Методика сонди: Тест Сонди. Методика восьми влечений. Метод портретных выборов (МПВ), модификация Собчик. Опросник — судьбоанализ.

Содержание

КАК ВЫГЛЯДИТ РАСШИФРОВКА ТЕСТА СОНДИ СПЕЦИАЛИСТОМ ПСИХОДИАГНОСТОМ, ПСИХОЛОГОМ

Тест Сонди, метод портретных выборов — по сути своей уникальный тест, дающий огромное количество возможностей психодиагносту, психологу, специалисту при его расшифровке.

Прохождение теста Сонди не требует много времени или каких-либо специальных условий, на весь процесс уходит 3-5 минут. Во время тестирования необходимо выбирать портреты людей из предложенных по определённому принципу. Далее все результаты заносятся программой в специальную таблицу «сетка результатов исследования», которая выходит сразу же после прохождения теста и автоматическая расшифровка. Таким образом можно пройти тест в любое время и получить результаты бесплатно. Вот как это выглядит:

http://psytests.org/result?v=szn1FwvhwaFi1_xPAcZ&m=pro

При рассмотрении таких результатов обязательно нужно учитывать, что они создаются автоматически по принципу набора фраз, означающих крайность, а не интерпретирует его, поэтому не надо относиться к этим результатам со всей серьезностью.

Например, программа может поставить значение «заблокированность контактов, ирреальные связи. Отчуждение от мира», профессиональный психолог, психодиагност расшифрует это как «и в этой ситуации человек на данный момент ощущает свое бессилие, потому что опять не получилось….» и далее все это объединяется с остальными значениями из сетки, обрабатывается исходя из того, что за ситуация, как человек к ней пришел, какая задача решалась на самом деле и что ему помешало ее реализовать. Или другой пример, в автоматической расшифровке присутствует значение «импульсивное поведение, экспансивно-шизоидная акцентуация, алкоголизм, наркомания, аферизм, мошенничество», психолог или специалист по расшифровке сонди на основании конкретной ситуации и остальных значений векторов и факторов, напишет, что «тестируемый склонен уходить от конфликта путем попытки убеждения человека, что он не прав или будет пытаться уговорить его, убедить в чем-то. На открытый конфликт не пойдет». А склонность к аферизму и мошенничеству, написанными в компьютерной расшифровке обязательно нужно перепроверять через ряд других факторов.

Хотя, в любом случае, что-то полезное из компьютерной расшифровки результатов теста Сонди почерпнуть можно.

На сегодняшний день в России очень мало специалистов по Сонди, профессиональных психологов и психодиагностов, работающих с тестами Сонди. Причина такой непопулярности в сложности расшифровки. Но если профессионально и действительно грамотно расшифровывать тест Сонди, то с его помощью можно восстановить картину жизненных циклов человека, его судьбу, ту которую он выбрал и которую, сам того не осознавая, проживает; его автоматические модели поведения и причины, по которым у него не получается решить определенные задачи; тест Сонди отлично зарекомендовал себя не только в работе психолога по формированию личности человека и вытеснения его авторитетов, но и в профессиональной и бизнес сферах. Кроме того, тест Сонди определяет причины неудач в личной сфере, семейных конфликтов, неудач в построении отношений с противоположным полом.

Тест Сонди действительно очень эффективная методика, решающая огромное количество задач и благодаря своей многогранности его в принципе можно поставить отдельно как самостоятельное направление в судьбоанализе, психоанализе, в работе с личностно – индивидуальным портретом человека и изменением его будущего. Единственное «но» — расшифровка обязательно должна быть сделана профессионально и исходя из Ваших конкретных задач.

«ИНТЕРПРЕТАЦИЯ ТЕСТА СОНДИ» — НИИ «Международное судьбоаналитическое сообщество»

«Интерпретации Теста Сонди»

Л. Сонди является автором концепции Судьбоанализа, им был разработан метод портретных выборов (МПВ). В основе теста Сонди лежит методика восьми влечений человека.

В результате прохождения человеком теста Сонди, формируются 2 таблицы: передний план и задний план, в каждом из которых существует 8 факторов влечений – которые побуждают человека к действие. Работают они посредством восьми батарей (аккумуляторов), которые дают математические значения «-», «+», «0», «+/-». Взаимодействие напряжения в аккумуляторах формирует поведенческую реакцию человека. Суть концепции Сонди – удовлетворение нейтрализует желание.

Существует один метод анализа данного теста, разработанный самим Л. Сонди, он широко используется в классической науке.

В 2015 году ученый Мальцев Олег Викторович, в рамках создания методики Соло разработал более 15 интерпретаций теста Сонди:

  • Метод автомата
  • Метод Круга Мальцева
  • Сопоставление с 8-ю вещами, которые делают все люди
  • Сопоставление с 8-ю религиями общественного сознания
  • Тактическая интерпретация теста Сонди
  • Метод положения вещей в системе координат и др.

Они позволяют полностью проанализировать поведение человека, увидеть побуждающие факторы, спрогнозировать действия человека в будущем и выяснить причины, которые заставляют его действовать определенным способом. Эти интерпретации дают возможность разложить до мелочей все реакции человека.

Благодаря этим интерпретациям, можно за короткое время провести диагностику и определить слепок бессознательного человека.

Данные методы интерпретации являются авторской разработкой ученого Мальцева Олега Викторовича и интеллектуальными активам НИИ «Международное Судьбоаналитическое Сообщество».

Вы можете пройти тест и обратиться за интерпретацией к экспертам НИИ: контакты. 

Диагностика Сонди-тест — LiveJournal

Отличительной особенностью данного исполнения теста является:

1.        Использование оригинального стимульного материала (фотопортреты).
Тут надо быть внимательным, ибо популисткое использование рисованных «копий» фотопортретов некоторыми психологами исключает диагностическую ценность метода.

2.        Расчет «профиля переднего плана» (ППП).

3.        Расчет «экспериментального комплементарного профиля» (ЭКП).

При десятикратном тестировании рассчитывается:

1.        Пропорция латентности.

2.        Класс побуждений (опасности, вентили).

3.        Формула побуждений (симптоматические и коренные факторы).

4.        Индекс сексуальности, индекс социальности.

5.        Квотиент напряженности тенденций.

6.      % симптоматических реакций.

В качестве стимульного материла Вам представлены 6 серий с портретами, в каждой по 8 портретов.
1. Посмотрите внимательно (на каждую серию портретов поочередно) и впишите, в бланк для фиксации результатов, номер того портрета, который будет наиболее симпатичным, а затем того, который будет наиболее симпатичным среди оставшихся. Далее, из оставшихся шести портретов, выберите и впишите в бланк, номер самого антипатичного для Вас портрета, а затем портрета, который бы Вы поставили бы по антипатичности на втрое место. В итоге получается два номера, соответствующие симпатичным портретам, а затем два, соответстсующие несимпатичным портретам. Таким образом снимается переднеплановый профиль (ППП).
2. Для того, чтобы снять заднеплановый профиль (ЗПП), вернитесь к первой серии вновь, исключив номера портретов первого выбора, и из оставшихся четырех, выберите два симпатичных, два несимпатичных. Внесите номера портретов в бланк.
Не стоит особо задумываться и долго выбирать самые приятные и неприятные портреты — выбирайте, руководствуясь своим первым впечатлением. Если трудно выбрать портрет, который был бы приятным — все портреты кажутся несимпатичными, выбирайте наименее несимпатичный.
3. Наводите и нажимайте на ссылку по сериям (I-VI). Делайте выбор ППП и ЗПП, фиксируйте номера портретов в бланк и высылайте по предложенному Вам адресу.

Бланк для фиксации результатов
ПППЗПП
 симпатияантипатия
I  
II  
III  
IV  
V  
VI  
 симпатияантипатия
I  
II  
III  
IV  
V  
VI  

Серия I
http://s59. radikal.ru/i164/0905/db/3714bf248f0b.jpg
Серия II
http://s41.radikal.ru/i094/0905/7f/58e58db60d91.jpg
Серия III
http://s51.radikal.ru/i131/0905/87/2786391b5bbd.jpg
Серия IV
http://i030.radikal.ru/0905/33/327e08ca339a.jpg
Серия V
http://s55.radikal.ru/i150/0905/83/3b2d354c07f4.jpg
Серия VI
http://s39.radikal.ru/i083/0905/71/9ce136848779.jpg

Собчик, Людмила Николаевна — Метод портретных выборов — адаптированный тест Сонди : Практ. рук.


Поиск по определенным полям

Чтобы сузить результаты поисковой выдачи, можно уточнить запрос, указав поля, по которым производить поиск. Список полей представлен выше. Например:

author:иванов

Можно искать по нескольким полям одновременно:

author:иванов title:исследование

Логически операторы

По умолчанию используется оператор AND.
Оператор AND означает, что документ должен соответствовать всем элементам в группе:

исследование разработка

author:иванов title:разработка

оператор OR означает, что документ должен соответствовать одному из значений в группе:

исследование OR разработка

author:иванов OR title:разработка

оператор NOT исключает документы, содержащие данный элемент:

исследование NOT разработка

author:иванов NOT title:разработка

Тип поиска

При написании запроса можно указывать способ, по которому фраза будет искаться. Поддерживается четыре метода: поиск с учетом морфологии, без морфологии, поиск префикса, поиск фразы.
По-умолчанию, поиск производится с учетом морфологии.
Для поиска без морфологии, перед словами в фразе достаточно поставить знак «доллар»:

$исследование $развития

Для поиска префикса нужно поставить звездочку после запроса:

исследование*

Для поиска фразы нужно заключить запрос в двойные кавычки:

«исследование и разработка«

Поиск по синонимам

Для включения в результаты поиска синонимов слова нужно поставить решётку «#» перед словом или перед выражением в скобках.
В применении к одному слову для него будет найдено до трёх синонимов.
В применении к выражению в скобках к каждому слову будет добавлен синоним, если он был найден.
Не сочетается с поиском без морфологии, поиском по префиксу или поиском по фразе.

#исследование

Группировка

Для того, чтобы сгруппировать поисковые фразы нужно использовать скобки. Это позволяет управлять булевой логикой запроса.
Например, нужно составить запрос: найти документы у которых автор Иванов или Петров, и заглавие содержит слова исследование или разработка:

author:(иванов OR петров) title:(исследование OR разработка)

Приблизительный поиск слова

Для приблизительного поиска нужно поставить тильду «~» в конце слова из фразы. 4 разработка

По умолчанию, уровень равен 1. Допустимые значения — положительное вещественное число.
Поиск в интервале

Для указания интервала, в котором должно находиться значение какого-то поля, следует указать в скобках граничные значения, разделенные оператором TO.
Будет произведена лексикографическая сортировка.

author:

[Иванов TO Петров]

Будут возвращены результаты с автором, начиная от Иванова и заканчивая Петровым, Иванов и Петров будут включены в результат.

author:{Иванов TO Петров}

Такой запрос вернёт результаты с автором, начиная от Иванова и заканчивая Петровым, но Иванов и Петров не будут включены в результат.
Для того, чтобы включить значение в интервал, используйте квадратные скобки. Для исключения значения используйте фигурные скобки.

Тест Сонди: найдите человека, вызывающего у вас страх или отвращение.

Post Views: 702

Перед вами довольно любопытный тест венгерского психиатра Леопольда Сонди, позволяющий выявить самые глубокие внутренние импульсы, находящиеся под гнетом личности. В основе теста лежит отвращение или симпатия к людям, так как, по мнению Сонди, черты, которые нас раздражают или привлекают мы проецируем на окружающих.

Вики: Тест Сонди — это тест, разработанный психологом и психоаналитиком Леопольдом Сонди в 1947 году, целью которого является выявление психических отклонений.

Наблюдая за пациентами клиники, Леопольд Сонди выявил некую закономерность: пациенты общались с людьми у которых были похожие психические отклонения. Бессознательное влечение людей к себе подобным связано с генетической предиспозицией. На чем и основывается теория судьбоанализа Сонди.

Согласно теории, у каждого конкретного человека в течение жизни на почве унаследованных генотипических свойств проявляется обусловленный ими выбор (генотропизм) в отношении тех лиц, которые близки его собственному личностному паттерну. В лаборатории эндокринологии и конституциональной патологии им был собран обширный эмпирический материал с использованием фотографических портретов лиц с серьезными психологическими проблемами и разными психическими заболеваниями. Данные клинико-генетического исследования легли в основу теста восьми влечений, интерпретация которого в виде судьбоанализа базируется на теории бессознательного и психоанализе Зигмунда Фрейда.

Эксперимент состоит в том, что человек должен выбрать наиболее симпатичные и наименее приятные портреты мужчин и женщин. Каждый портрет отражает в наиболее заостренном виде проявление одной из основных восьми базисных человеческих влечений.

Каждое из них в зависимости от формализованных показателей выявляет ту или иную патологию или проблему обследуемой личности.

