Мышечный вектор в системно векторной психологии: Недопустимое название — Энциклопедия системно-векторной психологии

ВЕКТОРНАЯ ПСИХОЛОГИЯ. СОЛЬ ЗЕМЛИ.: tatiana_akko — LiveJournal

Россия это страна с особым, уретрально – мышечным менталитетом. Как раз о мышечном векторе мне хотелось бы рассказать. Самый  многочисленный  — 38 % людей являются носителями только мышечного вектора.
Мышечные люди живут, преимущественно, в деревнях, обрабатывая землю. Они просты и непритязательны, бесхитростны и доброжелательны. Мышечный вектор — это база и фундмент демографии, одна из основных задач, стоящих перед представителями этого вектора  –  увеличение численности населения.

Мышечный вектор является самым совершенным вектором, т.е  самым близким к природе. Это сочетание секса и убийства в одном лице. Коридор, через который мы все проходим: убийство (наиболее выражено мышечным самцом) и секс (как порождение – максимально выражен мышечной самкой). Она рожает, а  мышечный самец кормит все это.

Мышечники (http://www.yburlan.ru/biblioteka/myshechnyi-vektor )  просты в своих желаниях (есть, пить, дышать, спать — ЕПДС) и дифференцируют только первичные позывы, больше ничего, т. е.  – на жизнь и смерть, убийство и секс. Жизнь для них – это то, что было в животе у мамы (полностью обеспечены все его потребности ЕПДС), после рождения это обеспечение прерывается, что равнозначно для них смерти… Мышечники телесно выражены, у них колоссальная связь с землей.

Мышечники единственные люди, воспринимающие смерть естественно, для них это все равно, что вернутся в утерянное лоно матери. Для них характерен пафос смерти, это они оживляются на похоронах и со значимостью говорят: «Надо похоронить  человека  по – людски, отмучился!»

У них нет чувства собственного «я», они живут в ощущении МЫ. Они склонны подчиняться коллективному мнению: «Я как все… Как ребята скажут!»

Мышечный вектор дает человеку физическую силу, здоровье и выносливость, когда правильно развивается. Раньше люди без мышечного вектора не выживали.В современном мире около 5% людей без мышечного вектора.

Особо чувствительная зона у  предствителей этого вектора   –  мышцы, поэтому, выполняя физическую работу, эти люди испытывают состояние комфорта, через труд происходит балансирование биохимии головного мозга.

С  детства их нужно приучать к физическому труду (а то потом не будут знать, куда силу девать), пусть помогают маме в огороде или папе – по хозяйству.

Уретрально – мышечный менталитет России опирается именно на этих тружеников маленьких городов и деревень.

Именно  уретрально – мышечный менталитет создал у россиян ксенофобию наоборот. Весь  окружающий мир очень враждебно относится к чужеземцам, стараются им работу предоставить похуже, потяжелее, а зарплаты – поменьше,  дистанцию устанавливают между своими и чужими.

А в России не так – чужестранцев привечают. Приехал   в  Росиию  мальчик из далекого Зимбабве,  а его,  как родного,  привечают  —  хлебом,  солью! Мало того,  лучшую девочку замуж за него отдадут. Таково влияние уретрального менталитета на мышечный вектор  в  России  (свойство мышечного вектора – считать за „своих“ только земляков, разделяют всех по территориальному признаку).

Вот такая душа Русская широкая, как Волга – матушка!

Мышечный вектор комплиментарен ко всем остальным векторам. Если верно воспитан — он миролюбив и трудолюбив. У них особое наглядно-действенное мышление — представители этого вектора не созданы, чтобы «шевелить мозгами». Нужно  им все показать и проделать, и мышечный человек  сможет это повторить. Это именно для них подходит выражение: «копать от забора и до обеда!»  Они ничуть не смущаются от  такой постановкой задачи и будут ее с удовольствием выполнять.

Женщины мышечного вектора  — прекрасные матери, именно они созданы для того, чтобы рожать часто и много детей.

Видовая роль мужчин мышечного вектора  в первобытной стае  — охотники в состоянии мир и воины в состоянии война.

Мышечники все воспринимают по территориальному признаку:  зрительник со своего дома – свой, а мышечник с другого дома  –  чужой.

Улица на улицу пойдут, деревня  – на деревню, страна  – на страну пойдут, когда мышечников поведут кожники или уретральники. На самом деле  – это сила, которая делала веками непобедимой нашу русскую армию. Армии Суворова,  Александра Македонского состояли, в основном, из мышечных воинов.   Ведомые уретральными вождями, мышечные воины  становились непобедимой бесстрашной силой на поле боя. Под руководством кожного Петлюры  гнали всех подряд и всегда, войско же уретрального Махно было самым победоносным.

Во время и после Великой Отечественной войны  много советских певиц  (кожно  — зрительных) выступали с концертами перед  мышечним войском, чтобы переключить  их из состояния ярость в состояние монотонии.

Чтобы поднять дух воинов и сделать войско непобедимым,  кожно – зрительные девочки  танцевали перед ними.

В современном мире мышечный человек способен выживать на ландшафте исключительно за счет физического труда, воспроизводством потомства они помогают выживать целому.

Нужно все показывать, рассказывать мышечникам, т. к  они  — хорошие исполнители, но не мыслители. Если им не спел вовремя частушки оральник (которые всегда о секуальном), они даже могут не понимать, что нужно делать, чтобы на свет появились дети. В фильме «Жила  — была одна баба»  мы видим наглядный пример, как мышечный мужчина не знает, что делать с женой в первую брачную ночь.

Они любят проверять свои усилия —  за сколько ударов стенку сломают. Силу свою знают, любят меряться силой, чтобы ее знать. Не способны выполнять сложные действия, совершенно обучаемы для выполнения простых действий.

Мышечник поработал на заводе 5 дней, поехал отдыхать на 2 дня на дачу : вскопал огород, крышу починил, и работа не в тягость, и отдыхать умеют! Поработал в огороде и чувствует себя человеком. Мышечники  –  мы и есть труд, мы и есть работяги – воины, охотники, строители, скотоводы.  Лодыри считают их трудоголиками.

Могут 40 лет работать на одном заводе, точить одну и ту же деталь, это выравнивает у них состояние комфорта  –  ровная эмоциональная амплитуда, монотония. Не дифференцируют время.

Только мышечники понимают, что земля рожает. Она готова кормить, поить. Понимают, что с земли пришли, в землю уйдем.

Связь с родной землей для них очень важна. В другой стране мышечники не приживаются,  поэтому эмиграции мышечным людям противопоказаны.

Вся демография происходит за счет мышечных людей.  Хлебопашцы  и  скотоводы  –  тоже они.  Как же их еще назвать, если не СОЛЬ ЗЕМЛИ!

Статья написана по материалам лекций по системно – векторной психологии Юрия Бурлана.

Похождение орального вектора (по материалам Системно векторной психологии Юрия Бурлана, дело № 8): jamallutdin — LiveJournal

Все люди говорят, бывает что кричат и скандалят, но  несущие в себе оральный вектор делают это особенно.

Оральный вектор . Реальные истории из жизни. Участвовал ли я сам? Наверное… хотя об этом история умалчивает, но получился собирательный образ парня с оральным вектором, назовем его Геной.

История 1. Оральный вектор и разрушающий крик.

Детский садик. Старшая группа, мелкота 5-ти лет от роду. Пообедали, апосля сонный час. Спать не хочется, тем более что воспитатели куда-то ушли. Начали разговаривать, понятное дело,сначала два оральника между собой. Остальные  перешептываются. Два мальчика несущие в себе оральный вектор, условно Гена и Витя, стали кричать друг на друга, без умысла, в шутку, а потом и вовсе заорали «А-а-а-а-а-а!!!»

                                                              Оральный вектор и разрушающий крик.

В какой то момент звуки двух оральных ртов попали в одну частоту и тональность, а может, наоборот в разные, и застекленная дверь находящаяся в другом помещении, черте где, разлетелась вдребезги. Больше так не экспериментировали в садике, но догадка осталась…В жизни пригодилось…Одному из них точно!

«Если вам пришлось применять силу, или не дай Господь, оружие, значит, вы проиграли переговорную часть. То есть, вас поимели. Однако это не освобождает мужчину  от ответственности и необходимости иметь силу, а иногда и оружие.»

История 2. Оральный вектор, крик и индукция.

У одного моего знакомого, назовем его Геной, случился роман с замужней женщиной. Ну вот они вместе, у нее в квартире, им хорошо вдвоем.

           
                                                                              Оральный вектор, крик и индукция.

И тут, как водится, является муж, да ещё и в нетрезвом состоянии. Настоящий мужик, потому как носитель анального вектора,а значит, измену не простит. В квартире он достает ружье с целью подведения окончательных итогов. Обычно следующий сюжет показывают в разделе «Криминальная хроника», но не в этот раз, потому как  Гена носитель орального вектора, где одна из видовых ролей – крик, предупреждающий об опасности!

Пьяный супруг направляет заряженное ружье на Гену. Расстояние в коридоре около 3 метров, ни влево, ни вправо, прыжок на месте- провокация.Будет выстрел. В потустороннем мире уже освободилось вакантное место… вот сейчас…но вдруг оральный вектор Гены демоническим криком выдаёт: «ОПОМНИСЬ!… СМЕРТНЫЙ!!!» Задрожали стены и внутренности… время остановилось.
                                                   
Как думаете, сколько раз незадачливый муж слышал подобные слова, да  ещё ТАКИМ магическим ГОЛОСОМ?! И как реагирует анальный вектор? Ступором. Вот и он..бамс.. застыл, как соляной столб. Этого хватило, чтобы быстро приблизиться к нему, послать в нокдаун, обезоружить и по-быстрому свалить из квартиры.

«Доброе слово и пистолет гораздо лучше, чем доброе слово или пистолет в отдельности, а умение пользоваться этими инструментами — главное, что отличает нас от окружающего стада овец. Я отдам три десятка своих головорезов за одного человека, умеющего решать вопросы, разговаривая». (Альфонс Габриэль «Аль» Капоне).

История 3. Оральный вектор и стёб.

Молодой человек, снова Гена, который с оральным вектором, сидит в своем офисе. В этот момент в помещение врывается пьяный мужчина, в руке пистолет  и  крики : «Ты, ты…ты….ты спал с моей женой!!!?» Пистолет заряжен, курок взведен. Анальник и месть – братья-близнецы.

В углу комнаты дымкой замаячила фигура «старухи с косой».

У криминального фотографа наметился сюжет под названием «Приплыли».

Что-либо объяснять, оправдываться, доказывать свою «правоту» бесполезно. Сейчас может случиться трагедия, но человека с оральным вектором невозможно поставить к стенке, поэтому…

отмотаем чуть назад…

-«Ты, ты…ты….ты спал с моей женой!!!?»

-«Ну а  кто с ней не спал?!», — невозмутимо ответил Гена.

Обратная реакция, ступор.

И закрепляя позиции: «Да все они такие… чего им только не хватает? Дуры!» и далее индуцирующий текст по теме…

Тот, кто с пистолетом, как-то поник, сел на стул и прослезился.Потом пошел разговор за жизнь, точнее за женщин неверных и о том, чего им не хватает…

«Когда довод слабоват, надо кричать» ( У.Черчилль)

История 4. Оральный вектор против чужой стаи.

Поздний вечер, а может уже и ночь. За рулем  автомобиля спортсмен-крепыш Рома, рядом  его приятель Гена, на заднем сиденье его дочка Яна 6 лет. Заезжают во двор, навстречу пьяная компания парней 20-25 лет, человек 10-ть, агрессивные, наглые, ищущие приключений.  Приключения начинаются…

Нужно проехать к дому, да никак, не пускают, еще и машину пнули с возгласом: «Куда прешь, козел!». Рома выходит из машины, слово за слово, его  сбивают с ног трое парней и начинают пинать. Гена выскакивает из авто и видит, что у одного из парней нож. Тогда он хватает из салона машины Яну, бежит с ней в дом, квартира на первом этаже, оставляет ее там, затем выбегает, на все про всё 20 секунд, и нечеловеческим криком орёт: «Стоять!!!Милиция!!!». Жуткие вибрации орального крика и «бравые» парни замирают, а затем, сами того не понимая  бегут в рассыпную
                                                                          Оральный вектор против чужой стаи.
         

Никакой милиции нет и в помине, пустота и ночь кругом. Зато есть дикий крик корального вектора. Дальше следуют четкие команды Гены по типу: «Буду стрелять!» «Руки на капот!» и т.д. Хулиганы до сих пор в оцепенении.Верят. Двое нападавших он захватывает в плен, вместо пистолета используя указательный палец в спину.

Рома по ходу дела догоняет и мутузит тех, кто плохо бегал ещё на школьной физкультуре. Человек пять изрядно побиты и по делу. Двоих пленных отвозят в милицию. Никакого оружия, понятное дело у Ромы и Гены не было, но для хулиганов приключение состоялось!

«Чтобы ответить, не обязательно говорить, можно крикнуть».

История 5. Оральный вектор, крик- как оружие.

Бывший уголовник оскорбил и ударил молодую женщину. Чуть позже появился ее муж Гена и застал супругу в слезах. Неприятно и несправедливо. Уголовник работал сторожем в здании автошколы. Гена пошел туда, чтобы сделать выговор. Здание старое, длинные коридоры, высокие потолки. В конце коридора  увидел обидчика. Тот и не думал объясняться, выпивший, сразу же не пошел, а побежал в атаку с ножом в руках. Гена как из винтовки выпалил: «Падай!».В хорошей акустике, целенаправленный  крик орального вектора прозвучал словно выстрел. У бегущего человека подкосились ноги, и он упал. Гена подбежал к нему и, обнаружив того в легкой контузии, забрал нож. Что было дальше история умалчивает, да нам это и неинтересно.

Итоги:

В некоторых эпизодах мы конечно же осуждаем Гену, но подводя итоги  вопрошаем у него: «Как так получалось,что в нужный момент ты говорил нужные слова или вовсе кричал? Это тренировка, заготовка или что-то ещё?»

Пожав плечами,он изрек:«Так получилось».

На самом деле,так работает программа орального вектора. Не мы живем, нами живут, наши желания выраженные векторами.

Однажды в г. Хабаровске Гену пригласили поучаствовать  в тренинге «Жесткие переговоры», который вел известный российский коуч по «личностному росту». Тренер рассказывал и демонстрировал возможности голоса, как им влиять, продавливать и индуцировать персон, выигрывать переговоры. «Я вас научу!»- это он через себя, потому как является обладателем орального вектора. Ему поверили и стали усиленно тренироваться.

