимый музыкальный инструмент

12. Любимый певец

13. Любимое животное

14. Любимая еда

15. Любимый месяц

Диагностика № 7. «Самореклама»

Учащимся предлагается дать о себе рекламу в газету для участия в конкурсе. В рекламе должны быть описаны внешние данные и внутренние качества, которые позволят победить в объявленном конкурсе. Главные требования к саморекламе — искренность, объективность, самокритичность.

Диагностика № 8. «Готовность к саморазвитию»

Учащимся предлагается определить наличие или отсутствие у себя приведенных ниже качеств знаком (+) или знаком (-):

1. Иногда мне хочется побольше узнать о себе.

2. Я считаю, что мне не нужно что-либо в себе менять.

3. Я всегда уверен в своих силах.

4. Я убежден, что все, задуманное мной, осуществится.

5. У меня нет желания знать свои плюсы и минусы.

6. Планируя что-либо, я больше надеюсь на удачу, чем на свои возможности.

7. Мне хочется учиться лучше и результативнее.

8. Когда мне что-то нужно, я могу себя заставить это делать.

9. Мои неудачи связаны с тем, что я многого не умею.

10. Мне интересно мнение других о моих качествах и возможностях.

11. Мне трудно себя воспитывать.

12. В любом деле меня не страшат ошибки и неудачи.

13. Мои качества и умения соответствуют требованиям к учению.

14. Обстоятельства всегда сильнее меня.

Посчитайте количество совпадений ответов с ключом.

Ключ:

1. (+), 2. (-), 3. (+), 4. (+), 5. (-), 6. (-), 7. (+), 8 (+), 9 (+), 10. (+), 11 (-), 12 (+), 13 (-), 14 (-)

Результат:

Хочу знать о себе — баллы 1, 2, 5, 7, 9, 10, 13.

Могу совершенствоваться 3, 4, 6, 8,11, 12,14.

Диагностика № 9. «Сочинение»

Учащимся класса предлагается написать сочинение или эссе по следующим темам:

«Ода моему классу»

«Мой класс через 5лет»

«Чтобы могло со мной произойти, если бы я попал в другой класс»

«Удивительные истории моего класса»

«Болезни роста нашего класса»

Помимо тем сочинений, связанных с классным коллективом, можно предложить учащимся темы сочинений, связанных с собственной личностью. К примеру:

«Родственные души или вариации на тему: «Мои друзья в моем классе»,

«Я памятник себе воздвиг нерукотворный: «Моя жизнь в классе»,

«Письмо самому себе»,

«Мои «хочу», «могу» и «надо».

Если ученики доверяют классному руководителю, то они будут откровенны, а это позволит вдумчивому педагогу увидеть трудные моменты в жизни учащихся и помочь в решении наболевших проблем.

Одна и та же тема сочинений учащихся может стать традиционной и ребята могут выполнять такое задание в начале каждого учебного года, это сможет стать традицией класса, увлечь ребят. Итоги этих личностных изысканий можно подвести на выпускном вечере и подарить каждому на память «архивные материалы» за несколько лет, которые смогут стать началом собственного личного архива. Традиционные темы сочинений могут быть такие:

«Мои осенние размышления»

«Привет самому себе из сентября 20.. года»

«Год 20… Мои поиски истины»

«Мои взлеты и падения»

Диагностика №10. «Полемика с самим собой»

Учащимся предлагается сформулировать свое отношение к двум предлагаемым классным руководителем альтернативным тезисам. Данные тезисы могут быть представлены для осмысления учащимися в связи с проблемами или конфликтными ситуациями, которые имеют линию в классном коллективе. Например:

Дисциплина — это свобода

Дисциплина — это неволя

Учит жизни не книга, а опыт

Учит жизни не опыт, а книга

Надо жить легко, как птица, не вычисляя завтрашний день.

Надо жить, каждый день отдавая себе отчет, что и как сделано.

Друг познается в беде.

Анализ ответов учащихся поможет классному руководителю определить их отношение к пониманию того или иного вывода.

Диагностика № 11. «Незаконченный тезис»

Учащимся класса предлагается развить тезисы и привести доказательства своих мыслей.

Жизнь —это…

Друг —это…

Быть человеком — значит…

Наивысшая радость — это…

Самая большая беда — это…

Добрая память о себе — это…

Плохая память о себе — это…

Главное в жизни — это…

Мелочи жизни — это…

Радости жизни —это…

Диагностика №12. «Ассоциативный ряд»

Учащимся предлагается построить ассоциативный ряд, связанный с одним словом, понятием, явлением. Ребята должны написать не менее 10 — 15 слов, которые могут быть связанны непосредственно с данным понятием.

Например: любовь — радость — родители — единение -тепло — удовольствие — праздник — подарок — чувство -глупость -мужество — взаимность — эйфория — безопасный секс -кольца — дети — свет — романтика — переживание — наслаждение.

Диагностика № 13. «Социометрия»

Целью социометрического исследования, является изучение взаимоотношений учащихся в коллективе и определение приоритетов отдельных учащихся в классе. Каждый ученик получает список всего класса и выполняет следующие задания:

Задание 1. У тебя есть деньги, сумма которых позволяет тебе купить подарки только трем одноклассникам. Отметь, кому ты хотел бы сделать подарок.

Задание 2. Прошло десять лет после школы. У тебя появилась возможность определить лишь трех человек из класса, с кем ты хотел встретиться. Запиши их фамилии.

Задание 3. Ты победил на выборах и у тебя есть возможность сформировать свою команду из бывших одноклассников. Их должно быть не более трех. Кого ты предпочтешь?

Метод социометрического выбора — метод, позволяющий выразить количественно, графически , структуру межличностных отношений в коллективе.

Социограмма – это графическое изображение отношений респондентов друг к другу с помощью этого метода я решила 2 задачи:

выявила лидеров и изолированных детей;
выявила взаимные симпатии и сплоченность коллектива

Организация диагностики.

Проведение диагностических процедур в школе должно осуществляться систематически. Классный руководитель может делать это самостоятельно, сотрудничая с психологом. Рекомендуется производить как общую педагогическую диагностику класса, так и направленную на частные аспекты развития учеников.

Результатом диагностики могут быть характеристики отдельных учащихся и всего класса.

Предлагается методика, которая была разработана сотрудником кафедры педагогики доктором пед. наук Журавлевым (Московский педагогический университет) – диагностическая карта класса (в качестве обобщающей диагностики). Она представляет собой таблицу, в которую заносят данные о каждом ученике в сокращенном или кодированном виде. Это делает ее содержательной, информативной, удобной для обозрения и анализа:

по горизонтали – все об одном ученике;

по вертикали — состояние класса по одному показателю.

Всего в таблице 19 колонок, 18 из которых раскрывают параметры характеристики каждого ученика, а последняя предназначена для формулирования главных индивидуальных воспитательных задач.

В таблице отражены демографические, медицинские, психологические и педагогические данные.

* К демографическим данным относится:

— ФИО (1)

— дата рождения (2)

— профессия матери и отца

* К медицинским данным отнесем:

— сведения о заболевании детей

— степень физического развития

* Психологические сведения:

— способности — доминирующие черты характера

— увлечения — специальные умения

— интересы

* Педагогические данные:

— успеваемость

— поведение

— отношение к учению, труду

— положение в классе

— отношения с товарищами

— социальная активность

— внешкольные занятия

— профессиональные умения

Для получения данных используется комплекс методов:

— разовый письменный опрос

— беседы

— анализ документов и работ учеников

— наблюдение

— социометрические и проективные (тесты) методики

— анкеты

Большую часть данных следует сообщать ученикам, обсуждать и вести с ними работу по саморазвитию, самовоспитанию, что благотворно скажется на отношении ученика к самому себе, к другим людям и пр.

Итак, последовательно опишу порядок заполнения карты характеристики с указанием возможных вариантов использования данных.

ФИО – писать отдельно мальчиков и девочек для возможной дифференциации воспитательной работы с ними.
возраст – записывается для учета отклонений в развитии и работы, связанной с поступлением правовой ответственности, получением паспорта, проведением праздников дня рождения и т.д.
профессия матери и отца – для привлечения родителей к работе с детьми
тип воспитания (демократический, авторитарный, попустительский) — получаем в процессе беседы, наблюдения, посещая семью. Используется для работы с родителями и детьми.
состояние здоровья – о нем сообщают родители и врач; записывать шифром: БО – без отклонений, ЗР – зрение, СК – сколиоз. Используются данные для регулирования нагрузок, организации работы, направленной на сокращение здоровья, проведение лечения.
успеваемость — можно фиксировать произвольно, указывая преобладающие оценки ученика и оценки по отдельным предметам. Данные используются для поддержки индивидуального роста ученика, оказания ему необходимой помощи.

7, 8 черты характера – их можно выяснить в процессе наблюдения, беседуя с детьми, с родителями, учителями. Негативные черты лучше шифровать. Данные используются при организации воспитания, самовоспитания школьников, индивидуальной работы, формирования положительной самооценки.

9. ответы учеников об увлечениях, интересах, специальных умениях — дополнить данными бесед с родителями, учителями. Данные можно использовать для развития интересов, индивидуальной работы при организации досуга.

10. одаренных детей помогают выявить олимпиады, оценки и наблюдения учителей.

11. отношение к учению, мотивы учения — выявлять методом наблюдения, беседы. Фиксировать произвольно:

— познавательная активность,

— интерес

— чувство долга …

12. общая культура, эрудиция – выявлять методом наблюдения в процессе беседы с учителями, самими учениками. Записываем так: высокий, достаточный, средний, низкий уровень. Данные используются для формирования познавательных интересов, культуры умственного труда, поведения, эстетической культуры.

13. положение в группе, отношения с товарищами, межличностные, эмоциональные отношения в классе – выявляются лидеры, предпочитаемые и отвергаемые, т.е. социально активные и признаваемые члены класса и социально-пассивные, непризнаваемые. Данные можно получить с помощью наблюдения и социометрической методики. Использовать для развития сплоченности класса, формирования индивидуальных личностных качеств, навыков общения.

14. принадлежность к общественным организациям, неформальным группам, компаниям — можно выяснить в беседах, путем наблюдения и использовать для развития полезных связей, контактов и нейтрализации социально-неодобряемого поведения.

15. постоянные или временные поручения – их важно учитывать при организации дел в классе, для развития контактов, различных умений, качеств учеников

16. трудовая активность – выяснять с помощью наблюдения, бесед; использовать сведения для индивидуальной воспитательной работы.

17. профессиональные намерения – выяснять с помощью бесед и специальных методик. Использовать в профориентационной работе.

18. сведения о постоянных внешкольных занятиях учеников — учитываются при ориентации групповой и индивидуальной воспитательной работы.

Итак, диагностическая карта класса поможет мне обнаружить проблемы и поставить задачи; выявить типичные характеристики и показатели воспитанности по отдельным параметрам и оценить их на соответствие нравственным и другим нормам.

Так же карта поможет мне обнаружить связь между разными параметрами характеристики школьника для понимания причин того или иного отклонения и сформулировать собственно педагогические задачи на следующий год.

По сути своей диагностическая карта и есть мониторинг в работе классного руководителя.

Диагностическая методика «Космическое путешествие» — Методическая копилка

Цель: определить лидера.

Ход проведения. Учащимся раздаются листы бумаги. Ребята должны представить, что отправляются в космическое путешествие и являются командирами космического корабля. Они должны набрать команду из группы ребят в составе трёх человек. Фамилии этих детей записать на листе.

Обработка результатов. Данная методика позволяет определить лидера, а также выявить учащихся, которые находятся вне классного сообщества.

Анализ диагностики

Диагностическую методику «Космическое путешествие» я провожу, в основном, в летний период времени, во время работы летней площадки. Как правило, в отряд приходят дети, которые мало знакомы между собой, или вообще не знают друг друга. Моя задача, как педагога, за короткий период времени, сплотить их в единый коллектив, и сделать все возможное, чтобы им в этом коллективе было уютно и комфортно.

Данная методика позволяет получить представление о дружеских отношениях и личных взаимных симпатиях в коллективе. Методику «Космическое путешествие», я провожу после периода адаптации, когда дети уже более или менее узнали друг друга. Анализируя ответы детей, можно сделать вывод о наличии в нём:

лидеров или активистов, не секрет, что многие дети выбирают в основном именно их;
рядовых членов коллектива, которые поддерживают в целом неплохие отношения с большинством членов коллектива;
одиночек, то есть тех, кто поддерживает хорошие отношения с очень узким кругом своих сверстников или только друг с другом;
отверженных, то есть тех, кто не принят в коллективе, их, как правило, игнорирует весь коллектив. Такое случается очень редко.

Исходя из опыта работы, можно сделать вывод: чем больше в коллективе активных детей, то есть лидеров, тем интереснее с такими детьми работать. Они придумывают интересные занятия, помогают проводить мероприятия, привлекают других детей, менее активных к играм.

Но есть здесь и свои сложности: если детей с лидерскими качествами несколько, то между ними может возникнуть конфликт. Поэтому, выявив лидеров, я стараюсь придумать такие занятия и мероприятия для коллектива, чтобы активные дети друг с другом не соперничали, а сотрудничали друг с другом, привлекая других детей. Тогда и рядовым членам коллектива и одиночкам найдется свое место и им будет в коллективе комфортно.

Диагностическая методика по выявлению уровня развития детского коллектива

Диагностическая методика по выявлению уровня развития детского коллектива

(адаптированная методика В.Т. Кабуш)

Признаки развития коллектива класса

Степень проявления признаков

Проявляется слабо

Проявляются

Проявляются ярко

I этап

1 класс

II этап
2–3 класс

III этап

3-4 класс

IV этап
4 класс

Постановка цели в совместной деятельности класса

Общая цель в совместной учебной и внеклассной деятельности коллектива класса, формирование актива класса определяется классным руководителем

Приобщение коллектива класса к общей цели в совместной учебной и внеклассной деятельности производится классным руководителем через актив класса

Организация коллектива класса в достижении общей цели совместной учебной и внеклассной деятельности производится с помощью актива класса и классного руководителя

Постановка цели в совместной деятельности коллектива класса производится по инициативе актива класса, при взаимодействии с классным руководителем

Способы привлечения к совместной деятельности

Выполнение обязанностей по совместной деятельности коллектива класса в порядке очередности

Назначение ответственных по выполнению обязанностей в совместной деятельности коллектива класса

Закрепление обязанностей за каждым в коллективе класса, назначение ответственных за выполнением обязанностей в совместной деятельности коллектива класса

Выборность актива класса для назначения ответственных за выполнением обязанностей в совместной деятельности коллектива класса

Взаимная требовательность, дисциплина

В коллективе класса требовательность друг к другу отсутствует, дисциплину поддерживают классным руководителем.

В коллективе класса разумные требования предъявляются и принимаются незначительным меньшинством, преимущественно активом.

В коллективе класса разумные требования предъявляются и принимаются большинством.

В коллективе класса преобладают разумные, справедливые требования друг к другу.

Сотрудничество и согласованность в работе

В коллективе класса не налажено сотрудничество, каждый действует в одиночку

В коллективе класса работает лишь актив, при согласовании действий наблюдается пререкания, ссоры, обиды.

В коллективе класса большинство распределяют между собой работу, встречаются затруднения, но они быстро разрешаются

В коллективе класса легко распределяют работу между собой и согласуют свои действия друг с другом и с другими классами.

Выводы:

При наблюдении за 2 «В» классом я отметила, что он находится на 1 этапе и признаки развития коллектива класса проявляются слабо. В основном вся ответственность лежит на классном руководителе. Общая цель в совместной, учебной и внеклассной деятельности ставится классным руководителем. Все обязанности распределяет так же кл.рук. Дисциплина полностью поддерживается учителем, самостоятельно дети ее поддерживать не могут.

3. Типы диагностических методик

2 группы:

— формализованные (тесты, опросники, проективные техники и психофизиологические методики) – жесткая регументация процедуры обследования, надежность и валидность.

— моноформализованные (наблюдения, опросы, анализ продуктов деятельности) – дают ценные сведения об испытуемом, когда предмет изучения выступают такие психологические явления, которые трудно поддаются активизации)

Методики высокого уровня:

— тесты – это стандартизированные, часто ограниченные во времени испытания предназначенные для установления качественных и количественных индивидуальных психологических различий.

