Метод срезов: Метод срезов | Понятия и категории

Метод срезов | Мир Психологии

Войти Зарегистрироваться

МЕТОД СРЕЗОВ

Метод срезов (метод поперечных срезов) — см. Срезов стратегия.

Психологический словарь. А.В. Петровского М.Г. Ярошевского

Метод поперечных срезов — см. Возрастных срезов метод.

Психология от А до Я: Словарь-справочник. М. Кордуэлл

Метод поперечных срезов — тип организации эксперимента, когда группы людей разного возраста изучаются одновременно. К примеру, исследователь, который хочет выяснить, как дети разного возраста рассуждают о моральной дилемме, может выбрать детей из разных возрастных групп и сопоставить их ответы.

  1. Аргументы за: — Метод поперечных срезов позволяет исследователю собрать ценную информацию о нормах — т.е. типичных представлениях разных возрастных групп. — Поскольку обычно экспериментатор лишь один раз встречается с участниками, этот метод не страдает погрешностями, характерными для лонгитюдного метода.
  2. Аргументы против: — Делая выводы о том, что является типичным для данного возраста, мы можем исходить из ничем не подкрепленной предпосылки, что поведение младших детей точно отражает поведение старших детей, когда они находились в этом возрасте. Проблема становится особенно острой, когда изучается широкий возрастной спектр и возрастает возможность возникновения «эффекта когорты». — Метод поперечных срезов содержит информацию только об изменениях в возрастных группах и ничего не говорит нам о причинах этих изменений. Было бы опрометчиво просто списать их со счетов как «возрастные факторы».

Неврология. Полный толковый словарь. Никифоров А.С.

нет значения и толкования слова

Оксфордский толковый словарь по психологии

нет значения и толкования слова

предметная область термина

ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДОМ ПОПЕРЕЧНЫХ СРЕЗОВ (cross-sectional research) — можно проводить различия между И. м. п. с., в к-рых сравниваются лица различного возраста (родившиеся в разное время), и исслед.

, опирающимися на др. методы орг-ции выборочного исследования. Традиционно поперечный метод сбора данных — часто наз. поперечным планом — принято противопоставлять так называемому продольному, или лонгитюдному плану, при к-ром возрастные сравнения проводятся в разных точках жизненного цикла лиц, родившихся в одно и то же время.

В психологии развития различия между рожденными в разные годы людьми часто называют когортными различиями. Если бы, напр., обнаружилось различие в среднем весе для выборок 47-летних мужчин в продольном и поперечном исслед., оно бы зачастую отражало именно такое когортное различие. В поперечном (но не в продольном) исслед. различия в возрастах являются тж различиями в поколениях: различия в возрастах и в поколениях смешиваются в данном случае. В продольных исслед. различия в возрастах смешиваются с различиями в периодах истории. Такое смешение отсутствует в случае И. м. п. с. Т. о., поперечные и продольные исслед. различаются между собой по виду смешения, неизбежно сопутствующего различиям в возрастах.

Однако эти 2 вида исслед. существенно различаются между собой и в др. отношениях. Если используемые в различных возрастных группах переменные выражают те же самые атрибуты и оцениваются в одних и тех же единицах измерения, можно сказать, что продольное исслед. включает повторные измерения.

Такой метод сбора данных позволяет изучать ретестовую интраиндивидную устойчивость мер — возможность, недостижимая в поперечных планах. Но если цель исслед. заключается в оценке эффектов, связанных с возрастами, эти эффекты могут смешиваться в случае повторных измерений с эффектами, к-рые возникают в рез-те более чем одного измерения той же самой вещи. В исслед. развития с этим связано одно важное различие: в поперечных исслед. отсутствует та твердая основа, на к-рую можно было бы опереться при формулировании выводов в отношении индивидуального развития. Такую основу предоставляют продольные планы с использованием или различающихся измерений, или повторных измерений.