                                                                                 оральный вектор
   
Те, у кого есть оральный вектор, на тренинг не пришли, они и без него могут. Кто ходит на подобные тренинги? Анальники, зрительники, реже кожники, бывает, что звуковики. Ребята добросовестно отзанимались, с умелой подачи тренера полагая, что все освоили,но обещанных навыков увы, не обрели. Не заданно им.Тренер их не обманул, он просто НЕ ЗНАЛ, как и многие другие преподаватели бизнес-тренингов и личностного роста. Тренеры, психологи всё понимают и преподносят через себя, не дифференцируют людей, не разделяют их по свойствам, совершая тем самым большую ошибку. Поэтому своими тренингами зачастую вводят большинство в ещё большее заблуждение.

Позднее Гена освоил системное мышление и оказалось, что векторов у него несколько. Именно тогда он и нашел ответы на все свои вопросы, стал осознавать свои желания и умело реализовывать их.

А многие ведь так и не знают, что ими живёт, не осознают свой потенциал и «жизнь у кого то протекла, а у кого то прошмыгнула».

Восемь векторов,  очень точные жизненные сценарии или комплексы на всю жизнь. Не суть, какой: оральный вектор, кожный, уретральный вектор или зрительный — все хороши, при одном условии — когда ты распознаёшь бессознательное человека!

Статья написана по материалам Системно Векторной психологии Юрия Бурлана.

Системно-векторная психология

Понятие системно-векторной психологии

Определение 1

Системно-векторная психология является наукой, направленной на познание человека, его восприятия окружающего мира, отношения к этому миру, испытываемых ощущений и эмоций.

Изучение данного научного направления началось более $10$ лет назад такими психологами, как Фрейд, Ганзен, Толкачев. Однако главным разработчиком системно-векторной психологии является Юрий Бурлан.

Для понимания сущности системно-векторной психологии необходимо понимать, что каждого человека окружают удовольствия и страдания. В течение всей жизни человек пытается увеличить свои удовольствия и при этом сократить долю страданий, однако и то, и другое у человека находится в некоторой пропорции.

С первого дня жизни человек пытается разобраться в других людях: родителях, сверстниках, муже, жене. При этом попытки понять других людей приводят человека к выводу, что люди очень похожи друг на друга.

Одновременно с этим приходит и осознание, что несмотря на невероятную схожесть люди разные.

Ошибка человека заключается в попытке оценить других людей. Системно-векторная психология пытается раскрыть понимание того, что люди, с одной стороны разные, а с другой стороны — одинаковые одновременно. И именно так оценивать их нужно в любой ситуации. Просто для этого необходимо понимание различий похожести и человеческих отличий. Схожесть людей в том, что у каждого человека, живущего на Земле есть восемь эрогенных зон. О них более подробно писал в своих работах З. Фрейд. в своих работах. При этом отличия людей друг от друга заключаются в том, что у каждого человека степень выраженности указанных зон находится на разном уровне.

Замечание 1

Системно-векторая психология опирается на теорию основных инстинктов человека. Общеизвестен тот факт, что жизнь человека невозможна в отрыве от группы, поэтому он должен выполнять конкретную роль в этой группе. Определение роли в группе определяется наиболее выраженным вектором.

Готовые работы на аналогичную тему

Вектор как ключевая составляющая в системно-векторной психологии

Под вектором в системно-векторной психологии понимается комплекс человеческих качеств, которые определяют его характер, набор ценностей, специфику поведения. Вектор является врожденным параметром, не поддаваясь изменениям на протяжении всей человеческой жизни. Именно поэтому вектор является преобладающим моментом в процессе построения особого сценария жизни того или иного человека. Он не просто влияет на судьбу, и может частично верно её предсказать в деталях.

Виды векторов

Разработчики системно-векторной психологии выделяют $8$ векторов в системно-векторной психологии.

• Звуковой вектор отличается молчаливостью и замкнутостью, эгоцентричностью. При этом материальные потребности отходят на второй план. К данному вектору относятся интроверты, изолирующие себя от социального взаимодействия. Как правило, они занимаются духовными практиками, исследованием первоначальной природы реальности, мира, бытия.

• Зрительный вектор отличается наблюдательностью, что обуславливает хорошую обучаемость. Высокая эмоциональность становиться причиной наличия большого количества фобий.

• Кожный вектор

  характеризуется дисциплинированностью и излишней экономностью. Также свойственна легкая адаптация к новой обстановке, скрытность, отсутствие эмоциональности.

• Обонятельный вектор тличается помимо чувствительности к запахам, необыкновенной интуицией. При этом для него характерна тяга к интригам.

• Оральный вектор отличается излишней болтливостью, лживостью и необходимостью повышенного внимания к своей персоне. Для него характерно умение убеждать и быть лидером.

• Мышечный вектор отличается комформностью, следованием за толпой.

• Уретральный вектор является вектором экстравертов, отличающихся справедливостью, нестандартным мышлением, способностью с легкостью выходить из сложных ситуаций.

• Анальный вектор

  характеризует интровертов, любящих книги, историю и постоянство. При этом главным отличием представителя данного вектора является использование уменьшительно-ласкательных слов.

Замечание 2

Многовекторные люди психически устроены намного сложнее, что проявляется в их способности с довольно сложными задачами.

понятие, определение, характеристики и основные принципы

Системно-векторная психология (далее — СВП) — это сравнительно новое направление в современной науке. Основателями считают Ю. Бурлана и В. Толкачева. Сущность СВП основана на типологии личности. В ней выделяют два уровня:

• Верхний уровень. Состоит из зрительного, звукового, орального и обонятельного векторов.
• Нижний уровень. Состоит из кожного, мышечного, анального и уретрального векторов.

Основатели СВП считают, что все люди рождаются с определенным набором векторов. Их количество колеблется от двух до пяти. И этот «набор» определяет в психике все: характер, темперамент, тип личности и прочее.

Звуковой вектор в системно-векторной психологи является одним из трех доминантных. Его представителям приходится удовлетворять в самую первую очередь его потребности. Его желания первичны для звуковиков.

Почему происходит так, а не иначе

Звуковой вектор в системно-векторной психологии определяет людей, которых чаще всего окружающие характеризуют просто — «не от мира сего». Причем не всегда в плохом смысле слова. Звуковики, отиписты, так их называют специалисты СВП, с самого детства интересуются больше глобальными проблемами мироздания, поиском первопричины всего происходящего. Почему происходит так, а не иначе.

Они отрешенно оглядывают все происходящее. Но видят это как цельную картину, поднявшись на высоту, невзирая на частности.

Мысль о том, что они проживают не свою жизнь, очень часто посещает головы звуковиков.

Ты узнаешь его

Звуковика практически не интересует, что происходит с его телом. Он забывает покушать, ухаживает за собой лишь по необходимости. Сон беспорядочен. Может подолгу не спать или проспать сутки. Практически не ощущает страха даже перед возникновением реальной опасности. Склонен к одиночеству, концентрации на своих чувствах, переживаниях.

В системно-векторной психологии звуковой вектор описание внешних признаков имеет следующее:

• отрешенный, рассеянный взгляд;
• необычно одет;
• лицо — маска;
• астеническое строение тела;
• в дневное время сонный, вялый.

Внешняя успешность, вершины карьеры не помешают звуковику все бросить и отправиться на поиски нового. Благополучный бизнесмен может заняться изучением актерского или музыкального искусства.

Как жили наши предки

Понятие «звуковой вектор» в современной психологии в чистом виде присутствовало у наших первобытнообщинных пращуров. Ячейкой общества в то время являлась стая. Одному выжить было нереально. Отношения строились вокруг двух приоритетов. Пища и… секс. Лучшее из этого доставалось тому, чей ранг был выше. Представители звукового вектора были в этой иерархии третьими.

Обязанности распределялись согласно видовой роли и должны были строго выполняться. Не выполнил — смерть. Задачей звуковика была необходимость охранять стаю, когда все спали ночью. Такой охранник вслушивался в ночную тишину, различая малейшие шорохи, реагируя на любой звук.

Всматривался в ночное, полное звезд небо, и слушал, слушал… Сознание соединялось с этой тишиной, погружаясь внутрь, заставляя реагировать не только на то, что происходит там, снаружи, а и на то, что внутри, становясь одним большим вселенским Я.

Вечный поиск

Носители системно-звуковых векторов — люди необычные. Если задать им вопрос, ответ придется подождать. Но и ответом это сложно назвать. Скорее всего, это будет: «А? Что? Вы это мне?». Звуковик находится рядом и одновременно где-то далеко, как будто что-то ищет, но не знает, что.

Материальное его мало интересует, чаще раздражает. Окружающим сложно понять такого человека, в результате он чувствует себя лишним. Склонен к депрессиям.

Он ищет ответ на вечный вопрос: «Для чего это все? Что такое жизнь? Что такое Бог?». Не находя ответа, ощущает бессмысленность существования.

Тишина

Звуковики предпочитают уединение и одиночество, так как развить звуковой вектор им не поможет никто. Избегают тусовок и шумных сборищ. Являются поклонниками глубокого поэтического творчества. Они любители философских, фантастических, эзотерических произведений. Это яркие представители абстрактного мышления.

Могут часами смотреть на звезды и ночное небо, вслушиваясь при этом во внутреннюю мелодию. Изучают психологию, религию, философию.

Работа ума

Отрешенность от земных и материальных благ подразумевает способность к самому сложному виду деятельности: умственной. Звуковой вектор в системно-векторной психологии профессии подразумевает следующие:

• физики;
• математики;
• писатели;
• ученые;
• филологи;
• художники;
• архитекторы;
• скульпторы.

Они выбирают те сферы, где могут трудиться самостоятельно. В команде им стоит давать автономные задания. Способность абстрактного мышления помогает звуковикам рождать гениальные идеи, находить оригинальные решения.

Вид деятельности, который выберет звуковик, зависит от наличия других векторов в типологии личности. Большое влияние на выбор профессии оказывает развитие личности. Выявив принадлежность к звуковому вектору в ближайшем окружении, в семье, стоит уделить особое внимание общению и элементам обучения.

Ребенка с преимущественным звуковым вектором отличает от других детей склонность к самостоятельным играм. Эти дети задают совершенно недетские вопросы о мироздании, Боге и так далее. Родителям не нужно бояться, что ребенок не такой как все. Стоит обеспечить ему занятия, которые смогут развить и реализовать звуковой вектор.

Я-мудрость

Звуковой вектор в психологии объясняет причину, по которой окружающие не находят общего языка со звуковиком. Воспринимая собственное «Я» как высшую ценность и смысл осознанности, они наслаждаются собственной мудростью постоянно. Из-за сверхоценки личных представлений звуковику не удается разделить точку зрения окружающих, найти с ними общее мнение. Порой это похоже на глухоту.

Эгоцентризм — их отличительная черта. Сначала «Я», а потом вся эта пирамида мироздания. Вот его концепция.

Как жить

Не прекращает свое развитие векторная психология. Звуковой вектор, его изучение, создание методов и форм работы со звуковиками помогает многим избежать трагедии.

Такие люди склонны к депрессивным состояниям. Постоянное самокопание, отсутствие ответов на вопросы, отрешенность от собственного тела могут приводить к серьезным психическим нарушениям. Иногда они видят выход в форме суицида.

Специалисты СВП призывают развивать свой интеллект, вдумываться, сосредотачиваться на современных проблемах. Они помогают звуковикам увидеть других людей и понять, что они такие же.

У тебя же все есть

Молчаливый, сосредоточенный, ушедший в себя молчун, чудак — самое частое описание. Носители звукового вектора часто слышат вопрос: «Чего тебе не хватает? У тебя же все есть для счастья! И даже больше!». В этом и проблема. Все это его не интересует. Это для остальных семи векторов важно иметь. Внутри, в душе он ощущает черную пустоту, которая мешает ощущению удовлетворенности и счастья. Неудовлетворенность может расти. Отсутствие ответа на вопрос о том, зачем жить, приводит к опустошению и отчаянию. Может наступить момент рождения мысли: «Жизнь бессмысленна!».

Эталон — интроверт, звуковик ощущает вину за все что происходит вокруг негативного. Винит в этом свое тело и ищет способы наказания для него.

Мальчики и мужчины склонны к алкоголизму и наркомании. Девочки могут страдать анорексией, булимией. Отрицание ценности собственного тела, желание освободиться от него находит выход в самоубийстве.

Все должно быть прекрасно

Люди-звуковики стремятся к красоте везде, всегда и во всем. С этой точки зрения они оценивают все: предметы, вещи, пейзаж и поступки, события, звуки, настроение. В их интерьере много зеркал, им важно видеть свое отражение.

Они очень открыты, доверчивы, легко поддаются красивым рекламным трюкам. Им легко можно «втюхать» что угодно, если пообещать, что оно будет украшать собой жизнь. Для маркетологов — легкая наживка.

Склонность к самовыражению, откровению делает их обычное поведение театральной игрой. Им важно получать «ответ» зрительской аудитории. Конечно же, этот ответ — восхищение. Они наблюдательны, им интересно «подглядывать» за другими, перенимая их манеры, средства и способы их коммуникаций.

Чаще всего как положительные, так и отрицательные эмоции звуковики выражают слезами. Они могут расплакаться по любому поводу: мелодия, фильм, даже рекламный ролик.

Чудеса

Представители звукового вектора в системно-векторной психологии живут в постоянном ожидании чуда. Стремление к безопасности и красоте, живое и абстрактное воображение позволяют им точно визуализировать свои желания и мечты. И чудеса в их жизни действительно происходят. Благодаря особенностям мышления у них развита интуиция, вплоть до экстрасенсорики. Им снятся вещие сны, они могут чувствовать, что происходит с родными и близкими на расстоянии.

Представителям звукового вектора в системно-векторной психологии удается найти временное удовлетворение в смене деятельности на противоположную, в новом виде искусства. Но все это быстро заканчивается, и опять возникает ощущение пустоты внутри.

Личная жизнь

«Чистые звуковики» сторонятся интимной жизни, не находят в ней ничего для себя, так как отрицают тело и все что связано с ним физически.

Звуковой вектор системно-векторной психологии в личности может находиться в сочетании с другими векторами, которые смогут определить место секса в интимной жизни.

Представители звукового вектора, как правило, романтики. Внешняя сторона, ухаживания, цветы, свечи, гораздо важней, чем телесные «услады». Звуковик быстро влюбляется со всей присущей ему отдачей и энергией и так же быстро остывает к предмету влюбленности.

Вектор силы — Блог Викиум

• • Ксения Петровская

    Автор Викиум

Согласно Фрейду, формирование личности происходит с самого рождения, при этом каждая из стадий зависит от определенного участка тела. Именно эта теория стала фундаментальной при создании векторной психологии.