Виды: речевому признаку – вербальные и невербальные, по форме поведения – индивидуальные и групповые, по направленности – интеллектуальные и личностные, по времени ограничения – тесты скорости и тесты результатов

Классификация по характеру: тесты аппаратурные – требующие специального оборудования использования для оценки психофизиологических свойств( высокая точность,высокая валидность, возможность для автоматизации сборов данных, отсутствие контакта с испытуемым)

тесты батарея – объединении в одну методик и направленная на измерения сложных психологических конструктов. тесты бланковые – корректурная проба, методика незаконченных предожений, исследование самооценки. тесты групповые – типы методик позволяющих использовать одновременно обследования группы испытуемых. тесты достижений – направлена на оценку достигнутого уровня, навыком и знаний. тесты интеллекта –направлена на изучения интегративных характеристик личности которая направлена на активизацию всех психологических функций и процессов. тесты креативности – творческие способности личности. личностные тесты – направлены не на интеллект личности.

— опросники – тип методик состоящих из набора пунктов не имеющих правильности ответа и характеризует их частотой и направленностью.

Основные виды: анкеты(получение информации не имеющей личностных особенностей), личностные опросникик (измерение особенностей и черт личностей)

Характеристика опросников:

Опрсник черт личности – диагностика осуществляется по степени выраженности черт, производиться группировка личностных признаков, а не обследуемых.

Опросники типологические – разработанных на основе выделения типов личности, как целостных образований не сводимых к набору черт.

Личностный опросник Айзенга:

Выберите качества, характериз меланхолика по методике Айзенка: У него реакция часто не соответствует силе раздражителя, трудно сосредоточится.

Выберите качества, характериз сангвиника по методике Айзенка: общителен, мимика богатая, непоседлив.

Выберите качества, характериз флегматика по методике Айзенка: Обладает медлительностью и спокойствием в действиях, мимике, речи.

Выберите качества, характериз холерика по методике Айзенка: Отличается повышенной возбудимостью, действия прерывисты, резкость.

Опросник Айзенка имеет символьное обозначение: EPQ (EPI)

Опросник Айзенка содержит шкалы: Невротизм, экстраверсия, интроверсия

Опросник СМИЛ

Опросники мотивов – предназначена для диагностики мотивов потребностей сферы личности, позволяет выявить, на что направлена потребность человека и как осуществляется динамика регуляции поведения.

Опросник интересов – диагностируются профессиональные интересы и ценности.

(бланк профессионального интереса Стронга)

Опросник интересов и ценностных ориентиров – опросник ценностей специальности Сьюпер, ценностные ориентации Ронич)

Опросник установок –измерение относительного ориентира человека в структуре установок (измерение установок)

—проективные методики – их существенные признаки использование неопределенных неоднозначных признаков, которые испытуемый должен конструировать, развивать, дополнять и интропретировать.

Совокупность методик исследования личности, базирующимся на проективном подходе психодиагностики — это: проективные методики

К группам проективных методов исследования личности относятся: конституцивные, конструктивные, интерпретативные, катартические , экспрессивные, импрессивные, аддитивные.

Название проективных методов исследования личности впервые в 1939г было использовано: Франком

Проективная методика «тест руки» Б.Брайкина, 3. Пиотровского, Э.Вагнера классифицирует ответы испытуемых по: 11 категориям

В проективной методике «тест руки» Брайкина , 3. Пиотровского, Э. Вагнера данное описание (рака разными способами выставляет себя на показ) относится к следующей категории: эксгибиционизм

Проективная методика «тест руки» Б.Брайкина, 3. Пиотровского, Э.Вагнера данное описание (рука воспринимается как доминирующая, наносящая повреждения, активно захватывающая какой — либо предмет) относится к следующей категории: агрессия

Проективные психодиагностические методики основываются на том, что: всё верно

Проективный метод «ассоциативный эксперемент», предложенный К.Г. Юнгом, предназначен для исследования : мативации личности

Стимульный материал в проективной методике «тест руки» Б.Брайкина, 3. Пиотровского, Э.Вагнера включает: стандартные 10 изображений кисти руки

Классификация по характеру:

— конститутивные – структуированные, оромление стимулов, предание им смысла

(чернильные пятна Роджерса)

— конструктивные – создание из оформления деталей осмысление целого.

(тест МИРА)

— интерпретивные – истолкование какого –либо события или ситуции

(тест ТАТ)

— Осуществление игровой деятельности в специально организованных условиях (психограмма) — относится к катартической группе проективных методов исследования личности

— экспресивные – рисование на свободную или заданную тему.

В процессе интерпретации проективной методики ДДЧ рассматриваются: пропорции

В РНЖ первая сторона листа связана с: энергичностью, активностью действия.

К категориям оценивания РНЖ относятся: всё верно

Рисование на свободную тему (ДДЧ) — относятся к эксприсивной группе проективных методов исследования личности.

Комплексный тест ДДЧ в 1948г был разработан: Буком

—ипресивные- предпочтение одних стимулов другим.

—одитивные –завершения рассказа,истоии, предложения.

-Наблюдение

-опрос – метод сбора первичных данных на основе невербальной коммуникации.

Виды: устные-письменные, индивидуальные-групповые, одноразовые – многоразовые,однократные –многократные.

В виде вопросов: прямые или косвенные,открытые или закрытые

—интервью – проводимая по определенному плану беседы предполагают прямой контакт.

По форме: свободные, стандартные, нестандартные

Диагностические методики

Диагностические методики

— особенности возраста учащихся класса;

— степень сформированности детского коллектива;

— особенности взаимоотношений классного руководителя и учащихся;

— степень доверия друг другу детей и взрослых.

Работая с диагностическими методиками, классный руководитель должен придерживаться следующих правил:

Правило первое. Содержание диагностической методики должно предполагать ожидаемый результат.

Правило второе. Диагностика должна носить содержательный характер и создавать широкое поле исследовательской деятельности.

Правило третье. Результаты диагностического исследования не должны обсуждаться людьми, не имеющим отношения к делам класса.

Правило четвертое. Результаты (любые) должны служить не во вред, а во благо учащихся класса.

Правило пятое. По результатам диагностического исследования должны вноситься коррективы и планирование воспитательной работы в классе.

Правило шестое. Необходимость педагогической диагностики должна учащимся разъясняться.

Наблюдение. Наблюдение дает возможность изучить участие каждого учащегося в деятельности без вмешательства в естественный процесс данной деятельности. Наблюдение используют тогда, когда существует конфликтная ситуация или необходимо сформировать мнение о поведении ученика и совершаемых им поступках.

Опросники. Опросник дает возможность изучить мотивацию действий, изучить мотивацию действий учащихся, интересов конкретной группы учащихся или класса в целом, уровень тревожности учащихся класса. Опросник позволяет выявить отношение учащихся к конкретным проблемам и явлениям.

Проективные тесты. Проективные тесты позволяют изучить отношение учащихся к миру, самому себе, значимой, деятельности, будущей профессиональной деятельности и своей социальной роли.

Анкеты. Анкеты дают возможность выявить степень влияния коллектива на личность и личности на коллектив, позиции детей в коллективе и степень их значимости.

Сочинения. Сочинения помогают изучить степень развитости кругозора учащихся, уровня интеллектуального развития учащихся, личностных качеств, отношение к миру.

Графические и рисуночные темы. Данные методики позволяют изучить отношение к коллективу, к педагогам и родителям.

Диагностические методики позволяют решать следующие педагогические задачи:

• Изучение личностных качеств учащихся класса.

• Изучение общих и специальных способностей класса.

• Изучение уровня взаимоотношений учащихся в коллективе.

• Учет индивидуальных особенностей учащихся при планировании и организации классных дел.

• Отбор методов для стимулирования и коррекции норм отношений и поведения учащихся

Поделитесь с Вашими друзьями:

2.1 Диагностическая методика Урунтаевой Г.А.. Развитие трудовой деятельности дошкольника

Диагностическая методика «Секрет» («Подарок») разработана Т.А. Репиной, модифицирована Т.В. Антоновой

Цель: выявление положения (социометрического статуса) ребенка в группе детского сада, его отношения к детям, а также представления об отношении сверстников к нему; степени доброжелательности детей друг к другу, их эмоционального благополучия.

Эксперимент проводится педагогом-психологом и (или) старшим воспитателем индивидуально с каждым ребенком, желательно в первой половине дня. Дети с воспитателем находятся в групповой комнате. Педагог-психолог приглашает одного из детей группы в спальную комнату (или раздевалку), предлагает сесть за стол, на котором заранее разложены картинки или игрушки в количестве трех предметов.

Инструкция: Сегодня все дети вашей группы по секрету, чтобы пока никто не знал об этом, дарят друг другу картинки (игрушки). Здесь на столе лежат картинки (игрушки), которые ты можешь подарить. А другие дети подарят тебе, ведь сегодня все друг другу дарят. Ты хочешь подарить картинки (игрушки) детям вашей группы? (Получив положительный ответ, взрослый продолжает). Тогда выбери, пожалуйста, картинку (игрушку), которая тебе больше всех нравится. Кому из детей вашей группы ты хочешь ее подарить? Почему?

Получив ответ, взрослый предлагает положить подарок под подушку названному сверстнику, если эксперимент проводится в спальне, или в шкафчик, если с ребенком беседуют в раздевалке.

Кому из детей ты хочешь подарить вторую картинку (игрушку)? Почему? А третью?

После того, как все подарки разложены, взрослый задает ребенку вопросы: «Есть в вашей группе такие дети, которым тебе совсем не хочется дарить? Почему? Как ты думаешь, кто из детей тебе подарит? Почему? А кто из детей не захочет тебе дарить? Почему?»

Ответы фиксируются в протоколе. По окончании эксперимента взрослый благодарит ребенка и просит его хранить секрет. Чтобы исключить возможность сговора, ребенка провожают в другое помещение. Когда все дети группы сделают свой выбор, педагог-психолог выявляет детей, которые ничего не получили, и кладет им 1 или 2 картинки (игрушки), а затем приглашает всех в спальную (или раздевальную) комнату, чтобы получить подарки от сверстников. При этом желательно регистрировать поведение и высказывания детей.

Вконтакте

Facebook

Twitter

Одноклассники

Диагностические методы: цель и методы

Диагностическая визуализация

Диагностическая визуализация — это наиболее распространенные типы процедур, используемых после скрининговых тестов. Ниже описаны типы тестов, которые используются для диагностики состояния пациента.

Рентген : Рентгеновские лучи используются для обнаружения проблем, относящихся к опорно-двигательной системе человека , что означает, что рентгеновские лучи используются для выявления проблем, связанных с нашими костями, мышцами, связками и сухожилиями. .Например, если человек упал с велосипеда и повредил руку, будет сделан рентгеновский снимок, чтобы подтвердить, была ли сломана кость. В некоторых случаях рентген можно использовать с контрастом. Пациент проглотит жидкость или таблетку или получит инъекцию вещества, которое будет выделять определенную область при рентгенографии.
MRI : MRI обозначает магнитно-резонансную томографию . В этой процедуре вокруг пациента вращается мощный магнит, который передает информацию через сканер и создает изображение, на которое врачи могут смотреть.МРТ также используется для выявления проблем с опорно-двигательным аппаратом. Однако МРТ немного более специфичен, чем рентген, и может получить гораздо больше информации. С помощью МРТ мы можем просматривать органы и мягкие ткани человека. Вы даже можете сделать МРТ головного мозга. МРТ очень полезна для обнаружения и мониторинга болезненных процессов, таких как рак или проблемы с органами.
Ультразвук : Ультразвук — очень распространенная процедура, которую можно использовать для определения функций определенных органов.Это лучше всего подходит для тестирования и наблюдения во время беременности. Ультразвуковой инструмент посылает крошечные вибрации через исследуемую область. Когда эти вибрации достигают пораженного участка, они возвращаются к ультразвуковому инструменту, который затем создает изображение. Это изображение обрисовывает в общих чертах просматриваемую область. Если беременная женщина идет на УЗИ, инструмент покажет очертания малыша. Кроме того, он покажет сердцебиение и другие функции ребенка, чтобы убедиться, что он здоров. Изображение, созданное с помощью ультразвука, похоже на прямую трансляцию видео.
КТ / ПЭТ : КТ обозначает компьютерную томографию , а ПЭТ обозначает позитронно-эмиссионную томографию . Компьютерная томография сравнима с рентгеновским снимком, за исключением того, что компьютерная томография позволяет получать множество рентгеновских изображений под разными углами. Все эти изображения затем объединяются с помощью компьютера, чтобы получить очень подробное изображение исследуемой области. При ПЭТ-сканировании в организм вводится радиоактивное вещество. Это вещество обнаруживается с помощью ПЭТ-сканирования, чтобы показать, как определенные органы работают внутри тела.Сканирование ПЭТ показывает не только изображения, но и прямую видеотрансляцию радиоактивного вещества, перемещающегося по проверяемым участкам.
Радионуклидное сканирование : Этот тип сканирования аналогичен ПЭТ-сканированию. Небольшое количество радиоактивного вещества попадает в тело и обнаруживается сканированием. Радиоактивное вещество может быть направлено в конкретный орган, чтобы показать, насколько хорошо этот орган функционирует или что с ним что-то не так. Этот тип сканирования часто используется для обнаружения опухолей или раковых процессов.Он также известен как для визуализации ядерной медицины .

Биопсия ткани

Когда у пациента подозревают заболевание кожи или внутренних органов, часто проводят биопсию ткани . При биопсии ткани из тела вырезается и исследуется небольшой кусочек подозрительной ткани. Биопсийную ткань можно просмотреть под микроскопом или пройти через определенные биохимические тесты, чтобы определить, что не так. Примером этого является подозрение на рак.Если пациент обратился к врачу со странной родинкой, будет проведена биопсия ткани, чтобы увидеть, злокачественная область или нет, и сузить диагноз.

Электрокардиография

Электрокардиография (ЭКГ) — это тест, который используется для получения дополнительной информации о сердце. Это очень распространенный диагностический тест, потому что сердечные заболевания являются главным убийцей в нашем обществе. Если у человека подозревают, что у него что-то не так с сердцем, выдается этот тест.ЭКГ проводится путем размещения электродов на определенных участках тела. Эти электроды подключены к аппарату, который будет измерять электропроводность сердца. Это означает, что измеряется биение и функция сердца. Если измерения искажены, это дает врачу понять, что что-то не так.

Отбор проб жидкости организма

Отбор проб жидкости тела используется для анализа крови или мочи людей, страдающих определенными заболеваниями. Образцы крови или мочи, взятые у пациента, могут быть подвергнуты химическим тестам, чтобы определить, есть ли у человека заболевание или определенная дисфункция в организме.

Резюме урока

В этом уроке мы рассмотрели множество различных диагностических методов и процедур, которые используются для выявления и мониторинга заболеваний и состояний. Большинство используемых тестов попадают в категорию диагностической визуализации . К ним относятся рентгеновских лучей , МРТ , ультразвуковых , КТ / ПЭТ и радионуклидное сканирование . Другие тесты, которые могут быть более конкретными, включают биопсий тканей , электрокардиографий и отбор проб биопсии .Каждый из этих диагностических тестов используется для определения того, что не так с пациентом, чтобы он мог получить необходимую помощь и лечение. Важно помнить, что базовые скрининговые тесты, хотя и полезны, иногда не позволяют однозначно определить, что с человеком не так. Именно в это время мы обращаемся к дальнейшему диагностическому тестированию.

Диагностические методы | Отделение патологии инфекционных болезней | DHCPP | NCEZID

IDPB использует различные диагностические методы при оценке образцов тканей, включая морфологические, антигенные и нуклеиновые кислоты.Эти тесты используются по мере необходимости на основе анализа данных случая и гистопатологии.

Иммуногистохимия (ИГХ)

IHC предлагает несколько явных преимуществ по сравнению с традиционными методами идентификации. Этот метод быстро расширяет диагностические возможности патологоанатома.

IHC позволяет быстро идентифицировать агентов. В методе используются специфические антитела, которые локализуются к антигенам интересующего этиологического агента. Поскольку в этом методе используются ткани, фиксированные формалином, транспортировка образцов упрощается, что позволяет проводить ретроспективные исследования и сводить к минимуму воздействие инфекционных агентов на лабораторных работников.

IHC — это чувствительная и специфическая методология тестирования для многих микроорганизмов, и в отличие от некоторых традиционных методов окрашивания, они приводят к прямым, хорошо интерпретируемым визуальным свидетельствам присутствия инфекционного агента в тканях. Кроме того, IHC выявляет организмы, которые трудно культивировать, и те, которые нельзя культивировать.