Сонди полагает, что типологически разные личностные структуры могут быть представлены различными сочетаниями этих 8-ми основных влечений

h — сексуальная недифференцированность;

s — садизм-мазохизм;

е — эпилептоидные тенденции;

hy — истерические склонности;

k — кататонические проявления;

р — паранойяльность;

d — депрессивное состояние;

m — маниакальные проявления.

Основные принципы интерпретации. Судьбоанализ.

Согласно теории влечений Сонди, факторы влечений — это ведущие жизненные радикалы. Они обладают способностью к превращению в разные формы проявления, то есть имеют несколько вариаций, проявляющихся в «возможностях судьбы». Благодаря их способности к метаморфозе человек имеет перспективу множества возможных судеб, а не одной единственной предначертанной наперед. Для понимания множества возможностей реализации в жизни восьми влечений, Сонди утверждает следующее:

Каждому фактору влечения соответствует филогенетическая, родовая, историческая первичная форма проявления, которая корнями уходит в реакции представителей животного мира, особенно сообщества приматов. Только так называемые Я-факторы (k и р) не имеют первичной формы в царстве животных, они свойственны только человеку.
Каждый фактор влечения имеет особую форму проявления в раннем детстве, которая полностью совпадает с прегенитальными парциальными влечениями по Фрейду.
Биполярная природа каждого фактора влечения может манифестироваться уже в первом пубертате (от 3 до 6 лет). Двухполюсные факторы влечений, такие как любовь к личности — любовь к человечеству (h), активность — пассивность (s), Авель — Каин (е), тщеславие — стыдливость (hy), аутизм — отказ от собственного Я (k), инфляция — проекция (р), поиск — прилипание (d), судорожное цепляние — отрыв (m), обуславливает те противоположности, которые обнаруживаются уже в раннем детстве при обследовании данным тестом.
Каждый из восьми факторов влечений обусловливает определенный набор характерологических черт, позволяющих понять типологическую принадлежность обследуемого человека, относимого к норме.
Каждый фактор влечения обусловливает определенный круг профессий, а также и определенный круг общения и интересов.
Каждый фактор влечения обусловливает и определенный тип духовной жизни человека и его деятельности в этой сфере. Отсюда способность методики выявлять глубоко спрятанные пружины в выборе направления социально-культурной жизни человека. Именно эти факторы изначально предопределяют, как считает Сонди, применит ли обследуемый свои духовные способности в сфере культуры и гуманизма (h), техники и цивилизации (s), религии и этики (е), театрального искусства (hy), философии, психологии, математики, филологии (k), поэзии, научных исследований (р), национальной экономики, хозяйства, коллекционирования произведений искусств (d), речевых видов деятельности (оратор, певец) (m). При этом Сонди подчеркивает, что имеет в виду не сублимацию как смещение угрожаемых сексуальных влечений (то есть по Фрейду), а самостоятельно существующие изначально априорные духовные ценности, которые являются контрастными по отношению к низменным (первичным, примитивным) тенденциям и присущи каждому человеку как возможный вариант его судьбы.
Восемь факторов влечений обусловливают именно те совершенно особые болезненные симптомы, которые не выводимы из других факторов или симптомов и могут выступать в виде клинических проявлений при психических расстройствах и нарушении влечений.

Л.Сонди на основании экспериментальных данных утверждал, что социокультурные и этнические различия не влияют на результаты тестирования, так как структура влечений является универсальной для людей любой национальности. Благодаря широким возможностям теста для выявления разных сторон и свойств личности, методика последние годы успешно применяется в психологическом консультировании — семейном, педагогическом, при отборе кадров, в службе охраны, в спорте, в правоохранительных органах. Использование метода портретных выборов значительно помогает составить целостную картину о личности, помогая психологу увидеть сложные механизмы поведения человека, истоки которых лежат в глубинах бессознательного.

 


Тест Сонди | Рупор Петрозаводска

Индивидуально — типологическая интепретация.
*h+.
Сентиментальность, экзальтированность, высокая чувствительность к средовым воздействиям,настроение в значительной мере зависит от отношения окружающих , впечатлительность,эстетическая oриентированность. Повышенная тревожность.
Потребность в понимании,сочувствии и глубокой привязанности pеализуется через отношения с конкретными лицами,в поисках удачи в личной жизни: в семье, в отношениях с женой /мужем/, с детьми, с дpугом.
Стремление найти социальную нишу,позволяющую избегать конфpонтации.
Пpи внешней конформности отмечается бесконфликтная тяга к независимости, стремление уйти от конфликта с окpужающими.
Стиль мышления: веpбально-аналитический .
Выбор профессии: прикладное искусство, артистическая деятельность, служба быта, сфеpа обслуживания, pабота коppеспондента,общественно полезная деятельность, увлечение самодеятельностью, танцами, пением, поэзий,религией. Повар, директор гостиницы, парикмахер, таксист.

*d-.
ТАКЖЕ ВЫРАЖЕНО:
Избирательность в контактах, пессимистичность.
Глубокая привязанность к объекту любви или теплого отношения,постоянство, верность, консерватизм,склонность к отказу от pеализации своих потpебностей pади дpугих. Честность и искренность.
Интровертированность, пассивность.Преобладает мотивация избегания неуспеха.
В стрессе — блокировка, пассивное поведение. Защитная реакция — отказ от желаемого во избежание конфликта, интрапунитивные реакции /повышенное чувство вины/.
Стиль мышления: абстpактно-веpбальный .
Выбор профессии: антиквар,хранитель раритетов, коллекционер,литературный критик, банкир, врач-терапевт,экономист, делопроизводитель, работник библиотеки, музея.
Социальная направленность на сферу духовных ценностей.

*m+.
ТАКЖЕ ВЫРАЖЕНО:
Коммуникабельность, активность, потребность в самоутверждении («Ищущий пpизнания»). Стремление к эмоциональной вовлеченности, впечатлительность, стремление к сотрудничеству
Потребность в причастности интересам референтной группы.
Неустойчивая мотивация, эмоциональная лабильность, экстравертированность, гибкость и общительность в контактах с окружающими.
Стиль мышления: коммуникативный.
Pеакция на стресс эмоционально яркая со склонностью к страхам, механизм защиты психосоматический или вытеснение.
Выбор профессии: преподавание языка, зубной врач,имрессарио, концертмейстер,кинорежиссер, общественник, музыкант,участник самодеятельности, клубная работа.
Социальная направленность: искусство, общественная активность.

Психоаналитическая интерпретация:
*h+.s-.
Пассивность, мягкость характера , уступчивость, развитое чувство вины. Мазохистические тенденции.
*e+.hy+.
Эмоциональная экзальтированность,»аффективное половодье»,связанное с подчеpкнутой совестливостью и обостренным чувством справедливости.
*k-.p0.
Вытестение из сознания истинных влечений.Невротическое развитие с выраженным механизмом переноса.
*d-.m+.
Пролонгированное прилипание к объекту привязанности, возможно — к матери, сопровождающееся инцестуозной любовью или ненавистью всю жизнь. Приверженность однажды взятой на вооружение идее. Гуманистическая направленность. Преданность как черта характера.

Тест Сонди — Колегія Поліграфологів України

Тест Сонди : краткое руководство / сост. В. А. Шаповалов. — К. : Освита Украины, 2016. — 88 с.

 

120 грн.

Для отримання інформації щодо придбання літератури  звертайтесь до редакції Колегії
+38 050 279 61 65 +38 098 484 45 14
[email protected]

 

Данное краткое руководство по тесту Сонди подготовлено для экспресс-овладения процедурой тестирования, протоколирования и интерпретации результатов. Материал сформирован на основе многолетней практики проведения тестирований с помощью теста Сонди и работы с литературой по судьбоанализу. Для использования руководства в повседневной практике, теоретический материал был сокращен, а ценные для описания результатов интерпретационные формулировки собраны из основной судьбоаналитической литературы и систематизированы для удобства психолога-практика. Основной акцент сделан на качественные, диалектические методы интерпретации единичного случая.
Издание предназначено для психологов-практиков, решающих диагностические задачи в своей повседневной деятельности, преподавателей психологии, а также всех тех, кто интересуется психодиагностикой.

 

СОДЕРЖАНИЕ

От составителя . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
ЛЕОПОЛЬД СОНДИ. БИОГРАФИЧЕСКИЙ ОЧЕРК . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
РАЗДЕЛ 1. ТЕОРИЯ ПОБУЖДЕНИЙ И МЕТОДИКА ТЕСТА. . . . . . . . . . . . . . . . . .12
ПРОЦЕДУРА ТЕСТИРОВАНИЯ И ПРОТОКОЛИРОВАНИЯ
РЕЗУЛЬТАТОВ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .12
ТЕОРИЯ ПОБУЖДЕНИЙ В СУДЬБОАНАЛИЗЕ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .16
ОПИСАНИЕ АППАРАТА ТЕСТА . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19
РАЗДЕЛ 2. ПСИХОЛОГИЯ ФАКТОРОВ И ВЕКТОРОВ ПОБУЖДЕНИЙ . . . . . . 20
СЕКСУАЛЬНОЕ ПОБУЖДЕНИЕ. ВЕКТОР S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
h — ЭРОС-ФАКТОР . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21
Анализ позитивных реакций (+h) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
Анализ негативных реакций (–h) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
Анализ амбивалентных реакций (±h). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
Анализ нулевых реакций (0h) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
Экзистенциальные варианты проявления h-фактора . . . . . . . . . 24
s — ТАНАТОС-ФАКТОР . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
Анализ позитивных реакций «s» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
Анализ негативных реакций «s» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
Анализ амбивалентных реакций «s» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .27
Анализ нулевых реакций «s» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
Экзистенциальные варианты проявления s-фактора . . . . . . . . . 28
Анализ векторных картин S . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29
ПАРОКСИЗМАЛЬНОЕ ПОБУЖДЕНИЕ. ВЕКТОР Р . . . . . . . . . . . . . . . . . .31
е — ЭТИЧЕСКИЙ ФАКТОР . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
Анализ позитивных реакций «е» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
Анализ негативных реакций «е» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
Анализ амбивалентных реакций «е» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
Анализ нулевых реакций «е» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
Экзистенциальные варианты проявления е-фактора . . . . . . . . . 35
hy — МОРАЛЬНЫЙ ФАКТОР . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35
Анализ позитивных реакций «hy» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
Анализ негативных реакций «hy» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
Анализ амбивалентных реакций «hy» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
Анализ нулевых реакций «hy» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
Экзистенциальные варианты проявления hy-фактора . . . . . . . . .37
Анализ векторных картин Р . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
Я-ПОБУЖДЕНИЕ. ВЕКТОР SCH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
k — ЭГОСИСТОЛА ФАКТОР . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41
Анализ позитивных реакций «k» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42

Анализ негативных реакций «k» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
Анализ амбивалентных реакций «k» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
Анализ нулевых реакций «k» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
Экзистенциальные варианты проявления k-фактора . . . . . . . . . 44
р — ЭГОДИАСТОЛА ФАКТОР . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
Анализ позитивных реакций «р» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
Анализ негативных реакций «р» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
Анализ амбивалентных реакций «р» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46
Анализ нулевых реакций «р» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
Экзистенциальные варианты проявления р-фактора . . . . . . . . . 47
Анализ векторных картин Sch . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
ПОБУЖДЕНИЕ К КОНТАКТАМ. ВЕКТОР С. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54
d — ФАКТОР ДОВЕРИЯ-НЕДОВЕРИЯ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 55
Анализ позитивных реакций «d» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 56
Анализ негативных реакций «d» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 56
Анализ амбивалентных реакций «d» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
Анализ нулевых реакций «d» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .57
Экзистенциальные варианты проявления d-фактора . . . . . . . . . .57
m — ФАКТОР ПРИВЯЗАННОСТИ И РАЗРЫВА СВЯЗЕЙ . . . . . . . . . . . 58
Анализ позитивных реакций «m» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 58
Анализ негативных реакций «m» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59
Анализ амбивалентных реакций «m» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59
Анализ нулевых реакций «m» . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60
Экзистенциальные варианты проявления m-фактора . . . . . . . . 60
Анализ векторных картин С . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .61
РАЗДЕЛ 3. МЕТОДЫ ИНТЕРПРЕТАЦИИ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 64
ГЛАВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ИНТЕРПРЕТАЦИИ
ПРОФИЛЕЙ ПОБУЖДЕНИЙ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 64
МЕТОД КРАЯ И СЕРЕДИНЫ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .66
КОМПЛЕМЕНТАРНЫЙ МЕТОД. АНАЛИЗ
«ПРОВОДНИКА И «СЛЕДОХОДА . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 70
Критический очерк относительно модификаций
стимульного материала теста Сонди . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 76
КРАТКИЙ СЛОВАРЬ СУДЬБОАНАЛИТИЧЕСКИХ ТЕРМИНОВ . . . . . . . . . . . . . 79
ЛИТЕРАТУРА . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
ПРИЛОЖЕНИЕ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 84

Моделирование и проверка свойств кластеризации в автомобильном специальном сетевом протоколе с помощью Event-B

В этом разделе представлен основной результат этой работы, который представляет собой формальную модель схемы кластеризации цепочки-ответвления-листа, позволяющей проверять ее свойства в сети VANET. . Что касается каждой схемы кластеризации, несколько правил учитываются механизмами, участвующими в построении как кластеров, так и всей магистрали. Например, уникальность выбора узла ветвления для каждого конечного узла является фундаментальным свойством организации «цепочка-ветвь-лист» 24 .Однако без формального описания схемы CBL такое требование можно только представить, но не выразить формально или проверить. Оценка схемы кластеризации CBL подразумевает два этапа: проверка требований для проверки того, что спецификация протокола соответствует функциональным потребностям, предусмотренным разработчиком 25 , и проверка согласованности для обеспечения того, чтобы схема кластеризации не вносила противоречий в отношения, связывающие узлы. Моделирование на основе событий особенно подходит для разработки протоколов.Event-B — это именно формальный метод, основанный на событиях, который продемонстрировал свою способность преодолевать сложность проектирования системы путем последовательных усовершенствований 15,26 . Поэтапное уточнение создает модель «правильное построение», формально доказывая различные свойства, введенные на каждом этапе 26 . Что касается CBL, Event-B предоставляет инструменты, необходимые для выполнения инкрементной проверки, проверяя свойства и ограничения, определенные на каждом этапе выполнения. Различные этапы выполнения характеризуются введенными событиями.Чтобы гарантировать сохранение инвариантов этими событиями, Event-B определяет концепцию обязательства доказательства. Следовательно, подход, предложенный в этой статье, должен позволить проверить и доказать правильность протокола CBL, а также его требований и свойств. Затем, после проверки протокола CBL, предложенная модель гарантирует, что ее выполнение не столкнется с ошибками или несогласованностью.