Поперечную выборку испытуемых впоследствии можно дополнить продольным исслед. Для последующих продольных исслед. можно тж привлекать совершенно новые выборки испытуемых. При сочетании этих двух вариантов выборки испытуемых с уже упоминавшимися возможностями возникает целый ряд различных выборочных планов. Они тж оказываются полезными в исслед. развития. См. также Методы эмпирического исследования, Контроль в эксперименте, Измерение Дж.Л. Хорн

назад в раздел : словарь терминов  / 

глоссарий  /  таблица

 

ХОТИТЕ ПОМОЧЬ НАШЕМУ САЙТУ? Любая денежная сумма от Вас — это поддержка для нас!

  • Метод срезов

Метод поперечных срезов в психологии: суть и примеры

Психология всегда отличалась большим количеством оригинальных методов воздействия на индивидуума в определенных условиях, взаимодействия с личностью или работы с душевным состоянием человека. Различные технологии разрабатывались с целью облегчения существования личности в социуме, а также для развития эмпирических навыков у каждого человека. Чем выше уровень подобных умений, тем стабильнее психологическое состояние, а также выше степень благополучия индивида.

Довольно большая часть экспериментов проводится в контексте исследований методом поперечных срезов в психологии. Этот способ пользуется особой популярностью не только из-за вовлеченности в него довольно больших групп лиц разного возраста, но и из-за точных результатов, которые получаются в результате научных экспериментов. С течением времени и развитием психологии, которая является междисциплинарной отраслью научного знания, метод продольных и поперечных срезов становится все более востребованным, так как общество постепенно движется в сферу всеобщего гуманизма. Кроме того, главной ценностью нового поколения считается душевное и психологическое здоровье каждой личности.

Метод поперечных срезов

Этот способ, разработанный в конце шестидесятых годов прошлого столетия, до сих пор остается одним из самых эффективных и действенных методов опроса групп различных возрастов. Отличительной чертой методики является то, что сам эмпирический опрос проводится всего один раз, однако распространяется на несколько групп лиц, принадлежащих к разным возрастным категориям, что позволяет исследователям увидеть социально-возрастную картину человеческих реакций на то или иное теоретическое утверждение. Возраст испытуемых обычно становится опорной точкой и общей переменной для всего исследования, а изучаемые признаки признаются зависящими от общего знаменателя результатов.

Создатель способа

«Праотцом» метода поперечных срезов в психологии можно заслуженно считать французского ученого, политолога и социолога Рене Заззо, который не только предложил саму суть метода, но и провел первый семинар по воплощению идеи в жизнь. Разумеется, эту технологию Рене взял не на пустом месте. Он досконально проштудировал труды своих предшественников, которые, в свою очередь, ссылались на теоретиков прошлого, считавших, что будущее современной психологии заключается в ее коллективном проявлении, а не в теории радикального индивидуализма.

Заззо с самого начала работы над новым способом исследования предпочитал взаимодействовать с лицами разных возрастов, чтобы достичь максимальной точности результатов. Все практические наработки, обобщенные результаты, а также теоретические дополнения, касающиеся метода поперечных срезов, ученый представил на XVIII Международном Психологическом Конгрессе в 1966 году. Доклад социолога был опубликован в официальном вестнике конгресса и вызвал большой резонанс в научных кругах. Однако в практической социологии метод прижился далеко не сразу. Дело в том, что психологическая наука того времени была ориентирована на психологию индивидуализма, призванную двигаться в направлении постижения духовных рефлексов отдельной личности, а метод поперечных срезов предлагал получение результатов коллективного мышления и общественной реакции. Однако, несмотря на некоторое давление со стороны консервативно настроенных научных кругов, Заззо все же добился довольно значимых успехов в практическом закреплении своих теоретических положений.

Основные ученые

Вдохновленные успехом своего заокеанского коллеги, некоторые ученые принимают решение практиковать сравнительный метод поперечных срезов у себя на Родине. Так, спустя несколько лет опыты Заззо успешно повторяет научный тандем, состоящий из американских академиков Л. Шонфельдта и В. Овенса, которые решили дать более широкую трактовку способу, изобретенному гениальным французом, и добавить в эксперимент еще несколько возрастных фаз, включая юность, а также две фазы зрелости. Это привело к тому, что результаты каждого из опросов стали более точными. Также ученые исследователи могли проследить динамику изменения человеческого характера на основе изменчивости мнений, которые высказывали люди различных возрастных категорий.