IHC предоставляет бесценную информацию для клинической диагностики, а также для изучения патогенеза. IDPB разработала множество специальных тестов IHC для выявления новых или повторно возникающих инфекционных заболеваний.В настоящее время IDPB предлагает диагностические тесты IHC для более чем 100 этиологических агентов, включая вирусные, бактериальные, паразитарные и грибковые организмы. Для ряда агентов тесты IHC могут быть единственными надежными методами обнаружения.

Особые пятна

Специальные красители полезны для обнаружения бактерий, грибков и паразитов в тканях и культуральных материалах. Однако они могут не давать конкретного диагноза для организма, и каждое пятно отличается по уровню чувствительности.

Молекулярный

IDPB в настоящее время располагает батареей основанных на ПЦР тестов для обнаружения многих бактерий, вирусов, грибков и паразитов.Молекулярные тесты IDPB оптимизированы для фиксированных формалином и залитых парафином тканей.

Микробиология

В некоторых случаях необъяснимых заболеваний IDPB обладает ограниченными возможностями для вирусной культуры этиологических агентов. Этот метод зависит от свежезамороженных тканей или биологических жидкостей и позволяет проводить дополнительные исследования, такие как методы иммунофлуоресценции или электронная микроскопия.

Электронная микроскопия

Исследования с помощью электронной микроскопии (ЭМ) проводятся на клеточных культурах, тканях и жидкостях организма.Доступны как тонкие срезы, так и отрицательные окрашенные ЭМ для помощи в диагностике и характеристике патогенов. ЭМ-исследование проводится на фиксированных глутаровым альдегидом тканях или жидкостях организма, фиксированных формалином блоках тканей, залитых парафином, подготовленных ЭМ-срезах, изображениях и сетках.

Достижения в методах диагностики инфекционных заболеваний: перспективы села и города

Реферат

Цели:

Диагностика — это первый шаг к лечению и искоренению инфекционных микробных заболеваний.В связи с постоянно развивающимися патогенами и появлением новых заболеваний существует острая необходимость в определении подходящих диагностических методов для лучшего лечения каждого заболевания. Успешность конкретного диагностического метода в любой популяции зависит от различных факторов, включая тип микробного патогена, доступность ресурсов, технический опыт, серьезность заболевания и степень эпидемии заболевания в данном районе. Одна из важных задач политиков — определить и внедрить подходящие диагностические методы для конкретных регионов на основе их конкретных требований.В этом обзоре мы обсудили различные методы, доступные в литературе, и их пригодность для целевой группы на основе вышеупомянутых критериев.

Методы:

Диагностические методы оценка хорошо задокументированных репрезентативных микробных заболеваний; В исследование были включены туберкулез (бактериальный), малярия (паразитарный) и ВИЧ (вирусный). Идентификация и сбор информации и данных проводился с упором на используемые диагностические методы из научных публикаций из Pubmed, Science Access, Scopus, EMBASE и нескольких региональных баз данных.Также были включены базы данных ВОЗ и CDC по туберкулезу, малярии и ВИЧ. Эти методы сравнивались с точки зрения наличия финансовых ресурсов, опыта и управления, функциональных возможностей, вирулентности патогенов и степени эпидемии среди населения.

Результаты и заключение:

В случае туберкулеза, ELISA и колориметрические методы успешны в сельских и городских сообществах с чувствительностью 80% — 90%. Генотипирование и анализ SNP полезны для штаммов, устойчивых к лекарствам.Паразитарные заболевания Малярия также следует той же тенденции, и диагностические методы, такие как ДЭТ, широко распространены в обеих популяциях с быстрыми результатами и чувствительностью около 90%. Заболевания, передаваемые половым путем, такие как ВИЧ, однако, демонстрируют несколько иные тенденции из-за срочной необходимости вмешательства в сельские эпидемии этого заболевания. Быстрые и чувствительные иммунологические методы, такие как тест-полоски и агглютинация с почти 100% чувствительностью, используются как в сельских, так и в городских районах. Для подтверждения проводятся дополнительные тесты, такие как белок Western и NAAT.Передовые методы могут быть вариантом для исследований в области более высоких эпидемий, лекарственной устойчивости и болезней, в то время как быстрые методы могут быть подходящими для районов с низким доходом и учреждений ЧВК. Следовательно, пригодность диагностических методов для лучшего лечения зависит не только от финансовых ресурсов и навыков оценки сообщества, но иногда и от самого заболевания. Мы далее обсудили технологические усовершенствования для конкретных условий (сельских / городских), основанные на прошлых исследованиях для лучшего управления болезнями, которые могут быть реализованы для понимания недостаточно изученных и вновь возникающих болезней.

Ключевые слова: Инфекционные заболевания, микробные заболевания, методы диагностики, бактериальные, паразитарные, вирусные, глобальное здравоохранение

1. Введение

Инфекционные болезни являются основной причиной заболеваемости и смертности во всем мире. Правильный и своевременный диагноз — это первый шаг на пути к лечению, а также борьбе с болезнями и их профилактике. Эффективные диагностические методы важны для выявления заболеваний и надлежащего лечения, а также для борьбы со вспышками среди населения.Являются ли эти методы ценными в данной среде сообщества, и если да, то какой тест может быть наиболее подходящим; это некоторые важные проблемы, на которые можно ответить, оценив эти методы с учетом многих факторов [1] [2]. Для решения проблемы диагностики и лечения тропических болезней в развивающихся странах ВОЗ (Всемирная организация здравоохранения) вместе с ЮНИСЕФ (Детский фонд Организации Объединенных Наций), Всемирным банком и ПРООН (Программа развития Организации Объединенных Наций) разработали специальную программу TDR (http: // www.who.int/tdr/en/), который организовал экспертную консультативную группу для разработки и проведения стандартной диагностической оценки. Другое сотрудничество ВОЗ с FIND (https://www.finddx.org/) работает над разработкой и реализацией политики для тестирования и предоставления эффективных методов диагностики инфекционных заболеваний различным странам на основе их конкретных требований. В эпоху эпидемий инфекционных заболеваний и появления новых болезней существует потребность в выявлении эффективных и легкодоступных диагностических методов и своевременном лечении.Важными факторами являются наличие и доступ к ресурсам, знание современных методов, которые могли бы добавить понимание вирулентности, генетической изменчивости патогена и тяжести заболевания. В литературе предложены и апробированы различные методы диагностики инфекционных заболеваний. Основную диагностику можно разделить на три большие категории: 1) классические методы, такие как микроскопия [3] и культивирование клеток [4]; 2) биохимические методы, такие как иммуноанализ [5] [6] и колориметрический тест [7] и [8]; 3) передовые методы биотехнологии, такие как молекулярное генотипирование [9] [10] [11] [12] [13], ДНК-микрочипы [14] [15] и нанотехнологии [16] ».Каждый из методов имеет свои преимущества и ограничения в пределах своего диапазона функций и обстоятельств, в которых они требуются и выполняются. Классические методы считаются золотыми стандартами и рентабельны, в то время как передовые методы во многих случаях быстрее и чувствительнее. Классические методы, такие как микроскопия и культивирование, являются хорошо зарекомендовавшими себя и доступными методами для определенных микробных патогенов, таких как туберкулез [3]. Эти методы легко доступны в труднодоступной сельской местности по сравнению с дорогими современными технологиями.Несмотря на эти преимущества, методы диагностики, являющиеся золотым стандартом, имеют ограничения, включая трудоемкую подготовку проб, медленные результаты, меньшую чувствительность, а иногда и неэффективное обнаружение. В нынешней перспективе, с учетом требований конкретных регионов, где каждый день появляются новые болезни и патогены, требуются более точные и быстрые методы. Учитывая эти характеристики, исследователи использовали новаторские подходы к биотехнологическим методам. Быстрые молекулярные методы расширили возможности лабораторий по выявлению и детальной характеристике микробных патогенов [17].Однако, учитывая ограниченные ресурсы, особенно в развивающихся странах, новые методы должны быть приоритетными для принятия правильных политических решений. Основное внимание в этом обзоре уделяется оценке и выявлению более эффективных методов диагностики на основе обзора литературы, доступной для некоторых серьезных инфекционных заболеваний. Большинство микробных инфекционных заболеваний вызываются бактериями, паразитами или вирусами. Таким образом, репрезентативными болезнями, выбранными для этого обзора, являются широко изученные туберкулез (бактериальный), малярия (паразиты) и СПИД (вирус).Другая цель этого исследования — предоставить информацию для проведения диагностики в контексте сельских и городских сообществ, а также о бремени и тяжести заболевания.

2. Методы

Идентификация и сбор информации и данных проводились с упором на диагностические методы, использованные в научных публикациях на английском языке от Pubmed, Science Access, Scopus, EMBASE до августа 2017 года или ранее, и был проведен поиск. База данных ВОЗ и CDC по туберкулезу, малярии и ВИЧ также была включена в исследование.Мы провели поиск в отчетах первичных клинических, эпидемиологических и лабораторных исследований о диагностических разработках и их эффективности в свете конкретного микробного заболевания. Вот некоторые ключевые слова для поиска: микробные И диагностические методы, Туберкулез / Малярия / ВИЧ И Диагностические методы, Диагностические методы И инфекционные заболевания, Африка И ВИЧ, Юго-Восточная Азия И методы диагностики микробов и т. Д. Целевыми группами для исследования были слаборазвитые сообщества в страны Африки и Юго-Восточной Азии, а также развитые европейские и американские сообщества.Список литературы был выбран на основе эффективности изучаемого метода, размера изучаемой популяции, успешности изучаемого метода в соответствующей популяции, методов, рекомендованных ВОЗ / CDC. Эти методы сравнивались с точки зрения доступности финансовых ресурсов, опыта и управления, функциональных возможностей и степени заражения.

3. Обзор методик

3.1. Методы диагностики туберкулеза

Туберкулез (ТБ) — это инфекционное бактериальное заболевание, передающееся воздушно-капельным путем, которое занимает второе место в мире по смертности от инфекционных заболеваний после ВИЧ.Согласно глобальному отчету Всемирной организации здравоохранения [18] за 2012 год (http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/75938/1/9789241564502_eng.pdf), в самом 2011 году 8,7 миллиона человек заболели Туберкулез, в то время как 1,4 миллиона человек умерли от этого заболевания [19]. Отсутствие адекватных диагностических мер для своевременного выявления было основной проблемой, препятствовавшей принятию надлежащих ответных мер по борьбе с заболеваемостью и смертностью, особенно в случаях ВИЧ-ассоциированного и лекарственно-устойчивого ТБ. В странах с низким уровнем дохода и высокой заболеваемостью диагностика по-прежнему зависит от традиционных методов, таких как световая микроскопия мазка мокроты, а иногда и посев.Однако эти методы микроскопии гораздо менее чувствительны, их чувствительность составляет от 20 до 80 процентов [20], особенно у пациентов с ВИЧ и детей, у которых легочная бактериальная нагрузка меньше пределов обнаружения микроскопии [21]. Для повышения чувствительности ВОЗ рекомендовала использовать светоизлучающую диодную [22] микроскопию, которая может генерировать как световые, так и флуоресцентные волны, вместо обычных световых или флуоресцентных микроскопов [23]. Незначительные улучшения в технике микроскопии все еще не подходили для решения диагностических проблем, таких как пациенты с коинфекцией ВИЧ и случаи лекарственной устойчивости, что делало культивирование незаменимым.Согласно рекомендациям ВОЗ, пациенты с отрицательными результатами микроскопии на ВИЧ с симптомами туберкулеза также должны быть протестированы посевом ().

Таблица 1.

Методы диагностики туберкулеза, изученные на различных популяциях, и рекомендации ВОЗ / CDC.

Мазок мокроты 9016 Низкая стоимость Мазок мокроты 9016 легкодоступный традиционный метод.

Методика диагностики	Эффективность в сельской / городской местности	Преимущество	Ограничение	Ссылка	Рекомендация ВОЗ / CDC
Световая микроскопия 16	Низкая чувствительность. Не подходит для штаммов, устойчивых к лекарствам	[3] [61].	Снято с производства ВОЗ.
Флуоресцентная микроскопия	В сельской / городской местности	Один из традиционных методов.	Высокая установка и стоимость. Небольшая разница в чувствительности от световой микроскопии	[62] [63] [64] [65].	Снято с производства ВОЗ.
Светодиодная флуоресцентная микроскопия	В сельской / городской местности	Более высокая чувствительность по сравнению с традиционной микроскопией.Полезно в периферийной области для обнаружения.	ВИЧ-инфицированные с низкой чувствительностью, особенно с низким уровнем CD4 Т-лимфоцитов. Не подходит для теста на лекарственную устойчивость.	[66] [67] [68].	ВОЗ рекомендовала использовать светодиодную микроскопию, которая может генерировать как световые, так и флуоресцентные волны, вместо обычных световых или флуоресцентных микроскопов [55].
Тест на культуру и лекарственную чувствительность	Городские лаборатории с требованиями лаборатории уровня биобезопасности 3 (BSL3)	Более чувствительны, чем микроскопия.Устойчивость к лекарствам может быть подтверждена.	Требуется время, дорого, Требуются лабораторные условия и опыт. Риск перекрестного заражения и биологической опасности.	[3] [69] [70].	Коммерческая жидкая культуральная среда и полоска для быстрого видообразования, рекомендованная ВОЗ [23] [71].
Иммунологический метод — (ELISA / RDT)	Быстрые серодиагностические тесты в сельских и городских условиях	Быстрые коммерческие тесты, простота использования.	Низкая чувствительность, ложноположительные результаты	[5] [72].	ВОЗ рекомендует прекратить коммерческие серодиагностические тесты [18].
Тест-LPA на основе ДНК	Доступны коммерческие наборы для сельских и городских условий с требованиями лаборатории уровня биобезопасности 2 (BSL2)	Тест с высокой чувствительностью. Меньше требований к образцу. Устойчивость к лекарствам может быть обнаружена и соотнесена с мутацией гена.	В основном рекомендуется для лечения МЛУ-ТБ, но не для лечения ШЛУ-ТБ.	[27] [28] [29] [73].	Использование коммерческих линейных зондовых тестов рекомендовано ВОЗ в эндемичных по МЛУ-ТБ районах, а также их сочетание с культивированием на ТЛЧ [71].
Тест на основе ДНК-RTPCR	Быстрый коммерческий метод Xpert и инструменты GenXpert для сельской и городской местности	Метод на основе rtPCR Xpert MTB / RIF может обнаруживать и идентифицировать лекарственную устойчивость непосредственно по мокроте. Высокая чувствительность, экономичность, меньше затрат времени, обнаружение лекарственной устойчивости, низкие требования к биобезопасности.	Обнаруживает только устойчивость к рифампицину	[31] [74] [75].	ВОЗ одобрила технологию Xpert в 2010 году [19] [32].
Тест-микрочип на основе ДНК	Городские лабораторные условия	Высокочувствительный и современный метод для углубленных геномных исследований положительных образцов. Одновременно обнаруживают все генные мутации.	Требуются расширенные настройки лаборатории.	[33] [34].	Не рекомендуется для плановой диагностики.

ТБ с множественной лекарственной устойчивостью, в широком смысле классифицируемый как МЛУ-ТБ (в основном устойчивый к INH и RIF) и ШЛУ-ТБ (устойчивый к дополнительным антибиотикам), являются основными проблемами в связи с необходимостью быстрых и эффективных методов диагностики, которые традиционно выявляются обычным культуральным методом и тестом на лекарственную чувствительность (ТЛЧ).Методы культивирования в странах с ограниченными ресурсами неэффективны из-за отсутствия инфраструктуры, плохих мер биобезопасности, а также отсутствия обученного персонала для проведения надежных тестов. Более того, решающее время теряется во время выращивания и перехода на летнее время. Различные иммунологические методы, такие как серологический тест и иммуноферментный анализ (ELISA), также были протестированы для диагностики ТБ, но не дали результата из-за низкой чувствительности и перекрестной реактивности [24] [25]. На основе генетических исследований, предполагающих, что устойчивость к лекарственным средствам у определенных штаммов обусловлена мутацией в целевом сайте лекарственного средства [27] [28] [29], были внедрены более передовые методы, такие как анализ молекулярных линий на основе ДНК [26].Анализ линейных зондов [26] представляет собой анализ чувствительности к молекулярным лекарствам с обратной гибридизацией на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР), который является очень специфичным (> 99%), чувствительным (> 97%) и быстрым и не требует наличия жизнеспособных патогенов для обнаружения, что делает обработка и биобезопасность более удобны. Однако зонды LPA в основном специфичны для МЛУ-ТБ, но не для туберкулеза с широкой лекарственной устойчивостью (ШЛУ-ТБ), поскольку ни одна мутация не является причиной обширной лекарственной устойчивости [29] [30]. Таким образом, появление LPA не устранило необходимость традиционного культивирования, особенно для диагностики ШЛУ-ТБ.В 2009 г. ВОЗ одобрила методику LPA в сочетании с методикой культивирования в жидких средах для диагностики туберкулеза в эндемичных странах [23] ().