Авторами векторной психологии стали В. Ганзен и В. Толкачев. В основе теории лежит 8 векторов, каждый из которых представляет набор человеческих качеств. Системная векторная психология подразумевает, что человек не может существовать в одиночку, а каждый из векторов помогает в формировании систем ценностей индивида. Все векторы присущи человеку с рождения и не способны меняться на протяжении всей жизни. Описание вектора может дать понимание о желаниях и предпочтениях человека.

Мышечный вектор

Люди с мышечным вектором являются заядлыми интровертами, а также любят черный цвет, который дарит им чувство комфорта. Для таких личностей наиболее подходит монотонная работа, однако, существенным недостатком можно считать отсутствие мотивации. Такие люди не слишком целеустремленны, и самое важное для них — первичные нужды и крыша над головой.

Кожный вектор

Люди с кожным вектором являются экстравертами. Чаще всего они являются невысокими с хорошим телосложением. Именно кожники склонны украшать свое тело татуировками и пирсингом. Такой тип людей способен быстро менять свою позицию в зависимости от личной выгоды. Кожникам не характерно открытое проявление эмоций и чувств.

Обонятельный вектор

Наиболее комфортным цветом для таких людей является фиолетовый. Обонятельные личности не любят выделяться, часто ходят с угрюмым лицом, меланхоличны, других людей ставят ниже себя. Они не любят рисковать и являются недоверчивыми, что спасает их во многих ситуациях.

Звуковой вектор

Синий цвет является наиболее приемлемым для людей со слуховым вектором. Звуковики являются эгоцентричными личностями. Звуковой вектор в психологической практике является уникальным явлением, так как ничто материальное для него не представляет большого значения.

Зрительный вектор

Наиболее комфортный цвет — зеленый. Для зрительного вектора характерным является наблюдательность и пытливость. Запахи для зрительников являются такими же важными, как и цвета. Такие личности обладают большими способностями в освоении нового материала, так как большую часть информации человек получает с помощью глаз.

Анальный вектор

Цветом наибольшего комфорта анального вектора является коричневый. Такие личности являются усидчивыми, прямолинейными, бережливыми, любят всегда и во всем порядок. Новые знания они усваивают достаточно медленно, но заседает в голове информация очень прочно.

Оральный вектор

Желтый — цвет орального вектора. Оральники отличаются любовью к новым блюдам и необычным вкусам. Такие люди прекрасно умеют врать и манипулировать людьми. Такая личность не очень любит проводить время наедине с собой.

Уретральный вектор

Комфортным цветом для уретрального вектора является красный. Такие личности отличаются смелостью, бесстрашием, отвагой и умением вдохновлять собственным примером. Уретральник всегда нуждается в группе людей, где он будет стоять во главе. Таким людям плевать на закон и мораль, ведь если он чего-то хочет, то добьется этого любой ценой.

В системно-векторной психологии есть даже специальный тест, с помощью которого можно определить принадлежность личности к определенному вектору.

Саморазвитие способствует познанию себя, своих качеств и уникальных особенностей. Человеку необходимо развиваться постоянно, чтобы становиться лучше. Курсы и тренажеры Викиум являются доступными и эффективными инструментами для саморазвития.

Читайте нас в Telegram — wikium

Системно-векторная психология — статьи и последние новости по теме Психология

Изменено: 14.08.2021, 09:43

Системно-векторная психология – это продолжение теории Фрейда об этапах развития личности, связанных с двумя центрами удовольствия – оральным и анальным. Авторы этой системы Ю. Бурлан и В. Толкачев продолжили изучение этого направления, предположив, что есть еще 6 других центров получения удовольствия. По их мнению, все стремления человека, связанные с этими центрами, действуют независимо друг от друга во все периоды жизни. Системно-векторная психология включает 8 векторов определения типа личности, среди которых: звуковой, зрительный, кожный, обонятельный, оральный, мышечный, уретральный и анальный.

Системно векторная психология: 8 векторов и их описания

Звуковой вектор представляет закрытый тип личности, сосредоточенный на себе и своих ощущениях. Он бывает высокомерным и заносчивым. В речи звукового типа чаще всего слышится местоимение «Я». Этот тип личности, в отличие от всех остальных не имеет материальных желаний, главное его стремление – познание своего Я.

Зрительный вектор символизирует чувственный тип личности, который постоянно испытывает сильные эмоциональные потрясения. Именно про таких людей говорят «делает из мухи слона». Такой тип личности любит сам себя пугать. Он боится смерти и всего, что связано с ней. Если в детстве состояние «страха» было слишком сильным, то такое мироощущение может сохраниться во взрослой жизни.

Кожный вектор представляет тип личности, который предпочитает экономить. Причем зачастую делает он это непродуманно, из-за чего может потерять очень многое. Стремится к роли лидера, чтобы полностью контролировать ситуацию. Главная черта – скупость.

Обонятельный вектор выражает тип личности, который делит все в окружающем мире на «приятное» и «неприятное». Прислушивается к своей интуиции, не доверяет людям. Старается продумать все возможные варианты, чтобы избежать опасных жизненных течений.

Оральный вектор представляет человека-оратора, который умеет говорить и убеждать, внушает доверие. Он может говорить глупые вещи, коверкать слова или делать ошибки, но благодаря его особенной подаче вокруг него всегда будут слушатели. У этого типа есть яркий минус – он не умеет хранить секреты.

Мышечный вектор характеризует тип личности, который любит монотонную физическую работу для достижения своих целей. Он может довольствоваться малым, если все происходит без перемен. Один из явных минусов – отсутствие мотивации для совершенствования жизненных позиций.

Уретральный вектор – это тип личности, который ничего не требует для себя. Представитель этого вектора не нуждается ни в каких формах владения, потому что не ощущает в этом ничего привлекательного. Он видит себя только в роли вождя. Идейное стремление – вести за собой и отдавать, улучшать, дарить. Среди недостатков: нежелания оглядываться на собственные ошибки и менять свое мнение.

Анальный вектор представляет такой тип личности, которому свойственен излишний консерватизм. Он уверен: все, чтобы было раньше – лучше всех новшеств. Наибольшее удовольствие доставляют старые воспоминания. Занимается накопительством, передачей и сохранением информации из прошлого. Бывает жестоким.

Авторы системно-векторной психологии предлагают попробовать самостоятельно определить свой тип по описанию, чтобы лучше понять себя и свои потребности. В каком векторе вы увидели себя?

Смотрите также: Тест «Какая Вы мама?»

Звуковой вектор в системно-векторной психологии Юрия Бурлана

Тысячи жизней поменялись навсегда в тот момент, когда люди узнали в себе звуковой вектор. «Я звуковик!» Тысячи раздумали прыгать с высоток, слезли с подоконников, вынули себя из петель и направились жить ту жизнь, которая еще за минуту до этого была не нужна. Горячо, полной грудью вдыхая воздух, которого еще совсем недавно почти не оставалось в легких. А сколько еще их, молчаливых, ходят по планете?

В чем особенности его психики и как реализовать звуковой вектор — читайте в этой статье.

Звуковой вектор в системно векторной психологии Юрия Бурлана

Интерес человека со звуковым вектором направлен на познание себя, смысла жизни. В этом весь его жизненный поиск. Оглядываясь на большинство, звуковик задумывается: почему, даже если все в жизни благополучно, с ним что-то не так?

Состояния в звуковом векторе могут быть разные, но все они родом из одного корня. Определение себя как обладателя звукового вектора рождает много вопросов. Если другие вектора направлены на физический мир, то область применения свойств звукового вектора нематериальна.

Люди со звуковым вектором

От того, как развивался звуковой вектор в детстве и какие условия есть для его реализации сейчас, зависит текущее состояние звуковика. Поэтому люди со звуковым вектором встречаются разные.

• Вот парень четырнадцати лет. Сутками играет в компьютерные игры и слушает музыку. Контактов с окружением почти нет: разговаривает вынужденно, только по бытовым вопросам. Общается в переписке лишь с несколькими людьми — тоже звуковиками. Угрюм и подавлен. «Оставьте меня в покое!» Родители заняты собой, он сам по себе. О чем думает ребенок со звуковым вектором, никто не знает.
• Мужчина за сорок, преподаватель в университете. Высокий, аккуратный, приятный в общении. Надежный и крепкий. Успешен в работе, дома порядок. Стремится докопаться до сути вещей. Глядя в ночное небо, испытывает особо глубокие чувства. Иногда возникает ощущение, что чего-то не хватает, хотя все есть. « У всех так», — думает мужчина со звуковым вектором.
• Девушка со звуковым вектором. Живет с парнем, но замуж не спешит. Детей не хочет — а зачем? Работает по специальности технолога. Ухоженная, добрая и умная. Читает о просветлении, самопознании. Практикует медитации и йогу. Всегда готова помочь. Задумывается, какой будет ее жизнь через десять лет. А через двадцать? Перспектива немного удручающая, но ведь это жизнь, верно?
• Молодая женщина, мать двоих детей. В разводе, помогают родители — живут вместе. Дел много, старается успевать все по дому — и детьми заниматься, и работать. Живет как белка в колесе. На автомате. Каждое утро начинается еще один «день сурка». Кто придумал ненавистное утро? Хочется бросить все, сбежать подальше и просто быть одной. Срывается, кричит — с кем не бывает. Женщина со звуковым вектором: «Не такой я представляла мою жизнь».

Такие разные люди, но суть звукового вектора от этого не меняется. Как с этой сутью быть?

Звуковой вектор: как с этим жить

Звуковой вектор обнаружен. Что делать дальше? Как изменить свою жизнь и в чем именно? Необходимо помнить про особенности психики звуковиков:

• Звуковик рождается интровертированным

Его восприятие направлено на внутренние состояния — на свой внутренний мир. Эту особенность он несет в себе всю жизнь в той или иной степени. Приобретает ли он навык экстраверсии свойств или остается погруженным в себя — зависит от условий развития.

• Развивается в свою противоположность

Ребенок со звуковым вектором вслушивается в звуки, улавливает через интонации истинный смысл слов мамы, а потом и других людей. Он учится строить связи с людьми постепенно. Если он рос в шуме, скандалах, если мама неосторожно говорила не те слова — звуковой вектор получает травму. Тормозится его развитие, ребенок растет замкнутым, отгороженным. И выходит во взрослую жизнь с определенным навыком в звуковом векторе.

Навык сосредоточения на внешнем мире определяет, как человек воспринимает информацию извне. Как он строит связи с другими людьми — умеет ли находить контакт с людьми, встраиваться в коллектив. Все это влияет на выбор окружения и условия для реализации звукового вектора в будущем.

• Звуковой вектор требует реализации каждый день

После окончания школы поступил в университет, получил специальность, нашел интересную работу, хобби и круг общения. А если нет? Надо ли получать какую-то профессию для звукового вектора? А если звуковой вектор находит у себя женщина в декрете, о какой реализации идет речь?

Работа для звуковика подразумевает напряжение абстрактного интеллекта. Например, программирование, писательство, наука. Люди со звуковым вектором интересуются духовным поиском и практиками, музыкой. Когда ум звуковика занят, у него в меньшей степени развиваются негативные состояния.

Все чаще работа не наполняет звуковой вектор. Сегодня не существует такой профессии для человека со звуковым вектором, в которой он полностью смог бы реализовать себя.

Хорошо, у меня есть звуковой вектор, и как с ним жить?

Как наполнить звуковой вектор

Звуковики вели человечество к раскрытию смысла жизни — писатели, философы, создатели религий и точных наук. Сейчас развитие объема звукового вектора уже таково, что его не наполняет что-то одно. Требуется то, что вместит в себя все.

Состояние любого человека зависит от того, как он воспринимает мир. Звуковой вектор так устроен, что ему требуется осмысление всего вокруг. Когда жизнь не складывается в осмысленную систему, у каждого звуковика накапливается пустота внутри. Глобальный вопрос «Зачем жить?» состоит из множества мелких «Зачем это?», «Почему так?». Все, что попадает в сознание звуковика, требует осмысления. А что туда попадает?

Свои мысли и чувства. Внутренние противоречия. Ведь откуда-то они берутся. Другие люди: их слова, поступки и то, что они производят. Ведь они делают все это зачем-то. Будь то постройки, искусство, общественные формации и законы, войны и преступления. Весь этот мир: закат, дождь, космос. Ведь для чего-то все это создано!

Ничего не существует само по себе — оно есть, потому что человек это воспринимает. Все, что когда-либо существовало и существует, является продуктом восприятия психики людей. И звуковик среди них тот, кто осмысливает за всех. Потому что может — такова его природная задача. Да и сам человек — откуда-то пришел и куда-то идет. Должен же быть в этом смысл! И он есть

Как наполнить звуковой вектор? Изучить первопричину, понять замысел. Психика человека объединяет в себе все, что есть, и определяет путь человечества.

Звуковик, останешься наблюдать на обочине или начнешь жить? Приступить к раскрытию бессознательного.

«… В лучшем случае успокоение найдется в музыке, философии или естественных науках. Та огромная пустота в душе и оторванность от физического мира, не ощущаемая никем другим, кроме звуковиков, постоянно гонит на поиск «чего-то», требуя наполнения. И тогда музыки нам уже мало — уходим мы, звуковики, по дорогам Непала в поисках познания бесконечности. Той бесконечности, которая всегда с нами…»

Янина Б., дизайнер, Санкт-Петербург

«… Но, если у него есть звуковой вектор, он никогда не удовлетворится успехом в профессии. Ему нужно что-то еще. И вот это «ЕЩЕ» и находит страждущий звуковик на тренинге Юрия Бурлана. И тогда по большому счету становится совершенно не важно, где он работает. Потому что тогда он в любую свою работу вносит ту составляющую, которая дает гораздо большее удовлетворение от жизни, чем успех в карьере и материальное благосостояние…»

Марина Г., журналист, Санкт-Петербург

«… Звуковые занятия очень тяжело прошли, в глубокой, давно знакомой мне депрессии, так как до СВП именно звук меня потихоньку убивал. Но звук дал много важных выводов. Во-первых, познать себя можно только относительно других — сосредоточился на ближнем, потом сосредоточился на себе. Иначе ложное чувство собственной гениальности…»

Ольга М., Санкт-Петербург

Автор: Екатерина Крестникова, врач — психиатр-нарколог
Корректор Наталья Коновалова

Статья написана с использованием материалов онлайн-тренингов Юрия Бурлана «Системно-векторная психология»
Раздел: Системно-векторная психология

23 Сен, 2018 Комментариев: 4 Просмотров: 8434
Теги: Самопознание психология

Противовоспалительные наночастицы значительно улучшают мышечную функцию на мышиной модели продвинутой мышечной дистрофии.