Их примеру последовали выдающиеся отечественные психологи и социологи, состоящие в рабочей группе легендарного академика В. М. Бехтерева, который не только одним их первых начал проводить систематические генетико-психологические исследования на территории России, но и стал первым социологом, применившим метод поперечных срезов в психологии по отношению к совсем маленьким детям.

Именно в центре этого замечательного педагога и был реализован комплексный подход к изучению определенной группы детей на протяжении нескольких месяцев. Бехтерев не подозревал, что своими пробными экспериментами заложил фундамент для совершенно нового метода исследования, получившего название лонгитюдинального. По сути, это тот же самый метод поперечных срезов, однако хронометраж эксперимента в данном случае растянут на более длительное время.

В 1928 году академик издает совместный труд вместе со своим ассистентом Н. М. Щеловановым, в котором были изложены основные положения нового способа исследования, а также базовые критерии метода, который Бехтерев назвал «длинником», так как исследование заняло довольно долгий срок по сравнению с другими типами подобных экспериментов.

В современной психологии лонгитюдинальный метод активно применяется в работе с группами людей пожилого возраста. В этом случае он дает особенно точные результаты, на основании которых можно делать серьезные выводы, а не просто теоретические предположения. Известны случаи, когда наиболее высокоэффективным становилось сочетание вышеописанного способа с психографическим методом дифференциальной психологии. Именно эту методику применял в своих практических исследованиях выдающийся психолог В. Штерн, который полагал, что синтетический характер психографии положительно скажется на непредвзятости результатов эксперимента, а также подчеркнет различия между идеологическими и сознательными установками поколений.

Сущность способа

Метод поперечных срезов предполагает взаимодействие исследователя с лицами разных возрастных категорий, объединенных в группы по возрасту. Всем им задаются абсолютно одинаковые вопросы и раздаются аналогичные задания, которые они обязаны выполнить в течение одного и того же промежутка времени. На основании результатов теоретического опроса и практических заданий исследователи формируют общую картину сознания поколения, выявляя характерные для каждой возрастной группы установки, предрассудки и систему принципов, на основании которой делаются необходимые выводы.

Примером метода поперечных срезов может послужить эксперимент выдающегося советского психолога Бехтерева, который опрашивал определенную группу детей в течение длительного времени, наблюдая за изменением их социальной позиции по тому или иному вопросу. В конечном итоге сформировалась полноценная картина представлений о жизни детей единичной возрастной группы, на основании которой можно было судить о мировоззрении ребятишек из похожих социальных групп, но лишь в том случае, если ее представители по полу, возрасту и социальному положению были схожи с опрашиваемыми детьми.

Проблематика метода

Суть метода поперечных срезов прежде всего проявляется в том, что он рассчитан на большое количество человек, а не на индивидуальную работу с определенной личностью. Он является одним из немногих действенных методов быстрого получения информации сразу от нескольких индивидов, что приводит к более плодотворной работе ученого, постоянно получающего новую информацию и наблюдающего всю картину сразу, вместе со всеми ее изменениями.

Практические эксперименты

С конца шестидесятых годов прошлого века активно проводятся эксперименты по применению метода возрастных поперечных срезов. Наиболее широкое распространение способ получил в Соединенных Штатах Америки, социологическая наука которых с самого начала была ориентирована на выявление общечеловеческих потребностей. Стоит отметить, что правильное отношение к последним смогло бы нейтрализовать расовые и межнациональные конфликты в большой стране.

Факторы риска

К причинам, по которым результаты эксперимента могут быть аннулированы, можно отнести:

  • Различные условия проживания лиц в возрастных группах;
  • Существенную разницу в возрасте подобранных групп;
  • Разные социальные статусы опрашиваемых;
  • Неопытность проводящего эксперимент ученого.

Сфера применения

Пример метода поперечных срезов можно найти в работах, посвященных психологии, социологии и культурологии. Обычно именно в научных дисциплинах, так или иначе связанных с изучением социума и его внутренних процессов, можно найти примеры деятельности ученых именно с этим методом исследования.