ПЦР в реальном времени (RTPCR) — один из передовых и быстрых методов на основе ДНК, который амплифицирует ДНК в замкнутой системе и дает профили плавления ДНК для обнаружения мутации, связанной с устойчивостью. Один из полностью автоматизированных методов, основанных на ПЦР в реальном времени, под названием Xpert MTB / RIF, может обнаруживать туберкулез и определять устойчивость к рифампицину непосредственно по мокроте менее чем за два часа [31]. Клиническая валидация метода Xpert MTB / RIF показала 100% специфичность как для положительных, так и для отрицательных культур по мазку мокроты [31].Система Xpert MTB / RIF предлагает отличные характеристики обнаружения при более низких требованиях к биобезопасности и простоте эксплуатации оборудования. Компактная система ПЦР Xpert MTB / RIF в реальном времени легко транспортируется и, таким образом, может обеспечить диагностику на месте пациентам на месте оказания медицинской помощи. Основным ограничением метода Xpert MTB / RIF является высокая стоимость реагентов и инструментов по сравнению с LPA или другими анализами. Поскольку в большинстве случаев лекарственной устойчивостью является рифамицин, ВОЗ одобрила технологию Xpert в 2010 году и отслеживает глобальное внедрение этой технологии для обеспечения эффективной координации [32].В рамках проекта TB-Xpert будет предоставлено около 1,4 миллиона тестовых картриджей Xpert MTB / RIF и более 200 инструментов GeneXpert для быстрого выявления туберкулеза и устойчивости к рифампицину в 21 эндемичной стране Юго-Восточной Азии и Африки с 2013 по 2015 год [19]. Однако технология Xpert MTB / RIF не устраняет необходимость в обычных микроскопических посевах и ТЛЧ, которые необходимы для мониторинга прогресса лечения и выявления устойчивости к лекарствам, отличным от рифампицина. В условиях или группах пациентов, где устойчивость к рифампицину встречается редко, результаты Xpert MTB / RIF, указывающие на устойчивость к рифампицину, должны быть подтверждены традиционным ТЛЧ или LPA.Одним из наиболее многообещающих и перспективных диагностических методов является платформа микрочипа ДНК, которая может обнаруживать все мутации генов одновременно для нацеливания на любую лекарственную устойчивость [33] [34] (). Метод микроматрицы может одновременно выполнять идентификацию, генотипирование, а также определение устойчивости к лекарственным препаратам из-за каждой известной мутации в одном эксперименте. Обладает огромным потенциалом; Технология микроматриц все еще находится на стадии младенчества и потребует множества оптимизаций и клинических испытаний, прежде чем она станет стандартной методикой диагностики туберкулеза.

Если посмотреть на общий сценарий и существующие проблемы, ни один метод не является золотым стандартом для диагностики ТБ. Поэтому рекомендуется применять комплексный многоуровневый подход, когда диагностика заболевания выполняется в лабораториях на разных уровнях. Каждый уровень делится в зависимости от сложности и доступности ресурса и обученного персонала. Самый первый уровень должен быть на месте или может быть в сельской местности, где можно выполнить простую микроскопию и сбор образцов.Следующим уровнем должны быть лаборатории, в которые можно передать образцы для проведения более качественной микроскопии, традиционных посевов и тестов на лекарственную чувствительность с соответствующими мерами. Конечным уровнем должны быть современные высокотехнологичные лаборатории со штаб-квартирой, которые могут выполнять генотипирование, дальнейшие тесты на лекарственную устойчивость и исследования для лучшей диагностики и лечения. Координация между лабораториями каждого уровня — самый важный шаг на пути к успешному лечению болезни.

3.2. Методы диагностики малярии

Малярия — одно из самых распространенных и смертельных паразитарных заболеваний, особенно в слаборазвитых странах Африки и Юго-Восточной Азии.Согласно последнему отчету ВОЗ, в 2010 г. было около 219 миллионов предполагаемых случаев малярии (с диапазоном неопределенности от 154 до 289 миллионов) и 660 000 случаев смерти (с диапазоном неопределенности от 490 000 до 836 000) [18]. В 2012 г. была разработана новая инициатива глобальной программы ВОЗ T3 («Тестирование, лечение и отслеживание») для обеспечения всеобщего доступа к диагностике, лечению и усилению эпиднадзора. Ранняя диагностика важна для правильного лечения и контроля передачи болезни.На сегодняшний день наиболее оцененными и успешными методами диагностики малярии являются микроскопия Гимза и быстрые диагностические тесты (RDT) [35] [36]. Из-за более низкой стоимости и простоты микроскопия с окрашиванием по Гимзе до сих пор остается стандартным методом быстрого обнаружения паразитов в эндемичных сельских районах [37] (). Однако низкая чувствительность (50–100 паразитов на мкл), ложноположительные результаты и возникающие осложнения в диагностике, такие как лечение штамма P. falciparum с лекарственной устойчивостью к 4-аминохинолинам, и низкий уровень инфекции делают обычные методы неадекватными для этой цели.В последние несколько десятилетий исследований малярии были внедрены альтернативные методы, такие как ELISA [38], иммунофлуоресцентный анализ [39], RDT [40] [41], а недавно были внедрены методы анализа на основе ДНК. Среди них, до сих пор ДЭТ показали многообещающие результаты благодаря аналогичной чувствительности к микроскопии (200 паразитов на мкл в клинических условиях), но простоте использования без инструментов или технических навыков, а также доступности пункта оказания медицинской помощи (POC). В 2006 г. ВОЗ, Специальная программа исследований и подготовки специалистов по тропическим болезням [42] и Фонд инновационных новых диагностических средств (FIND) запустили программу оценки для оценки сравнительной эффективности имеющихся в продаже БЭД по борьбе с малярией.К настоящему времени проведено и опубликовано четыре раунда тестирования 164 продуктов RDT [36]. Тесты P. falciparum, нацеленные на антиген HRP2, продемонстрировали самый высокий PDS, однако тесты, нацеленные на pLDH для обнаружения P. falciparum и P. vivax, не прошли 1 этап (<80% PDS для P. falciparum при 2000 паразитов / мкл). Результаты всемирной программы оценки RDT послужат дополнительным ориентиром для лиц, определяющих политику в государственных учреждениях, в отношении принятия решений о более эффективных тестах.

Таблица 2.

Методы диагностики малярии изучены на различных группах населения и рекомендованы ВОЗ / CDC.

Диагностический метод	Эффективность в сельской / городской местности	Преимущество	Ограничение	Ссылка	Рекомендация ВОЗ / CDC
Микроскопия	Оранжевый цвет 167 или	Первое окрашивание по Giemsa или	линейка стандартной диагностики. Экономически эффективным.	Менее чувствительный. Лекарственной устойчивости не обнаружено.	[8] [37].	ВОЗ рекомендует оперативную диагностику с помощью микроскопии или экспресс-диагностики (ДЭТ) [76] [77].
Иммунологические тесты-RDT	В сельской и городской местности	Простота использования. Быстрые результаты.	Менее чувствителен при малом количестве паразитов. Ложноположительный / отрицательный. Лекарственной устойчивости не обнаружено.	[35] [40] [78] [79].	ВОЗ рекомендует оперативную диагностику с помощью микроскопии и коммерческих БДТ в эндемичных районах [76].
Серологический тест-ELISA	В сельской и городской местности	Быстрое обнаружение. Более чувствительный, чем микроскопия.	Ложноположительный, менее чувствительный. Требуется настройка лаборатории. RTD являются более развитым иммунологическим методом для POC.	[38] [80]	Не рекомендуется для регулярной диагностики.
Иммунофлуоресцентный анализ	Urban	Высокая чувствительность, чем микроскопия.	Требуются лабораторные настройки. Не рентабельно. Время забирает.	[39].	Не рекомендуется для регулярной диагностики.
Анализ ДНК-ПЦР, ОТ-ПЦР, Мультиплексная ПЦР / ПЦР-LDR, LDR-FMA, LAMP	Urban	Высокая чувствительность и специфичность.Обнаружение лекарственной устойчивости.	Требуются стандартные лабораторные настройки. Необходима экспертиза. Не рентабельно.	[43] [44] [45] [46].	Не рекомендуется для регулярной диагностики. Более полезно для подтверждения вида паразитов и восприимчивости к лекарствам.

Нечувствительность ко всем видам Plasmodium, термочувствительность, неспособность обнаружить низкий уровень инфекции (менее 200 паразитов на мкл) и ложноположительные результаты являются основными проблемами для ДЭТ на данном этапе с точки зрения эффективности этих стандартных диагностических методов. мера.Методы диагностики на основе ДНК имеют преимущество в том, что они более чувствительны, специфичны, определяют вид, устойчивость к лекарствам и низкий уровень инфекции. ПЦР является одним из основных и чувствительных методов на основе ДНК и имеет предел обнаружения до 0,5 — 5 паразитов / мл [43] [44]. Методы изотермической амплификации, такие как изотермическая амплификация, опосредованная петлей (LAMP), широко изучается методом амплификации на основе ДНК в диагностике малярии, который не требует термосциклера, имеет 95% чувствительность и 99% специфичность с задокументированным пределом обнаружения 0.2 паразита / мл [45] [46]. Также были внедрены и протестированы другие методы на основе ДНК, такие как ПЦР в реальном времени, Мультиплексная ПЦР / реакция обнаружения лигирования (ПЦР-LDR) и реакция обнаружения лигазы — флуоресцентный микросферный анализ (LDR-FMA). Основным недостатком методов амплификации ДНК являются дорогие реагенты, требования к инструментам и особая осторожность при обращении с образцами, поскольку они подвержены загрязнению и амплификации нецелевых последовательностей ДНК. В настоящее время эти методы доступны только в высококлассных лабораториях или центральных медицинских учреждениях из-за их ресурсоемких требований и высокой стоимости.Необходимы новые стратегии для дальнейших исследований с целью улучшения и внедрения этих методов в повседневные медицинские центры в эндемичных районах.

В целом, в данном сценарии как низкотехнологичные, так и высокотехнологичные подходы незаменимы для успешного обнаружения паразитов в целях управления и, в конечном итоге, искоренения болезни. ДЭТ и микроскопия подходят для большинства симптоматических обнаружений и лечения P. falciparum, в то время как передовые молекулярные методы необходимы для выявления низкого уровня инфекции и бессимптомных лиц, которые могут способствовать продолжающейся передаче малярии и P. vivax чемоданов.

3.3. Методы диагностики СПИДа

СПИД, вызванный ВИЧ, является серьезной проблемой общественного здравоохранения в мире. Согласно последним данным ВОЗ и ЮНЭЙДС, на конец 2014 года во всем мире с ВИЧ жили 36,9 миллиона человек, при этом 1,2 миллиона человек умерли и 2 миллиона впервые заразились [47]. Африка к югу от Сахары является наиболее пострадавшим регионом, на который приходится почти 70% глобального распространения ВИЧ. От ВИЧ нет лекарства. Однако своевременное определение ВИЧ-статуса может быть полезным для эффективной антиретровирусной терапии (АРТ), которая способствует продуктивному образу жизни и предотвращает распространение болезни.В настоящее время доступны три типа популярных диагностических тестов на ВИЧ, включая тесты на антитела, такие как ELISA, экспресс-тест или вестерн-блот [48], комбинированные тесты антиген / антитело, такие как вирусный белок p24, а также антитела к ВИЧ [49] [50] [51] ] и тесты нуклеиновых кислот (NAT) [52] [53] (). Тесты на антитела выявляют антитела, белки, которые организм вырабатывает против ВИЧ, а не сам ВИЧ. Тесты на антигены и тесты на РНК выявляют ВИЧ напрямую. Методы четвертого поколения для обнаружения антител и антигена одновременно могут сократить время диагностического окна после первичной инфекции по сравнению с одним антителом [54].Тест амплификации нуклеиновой кислоты (NAAT) в основном основан на амплификации нуклеиновой кислоты с помощью ПЦР и может быть как качественным, так и количественным. В настоящее время ПЦР-тесты стали более популярными из-за их чувствительности и простоты техники [55]. С момента появления тестирования на вирус иммунодефицита человека [26] лабораторные методы претерпели огромные изменения. Вестерн-блоттинг и непрямой иммунофлюоресцентный анализ [56] были исключены из обновленных рекомендаций CDC из-за ложноотрицательных результатов [57] [58] [59].Первоначальный тест на антитела к ВИЧ или тест на антиген / антитела проводится вместе с дополнительным контрольным тестированием в соответствии с обновленными Центрами по контролю и профилактике заболеваний [36] и руководящими принципами ВОЗ [60]. На основании обновленных рекомендаций CDC (Лабораторное тестирование для диагностики ВИЧ-инфекции: обновленные рекомендации, опубликованные 27 июня 2014 г., https://stacks.cdc.gov/view/cdc/23447) персонал лаборатории должен использовать Управление по контролю за продуктами и лекарствами (FDA). ) одобренные тесты для диагностики ВИЧ-инфекции у взрослых и детей старше 24 месяцев.Тестирование следует проводить с помощью тестов на обнаружение ag / ab, комбинированного иммуноанализа, выявляющего антитела к ВИЧ1 и ВИЧ2. Все положительные образцы в этом первоначальном анализе должны пройти дальнейшее тестирование с помощью иммуноанализа, который позволяет дифференцировать ВИЧ-1 от антител к ВИЧ-2. Образцы, которые являются реактивными в исходном иммуноанализе и нереактивными или неопределенными в анализе дифференцировки антител, переходят на тестирование нуклеиновой кислоты ВИЧ-1 для разрешения, которое напрямую ищет РНК вируса. Положительные результаты рекомендованного алгоритма указывают на необходимость оказания медицинской помощи при ВИЧ и первоначальной оценки, которая включает дополнительные лабораторные тесты (такие как вирусная нагрузка ВИЧ-1, растворимые дифференцированные клетки [sCD4 +], определение Т-лимфоцитов и анализ устойчивости к антиретровирусным препаратам). подтвердить наличие инфекции ВИЧ-1.Он используется в дальнейшем для определения стадии заболевания ВИЧ и для помощи в выборе начальной схемы антиретровирусной терапии (OARAC, Группа по антиретровирусным рекомендациям для взрослых и подростков). Руководство по применению антиретровирусных препаратов у ВИЧ-инфицированных взрослых и подростков доступно в электронном виде по адресу (http://www.aidsinfo.nih.gov/ContentFiles/AdultandAdolescentGL.pdf, последнее обновление — октябрь 2017 г. На совещании в Женеве 2012 г. ВОЗ рекомендовала многоуровневый подход к диагностике и лечению ВИЧ в эпидемических и неэпидемических областях, особенно в развивающихся странах, на основе наличия ресурсов (Отчет совещания экспертов ВОЗ, Женева, Швейцария, 6-7 июня 2012 г .: http: // apps.who.int/iris/bitstream/10665/75971/1/9789241504522_eng.pdf).

Таблица 3.

Методы диагностики ВИЧ / СПИДа изучены на различных группах населения и рекомендованы ВОЗ / CDC.

Диагностический метод	Эффективность в сельской / городской местности	Преимущество	Ограничение	Ссылка	Рекомендация ВОЗ / CDC
Иммунологический тест168 Эффективный тест на антитела	в городах	Меньшая чувствительность. Ложноотрицательный результат при низкой концентрации антител. Время забирает.	[48].	Комбинированный анализ ag / ab, рекомендованный ВОЗ / CDC вместо анализа только ab (ВОЗ 2012; CDC 2014)
Комбинированный иммунологический тест-антиген / антитело (Ag / Ab)	Сельский и городской	Более чувствительный чем только тест на антитела. Окно более быстрого обнаружения.	Ложно-положительный результат. Специфические для антигена / антитела ВИЧ-1/2	[49] [50] [51] [54].	Комбинированный анализ ag / ab, рекомендованный FDA / CDC / ВОЗ [60] в качестве первого шага в выявлении ВИЧ.
NAAT	Городской	Наиболее чувствительный. Может обнаруживать и количественно определять вирус для определения стадии заболевания для рассмотрения в терапии.	Требуются настройки лаборатории высоких технологий. Необходим квалифицированный персонал для прохождения теста. Не рентабельно. Следует использовать для подтверждения и помощи в планировании терапии после теста ag / ab.	[52] [53].	Комбинированный анализ ag / ab, рекомендованный FDA / CDC (CDC 2014) в качестве первого шага, за которым следует дальнейшее подтверждение NAAT [81].