Abstract

Хроническое воспаление вносит свой вклад в патогенез всех мышечных дистрофий. Воспалительные Т-клетки повреждают мышцы, в то время как регуляторные Т-клетки (T _regs ) способствуют регенерации. Мы предположили, что предоставление противовоспалительных цитокинов в дистрофических мышцах будет способствовать прорегенеративным иммунным фенотипам и улучшать функцию. Первичные Т-клетки от дистрофических (mdx) мышей адекватно реагировали на воспалительные или супрессивные цитокины.Впоследствии наночастицы золота, конъюгированные с интерлейкином-4 (ИЛ-4) или ИЛ-10 (PA4, PA10), вводили в хронически травмированную стареющую мышцу MDX. PA4 и PA10 увеличивали набор Т-клеток, при этом PA4 удваивал CD4 ⁺ / CD8 ^— Т-клеток по сравнению с контролем. Кроме того, 50% CD4 ⁺ / CD8 ^— Т-клеток были иммуносупрессивными T _regs после PA4, по сравнению с 20% в контроле. Одновременно с набором T _reg мышцы демонстрировали увеличенную площадь волокон и четырехкратное увеличение силы сокращения и скорости по сравнению с контрольной группой.Способность PA4 изменять иммунные ответы и улучшать дистрофическую мышечную функцию предполагает, что иммуномодулирующее лечение может принести пользу многим генетически разнообразным мышечным дистрофиям, все из которых имеют общую воспалительную патологию.

ВВЕДЕНИЕ

Воспаление является причиной прогрессирования заболевания и хронической дегенерации тканей ( 1 ). Все больше данных свидетельствует о том, что воспаление играет патогенную роль в некоторых распространенных заболеваниях, включая сердечно-сосудистые, метаболические и нейродегенеративные ( 2 ), а также в генетических заболеваниях ( 3 , 4 ).Исторически сложилось так, что лечение, направленное на лечение других патогенных факторов, помимо воспаления, не могло вылечить ни одно из основных неинфекционных заболеваний, связанных с воспалением ( 1 ). Чтобы эффективно вылечить эти состояния, необходимо контролировать воспалительную реакцию. Однако биологическая сложность хронического воспаления с множеством типов клеток, таких как макрофаги и Т-клетки, и цитокинами, такими как фактор некроза опухоли (TNF), играющих разные контекстно-зависимые роли, привела к разработке противовоспалительных методов лечения, которые способствовать функциональной регенерации тканей трудно.Наиболее широкие противовоспалительные методы лечения повышают риск инфицирования и обладают потенциально серьезной токсичностью ( 1 , 5 ). Никакая противовоспалительная терапия не излечивает большинство пациентов с заболеванием, в котором воспаление играет основную роль, таким как артрит ( 1 ). Поэтому разработка терапевтических средств, которые могут контролировать хроническое воспаление с минимальными побочными эффектами, представляет значительный интерес.

Мышечная дистрофия — одно из многих состояний, при которых воспалительная реакция играет центральную роль в прогрессировании заболевания.Хотя формально это генетическое заболевание, вызванное мутациями в дистрофине, результирующая структурная нестабильность миофибрилл вызывает повреждение миофибрилл, вызванное сокращением, хроническую стимуляцию иммунной системы, возрастную замену мышц фибро-жировой тканью, прогрессирующую мышечную слабость и, в конечном итоге, смерть. ( 6 ). Хроническое воспаление в значительной степени способствует повреждению мышц и прогрессированию мышечной слабости ( 3 , 4 ), настолько, что адаптивный перенос иммунных клеток и мышечных экстрактов от дистрофической мыши к здоровым реципиентам приводит к мышечной патологии ( 7 ).В частности, было показано, что дисбаланс между воспалительными и противовоспалительными иммунными клетками способствует повреждению мышц. Удаление интерлейкина-10 (IL-10), цитокина, участвующего как в противовоспалительной (M2) поляризации макрофагов, так и в активации регуляторных Т-клеток (T _reg ) у мышей с дистрофией, увеличивает повреждение мышц и снижает силу ( 8 ) . Истощение CD4 ⁺ хелперов или CD8 ⁺ цитотоксических Т-клеток и, наоборот, увеличение T _regs улучшают гистологию мышц у дистрофических мышей ( 7 , 9 ).Кроме того, мышиные модели с поляризацией макрофагов, смещенной в сторону фенотипа M2, показывают улучшения в гистологии и силе мышц ( 10 ). В совокупности существующие данные предполагают, что обеспечение соответствующего баланса противовоспалительных макрофагов и Т-клеток в дистрофических мышцах имеет решающее значение для окончательного восстановления мышечной силы и функции.

Генная терапия добилась значительных успехов в лечении мышечной дистрофии за счет как редактирования ex vivo ( 11 — 13 ), так и стратегий in vivo.Трансплантация отредактированных ex vivo стволовых клеток может генерировать новые здоровые миофибриллы, в то время как генная терапия in vivo, хотя и наиболее эффективна до значительной потери мышечной массы, продемонстрировала наиболее драматические и широко распространенные эффекты на животных моделях ( 6 ). В настоящее время проводятся многочисленные клинические испытания генной терапии in vivo на людях ( 14 ). In vivo CRISPR-Cas9-опосредованный пропуск экзона, в конечном итоге приводящий к усеченному, но функциональному дистрофину, улучшает патологию как у мышей, так и у собак в моделях мышечной дистрофии Дюшенна (DMD) ( 12 , 15 — 18 ).Хотя экспрессия белка дистрофина поддерживалась в течение 1 года у мышей [2 месяца у собак ( 18 )], вектор доставки CRISPR аденоассоциированного вируса (AAV) был иммуногенным при введении взрослым мышам ( 19 ). Недавно разработанные липидные наночастицы (LNP), которые доставляют рибонуклеопротеидный комплекс Cas9, показали пропуск экзонов и экспрессию белка дистрофина до 4,2% от нормы после повторных внутримышечных (IM) инъекций LNP ( 20 ), и такие векторы доставки липидов могут обеспечивать значительную преимущества перед векторами AAV.Золотые наночастицы (AuNP), доставляющие рибонуклеопротеиновый комплекс, вместе с ДНК-матрицей для восстановления мутации дистрофина, показали генную коррекцию в <1% транскриптов дистрофина у взрослых мышей после внутримышечной инъекции. Тем не менее, функция мышц в тесте на подвешивание на четырех конечностях была значительно улучшена у мышей, получавших AuNP, но все же была значительно ниже, чем у мышей дикого типа ( 21 ). На сегодняшний день единственный препарат, одобренный Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) для лечения МДД, основан на пропуске экзонов антисмысловыми олигонуклеотидами (этеплирсен) и позволяет восстановить <1% нормального уровня белка дистрофина после длительного системного введения ( 22 ).В совокупности данные предполагают, что внутримышечная инъекция терапевтических средств для редактирования генов имеет большой потенциал для лечения мышечной дистрофии, но также подчеркивает проблему полной коррекции гена и, следовательно, полного разрешения хронического воспаления, которое, вероятно, необходимо для остановки прогрессирования заболевания. Токсичность, связанная с длительным лечением антисмысловыми олигонуклеотидами ( 23 , 24 ), и иммуногенность векторов доставки CRISPR еще раз подчеркивают серьезную неудовлетворенную медицинскую потребность в новых стратегиях лечения мышечной дистрофии и взаимосвязи между такими видами лечения, прогрессированием заболевания и воспаление.Наиболее успешные стратегии, вероятно, будут использовать редактирование генов в сочетании с иммуномодуляцией для создания тканевого микроокружения, которое одновременно способствует толерантности к экспрессии дистрофина de novo ( 25 , 26 ) и способствует функциональной регенерации мышц ( 6 ). Модуляция воспалительного ответа таким образом, что он способствует регенерации мышц, может существенно улучшить использование генной терапии у пациентов, уже демонстрирующих потерю мышечной массы.

Гипотеза, лежащая в основе этого исследования, заключается в том, что AuNP могут доставлять противовоспалительные цитокины, в частности IL-4 и IL-10, в дистрофические скелетные мышцы, тем самым способствуя прорегенеративному иммунному ответу и улучшая регенерацию функциональной мышечной ткани у старых мышей MDX.Мыши Mdx несут нонсенс-мутацию в гене Dmd, кодирующем дистрофин, аналогично мутациям, обнаруженным у пациентов с МДД ( 27 ). Противовоспалительные или иммунные ответы типа 2, характеризующиеся макрофагами M2 и T _regs , способствуют восстановлению мышц ( 6 , 9 , 27 ). И наоборот, воспаление, ответ типа 1, вызывает повреждение мышц и регулируется противовоспалительными цитокинами, такими как IL-4 и IL-10. IL-4 представляет собой противовоспалительный цитокин, который может индуцировать иммунный ответ 2 типа, стимулируя как поляризацию макрофагов M2, так и фенотип Т-хелперных CD4 ⁺ .IL-4 использовался в качестве потенциального терапевтического средства в различных моделях воспалительных заболеваний, включая аутоиммунное демиелинизирующее заболевание, артрит и псориаз ( 28 — 30 ). IL-10 продуцируется T _regs и подавляет воспаление, частично, путем активации фенотипа макрофагов M2, который впоследствии может способствовать ангиогенезу, восстановлению мышц и ремоделированию ( 4 ). Хотя цитокиновая терапия широко изучалась, ее использование часто ограничивается неблагоприятными фармакокинетическими профилями, требующими повторных инфузий с системными побочными эффектами ( 31 ).Кроме того, плейотропная природа цитокинов с зависимыми от контекста благоприятными и вредными эффектами часто требует локальных или целенаправленных стратегий доставки, и это также ограничивает использование таких методов лечения ( 31 ). Здесь мы используем NP для доставки IL-4 и IL-10, поскольку они являются инъекционными и позволяют локализованное распределение по всей мышце-мишени. AuNP были специально использованы, поскольку они проявляют минимальную токсическую или иммуногенную активность у людей ( 32 , 33 ).Ранее мы показали, что IL-4-конъюгированные AuNP (PA4s) могут контролировать врожденный иммунный ответ у здоровых мышей после острого мышечного повреждения и в конечном итоге увеличивать мышечную силу ( 34 ). В настоящей работе исследуется способность этих НЧ контролировать воспаление и фенотип Т-клеток и улучшать функциональную регенерацию мышц в контексте хронического воспалительного заболевания, истощающего мышцы, мышечной дистрофии.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Первичные Т-клетки мышей mdx легко принимают фенотипы T

_H 1, T _H 2 и T _reg ex vivo

Чтобы Т-клетки мышей mdx могли соответствующим образом принимать фенотипы регенерации мышц, Мы исследовали способность Т-клеток, выделенных от мышей mdx в возрасте 14 недель, принимать иммуносупрессивный регуляторный (T _reg ) фенотип в дополнение к фенотипам воспалительных эффекторных Т-хелперных клеток типа 1 (T _H 1) и типа 2 (T _H 2).Т-клетки селезенки выделяли и культивировали с IL-12 для индукции дифференцировки T _H 1, IL-4 для дифференцировки T _H 2 и трансформирующим фактором роста β1 (TGFβ1) для дифференцировки T _reg вместе с дополнительными антителами. требуется для культуры Т-клеток, как описано ранее ( 35 ). Как и ожидалось, Т-клетки, обработанные IL-12, повышали экспрессию воспалительного фактора транскрипции T-bet, Т-клетки, обработанные IL-4, повышали экспрессию фактора транскрипции T _H 2 GATA-3 и секретировали IL- 4, а Т-клетки, обработанные TGFβ1, активировали регуляторный фактор транскрипции Т-клеток FoxP3 (рис.1), предполагая, что Т-клетки у мышей mdx могут отвечать на цитокины, принимая как воспалительный, так и прорегенеративный фенотип.

Рис. 1. Первичные mdx Т-клетки легко принимают фенотипы T _H 1, T _H 2 и T _reg .

( A ) Селезеночные наивные CD4 ⁺ Т-клетки выделяли у мышей mdx и стимулировали ex vivo для индукции фенотипов T _H 1, T _H 2 или T _reg . Репрезентативные графики показывают экспрессию факторов транскрипции, связанных с фенотипами T _H 1 (T-bet), T _H 2 (GATA-3) и T _reg (FoxP3).( B ) Средняя интенсивность флуоресценции (MFI) клеток, экспрессирующих каждый фактор транскрипции после стимуляции ex vivo для индукции фенотипов T _H 1, T _H 2 или T _reg . ( C ) Секрецию IL-4 в среду для культивирования клеток, 22-часовое культивирование при 10 ⁶ клеток / мл, количественно оценивали с помощью иммуноферментного анализа (ELISA). Все данные являются средними значениями ± SEM; n = 4 мыши (2 самца, 2 самки). ANOVA с апостериорным тестом Тьюки: * P <0.05, ** P <0,01, *** P <0,001.

Генерация НЧ, представляющих противовоспалительные цитокины ИЛ-10 и ИЛ-4

Затем мы разработали стабилизированные полиэтиленгликолем (ПЭГ) НЧ, представляющие мышиный ИЛ-10 или ИЛ-4 (рис. 2), чтобы определить, способствует ли тип 2 иммунных ответа в старых MDX-мышцах могут улучшить мышечную функцию. Монодисперсные AuNP были синтезированы восстановлением Au гидрохиноном на цитрат-стабилизированных затравочных частицах ( 36 ) и стабилизированы частичным ПЭГилированием поверхности 5-кДа тиолом ПЭГ (рис.2А). Частичное ПЭГилирование позволило осуществить последующую конъюгацию мышиного IL-10 или IL-4 с оставшейся поверхностью Au (рис. 2B). Конъюгация как мышиного IL-10, так и IL-4, вероятно, происходила непосредственно через связи тиол-Au с оставшейся поверхностью Au и электростатическими взаимодействиями. Динамическое рассеяние света (DLS) показало монодисперсные [индекс полидисперсности (PDI) <0,1] AuNP с диаметром ядра ~ 30 нм и конечным диаметром ~ 50 нм после конъюгации IL-10 или IL-4 (Таблица 1). Небольшой сдвиг вправо в распределении размеров после ПЭГилирования и конъюгации белков подтвердил ожидаемые модификации поверхности (рис.2, В и Г). ζ-потенциал также использовался для отслеживания модификаций поверхности. Как и ожидалось, ζ-потенциал становился все менее отрицательным после пегилирования и конъюгации IL-10 или IL-4 (таблица 1).

Фиг.2. Конъюгация мышиных IL-4 и IL-10 с AuNP.

( A и B ) Схема, показывающая частичное пегилирование и последующее конъюгирование IL-4 с AuNP. Конъюгация IL-10 проводилась по идентичной схеме. ( C ) Распределение размеров DLS 30-нм ядерных частиц AuNP (серый) после пегилирования (светло-розовый) и конъюгации IL-10 (темно-розовый).( D ) Распределение размеров DLS 30-нм ядерных частиц AuNP (серый) после пегилирования (светло-розовый) и конъюгации IL-4 (темно-розовый). Данные взяты из репрезентативных синтезов.