Формальное описание организации CBL в VANET

В этом разделе мы сначала описываем функционирование CBL вместе с соответствующими формальными определениями.CBL — это распределенный алгоритм, выполняемый каждым узлом VANET 27 , учитывая, что последний может не иметь глобальных сведений о специальной сети. Таким образом, узел может напрямую связываться только со своими односкачковыми соседями, которые используются в качестве маршрутизаторов для достижения остальной части сети. Полное описание функционирования CBL представлено в работе. 24 . На рисунке 1 показаны различные элементы структуры CBL в сети VANET, которые можно резюмировать следующим образом:

  • Конфигурация дороги В любой конфигурации дороги CBL создает по одной магистрали в каждом направлении движения.В нашем примере, трехполосной автомагистрали с двусторонним движением, CBL строит две отдельные магистрали (рис. 1).

  • Узел ветвления — это головной узел кластера, выбранный другими узлами (ветвью или листом). Только ему разрешено ретранслировать широковещательный трафик на всю сеть, через свою нисходящую ветвь, восходящую ветвь или и то, и другое.

  • Листовой узел — это обычный узел, который присоединяется к ближайшему узлу ветвления.Если узел ветвления не обнаружен, конечные узлы выполняют процесс выбора ветвления, чтобы выбрать один из них.

  • Цепочка — это виртуальная магистраль, состоящая из последовательности узлов ветвления. В идеале должна быть создана одна цепочка на каждое направление движения. В контексте продольных дорог, таких как автомагистрали, цепь ведет себя как виртуальная магистраль, аналогичная той, которая должна быть получена с фиксированной инфраструктурой. Он предоставляет узлам ветвления путь для более чем односкачковой связи.

В этой работе термин Узлы относится к набору всех узлов в сети. Без потери общности, мы сосредоточимся в этой статье на двух типах пакетов, которых достаточно для описания функционирования CBL. Пакеты приветствия используются несколькими протоколами VANET для обнаружения окрестностей. Другой тип пакета относится к трафику приложений. Термин Hello относится к набору всех пакетов приветствия, отправленных во время сценария VANET. Мы формально определяем ссылки VANET, используя следующие функции:

$$ \ begin {выровнены} & links \ in {} \ mathbb {P} (Узлы \ mathbin \ times {} Узлы), \ end {выровнены} $$

(1)

$$ \ begin {align} & links \ cap {} (Nodes \ mathbin \ lhd {} id) = \ mathord \ varnothing {}. \ end {align} $$

(2)

Элемент \ (n1 \ mapsto {} n2 \) из набора ссылок (\ (n1 \ mapsto {} n2 \ in {} links \)) указывает, что узел n 1 получил приветственный пакет отправлено узлом n 2.Мы формально определяем локальных соседей узлов, используя следующую функцию:

$$ \ begin {выровненные} соседи \ in {} Узлы \ mathbin \ rightarrow {} \ mathbb {P} {} (Узлы). \ end {align} $$

(3)

Для данного узла n должно выполняться следующее свойство:

$$ \ begin {align} \ {n \} \ mathbin \ times neighbors (n) \ substeq \ {n \} \ mathbin \ lhd {} ссылок. \ end {align} $$

(4)

Одним из основных данных, требуемых CBL, является положение узла.Мы предполагаем, что каждый узел знает о своем местоположении через глобальную систему позиционирования, такую ​​как GPS или Galileo. Однако мы избегаем любой наземной инфраструктуры локализации, поскольку специальные сети не должны полагаться на какую-либо инфраструктуру. Положение узла — это двумерный вектор, который узел передает своим соседям посредством пакетов приветствия. Мы формально моделируем данные о позициях узлов, используя следующую функцию:

(5)

Рассмотрим узел n , набор positionTable ( n ) включает в себя позиции n и его локальных соседей.Узел может быть расположен на нисходящей или восходящей стороне любого из своих соседей. Мы формально определяем нисходящих / восходящих соседей узлов, используя следующие функции:

$$ \ begin {выровнено} & down \ in {} Nodes \ mathbin \ rightarrow \ mathbb {P} (Узлы), \ end {выровнены} $$

(6)

$$ \ begin {align} & up \ in {} Узлы \ mathbin \ rightarrow \ mathbb {P} (Узлы). \ end {align} $$

(7)

Чтобы определить, является ли узел восходящим или нисходящим от другого, мы используем следующий оператор:

$$ \ begin {align} DIFF = (\ lambda {} (a \ mapsto {} b) \ mapsto {} (c \ mapsto {} d) \ cdot {} \ {a, b, c, d \} \ substeq \ mathbb N | (a — c)).\ end {align} $$

Пусть n 1 и n 2 будут двумя соседними узлами, и пусть p1 и p2 будут их соответствующими позициями. Мы устанавливаем следующие правила:

Когда узел не получает приветственное сообщение от соседа в течение определенного периода времени, этот сосед считается недоступным и удаляется из таблицы соседей. Этот временной интервал, называемый временем истечения срока действия соседа, определяется как:

$$ \ begin {align} Neighbor \ _expiry \ _time \ in {} \ mathbb N {}.\ end {align} $$

(8)

В схеме кластеризации CBL узел может быть либо листом, либо узлом ветви. Мы формально определяем типы узлов следующим образом:

(9)

Рисунок 1

Пример двух цепей CBL на двухстороннем шоссе.

Узел ветвления n (\ (hasType (n) (n) = 1 \)) — это головной узел кластера, выбранный другими узлами в его окрестности с одним переходом. Он отправляет приветственные сообщения, как и каждый узел.Листовой узел n (\ (hasType (n) (n) = 0 \)) — это обычный узел, который должен подключаться к ближайшему узлу ветвления. Цепочка CBL — это последовательность узлов ветвления. Формально мы определяем эту цепочку узлов ветвления следующим образом:

$$ \ begin {align} & chainUP \ in {} Узлы \ mathbin \ rightarrow {} \ mathbb {P} (Узлы \ mathbin \ times {} Узлы), \ end {выровнено} $$

(10)

$$ \ begin {align} & chainDO \ in {} Узлы \ mathbin \ rightarrow {} \ mathbb {P} (Узлы \ mathbin \ times {} Узлы).\ end {align} $$

(11)

Эти две функции семантически противоположны. Следовательно, функция chainUP (соответственно chainDO ) определяет локальную восходящую (соответственно нисходящую) цепочку узлов ответвления. Если ветвь b2 является восходящим узлом другой ветви b1, то b1 является нижестоящим узлом b2. В организации CBL каждый листовой узел должен выбрать свою связанную ветвь. Мы формально определяем этот выбор следующим образом:

$$ \ begin {align} branchChoice \ in {} Nodes \ mathbin \ rightarrow {} \ mathbb {P} (Узлы \ mathbin \ times {} Nodes).\ end {align} $$

(12)

Для данного узла ветвления n , branchChoice (n), chainUP (n) (соответственно, chainDO) относятся к выбору ветки (если выбирающий узел является листовым узлом) или к восходящим (соответственно, нисходящим) узлам ветвления (если выбирающий узел является узлом ветвления), включенный в таблицу соседей n . Пакет приветствия может содержать различные данные об отправителе, а именно положение узла, тип узла и, в зависимости от последнего, выбранную ветвь вверх / вниз или выбор ветки. Для формального определения всех этих данных мы используем следующие функции:

(13)

(14)

(15)

(16)

(17)

Для данного пакета приветствия h , отправленного узлом n , helloPosition ( h ), helloBrChoice ( h ), helloChainUP ( h ), helloChainDO ( h ) и helloSrType ( h ) представляют соответственно наборы позиции, выбора ветви, выбранной ветви вверх, выбранной ветви вниз и типа n и его соседей.Все эти данные очень полезны при построении схемы CBL. Время соединения — это ожидаемая продолжительность связи двух узлов в зависимости от их движения. Более формально мы определяем следующую функцию:

(18)

Свойства и правила CBL

Теперь, когда организация CBL прояснилась, можно выразить ожидаемые свойства и правила, установленные для этой цели. Основные требования и результирующие свойства, ожидаемые от организации CBL в сети VANET:

  • REQ 1 Если у узла нет локального соседа, он должен быть листом.

  • REQ 2 Выбор узла ветвления выполняется только в соответствии с конечными узлами.

  • REQ 3 Выборы самоуправления невозможны.

  • REQ 4 Каждая ветвь должна иметь не более одного соседа по нисходящей ветви.

  • REQ 5 Каждая ветвь должна иметь не более одного соседа восходящей ветки.

  • REQ 6 Каждая ветвь должна избираться по крайней мере другим узлом (ветвью или листом).

  • REQ 7 Узел, имеющий нисходящую ветвь, должен относиться к типу ветвь.

  • REQ 8 Избирательный узел восходящей ветви должен быть ветвящимся.

  • REQ 9 Если узел n 1 является нисходящей ветвью узла n 2, то n 2 является восходящей ветвью n 1.

  • REQ 10 Восходящая ветвь узла должна быть одним из его восходящих соседей.

  • REQ 11 Нисходящая ветвь узла должна быть одним из его нисходящих соседей.

  • REQ 12 Один из соседей каждого конечного узла должен стать ветвью.

При выборе узлов ветвления должны выполняться различные ограничения, такие как следующие правила выбора узлов (NER):

  • NER1 Самостоятельное избрание узла невозможно (т. Е. Выбранный узел и выбирающий должны быть разными).

  • NER2 Выбранный узел должен быть соседом своего выбирающего узла.

  • NER3 Выбранный узел должен быть восходящим соседом своего узла выборной ветви.

  • NER4 Узел ветви должен иметь не более одной восходящей соседней ветви.

  • NER5 Когда выбирающий узел является конечным узлом, у которого нет соседнего узла ветвления, он должен выбрать соседнего конечного узла, имеющего максимальное время соединения, в качестве своего выбора ветви.

  • NER6 Когда выбирающий узел является узлом ветвления, у которого нет соседнего узла ветвления восходящего потока, он должен выбрать соседний узел восходящего потока, имеющий максимальное время соединения, в качестве своего восходящего узла ветвления.

Все узлы изначально являются листовыми. Некоторые из узлов можно превратить в узлы ветвления, в то время как другие необходимо сохранить как листовые узлы. Кроме того, ветку можно превратить в лист. Правила смены типа (TCR) следующие:

  • TCR1 Если листовой узел выбирается другим узлом, он должен быть превращен в ветвь.

  • TCR2 Если выбирающий узел является ветвью, то он должен быть добавлен в цепочку как нисходящая ветвь выбранного.

  • TCR3 Узел ответвления, который занимает свою нижележащую избирательную ветвь, должен быть превращен в лист.

Построенная модель CBL (CCM4CBL)

В этом разделе представлена ​​предлагаемая модель Event-B схемы кластеризации CBL, которая реализует вышеупомянутые свойства и правила (см. Раздел «Свойства и правила CBL» ).Рисунок 2 иллюстрирует архитектуру полученной модели. Он показывает три уровня абстракции, которые будут подробно описаны в следующих подразделах. Два первых уровня могут использоваться для моделирования любого другого протокола маршрутизации VANET.

Рисунок 2

Архитектура модели Event-B для CCM4CBL.