Достоинства

К положительным сторонам способа можно отнести его довольно высокую точность, конечно же, при соблюдении всех условий в подготовке испытуемых. Также способ отличается простотой и удобством в применении, способностью отобразить сразу всю картину результатов текущего периода. Большие социальные группы при подобном исследовании предоставляют значимое количество мнений, которые постепенно оформляется в единый тезис, принадлежащий тому самому сообществу. Таким образом, можно примерно понять позицию всей возрастной группы в целом, просто перенеся результаты на живущих в реальной жизни людей, имеющих похожий типаж и условия существования.

Недостатки

Существенным недостатком сравнительного метода (метода поперечных срезов) может стать существенная возрастная разница групп. Например, способ дает точные результаты, если опрашивается три сообщества, разница между возрастами которых составляет не более пяти лет. Если же ученый возьмет группу пятнадцатилетних подростков и шестидесятилетних людей, то метод может дать не совсем верные, непредсказуемые результаты, делать выводы на основании которых довольно опасно.

Также на качество и чистоту эксперимента влияет социальное окружение испытуемых. Не следует доверять данным, полученным в ходе опытов с группами лиц из различных семей, отличающихся уровнем социального благополучия. В таком случае ответы на вопросы будут слишком разрозненными, чтобы привести их к общему знаменателю.

Отзывы

В большинстве трудов отечественных и зарубежных психологов данный метод получает в основном положительные или же нейтральные оценки, так как нет объективных причин для критики способа. На результаты влияет неопытность лаборанта или недостаточно качественная подготовка испытуемых.

Метод Python slice() (с примерами)

Метод slice() возвращает часть итерируемого объекта как объект класса slice () на основе указанного диапазона. Его можно использовать со строкой, списком, кортежем, набором, байтами или объектами диапазона или с объектом пользовательского класса, который реализует методы последовательности __getitem__() и __len__() методы.

Синтаксис:

 срез(стоп)
слайс(начало, стоп, шаг)
 
Параметры:
  1. start: (Необязательно) Начальный индекс, с которого начинается нарезка итерируемого объекта. Значение по умолчанию — нет.
  2. stop: конечный индекс, на котором должно заканчиваться нарезка.
  3. Шаг
  4. : (Необязательно) Целое число для увеличения начального индекса. По умолчанию нет.
Возвращаемое значение:

Возвращает объект класса среза .

В следующих примерах демонстрируется метод slice() со строковым значением.

 mystr = 'Учебники для учителей'
числа = [1,2,3,4,5,6,7,8,9,10]

порция1 = ломтик(9)
часть2 = часть (2, 8, 2)

печать('кусок: ', часть1)
print('Строковое значение: ', mystr[partion1])
print('Список значений: ', nums[partion1])

печать('кусок: ', часть2)
print('Строковое значение: ', mystr[partion2])
print('Список значений: ', nums[partion2])
 
 срез: срез(Нет, 9, Нет)
Строковое значение: Учебники
Значение списка: [1,2,3,4,5,6,7,8,9]

срез: срез(2, 8, 2)
Строковое значение: тра
Список значений: [3, 5, 7]
 

Выше, slice(9) возвращает объект среза как slice(None, 9, None) , который вы можете передать любому итерируемому объекту, чтобы получить эту часть индекса.

Метод slice() можно использовать со строкой, списком, кортежем, набором, байтами или диапазоном. В следующем примере извлекается часть объекта списка.

 чисел = [1,2,3,4,5,6,7,8,9,10]
нечетная_часть = срез (0, 10, 2)
печать (числа [нечетная_часть])

четная_часть = срез (1, 10, 2)
печать (числа [четная_часть])
 
 [1, 3, 5, 7, 9]
[2, 4, 6, 8, 10]
 

Использование отрицательного индекса

Метод slice() также поддерживает отрицательное индексирование.

 чисел = [1,2,3,4,5,6,7,8,9,10]
четная_часть = срез (-9, -1, 2)
печать (числа [четная_часть])
 
 [2, 4, 6, 8]
 

Использование синтаксиса индексирования

Вы можете использовать сокращенный синтаксис iterable_obj[start:stop:step] для нарезки вместо использования метод slice() .