Таблица 1 Размер AuNP и ζ потенциал.

Нагрузка ИЛ-10 или ИЛ-4 на AuNP затем была аппроксимирована на основе упаковки сфер, моделируя IL-10 и IL-4 как сферы с диаметром, заданным их радиусом вращения, упакованные на сферический сердечник AuNP (рис. S1). Экспериментально определенные эффективности конъюгации IL-10 и IL-4 были согласованными и составляли 63 и 57% от теоретического максимума, соответственно (Таблица 2).Ожидаемая эффективность конъюгации менее 100%, поскольку поверхность AuNP была частично ПЭГилирована.

Таблица 2 Конъюгация IL-4 и IL-10.

Стабильность ПЭГилированных, конъюгированных с ИЛ-4 частиц была ранее оценена ( 34 ). Только 3% мышиного IL-4 высвобождалось в среду RPMI, содержащую 10% инактивированную нагреванием фетальную бычью сыворотку (FBS), после 61 дня в условиях культивирования клеток (37 ° C, 5% CO ₂ ) и с аналогичным профилем высвобождения. наблюдали для человеческого IL-4 ( 34 ).Это медленное высвобождение предполагает, что связи тиол-золото играют важную роль в конъюгации. Однако, учитывая изоэлектрические точки IL-4 и IL-10, нельзя исключать электростатические взаимодействия с AuNP (рис. S1B). Учитывая структурное и электростатическое сходство между IL-4 и IL-10, а также схожую эффективность упаковки AuNP (таблица 2), конъюгация и высвобождение IL-10, вероятно, аналогичны IL-4.

Для оценки биологической активности PEG-стабилизированных НЧ IL-10 (PA10) и IL-4 (PA4) частицы использовали для поляризации макрофагов in vitro.Конъюгированные с NP IL-10 и IL-4 активировали как CD163, так и CD206 в той же степени, что и эквивалентные дозы растворимого IL-10 и IL-4, что позволяет предположить, что оба цитокина сохраняют биоактивность после конъюгации (рис. S1C). ПЭГилированные частицы, лишенные цитокинов, не являются воспалительными (фиг. S1D) и не способствуют иммунным ответам 2 типа, на что указывает экспрессия макрофагов CD206 (фиг. S1E) ( 34 ).

Развитие хронического повреждения мышц у старых мышей mdx для модели DMD

Хотя мыши mdx имеют точечную мутацию в гене дистрофина, их относительная дегенерация мышц происходит значительно медленнее, чем наблюдаемая у людей.Пациенты с МДД обычно умирают в течение первых двух десятилетий жизни, в то время как мыши MDX имеют почти нормальную продолжительность жизни у мышей. Мыши Mdx продолжают набирать массу скелетных мышц и не демонстрируют значительной потери силы в течение по крайней мере 3-месячного возраста (рис. S2, A и B). Кроме того, мыши MDX имеют минимальные фиброзные поражения только в очень преклонном возрасте (> 18 месяцев), тогда как у людей фиброз наблюдается в раннем возрасте и коррелирует с потерей способности передвигаться. Вероятно, из-за легкого клинического заболевания у мышей MDX лечение 1.У здоровых мышей mdx в возрасте от 5 до 2,5 месяцев с PA4 не наблюдалось никакого улучшения мышечной силы или скорости сокращения (рис. S2, C и D). Чтобы более точно имитировать DMD человека и способствовать прогрессированию заболевания у мышей, микротравмы были выполнены в мышцах передней большеберцовой мышцы (TA) мышей mdx в возрасте от 10,5 до 11 месяцев ( 37 ). Чтобы определить наиболее подходящую модель хронического МДД, ежедневные микроповреждения сравнивали с однократной внутримышечной инъекцией нотексина Np в мышцу ТА. Мышцы были проанализированы примерно через 3 недели после прекращения протокола микроповреждений или инъекции Notexin Np, чтобы позволить острую травму и воспаление утихнуть и убедиться, что наблюдаемые эффекты были вызваны хронической травмой (рис.S2E). Ежедневные микроповреждения приводили к устойчивому снижению нормализованной силы мышечной массы, в то время как инъекция Notexin Np приводила только к острым, саморазрешающимся повреждениям у мышей mdx с восстановлением силы ТА до уровней, наблюдаемых у молодых неповрежденных мышей mdx (рис. S2F). Для изучения хронического мышечного повреждения, характерного для DMD, были проведены дальнейшие эксперименты in vivo на мышах MDX, подвергшихся повторному микроповреждению.

PA4 увеличивает присутствие T

_regs в хронически травмированной мышце mdx

Чтобы определить, могут ли PA4 и / или PA10 контролировать воспалительную реакцию у пожилых (10.От 5 до 11 месяцев) mdx мышей, частицы вводили внутримышечно в мышцу ТА. Два микрограмма IL-4 или IL-10, доставленных в виде PA4 или PA10, или фосфатно-солевого буфера (PBS) — только без частиц в качестве отрицательного контроля, вводили через 1 неделю после прекращения ежедневного протокола микроповреждений, чтобы позволить острому воспалению развиться. стихают до лечения (рис. 3А). Эта доза была выбрана на основе нашей предыдущей работы, показывающей ее способность сдвигать поляризацию макрофагов и улучшать мышечную функцию через ~ 2 недели после острого мышечного повреждения и однократного лечения на мышах дикого типа ( 34 ).Эта доза также соответствует другим местным инъекциям интерлейкинов, используемых в клинических испытаниях, которые хорошо переносятся ( 30 ). Красный / фиолетовый оттенок AuNP позволяет визуально оценить их общее биораспределение. Визуальный осмотр при вскрытии показал, что AuNP распределены по всей ТА, но не в окружающей ткани, и сохраняются в мышце в течение по крайней мере ~ 2 недель после инъекции (фиг. 3B).

Рис. 3 PA4 увеличивает T _reg в хронически травмированной пожилой мышце MDX.

( A ) Временная шкала, показывающая микроповреждения, вызывающие хроническое повреждение, лечение и анализ. ( B ) Репрезентативное изображение, показывающее фиолетовый оттенок AuNP в течение ~ 2 недель после инъекции. Черная пунктирная линия указывает очертание ТА-мышцы, а пурпурный оттенок РА4 визуально изолирован внутри ТА. ТА-мышцы, удаленные с ноги, показывают PA4 по всей ткани ТА (внизу справа) и без обработки (внизу слева). ( C ) Типичные диаграммы рассеяния и количественная оценка проточной цитометрии, показывающие экспрессию CD45, маркера иммунных клеток, на клетках, выделенных из ТА-мышцы.Данные представляют собой средние значения ± SEM; n = 6. ( D ) Иммунные клетки были сгруппированы на основе фенотипического сходства и нанесены на график в пространственно уменьшенном пространстве с использованием анализа tSNE в FlowJo. Слева: относительная экспрессия CD3, маркера Т-клеток, визуализируется цветом (синий, низкая экспрессия, красный, высокая экспрессия). Популяции Т-клеток обозначены высокой экспрессией CD3 (красный) и красной стрелкой. Справа: контурные графики tSNE от n = 6 мышей на группу лечения наложены, чтобы визуализировать различия в распределении иммунных клеток.Популяция Т-клеток обозначена красной стрелкой. ( E ) Типичные диаграммы рассеяния и количественная оценка проточной цитометрии, показывающие экспрессию CD3 на клетках, выделенных из ТА-мышцы. Данные представляют собой средние значения ± SEM; n = 6. * P <0,05. ( F ) Распределение клеток CD45 ⁺ в ТА: Т-клетки (CD3 ⁺ , розовые), лимфоидные ДК (CD3 ^— / CD11b ^— / CD11c ⁺ , светло-серые), миелоидные ДК (CD3 ^— / CD11b ⁺ / CD11c ⁺ , темно-серый), нейтрофилы (CD3 ^— / CD11b ⁺ / CD11c ^— / Ly6G ⁺ , синий), NK-клетки (CD3 ^— / CD11b ⁺ / CD11c ^— / Ly6G ^— / Ly6C ^— / F4 / 80 ^— , желтовато-коричневый), моноциты (CD3 ^— / CD11b ^{+ — / CD} / Ly6G ^— / Ly6C ⁺ / F4 / 80 ^— , черный), линия отрицательная (CD3 ^— / CD11b ^— / CD11c ^— , белый).( G ) Процент Т-клеток, выделенных из мышц ТА, которые представляют собой CD4 ⁺ / CD8 ^— Т-хелперы. Данные представляют собой средние значения ± SEM; n = 6. ( H ) Процент CD4 ⁺ / CD8 ^— хелперных Т-клеток, выделенных из мышц TA, которые являются FoxP3 ⁺ T _regs . Данные представляют собой средние значения ± SEM; n = 6. * P <0,05. Для всех сравнение Даннета с контролем PBS.

Обработка как PA10, так и PA4 имела тенденцию увеличивать рекрутирование иммунных клеток (рис.3С). Автоматическая кластеризация данных проточной цитометрии на основе уменьшения размерности [t-распределенное стохастическое встраивание соседей (tSNE)] использовалось для объективной идентификации уникальных популяций иммунных клеток в TA ( 38 ). Экспрессия маркеров клеточного происхождения была визуализирована в виде тепловой карты, наложенной на кластеризацию tSNE, чтобы идентифицировать популяции иммунных клеток (рис. S3A), и данные от шести мышей на группу лечения наложены (рис. S3B), чтобы визуально идентифицировать различия в рекрутинге иммунных клеток. .Примечательно, что обработка PA10 и PA4 увеличивала рекрутирование Т-клеток (рис. 3D). Большинство проникающих иммунных клеток были Т-клетками. Обработка PA10 и PA4 значительно увеличивала как процент клеток в мышцах, которые были Т-клетками, оцениваемые по экспрессии CD3 (фиг. 3E), так и процент иммунных клеток, которые были Т-клетками (фиг. 3F). Никаких значительных изменений в рекрутинге нейтрофилов, дендритных клеток (DC), естественных киллеров (NK), моноцитов или макрофагов после обработки PA10 или PA4 не наблюдалось (рис.S4).

Для дальнейшего исследования фенотипа Т-клеток была проведена автоматическая кластеризация tSNE Т-клеток CD3 ⁺ на основе экспрессии поверхностных (CD4 и CD8) и внутриклеточных (RORγT, T-bet, GATA-3 и FoxP3) маркеров. фенотипа Т-клеток (рис. S5A). Объединенные данные из каждой группы лечения показали, что обработка PA4 привела к более широкому диапазону фенотипов Т-клеток и к определенному увеличению FoxP3 ⁺ T _regs (рис. S5B). Поверхностные маркеры (CD4 и CD8) использовали для оценки присутствия хелперных и цитотоксических Т-клеток соответственно.После лечения PA4 процентное содержание CD4 ⁺ / CD8 ^— хелперных Т-клеток примерно удвоилось (рис. 3G), при этом наблюдалось одновременное снижение процента дважды отрицательных (CD4 ^— / CD8 ^— ) Т-клетки (рис. S6A). Хотя процент цитотоксических Т-клеток CD4 ^— / CD8 ⁺ также имел тенденцию к увеличению, это изменение не было статистически значимым (рис. S6B). Внутриклеточная проточная цитометрия факторов транскрипции показала, что PA4 значительно увеличивал процент CD4 ⁺ / CD8 ^— хелперных Т-клеток, которые были T _regs , идентифицированные по экспрессии FoxP3 (рис.3H). В то время как процент CD4 ⁺ / CD8 ^— Т-хелперов, экспрессирующих T-bet (идентифицирующих T _H 1 клеток), GATA-3 (идентифицирующий T _H 2 клеток) и RORγT (идентифицирующий T _H 17 клеток) также имели тенденцию к увеличению после обработки PA4, эти изменения не были статистически значимыми (рис. S6, C — E). Примерно 50% вспомогательных Т-клеток CD4 ⁺ / CD8 ^— , идентифицированных в мышцах ТА после обработки PA4, были T _regs , по сравнению только с ~ 20% после обработки PA10 или PBS (рис.3H).

PA4 улучшает гистологию и силу мышц у старых мышей MDX

Чтобы определить, был ли сдвиг в инфильтрации иммунных клеток в сторону T _regs после лечения PA4 достаточным для улучшения регенерации и функции мышц у старых и хронически травмированных мышей MDX, мышцы TA были оценивается через ~ 2 недели после лечения. Никаких изменений веса ТА-мышц или веса мышей не наблюдалось ни в одной группе в этот момент времени (фиг. S7). Гистологическая инфильтрация иммунных клеток наблюдалась во всех группах, при этом ни одна из экспериментальных групп не демонстрировала значительный фиброз в гистологии гематоксилина и эозина (H&E) (рис.4A и рис. S8). Однако площадь поперечного сечения мышечных волокон была значительно увеличена в ТА-мышцах, обработанных PA4, по сравнению с контрольными PBS (фиг. 4, A и B). Хотя обработка PA10 увеличивала площадь мышечных волокон, это увеличение не было статистически значимым.

Рис. 4 PA4 увеличивает площадь мышечных волокон и увеличивает силу у старых мышей с мышечной дистрофией.

( A ) Представитель H&E TA-мышц примерно через 3 недели после прекращения ежедневного микроповреждения и через 2 недели после лечения.Увеличение, × 10. Шкала 300 мкм. ( B ) Процент поперечного сечения ТА, связанный с мышечными волокнами. ANOVA с апостериорным тестом Тьюки; данные представляют собой средние значения ± SEM, n = 3. * P <0,05. ( C и D ) Максимальная сила и скорость сокращения ТА-мышцы после стимуляции ex vivo при 250 Гц, 25 В. Сила нормализовалась по массе ТА. ANOVA с апостериорным тестом Тьюки; данные — это средние значения ± стандартная ошибка среднего; n = от 5 до 6. * P <0,05.

Чтобы определить, соответствует ли увеличение площади мышечных волокон улучшению мышечной функции, после тетанической стимуляции измеряли силу и скорость сокращения ТА-мышцы ex vivo. ТА-мышцы, обработанные РА4, показали четырехкратное увеличение как силы сокращения ТА, нормализованной по мышечной массе, так и скорости по сравнению с обработкой PBS (рис. 4, C и D). Это значительное увеличение способности ТА-мышцы генерировать силу и быстро реагировать на тетанический раздражитель свидетельствует об улучшении мышечной функции у мышей MDX после лечения PA4.