Уровень 0: Работа с населением: Работник здравоохранения на уровне сообщества для распространения информации, RDT на ВИЧ (экспресс-диагностические тесты).

Уровень 1: Учреждение первичной медико-санитарной помощи: обученные медицинские работники: медсестры, медицинские работники БДТ на ВИЧ, другие тесты POC, сбор базы данных.

Уровень 2: Район: лаборанты и ассистенты ОВОС для диагностики, растворимого CD4 (sCD4 +) с низкой пропускной способностью, химии, гематологии, микробиологии.

Уровень 3: Региональный или провинциальный: Лабораторные специалисты / старшие технические специалисты ОВОС для диагностики, sCD4 с более высокой пропускной способностью, молекулярные технологии ВИЧ, включая ВН ВИЧ, количественное / качественное «раннее обнаружение младенчества» (EID).

Уровень 4: Национальный: Старшие лабораторные специалисты, использующие иммуноферментные анализы (EIA) для диагностики, sCD4 с более высокой пропускной способностью, молекулярные технологии ВИЧ, включая вирусную нагрузку ВИЧ (VL), количественный / качественный EID, тестирование на устойчивость к ВИЧ.

4. Заключение

Методы, оцениваемые для диагностики в популяции, были классическими, такими как микроскопия, иммуноанализы, такие как ELISA и колориметрический анализ, и передовые биотехнологические методы, такие как генотипирование. В случае бактериальных заболеваний, таких как туберкулез, ELISA и колориметрические методы распространены в сельских и городских сообществах с чувствительностью 80% — 90%.Микроскопия и культивирование распространены, но имеют низкую чувствительность, а культивирование требует определенных сред и времени. Генотипирование и анализ SNP в основном выполняются в городских лабораториях, поскольку они не только на 100% чувствительны, но и полезны при исследовании штаммов, устойчивых к лекарствам. Паразитарные заболевания Малярия также следует той же тенденции: диагностические методы, такие как иммуноанализ и ДЭТ, основанные на иммуноанализе, распространены как среди сельского, так и городского населения, с быстрыми результатами и чувствительностью около 90%.Однако высокопроизводительные методы генотипирования в настоящее время доступны только в городских лабораториях и полезны для изучения новых возникающих и устойчивых штаммов. Заболевания, передаваемые половым путем, такие как ВИЧ, однако, демонстрируют несколько иные тенденции с точки зрения развития диагностики из-за неотложной необходимости вмешательства в эпидемии этого заболевания в сельских районах. Теперь у нас есть быстрые и чувствительные иммунные методы, такие как тест-полоски и агглютинация, которые могут определять с почти 100% чувствительностью положительный или отрицательный результат и используются как в сельских, так и в городских районах.Для подтверждения проводятся дополнительные тесты, такие как белок Western и т. Д. Более сложный тест РНК NAAT, используемый в городских лабораториях, является более продвинутым и сложным не только для раннего обнаружения инфекции, но и для определения нагрузки инфекции. Наши предварительные наблюдения показывают, что передовые биотехнологические методы могут быть вариантом для развитых стран, в то время как дешевые, эффективные и менее сложные методы будут подходить для развивающихся стран с низкими доходами. Однако быстрые и инновационные методы необходимы в случае очень инфекционного и тяжелого заболевания для своевременного лечения.Следовательно, пригодность диагностических методов для лучшего лечения зависит не только от финансовых ресурсов и навыков оценки сообщества, но иногда и от самого заболевания.

Диагностические методы для мониторинга и контроля практического пламени

Реферат

Разработка диагностических методов, подходящих для мониторинга практического пламени, является важной задачей, которая получает все большее внимание и требует значительных исследовательских усилий. Это мотивировано необходимостью более точного описания процесса и, в конечном итоге, внедрения эффективных и надежных методов управления и оптимизации в качестве ключевого шага на пути к разработке более эффективных, гибких, надежных и чистых систем сжигания.Было предложено множество интересных попыток, включающих самые разные подходы с точки зрения используемых инструментов и концепций, предложенных для преобразования сенсорной информации в различные значимые параметры. В этой статье делается обзор методов, предлагаемых в литературе для мониторинга пламени, применяемых или задуманных для мониторинга практического оборудования для сжигания. Он разделен на четыре раздела, посвященных оптическим датчикам, методам визуализации, датчикам давления и методам зондирования.Подробный анализ опубликованных работ показывает, что, вероятно, основной проблемой в этой области является определение наиболее репрезентативных сигналов пламени и их последующая обработка для получения значимой информации, необходимой для диагностики состояния пламени или управления контроллером в эффективный и безопасный способ. Это вместе с широким спектром диагностических потребностей и ограничений, налагаемых различными ситуациями сгорания, вероятно, объясняет заметную неоднородность, наблюдаемую среди опубликованных работ.Несмотря на приложенные огромные усилия, методы, предлагаемые для расширенного мониторинга практического пламени, все еще находятся на стадии разработки. Однако в ближайшем будущем ожидается значительный прогресс в этой области, чему способствуют насущные потребности отрасли сжигания и постоянный прогресс в сенсорной технологии, технологиях обработки сигналов и, что немаловажно, в понимании процессов горения.

Ключевые слова

Мониторинг пламени

Диагностика пламени

Контроль горения

Оптические датчики

Визуализация пламени

Колебания давления

Датчики газа

Датчики ионизации

Цитирование статей

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Mini-FLOTAC, инновационный метод прямой диагностики кишечных паразитарных инфекций: практический опыт

Аннотация

Фон

Гельминты, передаваемые через почву, и кишечные простейшие инфекции широко распространены в развивающихся странах, однако точный диагноз устанавливается редко. Целью этого исследования было оценить недавно разработанный метод mini-FLOTAC и сравнить его с более широко используемыми в настоящее время методами диагностики кишечных паразитарных инфекций в различных условиях.

Методология / основные выводы

Исследование проводилось в Дхарамсале, Химачал-Прадеш, Индия, и в Букумби, Танзания. Стул 180 учеников из двух начальных школ был проанализирован (n = 80 в Дхарамсале и n = 100 в Букумби) на кишечные паразитарные инфекции с помощью трех методов диагностики: прямого мазка фекалий, метода концентрации формол-эфира (FECM) и мини- FLOTAC. В целом 72% учеников были инфицированы какой-либо кишечной паразитарной инфекцией, 24% имели двойную инфекцию, а 11% — три инфекции и более.Наиболее часто встречающимися кишечными паразитами были Entamoeba coli , Entamoeba histolytica / dispar , Giardia Кишечник , анкилостомы (и Schistosoma mansoni в Танзании). Статистически значимые различия были обнаружены в обнаружении паразитарных инфекций между тремя методами: mini-FLOTAC был наиболее чувствительным методом для гельминтозов (90% mini-FLOTAC, 60% FECM и 30% прямой мазок из кала), тогда как FECM был наиболее чувствительным. чувствителен к кишечным инфекциям простейшими (88% FECM, 70% прямой анализ кала и 68% mini-FLOTAC).

Заключение / Значение

Мы представляем первые опыты использования mini-FLOTAC для диагностики кишечных гельминтов и простейших. Наши результаты показывают, что это действенный, чувствительный и потенциально недорогой альтернативный метод, который можно использовать в условиях ограниченных ресурсов — особенно для диагностики гельминтов.

Сведения об авторе

mini-FLOTAC был недавно разработан как новый прямой метод диагностики кишечных паразитарных инфекций.Mini-FLOTAC пытается решить проблему использования современных технологий, сочетающихся с высокой чувствительностью, доступностью и целесообразностью диагностики в условиях ограниченных ресурсов, где широко распространены кишечные паразитарные инфекции. Мы сравнили точность и осуществимость mini-FLOTAC с более широко используемыми в настоящее время диагностическими методами, такими как прямой мазок кала и метод концентрации формол-эфир. Наше исследование было проведено в Дхарамсале, Индия, и в Букумби, Танзания, чтобы оценить методы в различных полевых условиях и различных профилях паразитарных инфекций.Среди 180 обследованных младших школьников 72% оказались положительными на кишечную паразитарную инфекцию. Mini-FLOTAC обнаружил наибольшее количество гельминтозов (чувствительность 90%), тогда как концентрация формол-эфир была наиболее чувствительным методом для кишечных инфекций простейшими (чувствительность 88%). Логистические преимущества mini-FLOTAC заключаются в том, что процедура не требует какой-либо стадии центрифугирования или дорогостоящего оборудования, ее можно проводить на свежих и фиксированных образцах стула, и требуется всего 10–12 минут подготовки перед микроскопическим анализом.Наши данные свидетельствуют о том, что mini-FLOTAC является многообещающим диагностическим инструментом для диагностики гельминтов; поэтому необходимы последующие исследования в других условиях.

Образец цитирования: Barda BD, Rinaldi L, Ianniello D, Zepherine H, Salvo F, Sadutshang T, et al. (2013) Mini-FLOTAC, инновационный метод прямой диагностики кишечных паразитарных инфекций: практический опыт. PLoS Negl Trop Dis 7 (8): e2344. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002344

Редактор: Питер Штайнманн, Швейцарский институт тропиков и общественного здравоохранения, Швейцария

Поступила: 19 ноября 2012 г .; Одобрена: 18 июня 2013 г .; Опубликовано: 1 августа 2013 г.

Авторские права: © 2013 Barda et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: BDB получил поддержку больницы Сан-Раффаэле — НПО AISPO. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Я прочитал политику журнала и обнаружил следующие конфликты: Mini-FLOTAC и FILL-FLOTAC были изобретены и запатентованы проф.Джузеппе Кринголи, Неаполитанский университет имени Федерико II, Италия.

Введение

Гельминты, передающиеся через почву (ГПГ) ( Ascaris lumbricoides , Trichuris trichiura , анкилостомоз, Strongyloides stercoralis ) и кишечные простейшие (например, Giardia dispatchinitinalis , Giardia Dispactinalis , Entamoeba, широко распространены) Entamoeba Entamoeba страны, особенно в которых плохие гигиенические условия способствуют заражению яйцами, личинками и цистами при контакте с зараженной почвой, продуктами питания или водой.Гельминты, передающиеся через почву, поражают более 1 миллиарда человек во всем мире и являются частью забытых тропических болезней (NTD), которые связаны с бедностью и отсталостью [1]. Глистные инфекции, передающиеся через почву, в эндемичных странах являются основной причиной недоедания, анемии и задержки роста. Часто они связаны с незначительными симптомами, такими как подострая диарея, или могут протекать незаметно и бессимптомно, о чем часто не сообщают [2]. Кишечные простейшие инфекции (особенно G.intestinalis и Entamoeba spp.) имеют большое значение для общественного здравоохранения [3], [4]. Например, распространенность Giardia составляет 2–7% в развитых странах, тогда как в развивающихся странах она составляет 20–30% из-за загрязнения воды и пищевых продуктов [5]. Около 200 миллионов человек инфицированы во всем мире, и каждый год происходит 50 000 новых случаев. E. histolytica заражает сотни миллионов людей в год; в то время как большинство людей бессимптомны, сохраняя естественный цикл организма через фекальное выделение инфекционных кист, меньшинство страдает тяжелой болезнью, связанной с инвазивным заболеванием (около 50 миллионов), и, по оценкам, ежегодно умирает 100000 человек от тяжелого инвазивного амебиаза [6 ].

Метод, рекомендуемый для качественной диагностики кишечных паразитов (как гельминтов, так и кишечных простейших), представляет собой метод концентрирования формол-эфирного эфира (FECM) [7], [8], [9], выполняемый на трех разных образцах, но прямой мазок кала. на единичном образце чаще всего используется как метод диагностики в условиях ограниченных ресурсов. Рекомендуемый количественный метод диагностики гельминтов, передаваемых через почву, — это метод Като-Каца, за исключением S. stercoralis , для которого в качестве рекомендуемых методов прямой диагностики требуется метод Берманна, агаровой чашки Кога или метод Харада Мори [8].

Недавно методы подсчета фекальных яиц (FEC), используемые для диагностики гельминтов в ветеринарной паразитологии, такие как методы FLOTAC [10], [11] и McMaster [12], были успешно использованы для диагностики гельминтозов, передаваемых через почву. у людей [13], [14], [15], [16].

Молекулярные инструменты, такие как полимеразная цепная реакция (ПЦР) и мультиплексная ПЦР, в настоящее время становятся все более распространенными в качестве методов диагностики паразитарных инфекций в лабораториях, где имеется соответствующее оборудование, хотя в сельских и районных лабораториях в развивающихся странах этого часто не происходит [17]. , [18], [19], [20].

Несмотря на их высокую чувствительность, основным ограничением методов FLOTAC является сложность метода, который включает центрифугирование образца с помощью специального устройства, оборудования, которое часто недоступно в лабораториях в развивающихся странах [14]. Чтобы преодолеть это узкое место, в рамках «стратегии FLOTAC» по повышению качества копромикроскопической диагностики было разработано новое упрощенное устройство, а именно mini-FLOTAC. Одним из основных преимуществ этого нового метода является то, что его легче переносить и проводить в лабораториях с ограниченными возможностями из-за отсутствия стадии центрифугирования.

Целью данного исследования было оценить и сравнить широко используемые стандартные методы качественной диагностики с mini-FLOTAC в различных условиях. В текущем отчете основное внимание уделяется диагностической точности и выполнимости различных методов, при этом особое внимание уделяется применению метода mini-FLOTAC в сельских / периферийных лабораториях с базовым оборудованием.

Материалы и методы

Заявление об этике

Общий протокол исследования по оценке mini-FLOTAC был рассмотрен и одобрен этическим комитетом медицинского факультета больницы Сан-Раффаэле, Милан, Италия.Для каждого предложенного исследовательского центра было получено отдельное этическое разрешение от местного наблюдательного совета.

Перед включением в исследование всем детям была предоставлена форма информированного согласия для чтения и утверждения их родителями / опекунами. Все дети с положительным диагнозом кишечных паразитарных инфекций любым из использованных методов получали лечение в соответствии со стандартным протоколом, применяемым в стране. Данные оставались анонимными, а пациенты идентифицировались по коду; данные исследования были безопасно зарегистрированы и сохранены в шкафу в отделе управления данными каждого исследовательского центра и оставались конфиденциальными.

Учебные места

Участки исследования были выбраны среди мест, где больницы и медицинские учреждения в настоящее время сотрудничают с итальянской неправительственной организацией (Итальянская ассоциация солидарности между людьми) и больницей Сан-Раффаэле. В частности, сотрудничество было сосредоточено на учреждениях, которые нуждались в технической поддержке с лабораторной диагностикой кишечных паразитарных инфекций.

Первая часть исследования была проведена в феврале и марте 2012 года в школе в Дхарамсале, Химачал-Прадеш, Индия.Доступные данные тибетской больницы Делек показывают, что распространенность кишечной паразитарной инфекции составляет около 10% у пациентов, находящихся в амбулаторном отделении, но это число, вероятно, будет занижено, поскольку диагностика кала проводится с помощью прямого мазка. Опубликованные данные показывают, что инфекция Giardia составляет около 20%, а наиболее распространенной инфекцией среди гельминтов, передающихся через почву, является A. lumbricoides (11%) [21], [22]. Все ученики (n = 80) школы, находящейся в ведении Департамента образования Центральной тибетской администрации в изгнании, были проанализированы на наличие кишечных паразитов.

Вторая часть исследования проводилась в мае и июне 2012 года в Букумби, округ Мванза, Танзания. В этом регионе наиболее распространенными кишечными паразитами являются анкилостомы, Schistosoma mansoni , S. stercoralis , G. Кишечник и Entoamoeba spp. как определено из больничных карт на основе прямого мазка кала. Сто (n = 100) детей были случайным образом выбраны из единственной начальной школы в Букумби.

Размер выборки и рандомизация

Размер выборки был рассчитан на основе в основном исторических и неопубликованных данных о распространенности кишечных паразитарных инфекций в исследуемых районах, которая, по консервативным оценкам, составляет около 20%.Чтобы иметь идеальное количество положительных / отрицательных результатов (50%) для определения сравнения между методами, адекватный размер выборки, чтобы иметь значительную разницу с 95% доверительным интервалом (ДИ) и с 80% мощности, составлял 88 в каждом месте. .