 чисел = [1,2,3,4,5,6,7,8,9,10]
print('Odd nums: ', nums[0:10:2]) # start 0, stop: 10, step:2
print('Четные числа: ', числа[1:10:2]) # начало 1, остановка: 10, шаг:2

mystr = 'Учебники для учителей'
print(mystr[0:9]) # старт 0, стоп: 9, шаг:1
print(mystr[9:]) # start 9, stop: конец строки, шаг:1
print(mystr[9::2]) # начало 9, остановка: конец строки, шаг:2
print(mystr[::2]) # начало 0, остановка: конец строки, шаг:2
 
 Нечетные числа: [1, 3, 5, 7, 9]
Четные числа: [2, 4, 6, 8, 10]
Учебники
Учитель
Тар
Трасече
 

Хотите проверить, насколько хорошо вы знаете Python?

Запустить тест Python

Методы острых срезов головного мозга взрослых и стареющих животных: применение целевого анализа пэтч-кламп и оптогенетики

.

2014;1183:221-42.

дои: 10.1007/978-1-4939-1096-0_14.

Джонатан Т Тинг 1 , Таня Л. Дайгле, Цянь Чен, Гопин Фэн

принадлежность

  • 1 Отделение типов клеток человека, Институт исследований мозга Аллена, 551 N 34th Street, Сиэтл, Вашингтон, 98103, США, [email protected].
  • PMID: 25023312
  • PMCID: PMC4219416
  • DOI: 10.1007/978-1-4939-1096-0_14

Бесплатная статья ЧВК

Джонатан Тинг и др. Методы Мол Биол. 2014.

Бесплатная статья ЧВК

. 2014;1183:221-42.

дои: 10.1007/978-1-4939-1096-0_14.

Авторы

Джонатан Т Тинг 1 , Таня Л. Дайгле, Цянь Чен, Гопин Фэн

принадлежность

  • 1 Отделение типов клеток человека, Институт исследований мозга Аллена, 551 N 34th Street, Сиэтл, Вашингтон, 98103, США, [email protected].
  • PMID: 25023312
  • PMCID: PMC4219416
  • DOI: 10. 1007/978-1-4939-1096-0_14

Абстрактный

Разработка препарата живого острого среза мозга для анализа синаптической функции примерно полвека назад была ключевым достижением, которое сильно повлияло на ландшафт современной нейронауки. Действительно, многие нейробиологи считают срезы мозга золотым стандартом модельной системы для детального анализа на клеточном, молекулярном и схематическом уровнях и возмущения функции нейронов. Критическим ограничением этой модельной системы является сложность подготовки срезов взрослых и стареющих животных, и за последние несколько десятилетий появилось несколько существенных методологических улучшений для облегчения анализа пэтч-клэмп на стадии зрелых взрослых особей. В этой главе мы опишем надежный и практичный протокол для подготовки срезов мозга взрослых мышей, которые подходят для анализа патч-клэмп. Этот метод уменьшает отек и повреждение поверхностных слоев срезов и повышает вероятность успеха для целевых записей пэтч-клэмп, включая записи флуоресцентно меченных популяций в срезах, полученных от трансгенных мышей. Этот метод срезов мозга взрослых подходит для различных экспериментальных приложений, включая как мониторинг, так и манипулирование активностью нейронов с помощью генетически закодированных индикаторов кальция и оптогенетических приводов соответственно. Мы описываем применение этой платформы срезов мозга взрослых и связанных с ней методов для скрининга кинетических свойств вариантов Channelrhodopsin (ChR), экспрессируемых в генетически определенных подтипах нейронов.

Цифры

Рисунок 1

Оборудование для подготовки мозга…

Рисунок 1

Оборудование для приготовления срезов головного мозга.( A ) Машина для нарезки Compresstome VF-200 с…

Рисунок 1

Оборудование для приготовления срезов головного мозга. ( A ) Машина для нарезки Compresstome VF-200 с основными компонентами, помеченными следующим образом: 1 камера для нарезки, 2 ножевых рычага, 3 микрометра, 4 блока управления. ( B ) Альтернативный вид ножевого рычага со вставленной губной помадой в приемник платформы для нарезки.( C ) Аппарат Brain Slice Keeper-4.( D ) БСК-4 в разобранном виде с основными компонентами, обозначенными следующим образом: 1-крышка, 2-четыре камеры с сеткой, 3-газ диффузор камень, 4-внешний контейнер.