Уровень 1: базовая модель протокола маршрутизации (CBL_c0, CBL_m0)

Эта модель вдохновлена ​​Ref. 18 — это формальная модель Event-B базового протокола маршрутизации. Он включает в себя определения набора узлов, связей, а также событий, связанных со статусом пакетов и операциями (рис.3). Его можно расширить и усовершенствовать, чтобы смоделировать любой другой протокол маршрутизации. Хотя мы переписали модель (рис. 4), аналогичная имеется в литературе 23 . Эта модель была реализована через контекст CBL_c0 и машину CBL_m0 , показанную на рис. 2.

Рис. 3

Диаграмма состояний процесса передачи пакетов.

Рисунок 4

Уровень 1: модель основного протокола, включая машину и контекст.

Уровень 2: моделирование динамики и связи узла VANET (CBL_c1, CBL_m1)

Этот второй уровень абстракции модели CCM 4 CBL формально определяет концепции, связанные с динамикой узла VANET и связью, в частности, управление соседством, позиционирование узлов в дорожном движении и пакетном вещании.Он состоит из машины \ (CBL \ _m1 \) и контекста \ (CBL \ _c1 \) (см. Рис. 5). В дополнение к определениям в разделе «Формальное описание организации CBL в VANET» контекст \ (CBL \ _c1 \) расширяет начальный контекст \ (CBL \ _c0 \), вводя конечный набор всех пакетов приветствия (\ (Привет \ subset Packets \)). Учитывая контекст \ (CBL \ _c1 \), машина \ (CBL \ _m1 \) уточняет \ (CBL \ _m0 \), вводя переменные, инварианты и события, моделирующие связь узла VANET, движение транспортных средств в дорожном движении и окрестности. открытие и управление.

Рисунок 5

Уровень 2: моделирование динамики и связи узлов VANET.

Моделирование связи узла VANET

Связь в VANET включает в себя не только пересылку пакетов приложений, но также широковещательную рассылку пакетов приветствия для обнаружения соседства и обнаружения каналов. Чтобы формально моделировать специальные коммуникации в VANET, в дополнение к определениям, предложенным в разделе «Формальное описание организации CBL в VANET», мы вводим следующие переменные:

  • nextNodeToReceiver переменная, определяющая следующий узел-получатель каждого отправленного пакета (см. inv 2, рис.5). Эта переменная используется для пересылки пакетов от источника к месту назначения.

  • lastGotHello : переменная, определяющая последнее приветствие, полученное узлом от другого. Мы определяем эту переменную следующим образом:

  • время переменная, определяющая местное время каждого узла (см. Inv4, рис. 5) 24 .

  • Время приема Переменная, определяющая время приема пакета в соответствии с его узлом назначения. Мы формально определяем эту переменную, используя инвариант, как следующую функцию:

  • neighbourTime переменная, определяющая время, когда узел становится соседом другого. Мы формально определяем эту переменную как следующую функцию:

Эти переменные time , acceptTime и neighbourTime в основном используются для управления доступностью соседей узла, как это будет подробно описано на этапе управления соседством. Также уточняются абстрактные события sendPacket , forwardPacket и receivePacket . Для события отправки пакета предлагаются две усовершенствованные версии, а именно sendPacket и broadcast. Первый используется для отправки пакетов приложений, а второй позволяет транслировать некоторые определенные пакеты, такие как hello. Как показано на фиг. 6, абстрактный параметр назначения исчез из события пакетной широковещательной передачи, в то время как были добавлены новые средства защиты и действия.Кроме того, включен пункт-свидетель ( с ), чтобы определить связь между абстрактным событием и уточненным. Этот свидетель заявляет, что широковещательные пакеты могут быть получены любым узлом в специальной сети, за исключением отправителя. Это требует замены всех вхождений пунктов назначения в предложении действия на \ (Nodes \ setminus {} \ {source \}. \) Действие , действие 6 иллюстрирует пример такой замены. Guard grd 3 гарантирует, что TTL пакета Hello-type равен 1 во время широковещательного процесса, чтобы избежать его пересылки. Действие Действие 7 выражает, что отправитель пакета приветствия должен транслировать свое текущее положение всем своим соседям. Новый параметр T , представляющий местное время в узле назначения, и новые средства защиты добавляются в уточненную версию события приема пакета. Предложение защиты расширяется следующими тремя предикатами:

  • \ ((packet \ notin {} Hello \ mathbin \ Rightarrow {} packetLocation (destination \ mapsto {} packet) \ mapsto {} destination \ in {} cls (links)), \)

  • \ (T \ in {} \ mathbb N {} \ wedge {} время (место назначения) \ le {} T, \)

  • \ ((packet \ in {} Hello \ mathbin \ Rightarrow {} destination \ mapsto {} packet \ mapsto {} travel \ notin {} \) packetStatus ),

, где cls относится к математическому оператору закрытия. {i-1}), & {} \ text {if} i \ ge 1. \ end {array} \ right. } \ end {align} $$

Рис. 6

Событие широковещательного пакета.

Действия, добавленные при доработке события приема, обновления времени, , acceptTime и lastGotHello переменных. В уточненном событии пересылки пакетов ( forwardPacket ) мы вводим новый параметр nextNode (nextNode \ (\ in {} \) Nodes), новые средства защиты и новое действие. Добавленные средства защиты используются для определения каналов связи между источником / получателем пакета и узлом пересылки, в то время как действие обновляет переменную nextNodeToReceiver следующим образом:

Моделирование движения транспортного средства

Событие updatePosition определяется в \ ( CBL \ _m1 \) для моделирования движения транспортных средств (описанных как элементы множества узлов в нашей модели) по дороге.Как показано на рис.7, это событие принимает в качестве входных параметров следующие параметры:

  • Узел представляет транспортное средство, положение которого должно быть обновлено.

  • \ (XY \ in {} \ mathbb N {} \ mathbin \ times {} \ mathbb N {} \) относится к новой позиции узла.

  • newUp и newDown обозначают обновленных восходящих и нисходящих соседей узла.

Последние два параметра проверяются автоматически в зависимости от положения нового узла с использованием охранников grd 3 и grd 4. Событие обновляет переменную positionTable , заменяя positionTable (узел ) набором, состоящим из элемента \ (\ {node \ mapsto {} XY \} \). Действия act 2 и act 3 соответственно обновляют восходящие ( newUp, ) и нисходящие ( newDown, ) соседи узла.

Рисунок 7

Событие «Обновление положения автомобилей».

Моделирование управления локальным соседством

Когда узел получает пакет приветствия, он должен обновить свою таблицу соседей в соответствии с ее содержимым. Чтобы смоделировать это формально, мы добавляем событие updateNeighbor в машину \ (CBL \ _m1 \) (см. Рис. 8). Это событие имеет шесть параметров, три из которых ( newUp , newDown и H ) автоматически вычисляются средствами защиты на основе первых четырех параметров.Первые два параметра — это источник ( сосед ) и его позиция XY , содержащаяся в последнем приветственном сообщении H , полученном от него. Параметры H, (последнее полученное приветствие), newUp, (обновленные узлы восходящего потока) и newDown (обновленные узлы нисходящего потока) используются просто для упрощения. Два других параметра — это целевой узел и его текущее время T . Вышеуказанные параметры вводятся через охранников.Как указано в работе Ref. 24 , каждый узел периодически рассылает пакеты приветствия, чтобы объявить о своей доступности всем своим соседям. Таким образом, когда узел не получает пакет приветствия от соседа в течение периода времени, равного \ (neighbour \ _expiry \ _time \), этот сосед считается недоступным и удаляется из таблицы соседей узла. Более формально, мы создаем событие dropNeighbor на машине \ (CBL \ _m1 \) (см. Рис. 8). В качестве входных параметров событие dropNeighbor имеет узел и его недоступный сосед.Эти параметры четко определены охранниками grd 1, grd 2 и grd 3. Охранник grd 3 проверяет предварительное условие недоступности соседнего узла перед применением необходимых действий.

Рисунок 8

События обновления / удаления соседа.

Уровень 3: моделирование свойств и правил CBL (CBL_c2, CBL_m2)

Последний уровень абстракции нашей модели CCM4CBL представляет определенные свойства и правила схемы кластеризации CBL в сети VANET.Как показано на рис. 9, этот уровень реализации состоит из машины \ (CBL \ _m2 \), которая видит контекст \ (CBL \ _c2 \).

Рисунок 9

Уровень 3: моделирование свойств и правил CBL.

Рисунок 10

Контекст \ (CBL \ _c2 \) расширяет контекст второго уровня (\ (CBL \ _c1 \)), вводя понятие времени соединения узла ( Ctime ). Последнее аксиоматически определяется в соответствии с определением, предложенным в разделе «Формальное описание организации CBL в VANET».На рисунке 9 также изображена машина, которая моделирует свойства и правила CBL. Эта машина видит контекст \ (CBL \ _c2 \) и уточняет машину \ (CBL \ _m1 \). Представление уточнений организовано в четыре этапа, которые включают: (1) моделирование свойств CBL, (2) моделирование выбора узлов ответвления, (3) уточнение специальной связи в VANET и (4) моделирование обновления цепочки CBL.

Таблица 1 Формальное моделирование свойств CBL с Event-B в качестве инвариантов.
Моделирование свойств CBL

Новые переменные вводятся в машину \ (CBL \ _m2 \) для формального моделирования конкретных свойств и правил CBL:

  • hasType переменная, определяющая тип узла (ветвь или лист).

  • branchChoice переменная, определяющая выбор ветви для узла.

  • chainUP переменная, определяющая узел ветвления восходящего направления.

  • chainDO переменная, определяющая нисходящий ветвящийся узел.

Тип каждой переменной определяется с использованием инварианта типизации в соответствии с определениями, представленными в разделе «Формальное описание организации CBL в VANET». С учетом введенных переменных, констант и наборов свойства CBL ( req 1, req 2, \ (\ ldots \), req 12) могут быть формально выражены как инварианты в Event-B. Эти инварианты проиллюстрированы в Таблице 1.

Выбор узлов ветви моделирования

Этот выбор является ключевым шагом в построении структуры CBL.Как указано в работе Ref. 24 , возможны два типа выборов: выбор ветви по конечным узлам и выбор восходящей ветви по узлам ветвления. Чтобы смоделировать эти две операции формально, мы создали событие electBranch , взяв на вход три параметра (см. Рис. 10). Первые два параметра, избрание и избранное , относятся как к избирающим, так и к избранным узлам. Другой параметр, V , представляет собой двоичное число (\ (V \ in {} \ {0,1 \} \)), используемое для упрощения проверки правил NERi при выборе узлов ветвления.Для достижения этой проверки каждое правило NERi определяется как средство защиты в событии electBranch . Каждый из этих охранников подробно описан ниже. Первое правило, NER 1, гласит, что узел (лист или ветвь) не может выбрать себя как ветвь, а второе ( NER 2) оговаривает, что выбранный узел должен быть соседом его выбирающего. Эти два правила определены следующим образом:

$$ \ begin {Выровнены} избранные \ ne {} выборы \ клин {} избранные \ в {} соседи (выборы) \ клин {} ~ выборы \ mapsto {} 0 \ in { } hasType (выбор).\ end {align} $$

Правило NER 3 гласит, что выбранный узел должен быть восходящим соседом своего выбирающего узла, который должен быть ветвью. Это правило выражается через следующий предикат:

$$ \ begin {выравнивание} избрание \ mapsto {} 1 \ in {} hasType (избрание) ~ \ mathbin \ Rightarrow {} избранное \ in {} up (избрание). \ end {align} $$

Правило NER 4 используется для обеспечения уникальности цепочки CBL, чтобы избежать параллельных цепочек в одной и той же области. Следовательно, он выражает, что узел ветвления должен иметь не более одной восходящей соседней ветви.Мы определяем это правило следующим образом:

$$ \ begin {align} V = 1 \ mathbin \ Rightarrow {} chainUP (выбор) \ mathbin \ rhd {} up (выбор) = \ mathord \ varnothing {}. \ end {align} $$

Правило NER 5 гласит, что, когда нет соседнего узла ветвления, выбирающий лист должен выбрать соседа, имеющего максимальное время соединения с самим собой. Мы формально определяем это ограничение с помощью следующего предиката:

$$ \ begin {выравнивание} & selected \ mapsto {} 0 \ in {} hasType (выбор) \ wedge {} V = 0 \\ & \ quad \ mathbin \ Rightarrow { } \ lnot {} (\ exists {} n \ cdot {} n \ in {} соседи (выбор) \ wedge {} выбор \ mapsto {} n \ in {} dom (Ctime) \ wedge {} Ctime (выбор \ mapsto {} selected) \ end {align} $$

Правило NER 6 касается времени соединения выбранной восходящей ветви. Это правило применяется, когда выбирающий узел ветви не имеет соседа восходящего типа ветви. Формально он определяется аналогично правилу NER 5 следующим образом:

$$ \ begin {выровнено} & \ {selected \ mapsto {} 0 \} \ substeq {} hasType (избрание) \ wedge {} V = 1 \ \ & \ quad \ mathbin \ Rightarrow {} \ lnot {} (\ exists {} n \ cdot {} n \ in {} up (выбор) \ wedge {} избирает \ mapsto {} n \ in {} dom (Ctime ) \ wedge {} Ctime (избрание \ mapsto {} избранное)

Уточнение связи между узлами VANET

Как указывалось ранее, CBL — это распределенный алгоритм, который строит магистраль из узлов ветвления и кластеры конечных узлов вокруг последних. Для достижения этой задачи CBL полагается только на информацию, передаваемую через пакеты приветствия. Пакет приветствия содержит информацию об отправителе, такую ​​как его положение, его тип (ветвь или лист), его выбор ветвления, когда он является конечным узлом, его восходящие и нисходящие узлы ветвления, когда он является узлом ветвления, и его прямые соседи. Добавлены следующие переменные:

  • helloBrChoice переменная, определяющая выбор ветви отправителя приветствия.