Выбор между двумя начальными школами в Дхарамсале был произведен случайным образом, и все 80 детей были обследованы в выбранной тибетской школе. Три класса детей (2, 3 и 4 классы) единственной начальной школы в Букумби были выбраны случайным образом, и все дети в этих классах были обследованы на наличие кишечных паразитов.

Паразитологические методы

Контейнеры для стула были розданы детям вместе с формами согласия, и на следующий день у каждого ребенка был взят один образец кала (минимум 12 г) и проанализирован в тот же день. Образцы были исследованы параллельно с помощью прямого мазка, FECM и mini-FLOTAC в больничной лаборатории, а также были обработаны и прочитаны вслепую двумя опытными паразитологами (BB и DI среди авторов).

Вкратце, для проведения прямого мазка кала использовалось около 2 мг стула [7].

Что касается mini-FLOTAC, метод развился на основе методов FLOTAC [10], [11], адаптированных для выполнения техник без необходимости этапа центрифугирования. Mini-FLOTAC состоит из двух физических компонентов: основания и считывающего диска. Имеются две флотационные камеры объемом 1 мл, которые предназначены для оптимального исследования суспензий фекальных проб в каждой флотационной камере (общий объем = 2 мл) и допускают максимальное увеличение в 400 раз.

Fill-FLOTAC — одноразовые устройства для отбора проб, которые входят в состав наборов FLOTAC и mini-FLOTAC [10], [11].Они состоят из емкости, коллектора и фильтра (рисунок 1). Эти наборы облегчают выполнение первых четырех последовательных этапов техники mini-FLOTAC, то есть сбора (включая взвешивание), гомогенизации, фильтрации и розлива. Процесс мини-FLOTAC показан на рисунке 2.

Стул обрабатывали следующим образом для базовой методики mini-FLOTAC (аналитическая чувствительность = 10 яиц или кист на грамм кала). Восемь граммов стула помещали в наполнитель FLOTAC, разбавляли 8 мл 5% формалина, тщательно гомогенизировали и фильтровали.Два мл суспензии (1 г стула + 1 мл формалина) были непосредственно добавлены к 18 мл каждого из двух флотационных растворов (FS), а именно FS2 (насыщенный хлорид натрия; удельный вес (sg) = 1,20) и FS7. (сульфат цинка; sg = 1,35). Решения для флотации аналогичны описанным в протоколах FLOTAC. Раствор FS2 рекомендуется для диагностики гельминтов, передающихся через почву, раствор FS7 рекомендуется для S. mansoni и кишечных простейших [10]. Для каждого образца были выполнены два мини-FLOTAC: один был заполнен фекальной суспензией в FS2, а другой — фекальной суспензией в FS7.Перед чтением слайда и перемещением чашки для чтения в среднем требовалось 10 минут для того, чтобы яйца и цисты всплыли.

Два мл исходного раствора 1∶1 (1 г фекалий плюс 1 мл 5% раствора формалина) в fill-FLOTAC были использованы для выполнения FECM в соответствии с рекомендациями ВОЗ [7].