Рисунок 2

Метод защитного восстановления дает…

Рисунок 2

Метод защитного восстановления обеспечивает превосходную сохранность нейронов при подготовке острых срезов головного мозга…

фигура 2

Метод защитного восстановления обеспечивает превосходную сохранность нейронов при подготовке острых срезов головного мозга взрослых взрослых животных. ( A ) Сравнение процедурных шагов при защитной резке и защитных методах извлечения. ( B ) Быстрое набухание нейронов и последующее сморщивание в острых срезах головного мозга, полученных из 5-месячных взрослых мышей с помощью метода защитного разрезания сахарозой aCSF. ( C ) Уменьшение отека и улучшение сохранения нейронов в острых срезах головного мозга, полученных из 5-месячных взрослых однопометных мышей защитным методом восстановления.

Рисунок 3

Визуализация кальция GCaMP3 для оценки…

Рисунок 3

Визуализация кальция GCaMP3 для оценки функциональной целостности срезов зрелого мозга взрослого человека. (…

Рисунок 3 Визуализация кальция

GCaMP3 для оценки функциональной целостности срезов зрелого мозга взрослого человека. ( A ) Применение переходной ванны с высоким K 9Раствор 0087 + (15 мМ) вызывает слабое усиление флуоресценции зубчатых гранулярных клеток гиппокампа в срезах головного мозга, полученных из 5-месячной трансгенной мыши Thy1-GCaMP3 с использованием стандартного метода защитного разрезания сахарозой aCSF. Стрелками отмечены примеры слабо реагирующих нейронов. ( B ) Такая же высокая перфузия K + (15 мМ) вызывает сильное усиление флуоресценции по всему зернистому клеточному слою в срезах мозга, полученных от однопометного животного того же возраста с использованием NMDG. метод защитного восстановления.( C ) Пример необработанных следов интенсивности флуоресценции, измеренной во времени для выбранных областей интереса (ROI), демонстрирующих эффект высокой перфузии ванны K + . Шкала баров: 50%, 50 с. Сводные данные, сравнивающие ΔF/F для двух методов приготовления срезов в диапазоне внеклеточных концентраций K + .

Рисунок 4

Позиционирование оптических волокон с лазерной связью…

Рисунок 4

Позиционирование связанных с лазером оптических волокон для фокальной лазерной стимуляции в срезах головного мозга. ( A…

Рисунок 4

Расположение связанных с лазером оптических волокон для фокальной лазерной стимуляции в срезах головного мозга. ( A ) Пример размещения оптического волокна с сердцевиной 200 мкм непосредственно над регистрируемым нейроном полосатого тела ( звездочка ).( B ) Каждый лазерный импульс освещает эллипс, окружающий нейрон-мишень.( C ) Расчетная площадь освещения для определения выходной мощности как функции площади (излучения).

Рисунок 5

Сравнительный анализ кинетики ХР…

Рисунок 5

Сравнительный анализ кинетических вариантов ChR в различных типах клеток. Измерение…

Рисунок 5

Сравнительный анализ кинетических вариантов ChR в различных типах клеток. Измерение кинетики закрытия канала (Tau от ) после короткой световой стимуляции в течение 2 мс выполняли с использованием зажима напряжения целых клеток (-70 мВ) в качестве чувствительного анализа для скрининга новых кинетических вариантов ChR ( A ). Эксперимент № 1: сравнение Tau с , измеренное в кортикальных пирамидных нейронах с трансгенной экспрессией ChR2 Р или ВЧР1. Шкала баров: 200 пА, 100 мс. Эксперимент № 2: сравнение Tau с , измеренное в пирамидных нейронах коры, экспрессирующих новые варианты ChETA ARC или oCHIEF AC . Шкала баров: 50 пА, 100 мс. ( B ) Комбинированные данные для пирамидных нейронов. ( C ) Сравнение Tau и , измеренных в кортикальных быстрых вставочных интернейронах с трансгенной экспрессией ChR2 R (VGAT-ChR2 ) Р -ЭЙФП стр.8) или ЧЭТА ТР (Р26-2ХЧЕТА ТР /Пвалб-ИРЭС-Кре). Шкала баров: 200 пА, 10 мс. ( D ) Сводные данные, сравнивающие Tau с , измеренные либо в корковых интернейронах с быстрым выбросом, либо в кортикальных пирамидных нейронах, экспрессирующих ChR2 R . Внутренние различия типов клеток влияют на измеряемые кинетические свойства и, таким образом, препятствуют сравнительному анализу типов клеток.