  • helloChainUP переменная, определяющая восходящую ветвь отправителя приветствия.

  • helloChainDO переменная, определяющая нисходящую ветвь отправителя приветствия.

  • helloSrType переменная, определяющая тип отправителя приветствия (ветвь или лист).

Эти переменные определены как частичные функции с использованием инвариантов в машине \ (CBL \ _m2 \) в соответствии с их определением (см. Раздел «Формальное описание организации CBL в VANET»). Событие пакетной широковещательной передачи уточняется, чтобы интегрировать информацию, содержащуюся в приветственном пакете. Защита, связанная со свойством CBL REQ 12, добавляется для принудительного применения оконечных узлов, у которых есть соседи, чтобы они могли выбирать свои узлы ветвления перед широковещательной рассылкой своего пакета приветствия:

$$ \ begin {align} соседи (источник) \ ne {} \ mathord \ varnothing {} \ wedge {} source \ mapsto {} 0 \ in {} hasType (источник) \ mathbin \ Rightarrow {} ~ 1 \ in {} hasType (источник) [соседи (источник)] . \ end {align} $$

Новые действия замены также представлены в усовершенствованной версии события broadcast , чтобы обновить статус переменных helloBrChoice , helloChainUP , helloChainDO и helloSrType следующим образом:

Моделирование обновления цепочки CBL

Несколько событий запускают обновление цепочки CBL локально на уровне узла VANET, например, недоступность некоторых соседей или обгон узла ветвления его восходящим узлом ветвления.В этой работе мы рассматриваем три события, а именно: сосед, который больше не доступен, изменения в позициях узлов и полученный пакет приветствия, указывающий на некоторые изменения в цепочке CBL (выбор новой ветви вверх / вниз, выбор ветви, так далее. ). Для формального моделирования этих событий мы уточняем updatePosition , dropNeighbor и updateNeighbor абстрактные события и вводим два новых события, turnIntoBranch и turnIntoLeaf , которые используются для изменения типа узла в соответствии с правилами TCR. (Раздел «Свойства и правила CBL»).Переменная updateNeighbor уточняется следующим образом:

$$ \ begin {align} hasType (node) &: = {} newTypes \\ chainDO (node) &: = {} newChainDO \\ chainUP (node) &: = {} newChainUP \\ branchChoice (node) &: = {} newBrChoice \ end {align}, $$

, где newTypes , newChainDO , newChainUP и newBrChoice относятся к параметрам, введенным в уточнении события. , и являются новыми значениями функций hasType ( узел ), chainDO ( узел ), chainUP ( узел ) и branchChoice ( узел ) после обновления или добавления информации ( тип, выбор ветки и тд) о соседе. Например, значения параметров newChainUP и newChainDO вычисляются следующим образом:

Остальные параметры вычисляются аналогично. Уточненное событие dropNeighbor позволяет локальное обновление цепочки CBL в случае недоступности соседа. По сравнению с его абстрактной версией, он вводит следующие действия:

Обновление положения узла Ni требует проверки, не обогнал ли Ni узел Nj , который выбрал его в качестве узла восходящей ветви.В этом случае звено цепи между Ni и Nj должно быть удалено путем добавления действия в событие updatePosition :

$$ \ begin {align} chainUP (node): = {} newChainUP \ end { выровнено} $$

, где newChainUP — новый параметр, относящийся к обновленному узлу ветвления восходящего потока, автоматически вычисляемый следующим образом:

(19)

При выполнении следующих условий (выраженных в виде защиты):

Событие turnIntoBranch позволяет превратить листовой узел в узел ветвления, если он был выбран хотя бы одним из его соседей (см. Grd1, рис.11). Это изменение типа происходит после получения пакета приветствия от соседа. Guard grd 3 проверяет свойство CBL req 6, в котором указано, что самоизбрание не разрешено (узел не может быть выбран сам по себе). Событие turnIntoLeaf позволяет превратить узел ветвления в лист, когда последний догонит свой выбирающий узел ветвления ниже по потоку после обновления положения узла (см. Рис. 11). Guard grd 1 определяет предварительное условие для изменения этого типа в соответствии с правилом TCR 3.

Рис. 11

ЯМР 19F-исследование лейцин-специфического связывающего белка Escherichia coli: мутагенез и отнесение остатков, меченных 5-фтортриптофаном | Белковая инженерия, дизайн и отбор

Абстрактные

Рецептор l-лейцина Escherichia coli представляет собой водный белок и первый компонент в отдельном пути переноса гидрофобных аминокислот. Связывание L-лейцина вызывает конформационное изменение, которое позволяет рецептору стыковаться с компонентами мембраны.Чтобы исследовать индуцированные лигандом конформационные изменения и связывающие свойства этого белка, мы использовали 19 F ЯМР для исследования четырех остатков триптофана, расположенных в двух долях белка. Четыре остатка триптофана были помечены 5-фтортриптофаном и назначены сайт-направленным мутагенезом. Спектры ЯМР 19 F частично свободных от лигандов белков показывают расширенные пики, которые становятся более резкими при связывании l-лейцина, показывая, что меченый белок дикого типа и мутанты являются функциональными.Титрование 1-фенилаланина в белок дикого типа, меченный 5-фтортриптофаном, показывает наличие закрытых и открытых конформеров. Исследования денатурации, вызванной мочевиной, подтверждают результаты ЯМР, согласно которым белок дикого типа связывает l-фенилаланин по-другому с l-лейцином. Наши исследования показали, что мутации триптофана и фенилаланина в структурных единицах, связанных со связывающим карманом, вызывают тонкие изменения в окружении Trp18, расположенного непосредственно в связывающей щели.

Введение

Периплазматические рецепторы Escherichia coli — идеальные белки, которыми можно манипулировать с целью изучения способа связывания гидрофобных лигандов, представляющих интерес в фармацевтической промышленности и медицине.Особенно интересны два периплазматических компонента транспортной системы аминокислот с разветвленной цепью в E.coli , а именно лейцин-изолейцин-валин-связывающий белок (LIV) и лейцин-специфический связывающий белок (LS). Эти водорастворимые рецепторы локализуются в периплазматическом пространстве и перемещают небольшие молекулы в цитоплазму бактерий. Метод транспортировки основан на распознавании связывающего белка с мембраносвязанными компонентами. Изменение третичной структуры от открытой к закрытой форме жизненно важно для этого взаимодействия (Luck and Falke, 1991a; Shilton et al ., 1996). Механизм закрытия расщелины — тема всей природы. Таким образом, LIV использовался в качестве модели для многочисленных исследований требовательных человеческих белков, таких как N-концевой домен метаботропных рецепторов глутамата группы I и рецептор N -метил-d-аспартат (Bessis et al . , 2000; Паолетти и др. ., 2000; Линч и Гуттманн, 2001).

LIV и LS примерно на 80% идентичны по содержанию аминокислот и имеют практически одинаковую трехмерную структуру в нелигандированной форме (Sack et al ., 1989b). Однако два периплазматических рецептора имеют разные специфичности в отношении лигандов, и диапазон лигандов для LS намного шире, чем первоначально наблюдалось при первоначальных исследованиях белков (Landick and Oxender, 1985; Adams et al ., 1991). LS связывает лейцин и фенилаланин, а также фторированные аналоги обеих этих аминокислот (Rahmanian et al ., 1973; Adams et al ., 1991; Luck and Johnson, 2000). LIV распознает лейцин, изолейцин и валин и, в меньшей степени, треонин, серин и аланин, но на сегодняшний день не было показано, что LIV связывает какие-либо фторированные аналоги аминокислот.LS был исследован методом рентгеновской кристаллографии, но только в открытом виде без лиганда. LIV также был исследован как не связанный с лигандами белок вместе с лигандированной «открытой» формой, где лейцин связан только с N-концевой долей белка (Sack et al . , 1989a). Не опубликовано ни одной закрытой структуры, и механизм связывания лиганда неизвестен.

Эти периплазматические рецепторы предоставляют уникальную возможность исследовать тонкие различия в субстратной специфичности в лиганд-связывающем кармане.Кроме того, у нас есть уникальная возможность изучить конструкцию специфического связывающего кармана для размещения интересующего лиганда. Поскольку LS связывает фторированные субстраты, мы можем расширить диапазон связывания в щели, чтобы включить фторированные вещества, такие как те, которые используются в биологической войне. Таким образом, наш периплазматический связывающий белок может быть использован в качестве основы для создания биомолекулярных поглотителей этих агентов.

В свете этого мы собираем биофизическую информацию об этих белках.Один из наших методов изучения динамики этих важных белков — 19 F ЯМР. 19 F ЯМР — это проверенный метод исследования структуры и динамики белков, поскольку ядро ​​фтора легко включается в определенные места внутри белков, где оно обеспечивает чувствительный зонд для получения структурной информации с низким разрешением (Luck and Falke, 1991a, b) . Для белков, слишком больших или нестабильных для полного определения структуры методом ЯМР, 19 F ЯМР дает ценную информацию о конформационных изменениях, поскольку ядро ​​способно обнаруживать изменения в локальной конформационной среде, включая взаимодействия ван-дер-ваальсова упаковки и локальные электростатические поля.Биосинтетическое включение фтора в остатки триптофана в рецепторных белках показало, что фтор мало влияет на структуру и функцию белка (Danielson and Falke, 1996). Каждый из четырех остатков Trp в LS находится в интересной области структуры (рис. 1): один в связывающей щели, которая может взаимодействовать непосредственно с лигандом, один рядом с шарниром, соединяющим два домена, один скрыт в N- терминальный домен и единственный Trp, расположенный в C-домене. С помощью этих зондов можно исследовать как события связывания в щели, так и глобальные конформационные изменения в этом белке.В этой работе мы получили сайт-направленные мутанты по всем четырем остаткам Trp. Мы пометили LS дикого типа и четыре мутанта Trp to Phe 5-фтортриптофаном (5F-Trp) и приписали 19 F ЯМР-резонансов специфическим остаткам Trp, что позволило нам изучить динамику и связывание субстрата.

Материалы и методы

Получение мутантов

Плазмида pK Sty , содержащая livK , ген, кодирующий лейцин-специфический связывающий белок (LS) из E.coli , был получен из Oxender Laboratory, штат Мичиган (Oxender и др. ., 1980; Адамс и др. ., 1991). Белок LS содержит четыре остатка Trp в положениях 18, 278, 320 и 336 (рисунок 1). Для создания мутантов с Trp, замененным на Phe в последовательности праймера, кодон триптофана TGG в положениях, упомянутых выше, был заменен кодоном фенилаланина TTC. Два праймера для каждого мутанта (таблица I) были синтезированы на заказ компанией Integrated DNA Technlogies (Coralville, IA).Сайт-направленный мутагенез проводили с помощью набора для мутагенеза Quick-Change (Stratagene, La Jolla, CA). Мутанты W18F и W336F подвергали скринингу путем переваривания рестриктазой Tsp RI, а мутанты W278F и W320F подвергали скринингу с использованием Dpn I и Taq I, соответственно. Кроме того, все мутанты были подтверждены секвенированием ДНК с использованием автоматического секвенатора ДНК Applied Biosystems 373S Model в Институте Трюдо (Саранак-Лейк, Нью-Йорк).

Производство белка

Плазмида pK Sty дикого типа и мутантные плазмиды трансформировали в штамм BL21 (DE3) E.coli. Клетки выращивали при 37 ° C до OD 600 = 0,7 в среде LB с добавлением ампициллина (100 мг / мл). Клетки собирали, промывали 100 мл среды M9 и ресуспендировали в 1 л среды M9 с добавлением 2 мМ MgSO 4 , 0,1 мМ CaCl 2 , 0,04% глюкозы, 1% казаминокислоты, 0,1% тиамина, 1%. глицерин, 100 мг / мл ампициллина и 1 г 5F-Trp. Культуры инкубировали для истощения остаточного Trp в среде в течение 30 мин, затем добавляли изопропил-β-d-тиогалактозид (IPTG) до конечной концентрации 0. 5 мМ. Клетки осаждали через 4 часа и белки выделяли с использованием стандартной осмотической процедуры. Белки LS дикого типа и мутанты дополнительно очищали ионообменной хроматографией на колонке DEAE-Sephacel с использованием градиента 0–0,25 М NaCl в 10 мМ Трис-буфере, pH 7,5. Очищенные белки диализовали в 10 мМ калий-фосфатном буфере, pH 6,9, с добавлением 0,02% NaN 3 . Белки подвергали скринингу с помощью SDS-PAGE и визуализировали окрашиванием кумасси бриллиантовым синим.