Макрофаги играют минимальную роль в механизме лечения PA4 у мышей mdx

Значительная инфильтрация T _reg в обработанные PA4 хронически поврежденные мышцы mdx (рис. 3, D — H) и минимальное рекрутирование макрофагов (рис. S4F) ) предполагают, что Т-клетки играют центральную роль в механизме лечения PA4. Однако ранее было показано, что поляризация макрофагов M2 значительно улучшает мышечную функцию после острого повреждения у здоровых мышей ( 34 ). Таким образом, чтобы оценить роль макрофагов в мышечной функции mdx, первичные сателлитные клетки, выделенные от мышей mdx или дикого типа, совместно культивировали с RAW 264.7 клеток, линия клеток мышиных макрофагов. В то время как совместное культивирование с сателлитными клетками дикого типа или сателлитными клетками mdx способствовало активации макрофагов, совместное культивирование с сателлитными клетками, полученными с mdx, способствовало значительно меньшей активации макрофагов, чем сателлитные клетки дикого типа. Макрофаги, совместно культивированные со сателлитными клетками mdx, продемонстрировали более низкие уровни экспрессии CD206 (маркер поляризации M2a) (рис. S9, A и B) и CD80 (маркер M1) (рис. S9, C и D), что позволяет предположить, что сателлитные клетки mdx действительно по своей природе не способствуют такой же активации макрофагов, как сателлитные клетки дикого типа.

Чтобы оценить способность первичных макрофагов mdx отвечать на поляризационные цитокины, макрофаги костного мозга (BMDM) были выделены из мышей mdx или дикого типа (рис. S10A) и поляризованы ex vivo с помощью IL-4, IL-10. , ИЛ-4 + ИЛ-10 или отсутствие цитокинов в качестве отрицательного контроля. В отличие от макрофагов дикого типа, макрофаги mdx не подавляют CD80 (рис. S10B) и не повышают уровень CD206 (рис. S10C) в ответ на IL-4 и / или IL-10, что позволяет предположить, что макрофаги mdx менее чувствительны, чем макрофаги дикого типа. макрофаги -типа к поляризационным цитокинам.Чтобы оценить поляризацию макрофагов in vivo у мышей MDX, PA4 вводили внутримышечно и использовали проточную цитометрию для оценки фенотипа макрофагов через ~ 2 недели после лечения, как указано выше. В соответствии с результатами in vitro, обработка PA4 не изменяла поляризацию макрофагов по сравнению с группой PBS. Не было изменений в уровнях экспрессии CD206 (M2a), CD86 (M1) или CD80 (M1) (рис. S11, от A до C) или в процентном отношении макрофагов, принимающих фенотип M1 (рис. S11D). Наблюдалось небольшое, но значительное увеличение процента макрофагов M2a при лечении PA4 (рис.S11E), но общее присутствие макрофагов в мышце mdx TA по-прежнему составляло лишь небольшую часть иммунных клеток (~ ≤10%), и рекрутирование макрофагов не было значительно увеличено обработкой PA4 (рис. S11F). Вместе эти данные предполагают, что хотя доставка NP IL-4 может способствовать развитию противовоспалительного микроокружения в мышцах, которое поддерживает поляризацию макрофагов M2a, макрофаги, вероятно, играют небольшую роль в механизме лечения PA4 у мышей mdx.

ОБСУЖДЕНИЕ

Воспаление является движущей силой прогрессирования многих распространенных состояний, от сердечно-сосудистых до генетических.МДД — неизлечимое генетическое заболевание, вызванное недостатком дистрофина и структурной нестабильностью мышечной ткани. Все 43 генетически дивергентных разновидности мышечной дистрофии имеют хроническое воспаление ( 6 ). Хроническое воспаление вносит существенный вклад в патогенез МДД, а инфильтрация иммунных клеток в скелетные мышцы тесно связана с тяжестью заболевания ( 39 ). Здесь мы показываем, что IL-4-конъюгированные AuNP способствуют инфильтрации мышечного T _reg после внутримышечной инъекции хронически травмированным пожилым мышам mdx, состояние, характерное для клинически распространенной МДД.Накопление T _reg под действием PA4 в конечном итоге привело к улучшению регенерации мышечных волокон MDX и четырехкратному увеличению силы и скорости сокращения мышц через 2 недели после лечения.

Результаты этих исследований демонстрируют, что Т-клетки мышей mdx могут соответствующим образом принимать как воспалительный, так и прорегенеративный фенотип. В ответ на воспалительную или иммуносупрессивную цитокиновую стимуляцию Т-клетки, выделенные из селезенки MDX, активировали экспрессию фактора транскрипции, ассоциированную либо с фенотипами эффекторных Т-клеток воспаления, T _H 1 и T _H 2, либо с прорегенеративным фенотипом T _reg (Рис.1). Кроме того, как воспалительные, так и прорегенеративные Т-клетки были обнаружены в мышцах ТА MDX (рис. 3, G и H, и рис. S6). Это согласуется с предыдущими сообщениями, которые показывают, что мышцы как у мышей MDX, так и у пациентов с МДД подвергаются непрерывным циклам повреждения и регенерации миофибрилл, сопровождающихся как воспалительной, так и прорегенеративной инфильтрацией иммунных клеток, соответственно ( 6 ). Кроме того, есть данные, позволяющие предположить, что обе ветви активации Т-клеток вносят вклад в МДД. Истощение антител либо CD4 ⁺ хелперных Т-клеток, либо CD8 ⁺ цитотоксических Т-клеток от мышей mdx значительно уменьшало гистологически различимую мышечную патологию ( 7 ).И наоборот, модификация in vivo воспалительных путей, которая привела к увеличению T _regs , увеличивала мышечную силу ( 40 ).

Это исследование демонстрирует, что AuNP можно использовать для доставки биоактивных иммуномодулирующих цитокинов мышиных IL-10 и IL-4 внутримышечно мышам mdx. Ранее мы показали, что ПЭГилированные AuNP являются стабильными, биологически инертными и неиммуногенными ( 34 ). Кроме того, мы показали, что человеческий и мышиный ИЛ-4, конъюгированный с этими частично ПЭГилированными AuNP, является стабильным, и только ~ 3% высвобождается через 61 день в среде, содержащей 10% сывороточных белков, и что конъюгированный ИЛ-4 сохраняет свою биоактивность ( 34 ).Здесь мы расширяем эту платформу доставки цитокинов на мышиный IL-10. Как и ожидалось, распределение наночастиц по размерам сдвинулось вправо, а ζ-потенциал стал менее отрицательным после частичного пегилирования и конъюгации IL-10 или IL-4 (рис. 2 и таблицы 1 и 2). Повышенное привлечение Т-клеток в обработанные мышцы и некоторое улучшение мышечной функции после обработки как PA10, так и PA4 показали, что конъюгированные цитокины сохраняли биоактивность после внутримышечной инъекции, как и ожидалось (фиг. 3, D-F и 4, C и D).Терапевтическая эффективность, наблюдаемая через 2 недели после однократной инъекции PA4, также дает некоторое представление о временном масштабе и устойчивости терапии PA4 in vivo. Ранее изучались различные методы доставки цитокинов, включая непрерывную внутривенную инфузию (фаза 1 клинического испытания) онкологическим больным ( 41 ), конъюгацию с децеллюляризованными каркасами ( 42 ) и временно контролируемое высвобождение из гидрогелей для доставки в мышцы ( 43 ). Однако некоторые из этих подходов были ограничены токсичностью и дозовыми ограничениями (особенно в случае инфузий) и их способностью равномерно распределять цитокин по ткани-мишени.Также изучались стратегии нацеливания на мышцы, включая доставку аденоассоциированным вирусным (AAV) вектором компонентов CRISPR или другой генетической информации ( 19 , 44 ) и идентификацию пептидов, нацеленных на мышцы ( 45 ). Однако эффективность переноса генов, неблагоприятные иммунные ответы на капсидный белок AAV и нацеленная на пептидный лиганд доставка лекарств остаются проблемными ( 46 ). Здесь конъюгация IL-10 и IL-4 с AuNP позволила неиммуногенному распределению цитокинов по всей мышце-мишени, предоставив модель для исследования их способности контролировать воспаление в контексте хронического МДД и влияния такой иммуномодуляции на функцию мышц. с клинически значимым вектором доставки.Составы коллоидного золота были одобрены FDA для лечения артрита, а доставка TNF-α с помощью AuNP показала многообещающие результаты в клинических испытаниях рака ( 47 , 48 ).

Доставка NP

обеспечивает более сильную и длительную иммуномодуляцию, чем растворимые цитокины. Ранее мы показали, что поляризация макрофагов PA4 приводит к более высоким и более стабильным уровням экспрессии CD206, чем растворимый IL-4, и что повышенная валентность IL-4 на НЧ приводит к увеличению поляризации M2a ( 34 ).Здесь мы показываем, что AuNP-конъюгированный IL-10 также сохраняет свою биоактивность и способность управлять фенотипом макрофагов in vitro (рис. S1C). AuNP сохранялись в мышце MDX в течение по крайней мере 2 недель после внутримышечной инъекции и способствовали накоплению T _reg в течение этого периода времени (рис. 3). Ранее мы показали, что растворимый ИЛ-4 неспособен улучшить мышечную функцию после острого повреждения у здоровых мышей по сравнению с 40% -ным увеличением силы, наблюдаемым после лечения эквивалентной дозой ИЛ-4, доставленной в виде РА4 ( 34 ).Это открытие предполагает, что доставка NP имеет решающее значение. Более тяжелая и хроническая воспалительная природа МДД предполагает, что растворимый ИЛ-4 будет еще менее эффективен при терапевтическом изменении иммунного ответа в этом контексте; здесь, вероятно, была необходима способность PA4 обеспечивать устойчивую поляризацию цитокинов. Было также показано, что ПЭГилирование защищает интерлейкины от разложения in vivo, тем самым улучшая их терапевтическую эффективность ( 49 ). AuNP-ПЭГилирование, вероятно, также принесло пользу в контексте острого мышечного повреждения ( 34 ) и дистрофии, изучаемых здесь.Акцент был сделан на IL-4 / PA4, поскольку PA4 оказался наиболее многообещающим терапевтическим средством. Однако стоит отметить, что растворимый ИЛ-10 не прошел многократных клинических испытаний из-за его нестабильности in vivo ( 50 ). По этим причинам, в дополнение к неспособности PA10 улучшать мышечную функцию у мышей mdx (рис. 4), растворимый IL-10 был исключен из текущего исследования. Однако будущие исследования для оценки того, как долго PA4 сохраняется в мышцах, понимания клеточной интернализации NP и определения продолжительности противовоспалительного иммунного ответа, будут важны, поскольку такие параметры будут необходимы для разработки режимов дозирования, необходимых для эффективно лечить МДД.Обработка

PA4 значительно увеличила присутствие иммуносупрессивных / прорегенеративных Т-клеток, T _regs , в хронически травмированной мышце MDX. IM-инъекция PA4 увеличивала инфильтрацию Т-клеток в мышцу и приблизительно удваивала процент CD4 ⁺ / CD8 ^– хелперных Т-клеток (рис. 3, D, E и G). Почти половина CD4 ⁺ / CD8 ^— хелперных Т-клеток были FoxP3-экспрессирующими T _regs после обработки PA4, по сравнению только с ~ 20% в группе отрицательного контроля (рис.3H). Это согласуется с предыдущими данными о том, что IL-4 может индуцировать образование T _regs из наивных CD4 ⁺ Т-клеток ( 51 ). Передача сигналов IL-4 через преобразователь сигнала и активатор транскрипции 6 (STAT6) необходима для экспрессии и поддержания транскрипционного фактора FoxP3 T _reg , пролиферации и выживания T _reg ( 52 , 53 ). IL-4 также улучшает способность T _regs ингибировать продукцию воспалительного интерферона-γ (IFN-γ) CD4 ⁺ Т-клетками независимым от STAT6 образом ( 52 ).Повышенное количество T _regs наблюдалось в скелетных мышцах мышей MDX по сравнению с мышами дикого типа ( 27 ), предполагая, что иммунная среда в дистрофических мышцах может способствовать проникновению или активации T _reg . Было показано, что лечение mdx-мышц комплексами IL-2 увеличивает частоту мышечных T _regs на ~ 10 процентных пунктов (~ 15% CD4 ⁺ T-клеток представляют собой T _regs в отрицательном контроле по сравнению с ~ 25%). T _{соответствует} в группе лечения) и увеличивает мышечный IL-10 почти вдвое ( 9 ).Здесь обработка PA4 привела к T _regs , что составляет почти половину от общего количества CD4 ⁺ Т-клеток в мышце. Повышенные уровни IL-10 также наблюдались в мышцах mdx ( 8 ), и биологическое насыщение IL-10 могло ограничить терапевтическое преимущество дальнейшей доставки IL-10 с помощью PA10. Модуляция дистрофического микроокружения с помощью PA4, однако, еще больше увеличивала присутствие T _regs в хронически травмированных мышцах mdx; следовательно, PA4 может обладать особой способностью управлять рекрутированием T _reg в контексте DMD, что, возможно, в конечном итоге приводит к ослаблению воспаления и улучшенной регенерации мышц.

Обработка PA4 улучшила регенерацию mdx-мышц и улучшила их функции. Через две недели после инъекции PA4 мышцы ТА продемонстрировали увеличение площади мышечных волокон и четырехкратное увеличение силы и скорости сокращения по сравнению с отрицательными контролями (рис. 4). Это согласуется с предыдущими исследованиями, показывающими, что IL-4 способствует регенерации мышц как напрямую, контролируя слияние миобластов и созревание функциональных мышечных трубок ( 54 ), так и косвенно, через стимулирование иммунного ответа 2 типа.Доставка AAV компонентов редактирования гена CRISPR (Cas9 и однонаправляющая РНК) увеличивала экспрессию дистрофина и увеличивала мышечную силу вдвое в модели МДД с делецией экзона 44 у мышей по сравнению с необработанным контролем через 4 недели после лечения ( 12 ). AuNP, доставляющие компоненты CRISPR вместе с ДНК-матрицей для восстановления мутации дистрофина, приводили примерно к двукратному увеличению времени зависания на проводе через 2 недели после лечения ( 21 ). Ранее мы показали, что стимулирование поляризации макрофагов M2 обработкой PA4 улучшало мышечную силу на 40% по сравнению с группами отрицательного контроля у мышей дикого типа после острого повреждения ( 34 ).Искажение поляризации макрофагов M2 у мышей mdx за счет удаления остеопонтина увеличивало удельную силу мышц задних конечностей в 1,2-1,3 раза ( 10 ). Здесь мы демонстрируем четырехкратное улучшение мышечной силы после лечения PA4 и набора T _reg , предполагая, что Т-клетки также могут играть центральную роль в функции mdx мышц.