Было обнаружено и подсчитано
яиц ГПГ. Кроме того, были обнаружены паразитарные элементы других родов гельминтов (например, Strongyloides , Enterobius , Hymenolepis , Taenia ) и кишечные простейшие.Сравнение этих трех методов было проведено по качественной диагностике, поскольку прямой мазок и FECM не являются количественными методами.
Статистический анализ
Результаты были введены в файл Excel. Анализ проводился с использованием программы EpiData (версия 3.1; Область анализа здравоохранения и информационных систем Панамериканской организации здравоохранения (ПАОЗ / ВОЗ), январь 2006 г.). Результаты были проанализированы с помощью таблиц сопряженности 2 × 2, и была рассчитана каппа-статистика Коэна для оценки соответствия между всеми тремя диагностическими методами.Для определения силы согласия использовалась статистика Каппа (k) с использованием следующих критериев: ≤0 = плохо, 0,01–0,20 = слабое, 0,21–0,40 = удовлетворительное, 0,41–0,60 = умеренное, 0,61–0,80 = значительное и 0,81–1 = практически идеально. Мы проверили наличие каких-либо значимых различий, вычислив интерференцию относительно пропорций (p) в двух независимых популяциях с уровнем значимости, установленным на значении p <0,05, и был рассчитан 95% доверительный интервал. Для каждого метода рассчитывались чувствительность (вероятность обнаружить «истинно» положительный случай) и отрицательная прогностическая ценность (ЧПС; вероятность того, что отрицательный результат будет «истинно отрицательным» случаем).Общее количество положительных образцов, обнаруженных любым из методов, было принято в качестве диагностического «золотого» стандарта для каждого вида паразитов.
Результаты
Из 200 студентов, которые были зачислены, 180, 47% (85/180) девочек и 53% (95/180) мальчиков в возрасте от 6 до 18 лет (средний возраст 12 лет) вернули образец и получили свои стул анализируется на кишечных паразитов.
Результаты исследования показаны в Таблице 1, Таблице 2 и на Рисунке 3. В целом 72% (129/180) образцов были положительными на любую кишечную паразитарную инфекцию, 24% (43/180) переносили двойные инфекции. , и 11% (20/180) три инфекции и более.
Рис. 3. A) Распространенность кишечных гельминтов и простейших инфекций, выявленных каждым из трех методов.
B) Результаты изучения распространенности простейших, Entamoeba coli, Entamoeba histolytica / dispar и Giardia Кишечник.
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002344.g003
Мы обнаружили разницу в распределении гельминтов по географическому ареалу: анкилостомы (20%), S. mansoni (10%), S . stercoralis и E.vermicularis (2%) были обнаружены в африканской школе, тогда как A. lumbricoides (5%), T. trichiura (2%), H. nana и Taenia spp. (1%) были обнаружены в индийской школе. Кишечные простейшие были более однородно обнаружены в двух местах исследования.
Mini-FLOTAC обнаружил большее количество гельминтозов, чем FECM или прямой мазок (38%, 22% и 11% соответственно), и различия были значительными (p <0,002 и p <0,001, соответственно).Mini-FLOTAC имел чувствительность около 90%, затем следовали FECM и прямой мазок кала (60% и 30% соответственно). FECM выявила наибольшее количество кишечных простейших инфекций, после чего последовали прямой мазок кала и метод mini-FLOTAC (48%, 37% и 36% соответственно). Различия между FECM и mini-FLOTAC / прямым мазком кала были значительными (p <0,04 и p <0,02, соответственно). Результаты показаны на рисунке 3. Самым чувствительным методом диагностики кишечных простейших был FECM (88%), за которым следовали прямой мазок кала и mini-FLOTAC (70% и 68% соответственно).NPV была выше 70% для всех трех методов как для гельминтов, так и для кишечных простейших, и они существенно не различались (Таблица 1).
Согласование между методами показано в таблице 2. Согласование между тремя методами было только умеренным (k = 0,40; p <0,001), а наилучшее совпадение было между FECM и mini-FLOTAC (k = 0,49–0,81; p <0,001). ). У 18 детей были обнаружены другие паразитарные инфекции, такие как A. lumbricoides , E. vermicularis , Hymenolepis nana , S.stercoralis , Taenia spp. и T. trichiura , но их было слишком мало для достоверной статистики, и они не были включены в анализ.
Принимая во внимание практическую осуществимость методов, mini-FLOTAC потребовалось приблизительно 12 минут для обработки образца: 2 минуты для подготовки образца, 10 минут для ожидания всплытия яиц / цист и 5–7 минут для считывания показаний сетки. . FECM в среднем занимал 2 минуты для подготовки образца, 10 минут центрифугирования и 3 минуты для считывания слайда (всего 15 минут).Самым простым и быстрым методом для выполнения был прямой мазок, поскольку для считывания слайда не требовалось никаких дальнейших шагов, превышающих примерно 3 мин.
Обсуждение
Впервые прибор mini-FLOTAC был использован для обнаружения гельминтов, передаваемых через почву, и других гельминтов, а также кишечных простейших и сравнен с двумя диагностическими методами, широко используемыми в паразитологии человека.
В настоящем исследовании, придерживаясь стандартных протоколов, все методы выявили одни и те же виды кишечных простейших ( E.coli , E. histolytica / dispar , G.interstinalis ), тогда как mini-FLOTAC выявил больше видов гельминтов, чем два других метода ( E. vermicularis был обнаружен только с mini-FLOTAC и T. trichiura не был обнаружен прямым мазком кала). Число особей, идентифицированных как положительные с помощью каждого метода, значительно варьировалось от одного вида к другому.
Наши результаты показывают, как и Levecke et al [23] для FLOTAC, что mini-FLOTAC оказался наиболее чувствительным методом (95% положительных образцов) для диагностики гельминтов.Важным наблюдением нашего исследования является то, что диагностическая точность изменений mini-FLOTAC в соответствии с используемым FS: анкилостомоз и E. vermicularis были более точно диагностированы с помощью FS2, в то время как S. решение FS7, таким образом поддерживая применение метода FLOTAC [11], [24].
При рассмотрении кишечных простейших инфекций картина диагностики меняется, и наши результаты демонстрируют относительно низкую эффективность mini-FLOTAC.Эти данные существенно отличаются от данных, представленных Becker et al. [13], где было обнаружено, что FLOTAC более чувствителен к обнаружению E. coli и G. кишечник , тогда как FECM был более чувствителен к E.histolytica / dispar . Однако следует учитывать, что стадия центрифугирования делает FLOTAC отличным от мини-FLOTAC, и его трудно сопоставить с mini-FLOTAC, особенно для диагностики кишечных простейших. В настоящих документах мы не сравнивали FLOTAC с mini-FLOTAC, поскольку последний не является заменой первого, но эти два метода следует использовать в различных лабораторных условиях в зависимости от имеющихся средств и оборудования.Однако мы поняли, что стандартное прямое сравнение метода mini-FLOTAC и метода FLOTAC может быть важным как для сравнения чувствительности методов, так и для оценки их осуществимости и рентабельности.
Для диагностики простейших в районах с высокой паразитарной нагрузкой и ограниченными ресурсами прямой мазок можно считать достаточным методом, так как в этом исследовании он не теряет слишком большую чувствительность по сравнению с FECM. Стоит отметить, что в нашем исследовании чувствительность прямого мазка кала для диагностики г.кишечник был даже больше, чем FECM, что можно объяснить тем фактом, что большинство образцов были положительными на трофозоиты, которые были убиты консервированием формолом, и поэтому дали отрицательные результаты при использовании двух других методов.
Наше исследование страдает некоторыми ограничениями, которые могут частично объяснить несоответствие между тремя методами паразитарной диагностики. Согласие между тремя методами было переменным (значения k варьировались от 0,4 до 0,8), но в целом умеренным (k = 0.6). Низкое согласие в диагностике простейших наблюдалось в других исследованиях, в которых один и тот же набор образцов анализировался в разных справочных лабораториях [25]. Из-за низкой распространенности других гельминтозных инфекций результаты этого исследования в основном основаны на диагнозе анкилостомы и S. mansoni , и необходимы дальнейшие исследования в различных условиях, чтобы сформулировать более надежные и окончательные рекомендации по использованию mini-FLOTAC для других почв. -диагностика перенесенных гельминтов.
Важно учитывать, что метод mini-FLOTAC все еще находится в стадии доработки, и необходимо более подробно рассмотреть два основных аспекта, особенно для диагностики кишечных простейших.Во-первых, важную роль играет консистенция стула, особенно при легких инфекциях, поскольку жидкий стул содержит меньшее количество кист. Слизистый стул можно обрабатывать добавлением мукозолванта или, если лабораторные помещения могут себе это позволить, можно выполнить стадию центрифугирования с эфиром, чтобы удалить остатки. Видимость внутренних структур часто ухудшается из-за обломков, что затрудняет дифференциацию между Entamoeba spp. Более того, показания при большом увеличении звездной величины (400 ×) не были четкими, поскольку считывающий диск mini-FLOTAC еще не обеспечивает идеальной видимости.
Во-вторых, mini-FLOTAC был протестирован только с использованием двух различных флотационных растворов (насыщенный NaCl и сульфат цинка), но можно было протестировать и другие FS и сравнить видимость образцов. Кроме того, флотационный раствор взаимодействует и может изменять внешнюю мембрану паразитов (таких как E. coli , G. кишечник , S. mansoni ), так или иначе искажая их изображения по сравнению с классическим рисунком. По этой причине для чтения mini-FLOTAC необходимы хорошо обученные лаборанты, и обучающий Атлас, который может помочь при чтении образца, может быть полезным инструментом для добавления в набор mini-FLOTAC.
Преимущество метода mini-FLOTAC заключается в том, что он позволяет работать с фиксированным образцом фекалий, но также может выполняться на свежих образцах. Это дает возможность исследовать образцы в разные дни, а также улучшает процесс контроля качества; Кроме того, комбинированное использование устройства fill-FLOTAC предотвращает любую опасность заражения оператора.
Необходима серия исследований для сравнения количественных характеристик mini –FLOTAC с другими рекомендованными стандартными методами диагностики гельминтов, такими как Kato Katz и McMaster.Это важный аспект борьбы с гельминтами, поскольку интенсивность инфекций, измеряемая в количестве яиц на грамм, напрямую связана с заболеваемостью и является важным показателем для мониторинга воздействия программ борьбы, а также эффективности лекарств [23], [26]. Предварительные качественные результаты эффективности mini-FLOTAC в этом исследовании должны способствовать планированию надежного независимого многоцентрового исследования, в котором сравнивается mini-FLOTAC со стандартными протоколами как по качественной, так и количественной диагностике гельминтозов.
Принимая во внимание рентабельность и осуществимость методов, мы продемонстрировали, что mini-FLOTAC требует примерно того же времени для обработки образца, что и FECM. Что касается стоимости оборудования, единственные затраты на mini-FLOTAC (помимо стоимости набора, который в настоящее время предоставляется бесплатно для исследовательских целей) — это покупка хлорида натрия (NaCl) и сульфата цинка (ZnSO _4).) для флотационных растворов, тогда как FECM требует центрифуги, формола и эфира, которые не всегда легко купить, особенно в лабораториях с ограниченными ресурсами.Все считывающие диски mini-FLOTAC и емкости для наполнения FLOTAC можно использовать повторно после тщательной мойки. Однако следует принимать во внимание тот факт, что сульфат цинка является довольно дорогой солью и ее нелегко получить в периферийных лабораториях.
В заключение, это исследование демонстрирует, что mini-FLOTAC определенно является чувствительным и относительно простым методом качественной диагностики гельминтозов, хотя его еще можно улучшить для диагностики кишечных простейших.Мы считаем, что эта работа является шагом вперед в борьбе с NTD, потому что пренебрежение диагностикой поддерживает порочный круг скрытых заболеваний и плохой доступ к клиническому ведению и лечению. Наиболее необходимы инновационные инструменты прямой диагностики, которые сочетают современные технологии и чувствительность с доступностью и осуществимостью в условиях ограниченных ресурсов, и разработка набора mini-FLOTAC является шагом вперед в этом направлении.
Благодарности
Мы благодарны Рубену Чимино за советы по статистическому анализу.Особая благодарность учителям букумби и тибетских школ, которые с энтузиазмом участвовали в опросах. Mini-FLOTAC и fill-FLOTAC были изобретены и запатентованы профессором Джузеппе Кринголи, Университет Неаполя Федерико II, Италия. Авторы выражают признательность Джузеппе и Массимо Федерико (IDEAL PLASTIK SUD srl) за их технический опыт и энтузиазм в участии в разработке устройств mini-FLOTAC и fill-FLOTAC.
Вклад авторов
Задумал и спроектировал эксперименты: BDB MA LR GC.Проведены эксперименты: BDB DI HZ. Проанализированы данные: BDB LR MA DI. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: GC MC FS TS. Написал статью: BDB MA LR FS DI GC.
Ссылки
1. ВОЗ (2010). Работа над преодолением глобального воздействия забытых тропических болезней. Первый доклад ВОЗ о забытых тропических болезнях. Женева, Всемирная организация здравоохранения (WHO / HTM / NTD / 2010).
2. Хотез П.Дж., Фенвик А., Савиоли Л., Молинье Д.Х. (2009) Спасение беднейшего миллиарда посредством борьбы с забытыми тропическими болезнями.Ланцет 373: 1570–5.
3. Балдурссон С., Каранис П. (2011) Передача простейших паразитов через воду: обзор мировых вспышек заболеваний — обновленная информация за 2004–2010 годы. Water Res 45: 6603–14.
4. Marshall M, Naumovitz D, Ortega Y, Sterling CR (1997) Водные патогены простейших. Clin Microbiol Rev 10: 67–85.
5. Savioli L, Smith H, Thompson A (2006) Giardia и Cryptosporidium присоединяются к «инициативе по забытым болезням».Тенденции Parasitol 22: 203–208.
6. Хименес К., Моран П., Рохас Л., Валадес А., Гомес А. (2009) Переоценка эпидемиологии амебиаза: современное состояние. Заразить Genet Evol 9: 1023–1032.
7. ВОЗ (1994) Судебные приспособления для диагностики кишечных паразитарных инфекций. Женева: Всемирная организация здравоохранения.
8. ВОЗ (1992) Диагностическая паразитология. Женева: Всемирная организация здравоохранения.
9. Suwansaksri J, Nithiuthai S, Wanitkit V, Soogarun S, Palatho P (2002) Метод концентрации формол-эфир для кишечных паразитов, сравнивающий 0.1 н. Гидроксид натрия с физиологическими препаратами. Юго-Восточная Азия J Trop Med Public Health 33: 97–98.
10. Cringoli G (2006) FLOTAC, новый прибор для поливалентного подсчета яиц в фекалиях. Parassitologia 48: 381–384.
11. Cringoli G, Rinaldi L, Maurelli MP, Utzinger J (2010) FLOTAC: новые поливалентные методы качественной и количественной копромикроскопической диагностики паразитов у животных и людей. Nat Protoc 5: 503–515.
12.Министерство сельского хозяйства, рыболовства и продовольствия Великобритании (1971) Руководство по методам ветеринарных паразитологических лабораторий. См. Книгу 418: 5–12.
13. Becker SL, Lohourignon LK, Speich B., Rinaldi L, Knopp S, et al. (2011) Сравнение двойного метода Flotac-400 и метода концентрирования формалина и эфира для диагностики кишечной инфекции человека простейшими. J Clin Microbiol 49: 2183–2190.
14. Кнопп С., Глинц Д., Ринальди Л., Мохаммед К.А., Н’Горан Е.К. и др.(2009) FLOTAC: многообещающий метод обнаружения яиц гельминтов в человеческих фекалиях. Trans R Soc Trop Med Hyg 103: 1190–1194.
15. Левеке Б., Ринальди Л., Шарлье Дж., Маурелли М.П., Боско А. и др. (2012) Систематическая погрешность, точность и прецизионность результатов теста на уменьшение количества яиц в фекалиях у крупного рогатого скота с использованием методов McMaster, Cornell-Winsconsin и FLOTAC. Vet Parasitol 188: 194–199.
16. Утцингер Дж., Ринальди Л., Лохориньон Л.К., Ронер Ф., Циммерманн МБ и др.(2008) FLOTAC: новый чувствительный метод диагностики анкилостомозов у людей. Trans R Soc Trop Med Hyg 102: 84–90.
17. Santos HL, Peralta RH, De macedo HW, Barreto MG, Peralta JM (2007) Сравнение мультиплексной ПЦР и обнаружения антигена для дифференциальной диагностики Entamoeba histolytica . Braz J Infect Dis 11: 365–370.
18. Taniuchi M, Verweij JJ, Noor Z, Sobuz SU, Lieshout L, et al. (2011) Высокопроизводительная мультиплексная ПЦР и обнаружение на основе зондов с помощью гранул Luminex для семи кишечных паразитов.Am J Trop Med Hyg 84: 332–337.
19. Джекс А.Р., Стэнли К.К., Ло В., Литтман Р., Вервей Дж. Дж. И др. (2012) Обнаружение диарейных патогенов в человеческих фекалиях с помощью автоматизированной роботизированной платформы. Зонды клеток Mol 26: 11–15.
20. Verweij JJ, van Lieshout L (2011) Кишечные паразитарные инфекции в промышленно развитой стране; новый акцент на детях с улучшенной диагностикой на основе ДНК. Паразитология 138: 1492–1498.
21. Сингх П., Гупта М.Л., Такур Т.С., Вайдья Н.К. (1991) Кишечный паразитизм в Химачал-Прадеше.Индийский журнал J Med Sci 45: 201–204.
22. Singh S, Raju GV, Samantaray JC (1993) Паразитарная кишечная флора у населения Северной Индии с желудочно-кишечными симптомами. Троп Гастроэнтерол 14: 104–108.
23. Levecke B, De Wilde N, Vandenhoute E, Vercruysse J (2009) Полевая применимость и осуществимость четырех методов обнаружения Trichuris у обезьян: модель для мониторинга эффективности лекарств в общественном здравоохранении? PLoS Negl Trop Dis 3: e366.
24.Глинц Д., Силуэ К.Д., Кнопп С., Лохориньон Л.К., Яо К.П. и др. (2012) Сравнение диагностической точности Kato-Katz, чашки с агаром Кога, концентрации эфира и FLOTAC для Schistosoma mansoni и гельминтов, передаваемых через почву. PloS Negl Trop Dis 4: e754.
25. Утцингер Дж., Ботер-Клейвен С., Кастелли Ф., Кьодини П.Л., Эдвардс Х. и др. (2010) Микроскопическая диагностика ацетата натрия — уксусной кислоты — формалина — фиксированных образцов стула на гельминты и кишечные простейшие: сравнение европейских справочных лабораторий.Clin Microbiol Infect 16: 267–273.
26. Левеке Б., Бенке Дж. М., Аджампур ССР, Альбонико М., Амэ С. М. и др. (2011) Сравнение чувствительности и подсчета яиц в фекалиях с помощью метода подсчета Макмастера и толстого мазка Като-Каца на гельминты, передающиеся через почву, в здравоохранении. PloS Negl Trop Dis 5: e1201.
Новый метод диагностики для быстрого флуоресцентного иммуноцитохимического окрашивания аденокарциномы и мезотелиальных клеток с использованием жидкостной цитологии — FullText — Acta Cytologica 2014, Vol.58, № 5
Аннотация
Цель: Оценить экспрессию антител против кальретинина, цитокератина 5/6, десмина, D2-40, HBME-1, мезотелина, тромбомодулина, WT1, Ber-EP4, CEA, EMA и MOC-31 по отдельности и сравнить его с новой быстрой процедурой флуоресцентной иммуноцитохимии (ICC) с использованием жидкостной цитологии (LBC). Дизайн исследования: Шестьдесят четыре образца перитонеальных клеток, приготовленных методом LBC, были окрашены этими маркерами для оценки их полезности и разработки метода быстрого флуоресцентного иммуноокрашивания с использованием Ber-EP4, применимого для интраоперационной цитодиагностики рака. Результаты: Маркеры аденокарциномы были положительными в 92% случаев аденокарциномы, 57% случаев с подозрением на аденокарциному и 5% отрицательных случаев (реактивные мезотелиальные клетки). С другой стороны, маркеры мезотелиальных клеток были положительными в 8-15% случаев аденокарциномы, 43-57% случаев с подозрением на аденокарциному и 93-95% отрицательных случаев. Новая процедура быстрой флуоресценции ICC четко окрашивала только клетки аденокарциномы в течение 20 минут. Заключение: Иммуноцитохимическое исследование методом LBC является мощным вспомогательным методом отличия клеток аденокарциномы от мезотелиальных клеток.Эта новая быстрая процедура флуоресценции ICC может использоваться в качестве вспомогательного метода для точного обнаружения клеток аденокарциномы при интраоперационном цитологическом исследовании жидкости для промывания брюшины или плевры.
© 2014 S. Karger AG, Базель
Введение
Цитологическая диагностика злокачественных выпотов часто затруднена в основном из-за наличия реактивных мезотелиальных клеток. Дифференциация злокачественных клеток, особенно клеток аденокарциномы, от реактивных мезотелиальных клеток является наиболее частой и серьезной диагностической трудностью в цитологии выпота [1,2,3].В дополнение к традиционной цитологии биологических жидкостей недавно было введено интраоперационное цитологическое исследование жидкостей для промывания брюшины или плевры для быстрой оценки клинической стадии пациента. Интраоперационное цитологическое исследование жидкости для промывания брюшины теперь указано как один из прогностических факторов, и его эффективность рекомендуется в соответствии с Японской классификацией рака желудка [4]. Клетки аденокарциномы в жидкости для промывания брюшины считаются важным фактором распространения брюшины при прогнозировании.Эта информация считается критически важной для хирургов, так как они могут выполнять операции в соответствии с наиболее надежными методами обнаружения.
Иммуноцитохимия (ICC) применялась для помощи в дифференцировке аденокарциномы и реактивных мезотелиальных клеток [1,2,5], но не очень полезна в основном из-за ограниченного количества образцов, в отличие от иммуногистохимии, в которой достаточно количество последовательных срезов доступно для каждого образца ткани. Системы жидкостной цитологии (ЖКТ) широко применяются не только в гинекологической цитологии, но и в негинекологической цитологии [6,7,8].LBC превосходит обычную цитологию в том, что она дает мазки с однородной плотностью клеток и распределением, которое позволяет проводить точное цитологическое исследование. Более того, можно сохранять клетки в растворе LBC в течение длительного периода времени и всегда использовать его для различных целей, таких как ICC и молекулярный анализ.
На протяжении многих лет было опробовано множество различных маркеров, чтобы прояснить сложные случаи. Основываясь на этом опыте и более поздних литературных данных, была отобрана тестовая панель из 13 антител, которые, как предполагалось, были способны дифференцировать клетки аденокарциномы и реактивные мезотелиальные клетки.Сообщалось, что иммуноцитохимические маркеры Ber-EP4, CEA, EMA и MOC-31 высоко экспрессируются в аденокарциномах или эпителиальных опухолях в целом, а не в реактивных мезотелиальных клетках. Другие маркеры, кальретинин (мышиные моноклональные и кроличьи моноклональные антитела), цитокератин 5/6, десмин, D2-40, HBME-1, мезотелин, тромбомодулин и WT1, считаются маркерами мезотелиальных клеток, хотя их специфичность варьируется в зависимости от маркер.
В настоящем исследовании мы выполнили иммуноцитохимический анализ 64 образцов перитонеальных клеток, приготовленных с помощью метода LBC, чтобы оценить его полезность, и разработали новую и быструю процедуру флуоресцентного иммуноокрашивания, которая применима для интраоперационной цитодиагностики рака.
Материалы и методы
Клинические материалы
Шестьдесят четыре образца перитонеальных клеток, 35 интраоперационных жидкостей для промывания брюшины и 29 перитонеальных выпотов были исследованы в отделении патологии Общей больницы Токи с 2008 по 2010 год (таблица 1). Пациентами были 38 мужчин и 26 женщин в возрасте от 35 до 88 лет (в среднем 68,6). Образцы перитонеальных клеток центрифугировали и готовили аликвоту клеточного осадка для обычных красок Папаниколау, периодической кислоты-Шиффа (PAS) и Гимзы, затем фиксировали в 95% этаноле более 15 минут и обрабатывали для рутинной цитоморфологической оценки (таблица 1).После отбора стандартных материалов оставшуюся часть осадка клеток суспендировали в растворе LBC (Liqui-PREP ™ Preservative Solution, LGM International Inc.) для фиксации и сохранения.
Таблица 1
Клиническая и цитоморфологическая оценка 64 образцов перитонеальных клеток
Подготовка слайдов LBC для окрашивания Папаниколау и ICC
Аликвоту клеток, сохраненных в растворе LBC, центрифугировали, и осадок клеток суспендировали в растворе клеточной основы (Liqui -PREP, LGM International), капали на предметное стекло и сушили при комнатной температуре при использовании для окрашивания по Папаниколау и ICC.После микроволновой термообработки в течение 15 мин (5 мин / 3 раза) в цитратном буфере 10 ммоль / л (pH 6,0) образцы клеток охлаждали при комнатной температуре. Затем образцы клеток обрабатывали 0,3% перекисью водорода в метаноле в течение 20 минут при комнатной температуре, чтобы блокировать активность эндогенной пероксидазы, и неспецифическую реакцию блокировали обработкой 10% нормальной козьей сывороткой (Nichirei, Токио, Япония) в течение 20 минут. при комнатной температуре. Затем образцы клеток инкубировали с первичными антителами, перечисленными в таблице 2, в течение ночи при 4 ° C.Затем образцы подвергали реакции с реагентом Histofine (Nichirei) в течение 30 минут при комнатной температуре и визуализировали с помощью хромогена DAB (Vector Laboratories, Inc.) в течение 15-360 секунд при комнатной температуре. Наконец, образцы клеток погружали в дистиллированную воду, чтобы остановить реакцию, и окрашивали гематоксилином Майера (рис. 1). Иммуноцитохимические экспрессии маркеров оценивали в соответствии с долей положительных клеток следующим образом: — = отсутствие окрашивания, ± = <10%, + = 10-50%, ++ => 50% независимо от результатов стандартной цитоморфологической оценки. .
Таблица 2
Рис. 1
Типичный микроскопический вид иммуноцитохимического окрашивания препаратов LBC пациента 14. Клетки аденокарциномы были положительными на Ber-EP4 ( a ), MOC-31 ( b ) и EMA ( c ), но отрицательным в отношении мышиного моноклонального антитела к кальретинину ( d ). × 1000.
Быстрая процедура флуоресценции ICC
Эта новая процедура была проведена на клетках, сохраненных в растворе LBC, с использованием жидкофазного метода для экономии времени.Аликвоту консервированного клеточного раствора инкубировали с первичным антителом Ber-EP4 (1%) и одновременно центрифугировали в течение 5 мин при комнатной температуре. Считается, что на этом этапе реакция антиген-антитело полностью развивается во время центрифугирования. Затем осадок клеток смешивали с 1% флуоресцеином против IgG мыши (Vector Laboratories) в PBS и центрифугировали в течение 5 минут при комнатной температуре, в течение которых аналогично развивалась вторичная реакция антиген-антитело. Затем осадок клеток суспендировали в растворе клеточной основы, капали на предметное стекло, сушили сушилкой и помещали в среду для фиксации флуоресценции, содержащую синий контрастный краситель (монтажная среда Vectashield® с DAPI, Vector Laboratories).Образец исследовали с помощью флуоресцентного микроскопа (Olympus Provis AX80 + DP-70; рис. 2). Цитоплазма положительных клеток окрашивалась FITC в зеленый цвет (рис. 3).
Рис. 2
Быстрая процедура иммуноцитохимического флуоресцентного окрашивания.
Рис. 3
Быстрая процедура иммуноцитохимического флуоресцентного окрашивания. Клетки аденокарциномы были положительными по Ber-EP4 ( a , b ), а мезотелиальные клетки были отрицательными ( c ). a Пациент 2. b Пациент 14. c Пациент 28. × 1000.
Стандартная флуоресценция ICC
Для сравнения чувствительности и специфичности мы выполнили стандартную флуоресценцию ICC на цитологических препаратах, приготовленных из клеток, сохраненных в растворе LBC. После обработки 10% нормальной козьей сывороткой в течение 20 минут при комнатной температуре образцы клеток инкубировали с первичным антителом Ber-EP4 в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем образцы клеток инкубировали с 1% флуоресцеином против IgG мыши в PBS в течение 1 ч при комнатной температуре.Затем образцы клеток помещали в среду для усиления флуоресценции, содержащую синий контрастный краситель, и наблюдали с помощью флуоресцентного микроскопа, такого же, как и для быстрой процедуры флуоресценции ICC.
Результаты
Цитологические особенности LBC-слайдов
Не было проблем с качеством окрашивания по сравнению со слайдами, окрашенными с использованием обычного красителя Папаниколау. Цитоморфологическая оценка образцов LBC показала аденокарциному у 13, подозрение на аденокарциному у 7 и отрицательный результат (реактивные мезотелиальные клетки) у 44, как и результаты обычного метода (таблица 1).
Standard ICC
Результаты иммуноцитохимического исследования приведены в таблице 3. Маркеры аденокарциномы Ber-EP4, CEA, EMA и MOC-31 были положительными в 12 (92%) из 13 случаев аденокарциномы, 4 (57%) из 7 случаев с подозрением на аденокарциному и 2 (5%) из 44 отрицательных случаев (реактивные мезотелиальные клетки). С другой стороны, маркеры мезотелиальных клеток — кальретинин-мышиное моноклональное антитело, кроличье моноклональное антитело к кальретинину, цитокератин 5/6, десмин, D2-40, HBME-1, мезотелин-тромбомодулин и WT1 — были положительными в 1-2 (8-15%) случаях. из 13 случаев аденокарциномы, 3-4 (43-57%) из 7 подозрительных случаев аденокарциномы и 41-42 (93-95%) из 44 отрицательных случаев (реактивные мезотелиальные клетки).При использовании ICC образцов LBC было очевидно, что 18 случаев были положительными на клетки аденокарциномы, а 46 случаев были отрицательными из всех 64 случаев. Более того, было доказано, что небольшое количество клеток аденокарциномы смешалось в 2 из 44 отрицательных случаев. В заключение, в этих 64 случаях, используя только цитоморфологическую оценку с помощью окрашивания Папаниколау, чувствительность обнаружения аденокарциномы составила 89% (16 из 18), специфичность составила 91% (42 из 46), а диагностическая точность составила 91% (58 из них). 64).
Таблица 3
Результаты иммуноцитохимической экспрессии различных маркеров
Быстрая процедура флуоресценции ICC
Чтобы быстро отличить клетки аденокарциномы от мезотелиальных клеток, на образцах LBC была проведена процедура быстрой флуоресценции ICC. На основании иммуноцитохимических результатов, описанных выше, Ber-EP4 был выбран в качестве маркера аденокарциномы, поскольку он наиболее четко окрашивался без какой-либо неспецифической реакции. Как показано на фиг. 4, клетки аденокарциномы легко разделялись флуоресцентным окрашиванием с помощью антитела к Ber-EP4.Результаты быстрой процедуры для флуоресценции ICC были такими же, как и для стандартной флуоресцентной ICC (таблица 4). Используя быструю процедуру флуоресценции ICC, мы могли четко окрашивать только клетки аденокарциномы в течение 20 минут в 18 случаях аденокарциномы.
Таблица 4
Сравнение трех иммуноцитохимических методов
Рис. 4
Типичный микроскопический вид стандартного предметного стекла, окрашенного по Папаниколау ( a ), и быстрой процедуры флуоресцентного иммуноцитохимического окрашивания предметных стекол LBC ( b ) пациента 14.Клетки аденокарциномы были положительными по Ber-EP4 (b ). × 400.
Обсуждение
Широкий спектр иммуноцитохимических маркеров был применен, чтобы отличить клетки аденокарциномы от реактивных мезотелиальных клеток или злокачественной мезотелиомы при цитологии выпота жидкости организма или серозной гистологии [9,10]. CEA, вероятно, является самым популярным маркером аденокарциномы и широко используется из-за своей высокой специфичности [9]. В этом исследовании клетки аденокарциномы показали сильную экспрессию CEA, как показано в предыдущих отчетах, что еще раз подтверждает, что это отличный маркер аденокарциномы.Однако наличие неспецифической реакции на лейкоциты часто затрудняет точную оценку. Вот почему другие маркеры искали в качестве более специфических маркеров аденокарциномы. Экспрессия EMA наблюдается в эпителиальных опухолях в целом, а также в некоторых неэпителиальных опухолях. Этот маркер, как известно, экспрессируется в клетках злокачественной мезотелиомы благодаря его сильному, преимущественно мембранному окрашиванию; однако, когда его присутствие в образце окрашивания преимущественно цитоплазмы указывает на аденокарциному, его используют в решающей дифференциальной диагностике злокачественных клеток мезотелиомы и клеток аденокарциномы [11].Несмотря на экспрессию в довольно широком спектре опухолей и неопухолевых клеток, EMA по-прежнему полезен для отличия клеток аденокарциномы от мезотелиальных клеток в излияниях, как показано в этом исследовании и в предыдущих отчетах. MOC-31 и Ber-EP4 — относительно новые маркеры, внедренные в области диагностической патологии и цитологической практики [1,9,12,13]. Сообщается, что MOC-31 довольно специфичен для аденокарциномы, тогда как Ber-EP4 более широко экспрессируется в карциномах с железистой или некоторыми другими дифференцировками.Полезность этих маркеров в дифференциальной диагностике клеток аденокарциномы и мезотелиальных клеток была подтверждена в этом исследовании, показав сильную экспрессию этих маркеров в клетках аденокарциномы и полное отсутствие экспрессии в мезотелиальных клетках. Учитывая их высокую специфичность и чувствительность, Ber-EP4 был принят в качестве маркера аденокарциномы в процедуре быстрой флуоресценции ICC в нашем исследовании. В отличие от маркеров аденокарциномы, до недавнего времени было мало положительных маркеров мезотелиальных клеток.HBME-1, тромбомодулин и мезотелин, которые используются в течение относительно длительного времени, демонстрируют высокую чувствительность к мезотелиальным клеткам, но в значительном проценте случаев аденокарциномы они также обнаруживаются в экспрессии этих маркеров [14,15]. Поэтому использование HBME-1, тромбомодулина и мезотелина в качестве специфических маркеров мезотелиальных клеток было ограничено особыми случаями. Калретинин, цитокератин 5/6, D2-40 и WT1 — недавно разработанные маркеры, которые, как сообщается, более специфичны, чем упомянутые выше [10,16,17].Первоначально десмин является маркером мышечных клеток и, как сообщается, экспрессируется в реактивных мезотелиальных клетках, но не в клетках мезотелиомы, поэтому он используется для дифференцировки последних двух клеток [3]. В настоящем исследовании мезотелиальные клетки показали относительно сильную положительную реакцию на эти маркеры. Сохраняя образцы клеток брюшины в растворе LBC, ICC может получить почти все возможные антитела, необходимые для диагностики. Таким образом, мы достигли высокой степени диагностической точности по сравнению с цитоморфологической оценкой только с традиционным окрашиванием Папаниколау, PAS или Гимза.Однако выполнение многих видов ICC во всех случаях является дорогостоящим. Чтобы быть более рентабельным, нужно внимательно следить за обычным окрашиванием Папаниколау, PAS или Гимза.
Для повышения точности диагностики в различных органах была проведена ICC или флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) для интраоперационной диагностики рака. Однако его применение в цитологическом исследовании выпота не является распространенным, особенно при флуоресцентном ИКК [18,19,20,21]. В этом исследовании мы провели быструю процедуру ICC флуоресценции с использованием Ber-EP4, которую можно выполнить в течение 20 минут с использованием жидкофазного метода.Хотя механизм, с помощью которого время реакции антиген-антитело сокращается с помощью жидкофазного метода, еще полностью не выяснен, мы обнаружили, что он дает те же результаты, что и стандартный ICC, и стандартный флуоресцентный ICC. Комбинированное использование нашей быстрой процедуры флуоресцентного метода ICC с другими методами окрашивания оказалось полезным для улучшения интраоперационной цитологической диагностики. Эту процедуру намного проще выполнить с образцами LBC. Когда исследуют обычное предметное стекло, окрашенное по Папаниколау, и показано иммуноокрашивание, обесцвечивание предметного стекла по Папаниколау обычно неизбежно, если только дополнительные предметные стекла случайно не законсервированы в этаноле.Система LBC превосходит то, что можно сохранять клетки в течение 1 или 2 месяцев в оптимальном состоянии без потери антигенности клеток и даже более 1 года в достаточно адекватном состоянии. Таким образом, клетки, сохраненные в растворе LBC, можно использовать не только для ICC, но также для FISH или других молекулярных методов одновременно с окрашиванием по Папаниколау, Гимза или после него или после него.
В заключение, иммуноцитохимическое исследование методом LBC является мощным вспомогательным методом дифференциации клеток аденокарциномы от мезотелиальных клеток в цитологическом исследовании выпота жидкости организма.Новая быстрая процедура флуоресценции ICC может использоваться в качестве вспомогательного метода для обнаружения клеток аденокарциномы при интраоперационном цитологическом исследовании жидкости для промывания брюшины или плевры с высокой степенью диагностической точности. Метод LBC — отличный метод подготовки клеток, который можно применять в различных диагностических и исследовательских методах.
Благодарности
Автор благодарен доктору Такехито Ватанабэ из клиники Ватанабэ и доктору Масафуми Ито из больницы Японского Красного Креста Нагоя Дайити за их полезные советы.
Список литературы
Morgan RL, De Young BR, McGaughy VR, Niemann TH: MOC-31 помогает дифференцировать аденокарциному и реактивные мезотелиальные клетки. Рак 1999; 87: 390-394.
Politi E, Kandaraki C, Apostolopoulou C, Kyritsi T, Koutselini H: Иммуноцитохимическая панель для различения карциномы и реактивных мезотелиальных клеток в жидкостях полости тела.Диагностика Cytopathol 2005; 32: 151-155.
Attanoos RL, Griffin A, Gibbs AR: Использование иммуногистохимии для отличия реактивного от неопластического мезотелия. Новое применение десмина и сравнительная оценка с антигеном эпителиальной мембраны, p53, рецептором фактора роста тромбоцитов, P-гликопротеином и Bcl-2.Гистопатология 2003; 43: 231-238.
Японская ассоциация рака желудка: Японская классификация рака желудка, изд 14. Токио, Канехара, 2010.
Grefte JM, de Wilde PC, Salet-van de Pol MR и др.: Улучшенная идентификация злокачественных клеток в серозных выпотах с использованием небольшой надежной панели антител на суспензиях клеток, залитых парафином.Acta Cytol 2008; 52: 35-44.
Bernstein SJ, Sanchez-Ramos L, Ndubisi B: Жидкостное цитологическое исследование мазка из шейки матки и традиционные мазки Папаниколау: метаанализ проспективных исследований, сравнивающих цитологический диагноз и адекватность образца. Am J Obstet Gynecol 2001; 185: 308-317.
Насути Дж. Ф., Там Д., Гупта П. К.: Диагностическая ценность препаратов на жидкой основе (ThinPrep) в негинекологических случаях. Диагностика Cytopathol 2001; 24: 137-141.
Сакакибара Э., Кимачи С., Хашимото К. и др.: Система подготовки аспирационного материала: применение новой жидкостной цитологической техники для тонкоигольной аспирации груди.Acta Cytol 2011; 55: 92-99.
Delahaye M, van der Ham F, van der Kwast TH: Дополнительная ценность пяти маркеров карциномы для диагностики злокачественной мезотелиомы, метастазов аденокарциномы и реактивного мезотелия в серозных выпотах. Диагностика Cytopathol 1997; 17: 115-120.
Ордоньес Н.Г.: Иммуногистохимический диагноз мезотелиомы: сравнительное исследование эпителиоидной мезотелиомы и аденокарциномы легких.Am J Surg Pathol 2003; 27: 1031-1051.
Saad RS, Cho P, Liu YL, Silverman JF: Значение экспрессии антигена эпителиальной мембраны в отделении доброкачественной мезотелиальной пролиферации от злокачественной мезотелиомы: сравнительное исследование. Диагностика Cytopathol 2005; 32: 156-159.
Ордоньес Н.Г.: Значение моноклональных антител MOC-31 в дифференциации эпителиальной мезотелиомы плевры от аденокарциномы легких.Хум Патол 1998; 29: 166-169.
González-Lois C, Ballestín C, Sotelo MT, et al: Комбинированное использование новых эпителиальных (MOC-31) и мезотелиальных (HBME-1) иммуногистохимических маркеров для оптимального диагностического различия первой линии между мезотелиомой и метастатической карциномой в плевре.Гистопатология 2001; 38: 528-534.
Kennedy AD, King G, Kerr KM: HBME-1 и антитромбомодулин в дифференциальной диагностике злокачественной мезотелиомы плевры. Дж. Клин Патол 1997; 50: 859-862.
Ордоньес Н.Г .: Применение иммуноокрашивания мезотелином в диагностике опухолей.Am J Surg Pathol 2003; 27: 1418-1428.
Fetsch PA, Simsir A, Abati A: Сравнение антител к HBME-1 и кальретинину для обнаружения мезотелиальных клеток в цитологии выпота. Диагностика Cytopathol 2001; 25: 158-161.
Ordóñez NG: D2-40 и подпланин являются высокоспецифичными и чувствительными иммуногистохимическими маркерами эпителиоидной злокачественной мезотелиомы.Хум Патол 2005; 36: 372-380.
Коиде К., Сакакура С., Хагивара А. и др.: Усовершенствованная быстрая процедура флуоресцентной гибридизации in situ, которая применима для интраоперационной цитодиагностики рака. Cancer Lett 2000; 158: 165-169.
Мёниг С.П., Любке Т., Сохейли А. и др.: Быстрое иммуногистохимическое обнаружение опухолевых клеток при карциноме желудка.Онкол Реп 2006; 16: 1143-1147.
Furuhata A, Sueyoshi N, Kurihara H, et al: Метод быстрого множественного иммуноцитохимического окрашивания с использованием микроволнового излучения для интраоперационной цитологии. Acta Cytol 2010; 54: 283-290.
Денда Т., Камошида С., Кавамура Дж и др.: Быстрая иммуноцитохимия с простой техникой извлечения антигена, индуцированной нагреванием, для повышения качества цитологической диагностики.J. Histochem Cytochem 2013; 61: 920-930.
Автор Контакты
Для корреспонденции: Доктору Аюми Моримото
Отделение клинической лаборатории
Общая больница Токи
703-24 Токигути, Токицучо, Токи, Гифу 509-5193 (Япония)
Электронная почта [email protected]
Подробности статьи / публикации
Предварительный просмотр первой страницы
Получено: 7 февраля 2014 г.
Принято: 12 августа 2014 г.
Опубликовано онлайн: 29 октября 2014 г.
Дата выпуска: сентябрь — октябрь
г.
Количество страниц для печати: 8
Количество рисунков: 4
Количество столов: 4
ISSN: 0001-5547 (печатный)
eISSN: 1938-2650 (онлайн)
Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/ACY
Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности
Авторские права: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме и любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование или с помощью какой-либо системы хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка лекарства: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарства, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новый и / или редко применяемый препарат.
Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, причиненный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