Линейная комбинация спектров

Для определения эффективности включения 5F-Trp в LS дикого типа и мутантного LS мы использовали линейную комбинацию УФ-спектрального поглощения (LINCS) (Zemsky et al ., 1999; Senear et al ., 2002).

Измерения ЯМР

19 Спектры ЯМР F были получены при 470 МГц на спектрометре Varian Model 500 с зондом 5 мм 19 F / 1 H. Образцы, содержащие 0,3–0,7 мМ 5F-Trp-меченых белков в 10 мМ фосфатном буфере, pH 6,9, получали добавлением 10% (об. / Об.) D 2 O в качестве фиксирующего растворителя в конечном диализном буфере. 19 F-резонанс отнесен к 3-фторфенилаланину при –38 пп.вечера. как внешний стандарт. Параметры измерения включали температуру 30 ° C, задержку релаксации 2 с, ширину развертки 9000 Гц и спектральную обработку с уширением линии 25 Гц.

Измерения флуоресценции

Экспериментальные растворы для определения связывания и экспериментов по конформационной стабильности готовили из концентрированных исходных растворов 20 мМ Трис, pH 7,1 и 10 М мочевины, каждый из которых содержал 0,5 мкМ белка. Для исследований с лигандами белки инкубировали с концентрацией 50 мМ, чтобы гарантировать насыщение белков.Перед регистрацией спектров флуоресценции растворы уравновешивали в течение 12 ч при комнатной температуре и температуре 25 ° C. Все измерения флуоресценции проводили при температуре окружающей среды с использованием люминесцентного спектрофотометра Perkin-Elmer (Norwalk, CT) LS 50B. Ширина полосы возбуждения и излучения была установлена ​​на 5 нм. Образцы облучали при 278 нм, а эмиссию контролировали от 300 до 390 нм. Интенсивность флуоресценции при 323 нм для всех образцов строили как функцию концентрации мочевины, чтобы создать разворачивающуюся кривую.Мы нашли разворачивающиеся переходы программой Origin от MicroCal (Нортгемптон, Массачусетс). Подгонка нелинейной регрессии модели с двумя или тремя состояниями проводилась с использованием той же программы.

Результаты и обсуждение

Производство белка

Большинство лабораторий использовали штаммы ауксотрофов E.coli для получения белков, меченных 5F-Trp (Danielson and Falke, 1996). Мы биосинтетически включили фторную метку в белки LS, дикого типа и мутанты, путем экспрессии гена livK в E.coli , BL21 (DE3). Клеточная линия ауксотрофов триптофана W3110 не вырабатывала высоких уровней LS. Кроме того, мы наблюдали деградацию белка после индукции IPTG. Мы также наблюдали более низкую эффективность мечения в этой клеточной линии ауксотрофов.

Замена Trp на Phe в мутантных белках не влияла на экспрессию или очистку белка, и в результате выходы составляли 50–80 мг меченного 5F-Trp белка на литр. На основании исследований LINCS, уровни включения 5F-Trp в LS и мутантные белки составляли от 90 до 100% (таблица II).Эти результаты намного выше, чем результаты, наблюдаемые для других белков, экспрессируемых промотором Т7 (Ross et al ., 2000).

Эффект мечения фтором на общую структурную стабильность LS и мутантов был исследован с использованием собственной флуоресценции триптофана для мониторинга денатурации мочевины. Свободная энергия разворачивания как для немеченого, так и для меченного 5F-Trp LS дикого типа без лиганда дала ΔG ° Uh3O = 38,0 ± 4 кДж / моль (Skeels, 2001). Результаты показывают, что включение фтора не нарушает общую структурную целостность белка.

19 Отнесения ЯМР F для остатков 5F-Trp в LS

Спектр меченного 5F-Trp дикого типа LS с лейцином в кармане связывания сравнивали с индивидуальными спектрами меченных 5F-Trp мутантов с одной заменой, также с лейцином в кармане связывания (рис. 2). Наблюдение за тем, какой пик в спектре дикого типа был устранен в спектре каждого мутанта, привело к однозначному отнесению резонансов 5F-Trp в спектре ЯМР 19 F.В спектре дикого типа можно четко идентифицировать все четыре резонанса 5F-Trp. Есть два хорошо разрешенных пика при –47,8 и –50,3 м.д. соответствующие 5F-Trp18 и 5F-Trp336 соответственно. Резонансы для 5F-Trp320 и 5F-Trp278 немного перекрываются, указывая на то, что они находятся в аналогичной химической среде. Малый резонанс при –49,6 м.д. в спектре дикого типа представляет собой небольшую фракцию развернутого или деградированного белка, которая имеет ту же частоту, что и наблюдаемая для подвергнутого воздействию растворителя 5F-Trp (Luck and Falk, 1991a).

Влияние мутаций Trp на Phe на

19 F ЯМР химические сдвиги

Спектры ЯМР 19 F мутантов аналогичны спектрам нативного рецептора, меченного 5F-Trp, за исключением того, что единственный резонанс, связанный с отсутствием Trp, удален. Помимо удаленных резонансов, замещение Trp в положении 278 вызывало небольшие структурные нарушения в положении 18 в связывающем кармане.

Как показано на рисунке 1, N-домен LS содержит Trp320, Trp278 и Trp18, которые также обнаруживаются в щели связывания.В C-домене находится единственный Trp336. В спектре ЯМР 19 F на фиг. 2 мы видим, что на резонанс, соответствующий 5F-Trp336, не влияет однократная замена других остатков Trp. Кроме того, на резонансы остатков 5F-Trp в положениях 320 и 278 не влияет мутация Trp336. Однако есть небольшие изменения в химическом сдвиге резонанса для 5F-Trp18 в мутанте W278F по сравнению с соответствующим резонансом в спектре дикого типа.Это изменение химического сдвига 5F-Trp18 в мутанте W278F без каких-либо других спектральных отличий от дикого типа предполагает, что мутации Trp в Phe на самом деле нарушают структуру белка в области связывающего кармана. Без замкнутой формы кристаллической структуры со связанным лейцином мы можем только предполагать, что это изменение положения резонанса происходит из-за сдвигов вторичных элементов в N-концевом домене. Trp278 скрыт внутри доменной структуры и разделяет структурные компоненты с остатками связывающего кармана.Уменьшение размера кольца от триптофана до фенилаланина может хорошо влиять на локальные взаимодействия на Trp278, которые, в свою очередь, могут нарушать локальное окружение Trp18 в кармане связывания через общие элементы. Подобные возмущения резонансов 5F-Trp в мутантах от Trp до Phe наблюдаются в растворимом тканевом факторе (Zemsky et al ., 1999) и в связывающем глюкозу и галактозу белке (Luck and Falke, 1991a).

Структурные эффекты связывания l-лейцина

Приведенное выше назначение позволяет использовать четыре резонанса 5F-Trp в качестве зондов структурных изменений в четырех известных положениях в нативном белке.Спектр белка 5F-Trp дикого типа после обширного диализа в фосфатном буфере показан на рисунке 3а. Несмотря на то, что белок подвергали ЯМР в течение 15 мин после удаления из диализа, лиганд остается. Есть восемь уширенных пиков для четырех меченых Trps в белке, что указывает на множественные конформеры в этом образце. На рисунке 3b показан тот же белок после добавления избытка L-лейцина. Стрелки на фиг. 3a указывают положения закрытого конформера с лигандами, а линии, проведенные на фиг. 3a-b, показывают структурные эффекты, наблюдаемые в положениях 5F-Trp при связывании l-лейцина.

Структурные эффекты, наблюдаемые при связывании l-лейцина с мутантами, дают аналогичную картину. По этим данным мы смогли идентифицировать частотные сдвиги для каждого из четырех меченых остатков Trp. На рис. 4 показаны три мутанта, LSW18F, LSW320F и LSW336F, с субстехиометрическими количествами лиганда (рис. 4a, c и e) и связанными с l-лейцином (рис. 4b, d и f). Когда к белку добавляется l-лейцин, спектры (рис. 4b, d и f) показывают значительное усиление резонансов. Это указывает на то, что лиганд связан и мутанты функциональны.Помимо доказательства функциональности мутантов, отсутствующие резонансы в спектрах мутантов с субстехиометрическими количествами лиганда позволяют приписать резонансы в спектре экстенсивно диализованного образца LS (рис. 3а) и идентифицировать химические сдвиги всех из них. 5Ф-Трпс.

Резонанс 5F-Trp18, расположенного в кармане связывания, показывает наибольшее изменение частоты при связывании с l-лейцином. Trp18 находится непосредственно в открытой щели связывающего кармана и, как предполагается, непосредственно взаимодействует с лигандом (Sack et al ., 1989b). Этот триптофан подвергается воздействию растворителя, но после связывания l-лейцина этот остаток будет захоронен в щели. Химический сдвиг Trp18 в нелигандированном состоянии при –49,6 м.д. такой же, как у свободного 5F-Trp в растворителе (Luck and Falke, 1991b). Химический сдвиг с –49,6 до –47,8 p.pm. как наблюдалось, когда l-лейцин связан, это указывало бы на то, что Trp18 переместился в совершенно другую химическую среду. Это изменение химического сдвига подразумевает закрытие щели и прямое структурное взаимодействие между 5F-Trp18 и l-лейцином.

Структурные эффекты l-фенилаланина на LS

Титрование 1-фенилаланина в частично пустой 5F-Trp-меченый LS показано на рисунке 5. С каждым добавлением лиганда резонансы в спектрах ЯМР 19 F обостряются и приобретают вид спектров l -связанный с лейцином рецептор, показанный на рисунке 2, за исключением широкого пика при -49,6 ppm Этот резонанс имеет химический сдвиг 5F-Trp, подвергнутого воздействию растворителя, и является довольно широким при наличии насыщающих количеств лиганда.Можно было предположить, что белок обменивается между закрытой формой и открытой формой. Возможно, l-фенилаланин способен связываться с белком в щели, но не имеет контактов, чтобы удерживать белок в закрытой форме. Спектр указывает на область потока в белке около Trp18. Таким образом, мы видим химические сдвиги для трех из четырех Trps в закрытых положениях и обмена Trp18 между двумя положениями. Эти резонансы находятся в медленном обмене на шкале времени ЯМР. Добавление стехиометрического количества l-лейцина к образцу с помощью 1.025 мМ 1-фенилаланин дает спектр, идентичный спектру на фиг. 3b, который подтверждает, что 1-лейцин связывает рецептор 5F-Trp легче, чем 1-фенилаланин.

Исследования в нашей лаборатории показали на основе данных флуоресценции, что l-фенилаланин связывается с немеченым LS (Luck and Johnson, 2000). Наши данные показывают K d s 0,4 и 0,18 мМ для 1-лейцина и 1-фенилаланина соответственно. Были проведены исследования денатурации мочевины LS без и с лигандами, l-лейцином и l-фенилаланином.На рисунке 6 показано, что требуется большее количество мочевины для денатурирования белков, когда l-лейцин и l-фенилаланин связаны в щели для связывания субстрата. Несвязанный белок и связанный с 1-фенилаланином белок демонстрируют сигмоидальную кривую, обозначающую процесс денатурации с двумя состояниями (Skeels, 2001). Однако белок, связанный с l-лейцином, показанный в виде треугольников, дает кривую денатурации с тремя состояниями. Эти данные дополнительно подтверждают, что l-фенилаланин связывается с белком, но не так, как l-лейцин.Мы исследуем это дополнительно с помощью рентгеновской кристаллографии, и наша цель в будущем — получить полную структуру с помощью ЯМР.

На сегодняшний день известно, что каждый из мутантов Trp-Phe связывает лейцин, но K d s не были определены. Калориметрические исследования для получения данных о связывании как меченых, так и немеченых LS и мутантов продолжаются. В последующих статьях будет рассказано о связывающих свойствах мутантов. В настоящее время мы однозначно приписали резонансы спектра ЯМР 19 F LS дикого типа и показали, что мутанты действительно функциональны.Мы показали, что мутации Trp в Phe вдали от кармана связывания могут влиять на структуру кармана, и это необходимо учитывать при разработке новых белков. С помощью 19 F ЯМР мы показали, что 1-фенилаланин связывается с рецептором 5F-Trp, но по-другому с l-лейцином. Это было дополнительно подтверждено исследованиями денатурации мочевины на LS.

Таблица I.