Повышенное присутствие T _regs в мышцах ТА после обработки PA4, вероятно, сыграло решающую роль в стимулировании регенерации и функции мышц.И наоборот, минимальные терапевтические эффекты, наблюдаемые после лечения PA10, можно частично объяснить его неспособностью увеличивать инфильтрацию мышечного T _reg (рис. 3G, H). Многочисленные доказательства подтверждают роль T _regs в регенерации мышц, поскольку эти клетки как модулируют воспаление, так и непосредственно влияют на рост мышц. Секреция IL-10 с помощью T _regs подавляет воспалительные процессы, повреждающие мышцы ( 9 ). Секреция IL-10 с помощью T _regs , задействованная после лечения PA4, могла способствовать наблюдаемому здесь улучшению мышечной силы, возможно, обеспечивая аналогичное преимущество комбинированной доставки как IL-4, так и IL-10.Напротив, обработка PA10 обеспечивала минимальное привлечение T _reg и, возможно, минимальную стимуляцию дополнительных регенеративных цитокинов. T _regs также оказывает прямое действие на предшественников мышц и возникающие миофибриллы через амфирегулин (Арег). Анализ транскрипции всей мышцы показал, что истощение T _reg у мышей mdx было связано с подавлением генов, связанных с гомеостазом и функцией мышц; Увеличение сывороточных уровней креатинкиназы, фермента, связанного с повреждением мышц, также наблюдалось при истощении T _reg ( 27 ).Кроме того, многообещающими оказались различные методы лечения, которые способствуют накоплению T _reg в мышцах MDX. Рапамицин улучшил мышечный фенотип mdx, в основном за счет снижения инфильтрации эффекторных CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клеток, при сохранении T _regs ( 55 ). Комплексы IL-2 / анти-IL-2 также снижали уровень креатинкиназы и улучшали гистологию мышц, одновременно с увеличением T _regs ( 9 ). Однако эти исследования не измеряли силу или функцию мышц.Здесь наблюдалось значительное увеличение силы и скорости сокращения мышц, сопутствующее увеличению T _regs , после лечения PA4 у мышей mdx.

Поляризация макрофагов, вероятно, играла небольшую роль в механизме воздействия PA4 на мышцы mdx. Клетки-сателлиты мышей mdx не поддерживали такую ​​большую активацию макрофагов, как сателлитные клетки дикого типа (рис. S9), а макрофаги mdx были менее чувствительны, чем макрофаги дикого типа, к поляризационным цитокинам как in vitro, так и in vivo (рис.S10 и S11). Хотя макрофаги, как было показано, играют центральную роль в регенерации и функционировании мышц у здоровых мышей ( 34 ), здесь наблюдались низкие количества макрофагов у мышей mdx, неспособность лечения PA4 стимулировать рекрутирование макрофагов (фиг. S4F и S11F). и относительная неспособность макрофагов mdx так сильно реагировать на IL-4 и IL-10, вероятно, ограничивает их терапевтический потенциал в дистрофических мышцах. Вместе эти данные показывают, что мутация mdx ограничивает способность дистрофических мышечных сателлитных клеток стимулировать активацию макрофагов и способность макрофагов mdx полностью отвечать на IL-4 и / или IL-10.Однако прямое сравнение мышечной функции и терапевтической эффективности PA4 у мышей mdx и мышей дикого типа является сложной задачей. Лечение неповрежденных мышей mdx не привело к какому-либо улучшению мышечной силы (рис. S2, C и D), вероятно, из-за легкого клинического заболевания, что позволяет предположить, что лечение мышей дикого типа также не приведет к каким-либо изменениям в мышечной функции. Микроповреждения, используемые здесь для ускорения прогрессирования заболевания у мышей MDX, позволили нам изучить тяжелую хроническую модель МДД и наблюдать терапевтическую эффективность PA4.Однако такое микроповреждение не приводит к повреждению или воспалению у мышей дикого типа ( 56 ).

Результаты этих исследований показывают, что конъюгированные с IL-4 AuNP могут сдвигать иммунный ответ в хронически воспаленных дистрофических мышцах и, в конечном итоге, способствовать улучшению регенерации и функции мышц. Хотя у пациентов с МДД было идентифицировано более 7000 уникальных генетических мутаций ( 59 ), хроническое воспаление играет решающую роль в патогенезе всех форм МДД.Это исследование предполагает, что модуляция иммунного ответа PA4 может замедлить прогрессирование заболевания и улучшить мышечную функцию у пациентов, страдающих широким спектром мышечных дистрофий.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Дополнительные методы см. В дополнительных материалах.

Дизайн эксперимента

Гипотеза этого исследования заключалась в том, что AuNP, доставляющие противовоспалительные цитокины, будут способствовать прорегенеративному иммунному ответу в дистрофических мышцах и в конечном итоге привести к улучшению регенерации и функции мышц.Эксперименты были разработаны для оценки влияния AuNP, конъюгированных с IL-4 и IL-10, по сравнению с контролем PBS у старых мышей mdx с хроническими повреждениями для моделирования клинически распространенной дистрофии. Условия эксперимента были выбраны на основе предыдущей работы, показывающей, что растворимый ИЛ-4 не может улучшить мышечную функцию после острого повреждения ( 34 ), и основаны на ожидании того, что доставка растворимых цитокинов не принесет значительных преимуществ в контексте хронических заболеваний. , запущенная мышечная дистрофия.Все виды лечения вводили по крайней мере через 3 недели после начала хронического повреждения у мышей MDX, чтобы гарантировать, что острое повреждение и воспаление утихли. Исследования in vivo проводились на самцах и самках мышей mdx одного поколения, выведенных в Гарвардском университете, чтобы минимизировать различия между группами. Вся работа с животными соответствовала требованиям Национального института здоровья и институциональным директивам. Количество животных и статистические параметры указаны в подписях к рисункам.

Культура Т-клеток

Наивные CD4 ⁺ Т-клетки были выделены из селезенки мышей mdx после эвтаназии в соответствии с национальными институтами здравоохранения и институциональными рекомендациями.Т-клетки выделяли путем истощения клеток, не являющихся мишенями, с использованием сортировки клеток с магнитной активацией и культивировали ( 35 ), и среду дополняли для активации различных фенотипов (таблица S1).

Синтез и конъюгация AuNP

AuNP были синтезированы восстановлением Au гидрохиноном на затравочных частицах, стабилизированных цитратом ( 36 ). После ПЭГилирования с помощью ПЭГ-тиола 5 кДа, мышиный IL-10 или IL-4 добавляли в концентрации 0,5 лигандов / нм ² с 10% (мас. / Об.) Трегалозой для конъюгации в течение ночи, как описано ранее ( 34 ).

Модели на животных

Все работы с животными соответствовали требованиям Национального института здравоохранения и институциональным руководствам с самцами и самками мышей mdx, выведенными в Гарвардском университете, в возрасте от 10,5 до 11 месяцев. Хроническое мышечное повреждение индуцировали ежедневным микроповреждением ( 37 ) и сравнивали с моделью токсинового повреждения, индуцированного внутримышечной инъекцией нотексина Np (дополнительные материалы). Чтобы обеспечить распределение лечения по всей ТА, общую дозу вводили двумя 10 мкл внутримышечно инъекциями.

TA force

TA-мышцы были установлены между двумя электродами и подключены к датчику силы ( 58 ). Сокращение столбнячных мышц вызывали при 250 Гц, 25 В в течение 1 с. Сила сокращения нормировалась на массу ТА. Скорость сокращения измеряли как наклон кривой силы во время стимуляции ( 34 ).

Гистологический анализ

Было проведено окрашивание

H&E, и 10-кратные изображения были распределены по всему поперечному сечению мышцы.Цветовая деконволюция в ImageJ использовалась для оценки процента площади поперечного сечения мышцы, состоящей из мышечных волокон (розовый, эозин) или ядер клеток (синий, гематоксилин).

Статистический анализ

Все анализы были выполнены с помощью GraphPad Prism 5. Тесты дисперсионного анализа (ANOVA) с апостериорным тестом Тьюки использовались для множественных сравнений на всем протяжении. Как отмечалось, использовалось сравнение Даннета с контрольным условием. Снижение размерности высокопараметрической проточной цитометрии было выполнено с использованием алгоритма tSNE в FlowJo v10.6.2 (TreeStar, США) (Дополнительные материалы) ( 38 ).

Благодарности: Финансирование: Эта работа была поддержана грантом NIH DP3DK108224 (D.J.M.), программой стипендий NSF Graduate Research Fellowship (T.M.R.) и грантом NIH R01 DE013349. Вклад авторов: Концептуализация: T.M.R. и D.J.M .; методология: T.M.R .; формальный анализ: T.M.R .; расследование: T.M.R .; руководство: D.J.M .; письмо — первоначальный черновик: T.M.R. и D.J.M .; написание — просмотр и редактирование: Т.M.R. и D.J.M. Конкурирующие интересы: Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов. Доступность данных и материалов: Все данные, необходимые для оценки выводов в статье, представлены в документе и / или дополнительных материалах.

• Copyright © 2021 Авторы, некоторые права защищены; эксклюзивный лицензиат Американской ассоциации содействия развитию науки. Нет претензий к оригинальным работам правительства США. Распространяется по некоммерческой лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (CC BY-NC).

Юрий Бурлан, векторно-системная психология. Системно-векторная психология, окончательный тест Vectors

Системно-векторная психология Юрий Бурлан, waans boeken hawwe wurden hiel populêr yn de ôfrûne jierren, basearre op Freud syn konsept fan psychosexual. Ним, нет, мелкие детали.

Algemiene skaaimerken

As ien fan ‘e wichtichste betingsten foar de goede opfieding fan bern de skriuwer neamt de teory fan oanberne beryp fan de eigenskippen en kwaliteiten fan elk bern.De needaaklike Kennis yn dit gebiet en help te behearskjen it systeem-vector психология. Вектор — это типо «oriïntaasje». Смотри на него как на человека. Selsferwêzentliking wurdt dan droegen troch in rol yn de maatskippij. Он начал, это было похоже на тапасте виттенскип. Это fasilitearret rappe ûntwikkeling meganismen ûnbewuste wurking, syn uterings yn elk yndividu, op it nivo fan it pear, de groepen fan de maatskippij. Как gefolch fan ‘e assimilaasje fan’ e kennis fan, folwoeksen tinken wurdt omfoarme ta в объективном блике на ват дер libbet.Это komt akseptaasje en folsleine megryp fan, это gedrach fan oaren en harren Prioriteiten yn it libben. Векторно-системная психология kinne âlden om better ferstean jo bern en opliede him sa, dat syn potinsjele waard realisearre safolle mooglik.

De essinsje fan it konsept

Wat systeem-boud векторная психология? Толкачев (со-скеппер, фанатская теория), en oare ûndersikers hawwe problems, fan it ûnderwiis ûntwikkelt it idee, что еще один человек — это berne mei spesifike winske eigenskippen.Se определить minsklik libben senario, syn gedrach en karakter. Dy eigenskippen binne ferdield yn 8 groepen. Yn elk fan dy skaaimerken wurde kombinearre, ôfhinklik fan ‘e foarstelling fan’ e rol yn de maatskippij. Sy, in beurt, útdrukt it doel fan ‘e minske, besteande út yn oerlibjen. Eltse groep (вектор) шляпа в ferbining mei in beskaat gefoelich gebiet. Это bepaalt de persoan ûntfangende из útfier metoade ynformaasje oer josels en de wrâld, dat leit его. Oanberne skaaimerken fan it yndividuele karakter fan syn libben net feroarje.Lykwols, se meie ferskine yn ferskillende foarmen.

основы

Система векторной психологии позволяет понять, как это сделать. In persoan dy’t syn eigendom bleau net sa bot ntwikkele, sil optrede yn ‘e tsjinoerstelde ferlike mei de ûntjouwing fan’ e yndividuele senario. Под dit senario ûntwikkelet это libben. В личном роде útgroeie ta in dief of in rjuchter, of in Schizophrenic sjeny, in rapist of in perfekte famylje minske, ensafuorthinne.Eigenskippen ûntwikkele foardat puberteit включительно. Dêrnei prestaasje kin wurde fol of / útfierd, of net. В этом смысле векторно-системная психология дает ему brûken fan oanberne eigenskippen, fanwege dêr’t immen krijt foldwaning en yn in stat fan harmony. Dit alles suggerearret dat de kaai skaaimerken wurde lein op jonge leeftyd en ferbettere te foltôgjen puberteit. De wichtichste rol yn dit proses heart by de âlden. Это hja, dy’t stal de wrâld om ‘e bern yn dizze perioade.

Relaasje mei skaaimerken

Identifikaasje fan eigenskippen begin mei in beskriuwing fan harren útdrukking yn de primitive perioade fan it peloton.Dat kinne wy ​​getripe it baseûnderwiis, orizjinele steat, dat wurdt jûn fan berte. Sa is it mooglik om te efterheljen de ûntwikkeling fan mentale prestaasjes, dy’t plakfn yn ‘e rin fan’ e kompleksiteit fan ‘e wrâld, yn’ e lêste pear tûzen jier.

get fan de nuânses

De fraach fan de goede opfieding fan bern yn классическая психология Fergrime it ntstean fan in bern syn ûntwikkeling metoades. Мар Гуон Фан Харрен Дудлик tsjinsprekke elkoar. Неэффективность Харрена и неэффективность для фанатов это feit dat de oprjochte Definysje Fan «нормальный» вентилятор, это bern binne net beskikber.Der binne gjin absolute grûnen dêr’t в персоне op jonge leeftyd wurdt beskôge as geastlik sûn, en syn hâlden en dragen wurdt beskôge как проходной, как идущий как весло. Yn dit ferbân, oer de ôfrûne heale ieu yn de kategory opnommen de talitberens en iere seksuele libben, en ôfwizing fan oanberne geslacht identityit. Yn dit gefal, Yu biedt Burlan? Психология Systeem-vector определена, чтобы узнать, как это сделать, вы не знаете, как это сделать. Dit foarkomt skea dat kin feroarsaakje âlden ûntwikkelje harren bern, en ek stelt betiid identifisearje de meast Effektive edukative metoaden.

proefskriften

Fan wat advisearret Yu ôfwarde Burlan? Системно-векторная психология, синхронизация, basearre op de folgjende stellingen:

1. It bern hat net ervje skaaimerken fan harren âlden, en kin hawwe hiel ferskillende eigenskippen.
2. As de wichtichste taak fan de folwoeksen foarsprekkers bieden fan bern in feilige omjouwing, de steat fan ‘e feiligens. Весло находится в ферментации, фермации остановки ntwikkeling.
3. ûnderwiis en oplieding metoaden moatte neffens de oanberne eigenskippen.
4. Effekten fan ûntfongen foardat puberteit trauma kinne нейтрализует ntlêste troch systeem ynteraksje.
5. Bern binne de fertsjintwurdigers fan de folgjende generaasje. Dat betsjut dat de ynherinte krêft fan langstme en harren potinsje is folle heger as de âlder.
6. Yn it deistige kommunikaasje, ûnderwiis en bern ûntwikkeling Key sprekkers systemen tinken âldere famyljeleden. Dat is benammen fan belang foar de mem, omdat sy is de wichtichste persoan yn myn libben oant de foltôging fan ‘e puberteit.