Рисунок 6

Улучшенная визуализация нейронов, экспрессирующих ChR2…

Рисунок 6

Улучшенная визуализация нейронов, экспрессирующих ChR2, для целевых записей пэтч-клэмп в срезах мозга…

Рисунок 6

Улучшенная визуализация нейронов, экспрессирующих ChR2, для целенаправленных записей пэтч-кламп в срезах мозга с использованием вирусных линкеров P2A. ( A ) Проблема идентификации экспрессирующих ChR2-EYFP нейронов исследуется в острых срезах полосатого мозга мышей Ai32/D1-Cre. Эта линия имеет сильную экспрессию трансгена ChR2-EYFP примерно в половине всех средних шипиковых нейронов полосатого тела. Слияние генов ChR2-EYFP локализовано на клеточной мембране и продуцирует плотный флуоресцентный нейропиль с небольшим сигналом от клеточных тел. Показан записанный нейрон ( звездочка ) вместе со вставкой зарегистрированного фототока, тем самым подтверждая принадлежность к MSN D1+. ( B ) Зарегистрированный MSN в соседней области не имел фототока и предположительно был D1 отрицательным (D1-/D2+ MSN объясняют другая половина населения MSN). Зарегистрированные нейроны были неразличимы на основании морфологии или флуоресценции живого EYFP. ( C ) Анализ флуоресценции нативного tdTomato вместе с двойным иммуноокрашиванием анти-2А (указывает на локализацию ChR2) и DARPP32 (указывает на все MSN в области полосатого тела) демонстрирует однозначную идентификацию экспрессирующих ChR2 нейронов со стратегией экспрессии opsin-2A-XFP. Показанный здесь пример взят из нашей Cre-индуцируемой репортерной линии ChETA-P2A-tdTomato, скрещенной с RGS9.Мыши-драйвер Cre для маркировки подмножества MSN полосатого тела ( D ). Использование вирусного линкера P2A (зеленая последовательность ) позволяет физически разъединить опсин и флуорофор, а метку эпитопа 2A затем можно использовать для отслеживания локализация мембранно-направленного белка опсина. Цитозольный флуорофор, в данном случае tdTomato, заполняет все тело клетки. Масштабные линейки: 20 мкм в панелях A и B , 50 мкм в панели C .

Рисунок 7

Избегание фотоактивации при поиске…

Рисунок 7

Избегание фотоактивации при поиске клеток, экспрессирующих ChR2. ( A–C ) Спектры возбуждения/испускания…

Рисунок 7

Предотвращение фотоактивации при поиске клеток, экспрессирующих ChR2. ( A–C ) Спектры возбуждения/испускания различных наборов оптических фильтров нанесены вместе со спектром активации для ChETA. Значительное перекрытие с активацией ChETA наблюдается для диапазона возбуждения с использованием EYFP ( A ) и Техасский красный ( B ), но не с пользовательским набором фильтров tdTomato ( C ). ( D ) Необработанные кривые максимальных фототоков, вызванных 1-секундным эпифлуоресцентным освещением (синяя линия) с использованием различных наборов фильтров для нейрона, экспрессирующего ChETA-P2A-tdTomato, записанные в зажиме напряжения цельной клетки. ( E ) Cell- прикрепленные записи, демонстрирующие вызванные светом всплески с различными наборами фильтров при полной и уменьшенной интенсивности света. Полное устранение всплесков было достигнуто только при использовании специального фильтра tdTomato, настроенного на пониженную интенсивность света.

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Похожие статьи

  • Записи одиночных или двойных патч-зажимов при подготовке срезов Ex Vivo: функциональная связность, динамика синапсов и оптогенетика.