Праймеры, используемые для сайт-направленного мутагенеза белков LS

+ W336F
Белок . Праймер I . Праймер II .
W18F 5′-CGATTGCCCAGTTCGGCGATATGGA-3 ‘ 5′-ATTCCATATCGCCGAACTGGGCAATC-3′
W278F 5′-GGCCTTATGTCTTCATCACCTACG-3 ‘ 5′-CGCGTAGGTGATGAAGACATAAGG-3′
W320F 5′-TGGGCCGCTGAACTTCGATGAAA-3 ‘ 5′-TTTCATCGAAGTTCAGCGGCCCA-3′
+
5′-TCTTCCAGTTCCACGCCGAC-3 ‘ 5′-GTCGGCGTGGAACTGGAAGACA-3′
91 076 91 032 + Белок . Праймер I . Праймер II . W18F 5′-CGATTGCCCAGTTCGGCGATATGGA-3 ‘ 5′-ATTCCATATCGCCGAACTGGGCAATC-3′ W278F 5′-GGCCTTATGTCTTCATCACCTACG-3 ‘ 5′-CGCGTAGGTGATGAAGACATAAGG-3′ W320F 5′-TGGGCCGCTGAACTTCGATGAAA-3 ‘ 5′-TTTCATCGAAGTTCAGCGGCCCA-3′ W336F 9104 -TC10GCC10 Я.

Праймеры, используемые для сайт-направленного мутагенеза белков LS

+ W336F
Белок . Праймер I . Праймер II .
W18F 5′-CGATTGCCCAGTTCGGCGATATGGA-3 ‘ 5′-ATTCCATATCGCCGAACTGGGCAATC-3′
W278F 5′-GGCCTTATGTCTTCATCACCTACG-3 ‘ 5′-CGCGTAGGTGATGAAGACATAAGG-3′
W320F 5′-TGGGCCGCTGAACTTCGATGAAA-3 ‘ 5′-TTTCATCGAAGTTCAGCGGCCCA-3′
+
5′-TCTTCCAGTTCCACGCCGAC-3 ‘ 5′-GTCGGCGTGGAACTGGAAGACA-3′
91 076 91 032 + Белок . Праймер I . Праймер II . + 91 034 91 045 91 046 91 045 W18F 5′-CGATTGCCCAGTTCGGCGATATGGA-3 ‘ + 5′-ATTCCATATCGCCGAACTGGGCAATC-3′ 91 034 91 045 91 046 91 045 W278F 5′-GGCCTTATGTCTTCATCACCTACG-3 ‘ + 5′-CGCGTAGGTGATGAAGACATAAGG-3′ W320F 5′-TGGGCCGCTGAACTTCGATGAAA-3 ‘ 5′-TTTCATCGAAGTTCAGCGGCCCA-3′ W336F 3′-TCTTGCAG10 5′-TCTTGCCAG10 9CCGAC10 9CCGAC10 9CCGACTAC10 9CCGCGTAC10 9CCGAC4 9CCGAC4 9CCGAC10 9CCGAC10 9CCGTAC10 9CCGCGC4 9CCGAC10 Таблица II.

Эффективность включения 5F-Trp в белки LS, полученные с помощью LINCS

Белок . Включение 5F-Trp (%) . Ошибка (%) .
WT 100 2,9
W18F 99 1,3
W278F 100 7
W336F 92 0,9
Белок . Включение 5F-Trp (%) . Ошибка (%) .
WT 100 2,9
W18F 99 1,3
W278F 100 7
W336F 92 0,9
Таблица II.

Эффективность включения 5F-Trp в белки LS, полученные с помощью LINCS

10
Белок . Включение 5F-Trp (%) . Ошибка (%) .
WT 100 2,9
W18F 99 1.3
W278F 100 5,2
W320F 98 2,7
W336F 92 0,
. Включение 5F-Trp (%) . Ошибка (%) . WT 100 2,9 W18F 99 1.3 W278F 100 5,2 W320F 98 2,7 W336F 92 0,9

Рис. 1.

Структура белка, связывающего l-лейцин E.coli . Показана структура α-углеродного скелета рецептора (Sack et al ., 1989b). Структура показывает четыре остатка триптофана, которые были помечены 5-фтортриптофаном в настоящем исследовании.

Рис. 1.

Структура белка, связывающего l-лейцин E.coli . Показана структура α-углеродного скелета рецептора (Sack et al ., 1989b). Структура показывает четыре остатка триптофана, которые были помечены 5-фтортриптофаном в настоящем исследовании.

Рис. 2.

Отнесение резонансов 5-фтортриптофана в спектре ЯМР 19 F с помощью сайт-направленного мутагенеза.Показаны рецепторы дикого типа и указанные мутантные рецепторы, каждый из которых мечен 5-фтортриптофаном и связан с избытком l-лейцина. Все образцы содержат 10 мМ фосфата, pH 6,9 и 10% D 2 О. Спектры были внешне привязаны к 3-фторфенилаланину при –38.00 p.pm. Спектры записывали при 470 МГц и 30 ° C.

Рис. 2.

Отнесение резонансов 5-фтортриптофана в спектре ЯМР 19 F с помощью сайт-направленного мутагенеза. Показаны рецепторы дикого типа и указанные мутантные рецепторы, каждый из которых мечен 5-фтортриптофаном и связан с избытком l-лейцина.Все образцы содержат 10 мМ фосфата, pH 6,9 и 10% D 2 О. Спектры были внешне привязаны к 3-фторфенилаланину при –38.00 p.pm. Спектры записывали при 470 МГц и 30 ° C.

Рис. 3.

Влияние связывания l-лейцина на резонансы 19 F ЯМР 5F-Trp-меченного LS. Показаны спектры LS, меченного 5F-Trp, с экстенсивным диализом в фосфатном буфере ( a ) и LS с добавлением избытка l-лейцина ( b ).Условия буфера и параметры ЯМР такие, как на фиг. 2. Стрелки указывают связанные формы белка. Линиями обозначены частотные сдвиги, вызванные связыванием лиганда.

Рис. 3.

Влияние связывания l-лейцина на 19 F ЯМР-резонансов 5F-Trp-меченого LS. Показаны спектры LS, меченного 5F-Trp, с экстенсивным диализом в фосфатном буфере ( a ) и LS с добавлением избытка l-лейцина ( b ). Условия буфера и параметры ЯМР показаны на рисунке 2.Стрелки указывают на связанные формы белка. Линиями обозначены частотные сдвиги, вызванные связыванием лиганда.

Рис. 4.

Влияние связывания l-лейцина на 19 F ЯМР-резонансов 5F-Trp-меченых мутантов LS. Показаны спектры ( a ) LSW18F частично без лиганда, ( b ) LSW18F с избытком l-лейцина, ( c ) LSW320F частично без лиганда, ( d ) LSW320F с избытком l-лейцина, ( e ) LSW336F частично без лиганда и ( f ) LSW336F с избытком l-лейцина.Стрелки указывают на связанные формы белка. Условия такие же, как на рис. 2.

Рис. 4.

Влияние связывания l-лейцина на 19 F ЯМР-резонансы 5F-Trp-меченых мутантов LS. Показаны спектры ( a ) LSW18F частично без лиганда, ( b ) LSW18F с избытком l-лейцина, ( c ) LSW320F частично без лиганда, ( d ) LSW320F с избытком l-лейцина, ( e ) LSW336F частично без лиганда и ( f ) LSW336F с избытком l-лейцина.Стрелки указывают на связанные формы белка. Условия такие же, как на рисунке 2.

Рис. 5.

Титрование 1-фенилаланина в частично свободный от лиганда 5F-Trp-меченый LS. Все образцы содержат 0,4 мМ белка, а условия соответствуют фиг. 2. Указаны количества 1-фенилаланина. Стрелки указывают на резонансы, обычно обнаруживаемые в форме белка, связанной с l-лейцином.

Рис. 5.

Титрование 1-фенилаланина в частично свободный от лиганда 5F-Trp-меченый LS.Все образцы содержат 0,4 мМ белка, а условия соответствуют фиг. 2. Указаны количества 1-фенилаланина. Стрелки указывают на резонансы, обычно обнаруживаемые в форме белка, связанной с l-лейцином.

Рис. 6.

Влияние l-лейцина и l-фенилаланина на равновесное развертывание LS. Денатурация белков мочевиной с лигандами и без них показана в виде графика развернутой фракции в зависимости от концентрации мочевины. LS без лиганда (▪), LS с избытком l-лейцина () и LS с избытком l-фенилаланина (•).Кривые были построены с помощью нелинейной регрессии модели с тремя состояниями (Eftink, 1995), выполненной с использованием Origin (Microcal, Northhampton, MA).

Рис. 6.

Влияние l-лейцина и l-фенилаланина на равновесное развертывание LS. Денатурация белков мочевиной с лигандами и без них показана в виде графика развернутой фракции в зависимости от концентрации мочевины. LS без лиганда (▪), LS с избытком l-лейцина () и LS с избытком l-фенилаланина (•).Кривые были построены с помощью нелинейной регрессии модели с тремя состояниями (Eftink, 1995), выполненной с использованием Origin (Microcal, Northhampton, MA).

Авторы благодарят Памелу Скотт Адамс из Института секвенирования ДНК Трюдо, а также Деррика Шварца и Мэтью Скилса за исследования флуоресценции. Они также благодарны Дж. Б. Александру Россу и Елене Русиновой за измерения LINCS на 5F-Trp LS и мутантах. Это исследование было частично выполнено в Национальной лаборатории сильного магнитного поля при поддержке Национального научного фонда в рамках соглашения о сотрудничестве DMR-0084173.Работа поддержана Фондом нефтяных исследований (36825-AC4).

Список литературы

Адамс, доктор медицины, Магуайр, Д.Дж. и Oxender, D.L. (

1991

)

J. Biol. Chem.

,

266

,

6209

–6214.

Бессис, А.С., Бертран, Х.О., Гавез, Т., ДеКолль, К., Пин, Дж. П. и Ахер, Ф. (

2000

)

Protein Sci.

,

9

,

2200

–2209.

Дэниэлсон, М.А. и Фальке, Дж. Дж. (

1996

)

Annu.Rev. Biophys. Biomol. Struct.

,

25

,

163

–195.

Эфтинк, М. (

1995

)

Methods Enzymol.

,

259

,

487

–512.

Ландик, Р. и Oxender, D.L. (

1985

)

J. Biol. Chem.

,

260

,

8257

–8261.

Удача, Лос-Анджелес. и Фальке, Дж. Дж. (

1991

)

Биохимия

,

30

,

4248

–4256.

Удача, Лос-Анджелес. и Фальке, Дж. Дж. (

1991

)

Биохимия

,

30

,

4257

–4261.

Удача, Лос-Анджелес. и Джонсон, С. (

2000

)

Protein Sci.

,

9

,

2573

–2576.

Линч, Д. и Гуттманн Р. (

2001

)

Curr. Drug Targets

,

2

,

215

–231.

Оксендер, Д.Л., Андерсон, Дж. Дж., Дэниелс, К. Дж., Ландик, Р., Гансалус, Р. П., Зуравски, Г. и Яновский, С. (

1980

)

Proc. Natl Acad. Sci. США

,

77

,

2005

–2009.

Паолетти, П., Перин-Дюро, Ф., Файязуддин, А., Ле Гофф, А. и Нейтон, Дж. (

2000

)

Neuron

,

28

,

911

–925.

Рахманян М., Клаус Д. и Oxender, D.L. (

1973

)

Бактериология

,

116

,

1258

–1266.

Росс Дж.Б.А., Русинова Э., Удача Л.А. и Rousslang, K.W. (2000) In Lakowicz, J.R. (ред.), Topics in Fluorescence Spectroscopy, Vol. 6. Флуоресценция белка . Kluwer Academic / Plenum Press, Нью-Йорк, стр. 17–42.

Мешок, Дж. С., Сапер, М. А. и Quiocho, F.A. (

1989

)

J. Mol. Биол.

,

206

,

171

–191.

Мешок, Дж. С., Траханов, С. Д., Цыганник, И. и Quiocho, F.A. (

1989

)

J. Mol. Биол.

,

206

,

193

–207.

Сенеар Д.Ф., Мендельсон Р.А., Стоун Д.Б., Удача Л.А., Русинова Э. и Росс, А.Дж. (

2002

)

Анал. Biochem.

,

300

,

77

–86.

Шилтон, Б.Х., Флокко М.М., Нильссон М. и Моубрей С.Л. (

1996

)

J. Mol. Биол.

,

264

,

350

–363.

Skeels, M.C. (2001) докторская диссертация, Университет Кларксона, Потсдам, Нью-Йорк.

Земский Ю., Русинова Е., Немерсон Ю., Удача Л.А. и Росс, J.B.A. (

1999

)

Белки

,

37

,

709

–716.

© Издательство Оксфордского университета

Значение имени Сонди, о Суринаме Имя девушки Сонди

Ваше имя Сонди? Узнать значение, нумерологию и подробности имени девушки из Суринама Sondi

Sondi — это имя American Girl, значение которого — « TBD ».