Диагностические методики — Классному руководителю

Диагностическая методика «Космическое путешествие» — Методическая копилка

Диагностическая методика по выявлению уровня развития детского коллектива

3. Типы диагностических методик

Диагностические методики

2.1 Диагностическая методика Урунтаевой Г.А.. Развитие трудовой деятельности дошкольника

Похожие главы из других работ:

1.3 Диагностическая деятельность

4. Методика обучения.

2.1 Диагностическая программа изучения мотивации учебной деятельности

1.2.1 Диагностическая работа с воспитанниками детского дома

2.1 Диагностическая программа изучения уровней проявления воспитанности

1.1.3 Диагностическая функция

1.2 Методика обучения ОБЖ

3. Коррекционно-диагностическая программа для детей младшего дошкольного возраста с недоразвитием речи

2.1 Методика Д. Векслера

Диагностическая деятельность, ее основные аспекты, характеристика

1.4 Диагностическая работа

2. ОПЫТНО-ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ РАБОТА ПО РАЗВИТИЮ ВЫРАЗИТЕЛЬНОСТИ В РИСУНКАХ ДЕТЕЙ СТАРШЕГО ДОШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА В ПРОЦЕССЕ ОБУЧЕНИЯ СЮЖЕТНОМУ РИСОВАНИЮ

4.1 Диагностическая методика творческого воображения младшего школьника

4.2 Диагностическая методика творческого воображения подростка

§5. Методика применения ТСО

Диагностическая методика «Секрет» («Подарок») разработана Т.А. Репиной, модифицирована Т.В. Антоновой

Похожие материалы в разделе Психологический практикум:

Диагностические методы: цель и методы

Диагностическая визуализация

Биопсия ткани

Электрокардиография

Отбор проб жидкости организма

Резюме урока

Диагностические методы | Отделение патологии инфекционных болезней | DHCPP | NCEZID

Иммуногистохимия (ИГХ)

Особые пятна

Молекулярный

Микробиология

Электронная микроскопия

Достижения в методах диагностики инфекционных заболеваний: перспективы села и города

Реферат

Цели:

Методы:

Результаты и заключение:

1. Введение

2. Методы

3. Обзор методик

3.1. Методы диагностики туберкулеза

Таблица 1.

3.2. Методы диагностики малярии

Таблица 2.

3.3. Методы диагностики СПИДа

Таблица 3.

4. Заключение

Диагностические методы для мониторинга и контроля практического пламени

Реферат

Ключевые слова

Рекомендуемые статьи

Цитирование статей

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

Mini-FLOTAC, инновационный метод прямой диагностики кишечных паразитарных инфекций: практический опыт

Аннотация

Фон

Методология / основные выводы

Заключение / Значение

Сведения об авторе

Введение

Материалы и методы

Заявление об этике

Учебные места

Размер выборки и рандомизация

Паразитологические методы

Статистический анализ

Результаты

Обсуждение

Благодарности

Вклад авторов

Ссылки

Аннотация

Введение