    Симонне Дж., Ришево Л., Фрикер Д. Симоннет Дж. и др. Методы Мол Биол. 2021;2188:285-309. дои: 10.1007/978-1-0716-0818-0_15. Методы Мол Биол. 2021. PMID: 33119858

  • Изучение функции нейронов ex vivo с использованием оптогенетической стимуляции и патч-клэмпа.

    Аксой-Аксель А., Генти Дж., Целлер М., Эрлих И. Аксой-Аксель А. и др. Методы Мол Биол. 2020;2173:1-20. doi: 10.1007/978-1-0716-0755-8_1. Методы Мол Биол. 2020. PMID: 32651907

  • Оптогенетика для изучения взаимодействия нейронов и глии у щенков и взрослых особей.

    Хабермахер К., Манот-Сайе Б., Ортолани Д., Ортис Ф.К., Ангуло М.К. Хабермахер С. и соавт. Методы Мол Биол. 2021;2191:135-149. дои: 10.1007/978-1-0716-0830-2_9. Методы Мол Биол. 2021. PMID: 32865743

  • Визуализация напряжения и оптогенетика выявляют зависящие от поведения изменения в динамике гиппокампа.

    Адам Ю., Ким Дж.Дж., Лу С., Чжао Ю., Се М.Э., Бринкс Д., Ву Х., Мостахо-Раджи М.А., Хейфец С., Парот В., Четтих С., Уильямс К.Дж., Гмайнер Б., Фархи С.Л., Мэдисен Л., Бьюкенен EK, Kinsella I, Zhou D, Paninski L, Harvey CD, Zeng H, Arlotta P, Campbell RE, Cohen AE. Адам Y и др. Природа. 2019Май; 569 (7756): 413-417. doi: 10.1038/s41586-019-1166-7. Эпаб 2019 1 мая. Природа. 2019. PMID: 31043747 Бесплатная статья ЧВК.

  • Изучение синаптической связи и силы с помощью оптогенетики и электрофизиологии патч-кламп.

    Линдерс Л.Э., Супиот Л.Ф., Ду В., Д'Анджело Р., Адан Р. А.Х., Рига Д., Мейе Ф.Дж. Линдерс Л.Э. и соавт. Int J Mol Sci. 2022 1 октября; 23 (19): 11612. дои: 10.3390/ijms231911612. Int J Mol Sci. 2022. PMID: 36232917 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

  • Низкочастотная оптогенетическая глубокая стимуляция мозга нейронов, содержащих дофаминовые D1 или D2 рецепторы прилежащего ядра, ослабляет селективный поиск кокаина у самцов крыс, частично за счет устранения дефицита синаптической пластичности.

    Суинфорд-Джексон С.Э., Рич М.Т., Хаффман П.Дж., Ноус М.С., Томас А.С., Манкаме С., Воробей С.Дж., Пирс Р.С. Суинфорд-Джексон С.Э. и др. bioRxiv. 2023 Янв 23:2023.01.23.524956. doi: 10.1101/2023.01.23.524956. Препринт. bioRxiv. 2023. PMID: 36747662 Бесплатная статья ЧВК.

  • Клеточный состав и организация цепи голубого пятна взрослых мышей.

    Маккинни А., Ху М., Хоскинс А., Мохаммадьяр А., Наим Н., Цзин Дж., Патель С.С., Шет Б.Р., Цзян Х. МакКинни А. и др. Элиф. 2023 3 февраля; 12:e80100. doi: 10.7554/eLife.80100. Элиф. 2023. PMID: 36734517 Бесплатная статья ЧВК.

  • Созревание глутаматергической передачи на серотонинергических нейронах дорсального шва.

    Киснер А., Полтер А.М. Киснер А. и соавт. bioRxiv. 2023 19 января: 2023.01.19.524776. дои: 10.1101/2023.01.19.524776. Препринт. bioRxiv. 2023. PMID: 36711665 Бесплатная статья ЧВК.

  • Одноклеточная масс-спектрометрия метаболитов и белков для систем и функциональной биологии.

    Портеро Э.П., Паде Л., Ли Дж., Чой С.Б., Немес П. Портеро Е.П. и др. Нейрометоды.