Исходя из нумерологического значения 7, Сонди является аналитичным, понимающим, знающим, прилежным, независимым, бесстрашным, исследовательским, ориентированным на доказательства, практичным. Духовное, умное, сдержанное, таинственное и интуитивное. Ниже приведены некоторые сведения об имени Sondi , основанные на нумерологическом значении.
Качества Философское, духовное
Счастливый цвет Зеленый
Правящая планета Нептун
Счастливое число 7

Анализ каждой буквы имени «
Sondi » в каждом имени каждая буква имеет определенное значение, которое описывает природу имени.Ниже в таблице описана каждая буква имени Sondi .
Письма Описание
S Вы настоящий чародей. Обладая чувством тепла и преданности, вы также глубоко чувствуете вещи. это может привести к чрезмерно драматическим реакциям и интенсивной внутренней жизни.
О Вы знаете, где находится моральный авторитет, и всегда принимаете его.Это потому, что ваши духовные убеждения так же сильны, как и ваша воля. Вам нравятся границы, законы и правила, но вы также чувствительны и очень глубоко чувствуете вещи.
N Вы — человек нестандартного мышления, творческий и оригинальный. У вас также есть сильная воля к тому, чтобы мнения совпадали.
D Вы обоснованы и прагматичны.У вас есть отличные системы для выполнения задач, и это здорово, потому что у вас сильное чувство решимости.
я Вы сострадательный человек, глубоко переживающий. В таком случае логично, что вы также артистичны и креативны, разбираетесь во всем, от моды до композиции.

Метод расчета нумерологии имени «
Sondi »
Алфавит Итого по алфавиту.
(например: U = 21 = 2 + 1 = 3)
S 1
О 6
N 5
D 4
I 9
Всего 25
Промежуточный итог 25 7
Расчетная нумерология 7
Найдите значение своего имени
Искать имена с помощью расширенного поиска

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Многоточечная ретрансляция

в сравнении с производительностью кластеризации цепочка-ответвление-конечность в оптимизированных транспортных сетях на основе маршрутизации на основе маршрутизации

Протоколы маршрутизации для автомобильных одноранговых сетей используют кластеризацию для оптимизации производительности сети.Что касается протокола маршрутизации с оптимизированным состоянием каналов и множества его производных, метод многоточечной ретрансляции (MPR) доказал свою эффективность в качестве точной схемы кластеризации за последние два десятилетия. Однако недавно было подчеркнуто, что метод MPR, который изначально был разработан для открытых площадок, не выигрывает от конкретной конфигурации участков дороги, которые по своей сути пространственно ограничены. Схема кластеризации, использующая эту особенность, а именно цепочку-ответвление-лист (CBL), была введена для улучшения лавинной рассылки широковещательного трафика, в том числе связанного с операциями маршрутизации.В этой статье MPR и CBL оцениваются посредством моделирования MATLAB по нескольким сценариям на основе реалистичных конфигураций дорог и трафика, созданного с помощью симулятора SUMO. Результаты показывают, что CBL фактически уменьшает количество узлов, действующих в качестве ретрансляторов (кластерных головок) в сети, тем самым уменьшая трафик маршрутизации, связанный с созданием и повторной передачей сообщений управления топологией. Кроме того, они показывают, что с CBL узлы, выбранные в качестве ретрансляторов, дольше остаются в этой роли, что способствует общей стабильности сети, и что большинство узлов остаются подключенными к одному и тому же ретранслятору дольше, чем при использовании метода MPR.

  • URL записи:
  • Наличие:
  • Дополнительные примечания:
  • Авторов:
    • Rivoirard, Lucas
    • Валь, Мартина
    • Сонди, Патрик
  • Дата публикации: 2020

Язык

Информация для СМИ

Предметный указатель

Информация для подачи

  • Регистрационный номер: 01737768
  • Тип записи: Публикация
  • Файлы: TLIB, TRIS
  • Дата создания: 5 марта 2020 г. 16:58

Некрологов для новоприбывших — Кассандра ‘Sondi’ Менз

Последнее обновление: 10.02.2015
Последний обзор: 10.02.2015
Пожалуйста, внимательно прочтите следующие условия использования («Условия использования») перед использованием этот сайт (далее именуемый «этот сайт») и написание или отправка любых материалов для этого сайта.

1.) Применимость и принятие условий использования

Используя, получая доступ, просматривая или отправляя любые письменные материалы и / или Материалы на этот Сайт, вы прямо соглашаетесь соблюдать настоящие Условия использования. Группа ритуальных услуг для новичков оставляет за собой право в любое время изменять, изменять или обновлять настоящие Условия использования без предварительное извещение.Вы соглашаетесь с тем, что каждый раз, когда вы посещаете этот Сайт, вы будете подвергаться действующие на тот момент Условия использования.

2.) Материалы, представленные пользователями

Отправляя любые письменные материалы или материалы на этот Сайт, включая, например, информацию, статьи, иллюстрации, изображения, тексты песен, фотографии, стихи или текст («Материал») на этот Сайт, вы заявляете и гарантируете, что имеете право размещать Материал на этот Сайт, что означает (т.) вы являетесь автором Материала или (ii) Материал не защищены законом об авторском праве, или (iii) у вас есть явное разрешение от авторских прав владелец размещать Материал на этом Сайте. Вы также заявляете и гарантируете, что написанное вы предоставляете и / или информация, которую вы предоставляете, является правдивой и точной. Вы также представляете и гарантируем, что предоставленный вами Материал не нарушает настоящие Условия использования, что он не будет причинить вред любому физическому или юридическому лицу и что это не нарушает права собственности третьих лиц, статутные права или права общего права.

Группа похоронных услуг для новичков не будет намеренно публиковать, передавать, отображать, публиковать или распространять любые представленные письменные материалы или Материалы, которые:

  • содержит вульгарную, непристойную, оскорбительную или ненавистную лексику, эпитеты или оскорбления, текст или иллюстрации безвкусицы, воспалительные атаки личного, расового или религиозного характера или выражения фанатизма, расизма, дискриминации или ненависти;
  • является дискредитирующим, угрожающим, унизительным, подстрекательским, ложным, вводящим в заблуждение, вводящим в заблуждение, мошенническим, неточный, несправедливый, содержит грубое преувеличение или необоснованные утверждения, нарушает конфиденциальность права любой третьей стороны, является необоснованно вредным или оскорбительным для любого человека или сообщества, содержит любое заявление, требующее принятия мер, или имеет тенденцию вводить в заблуждение или несправедливо отражаться в отношении любого другого человека, бизнес или юридическое лицо;
  • нарушает любые муниципальные, государственные или федеральные законы, правила, постановления или постановления или пытается поощрять такое уклонение или нарушение;
  • препятствует непрерывному использованию этого Сайта третьими лицами.
  • рекламирует, продвигает или предлагает торговать любыми товарами или услугами;
  • предназначен в первую очередь для продвижения дела или движения, будь то политическое, религиозное или иное;
  • содержит контент, защищенный авторским правом (защищенные авторским правом статьи, иллюстрации, изображения, тексты песен, фотографии, стихи, текст, или другой контент) без явного разрешения владельца авторских прав на контент;
  • включает статьи, иллюстрации, изображения, тексты песен, фотографии, стихи, текст или другой контент, который составляет, продвигает или поощряет незаконные действия, нарушение любого права любого физического или юридического лица, нарушение любого местные, государственные, национальные или международные законы, правила, директивы или постановления или иным образом создают ответственность;
  • загружает или передает вирусы или другие вредоносные, разрушающие или разрушающие файлы;
  • нарушает, мешает или иным образом вредит или нарушает безопасность этого Сайта или любых служб, системы ресурсы, учетные записи, пароли, серверы или сети, подключенные к этому Сайту или доступные через него, или аффилированные или связанные сайты;
  • не подходит для данного Сайта иным образом, по исключительному усмотрению группы обслуживания похорон для новичков.

Мы оставляем за собой право удалить любые представленные письменные работы, фотографии или любые другие материалы, которые не соответствуют стандарты, описанные в Разделе 2 выше, или по любой другой причине.

3.) Лицензия, выданная отправителями группе услуг похорон новичков.

Вы предоставляете Newcomer Funeral Service Group, ее аффилированным лицам, связанным организациям и / или назначаете безвозмездное бессрочное безотзывные, неисключительные права и лицензии на использование, копирование, изменение, отображение, архивирование, хранение, публикацию, передачу, выполнение, распространять, воспроизводить и создавать производные работы из всех письменных и / или Материалов, которые вы предоставляете Службе похорон для новичков Группа в любой форме, средства массовой информации, программное обеспечение или технологии любого вида, существующие или разрабатываемые в будущем.Не ограничивая В общем, вы разрешаете Группе похоронных услуг для новичков включать письменные и / или материалы вы предоставляете в формате с возможностью поиска, который может быть доступен пользователям этого Сайта и других веб-сайтов. Вы также предоставляете новичку Funeral Service Group и ее аффилированные и связанные с ней лица право использовать ваше имя и любую другую информацию о вас которые вы предоставляете в связи с использованием, воспроизведением или распространением таких письменных материалов и / или материалов, которые вы предоставляете.Ты также предоставить Newcomer Funeral Service Group право использовать любые факты, идеи, концепции, ноу-хау или методы («Информация») содержащиеся в любых Материалах или сообщениях, которые вы отправляете нам для любых целей, включая, помимо прочего, разработку, производство и сбыт продукции с использованием такой информации.

4.) Возмещение

Вы соглашаетесь возместить и удерживать Newcomer Funeral Service Group, ее дочерние и аффилированные компании, агентов, должностных лиц, директоров, и / или агенты и сотрудники таких организаций, не причиняющие вреда от любых претензий или требований, сделанных кем-либо в отношении любых письменных и / или Материалы, которые вы отправляете, публикуете, передаете, отображаете, публикуете или распространяете на этом Сайте или через него, ваше использование этого Сайта, ваше подключение к этому сайту или нарушение вами настоящих Условий использования.

5.) Право на публикацию

Newcomer Funeral Service Group оставляет за собой право прочитать и просмотреть все представленные материалы перед их публикацией на веб-сайте, и оставляет за собой право не публиковать какие-либо материалы по своему усмотрению.

6.) Отказ от постоянства

В соответствии с нашим правом на удаление Материалов, Группа обслуживания похорон для новичков гарантирует, что все книги сообщений останутся на этом сайте. Сайт на 30 дней.Сообщения с соболезнованиями останутся на этом Сайте в течение всего срока действия Книги сообщений.

7.) Право на контакт с вами

Отправив заявку, вы можете связаться с Группой похоронных услуг для новичков, чтобы мы могли решить любую проблему, связанную с к такому представлению.

8.) ОГРАНИЧЕНИЕ ОТВЕТСТВЕННОСТИ

Newcomer Funeral Service Group не несет ответственности перед вами за любые прямые, косвенные, особые, штрафные, случайные, образцовые или косвенные убытки, или любые убытки вообще, даже если Newcomer Funeral Service Group была ранее уведомлена о возможность таких убытков, будь то в результате действий по контракту, халатности или любой другой теории, возникающих из или в связи с использованием, невозможностью использования или выполнением информации, услуг и материалов, доступных на этом Сайте.

Newcomer Funeral Service Group также не несет ответственности и не несет ответственности за любой ущерб или вирусы, которые могут заражать ваше компьютерное оборудование или другое имущество в связи с вашим доступом, использованием или просмотром этого Сайта или вашего скачивание любых материалов с этого сайта.

Newcomer Funeral Service Group не несет никакой ответственности или обязательств, связанных с содержанием этого Сайта, а также любыми другими страницы вне сайта или дополнительные сайты, связанные с этим Сайтом, за любую ошибку, клевету, клевету, клевету, упущение, ложь, непристойность, порнография, ненормативная лексика, опасность или неточность в них.

Вы и группа обслуживания похорон для новичков соглашаетесь с тем, что отказ от гарантий и ограничение ответственности в настоящем Соглашении являются существенными и являются предметом переговоров в качестве основы настоящего Соглашения.

Вышеупомянутые ограничения ответственности применяются только в том случае, если это разрешено законодательством государства вашего проживания или Закон штата о Сайте, на котором Новичок оказал похоронные услуги для вас или вашей семьи.

© 2015 Группа ритуальных услуг для новичков

9780471599722: Анализ и использование финансовой отчетности — AbeBooks

Пытаясь по-новому взглянуть на обучение анализу финансовой отчетности, этот текст призван помочь студентам развить понимание данных, предоставляемых финансовой отчетностью, и аналитических методов, необходимых для оценки результатов деятельности фирмы.

«синопсис» может принадлежать другому изданию этого названия.

От издателя :

Комплексный обзор теоретических и аналитических вопросов для демонстрации использования фактических данных финансовой отчетности, включая последние разработки в области финансовой отчетности.Содержит сравнительную оценку требований к отчетности в США и других странах с использованием их финансовой отчетности, чтобы проиллюстрировать существенные различия. Материалы и проблемы в конце главы взяты из годовых отчетов компаний США и, при необходимости, иностранных компаний.

Обзор :

Имеется руководство для инструктора.- Издатель, John Wiley & Sons

«Об этом заголовке» может принадлежать другой редакции этого заголовка.

.