Tink oan in pear fan ‘e groepen dy’t идентифицировать системно-векторную психологию. Испытайте бепалевый хоккерный вектор перед бепаальдовым фрагментом. De reaksjes op har set heartrend ta ien типа весла.

«Dermatoloog»

Soarten rol fan sa’n bern is te meitsjen en te slaan продовольственные запасы. Хай находится в логыске wize fan tinken. Поскольку это oanberne eigenskippen fan it bern syn systeem-vector Psychoology bepaalt de mobiliteit en aktiviteit. Hy hat gefoelige fel, пластиковый лишай, это может быть вентилятор dûns klassen en sport.Sa’n bern hiel stingy mei emoasjes en wurden. Hy hat de koarte лаконичный синнен. Ольден бинн, который научил его усмешкам.

wearden fan it libben

Что характерно для системно-векторной психологии Юрий Бурлан? De test docht bliken dat de ûntwikkeling fan oanberne eigenskippen «dermatoloog» fan it bern groeit yngenieur wetjouwer, súksesfol behearder. Hy wit hoe’t om sizzen jaan en te ûndergeskikte, keunstner yn dysels en oaren. Как в bern wurdt straft beating, dan sil foarmje de strekking nei мазохизм.Yn it gefal fan gebrek oan ûntwikkeling fan syn eigenskippen, hy wurdt in dief, in alkoholist, famkes opgroeie как проститутки.

dy talittingseasken pleatst

Вектор-системная психология ferwurdet в наборе fan regels foar de normale ûntwikkeling fan it child- «dermatoloog». В нем слышен ров, который узнает о том, как он резжим и рассеивается. Fan kaai belang sil spylje sporten. Yn it proses fan it ûnderwiis skriuwer fan it konsept trunet âlders te iens op prikkels foar begean fan in bern fan beskate aksjes.De meast passende straf kin beheind yn tiid en romte.

urethral gebiet

Bern fan dit type склонны к wêzen ferantwurdlik foar it libben, stribje te wreidzjen wenromte. Это очень популярно в его системно-векторной психологии. Протестируйте, как это сделать, вектор из нетто-стандартного тактического тинкена. Дай Берн Бенн де Бонделс вентилятор enerzjy en wolle libje. Se wurde karakterisearre troch de dominante miening, se binne altyd entûsjast eagen. Это lichem temperatuer wurdt altyd ferhege. Dy bern net werkenne it gesach, se binne неконтролируемый.Tagelyk, as de âlden helje it rjocht oanpak, dan sil groeie hiel ferantwurdlik persoan. Dizze bern reagearje mei wjerljocht snelheid sawol geastlik en lichaamlik. Se net fiel de beheiningen en dêrom net fiele it gefaar. Dat, syn bar, soarget hege mortaliteit fan sleauwichheid. Depersoan mei dit soarte fan oanberne feardichheden — это от Steat om te lieden it folk. Hiel faak sokke bern groeie direkteuren fan grutte bedriuwen. Как де oanberne skaaimerken фанат, это ûnbeboude bern jeugd ûnder druk of geweld troch folwoeksenen, hy rint fuort fan hûs.Сокке берн бинне faak lieders fan kriminele organisaasjes. De klam op ferantwurdlikens — de wichtichste betingst foar de ûntwikkeling, dy’t ymplisearret foar harren в системно-векторной психологии. Boeken beskriuwe it gryp, befetsje detaillearre kommentaar en oanbefellings foar de heiten en memmen fan sokke bern. De skriuwers tinke dat folwoeksenen moatte net easkje heartsrigens, это allinnich nedich, как rjochtline foar it bern syn dieden.

Muscular rjochting

Fysyk arbeid — it wichtichste punt fan de ferwizing dy’t stelt út oan dizze bern системная векторная психология.Испытайте, как проверить правильность определения точки, в которой содержится определенное количество веществ: грязь, содержащаяся в составе биологически активных веществ. Yn it lêste gefal de persoan benaderjen liedt te wêzen hard wurkje. Это kin alle dagen, elk jier te fieren deselde baan. Sokke minsken hawwe gjin eigen miening, se sille dwaan wat se hawwe leard. Karren yn it libben sil ôfhingje fan wa’t beynfloedet de ûntwikkeling fan it bern. Думающий фанат dizze bern wurdt karakterisearre as fisuele-aktyf. Se dogge krekt wat se waarden toand. Dit eigendom moat rekken holden by it learen proses.Dy bern kinne net neamd dom. Se ha in spesifike manier fan tinken. Это резервуар для него, когда он работает. Mei de ûntwikkeling fan oanberne eigenskippen fan dy bern opgroeie hiel трудолюбивые профессионалы. Se bouwe, plow it lân, wurkje yn minen. Se hawwe net hege fersiken, это genôch dat sy koenen krije troch it wurkjen mei syn hannen. Как и в bern wurdt net leard om te wurkjen, dan kin groeie gefaarlik misdie baas. Это maklik om te fallen yn de kriminele groep, dêr’t hy sil sjen syn fysike krêft.

впечатлительный bern

Se wurde karakterisearre troch de fisuele vector. Это системно-векторная психология экстравертов сокке берн бинн хелдер. Foar harren, in mienskiplik fynplak wurdt beskôge snelle, стимулирующие качели. Dy bern wurde sterk ûntwikkele eangst foar de dea. Как в аналфабет опфидинг, так и в «стабильном Фоби». В soad fan dizze bern binne bang foar it tsjuster en wegerje te sliepen mei de ljochten út. Dat komt troch it feit dat harren byldzjend analyzer kin gjin ûnderskied tusken de bedriging en soargje foar befeiliging.Сокке берн хоуве в гоед ûntwikkele ferbylding. Se binne maklik te kommen mei ferskillende ferhalen, одушевляйте неодушевленные предметы. Поскольку это wichtichste taak yn it libben фунгиарет как kennis fan de wrâld. Это wêrom’t de wichtichste gebiet fan ‘waarneming binne de eagen. Semetentiids hawwe grutte en ekspressive. Dy bern binne as all moaie, se binne oanstriid en coquetry. De meast wichtige aspekt foar dizze dieden te stellen emosjonele bannen. Это kin oanmakke en mei inanimate foarwerpen en mei minsken en bisten.De ymmúnsysteem fan bern is swak, sadat se first pick up virale syktes. Mei de ûntwikkeling fan oanberne skaaimerken fan har waakse djippe gefoel, leafdefol en oprjochte minsken. В негативном инфлоед op harren hat in pesten, lêzen Scary ferhalen. Opnaam op sokke emoasjes, в персидских фильмах ужасов begin te kiezen syn, gean nei it tsjerkhôf by nacht, lêzen tsjustere boeken ensafuorthinne.

sound rjochting

Bern fan dit vector ferskille yn abstrakt tinken. Se betiid genôch te wêzen ynteressearre yn de sin fan it libben, it bestean fan it folk, op ôfspraak.Ferfolgens, dy alderhande fragen kinne skood yn ‘e nbewuste nivo. Lykwols, se binne benammen akute opkomst yn puberteit. Sound bern нежизнеспособный en trochtochte. Оставьте конфиденциальность. Har gesichten faak net keatse gjin emoasje, mar it wol net sizze dat se noch net. Yn de Earte helte fan dei dizze bern binne meastal trage en wat remme. Se binne hiel dreech te rjochtsjen op ‘e Earte lessen. Yn dit ferbân, se binne by risiko te wurden underachiting op it kurrikulum, nettsjinsteande de frijwat sterke geast.Yn normale ûntwikkeling by bern fn in goede yntellektuele fermogens. Se binne maklik te eksakte wittenskippen, talen. Мэй де Энтвиккелинг фан, оанберн скааймеркен фан, ди Сьеньен Грой. Sokke minsken wurde treflik natuerkundigen, wittenskippers, skriuwers, философен. Behinderjen harren ûntwikkeling fan in tint en getsjirm. Берн бинн hiel pynlik se wurde achtslane. As gefolch, se gean nei, fuortsmiten fan de wrâld. Харрен Стэйт Вурдт Спанд, Ферскин Депрессиф. Miskien de fassinaasje mei medisinen binne faak hoofdpijn.Дайберн бинн, автор: risiko foar autisme en skizofreny.

orale rjochting

Dy bern — fleurich en talkers. Se binne altyd op ‘e opkomst, meie yngean eltse ploech. Фоар харрен это фан беланг те прекрасные охотники. В этом случае вы можете сжимать информацию, используя прерывание. Dêrom, Harren Spraak wurdt incoherent, fluch. Sokke bern hawwe ferhege de gefoelichheid fan ‘e mûle, lippen. Se graach oanreitsje se. Se binne op ‘e hichte te kommen mei ien ferhaal, maklik te ferrifeljen.Dit alles is nedich foar harren te lûken oandacht. Bern mei avansearre eigenskippen binne toanielspilers, TV presintators, sprekkers. Se binne пошел разбираться в нем. Yn it gefal fan ûnbeboud yntelliginsje bern wurden clowns, net foar in momint stil. Se sizze sels by mielen.

Психология Systeem-Vector: resinsjes

Dêrby moat opmurken wurde, что это понятие является порождением ферспраата на Руслане. De skriuwer hâldt семинары, lêzingen en kursussen. Смотрите видеоуроки в грустных видеоуроках.Ûnderhâlden в онлайн-тренингах. Bywenje семинары en lêzings as gewoane minsken, это чистые разбирающиеся в психологии, en ek spesjalisten, доктора, психиатры. Demeten binne posityf oer it wurk fan Yu Burlan. Лезинген помог minsken omgaan встретить проблемы dy’t binne ntstien yn ‘e famylje om heroverwegen harren oanpak fan it ûnderwiis. Lykwols, der binne negatyf ôfwagings fan al dizze aktiviteit. Дус, быгеликс, весла головокружительный респект Вятслав Юнев. Системно-векторная психология, синхронизация — dizze oanfal op minsklik bewustwêzen.De skriuwer syn adres oan harren it gryp krityk jildstreamen waarden regissearre. Lykwols, in pear fan syn artikels krije lilk Rebuttal as de folgelingen fan ‘e teory, en ek dy minsken dy’t yn steat binne om te lossen famylje issues mei помочь развить его системно-векторную психологию.

Неожиданные эволюционно консервативные быстрые эффекты вирусной инфекции на рецептор окситоцина и TGF-β / pSmad3 | Скелетная мышца

1.

STEWART S. Доставляемое лентивирусом стабильное подавление генов с помощью РНКи в первичных клетках.РНК. 2003; 9: 493–501.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

2.

Artavanis-Tsakonas S. Передача сигналов Notch: контроль клеточной судьбы и интеграция сигналов в развитии. Наука. 1999. 284: 770–6.

CAS Статья PubMed Google Scholar

3.

Brack A, Conboy I, Conboy M, Shen J, Rando T. Временное переключение с передачи сигналов notch на Wnt в мышечных стволовых клетках необходимо для нормального миогенеза взрослых.Стволовая клетка. 2008; 2: 50–9.

CAS Статья PubMed Google Scholar

4.

Canning C, Lee L, Luo S, Graham A, Jones C. Сигналы Wnt, полученные из нервной трубки, взаимодействуют с передачей сигналов FGF при образовании и дифференцировке плакод тройничного нерва. Neural Dev. 2008; 3: 35.

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

5.

Карлсон М., Конбой М., Хсу М., Барчас Л., Чон Дж., Агравал А., Микелс А., Агравал С., Шаффер Д., Конбой И.Относительные роли TGF- ² 1 и Wnt в системной регуляции и старении ответов сателлитных клеток. Ячейка старения. 2009; 8: 676–89.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

6.

Heine U. Роль трансформирующего фактора роста бета в развитии эмбриона мыши. J Cell Biol. 1987; 105: 2861–76.

CAS Статья PubMed Google Scholar

7.

Кук С., Сон И., Чой К., Ли Х., Чунг В., Хван И., Ли Дж. Циклический механический стресс подавляет миогенную дифференцировку сателлитных клеток взрослого крупного рогатого скота посредством активации киназы, регулируемой внеклеточными сигналами. Mol Cell Biochem. 2007; 309: 133–41.

Артикул PubMed Google Scholar

8.

Lewis J. Notch передача сигналов и контроль выбора клеточной судьбы у позвоночных. Semin Cell Dev Biol. 1998; 9: 583–9.

CAS Статья PubMed Google Scholar

9.

Pelton R. Иммуногистохимическая локализация TGF бета 1, TGF бета 2 и TGF бета 3 в эмбрионе мыши: паттерны экспрессии предполагают множественные роли во время эмбрионального развития. J Cell Biol. 1991; 115: 1091–105.

CAS Статья PubMed Google Scholar

10.

Shi D., Bourdelas A, Umbhauer M, Boucaut J. Передача сигналов зиготического Wnt / β-катенина предпочтительно регулирует экспрессию гена Myf5 в мезодерме xenopus.Dev Biol. 2002; 245: 124–35.

CAS Статья PubMed Google Scholar

11.

Wagner J, Schmidt C, Nikowits W., Christ B. Компартментализация сомита и миогенез у куриных эмбрионов зависят от экспрессии Wnt. Dev Biol. 2000; 228: 86–94.

CAS Статья PubMed Google Scholar

12.

Volonte D, Liu Y, Galbiati F. Модуляция экспрессии кавеолина-1 контролирует активацию сателлитных клеток во время восстановления мышц.FASEB J. 2005; 19 (2): 237–9.

13.

Brionne T, Tesseur I, Masliah E, Wyss-Coray T. Потеря TGF-β1 приводит к повышенной гибели нейрональных клеток и микроглиозу в мозге мышей. Нейрон. 2003; 40: 1133–45.

CAS Статья PubMed Google Scholar

14.

Brack A, Conboy M, Roy S, Lee M, Kuo C, Keller C, Rando T. Повышенная передача сигналов Wnt во время старения изменяет судьбу мышечных стволовых клеток и увеличивает фиброз. Наука.2007; 317: 807–10.

CAS Статья PubMed Google Scholar

15.

Карлсон М., Суетта С., Конбой М., Аагард П., Макки А., Кьяер М., Конбой И. Молекулярное старение и омоложение стволовых клеток мышц человека. EMBO Molec Med. 2009; 1: 381–91.

CAS Статья Google Scholar

16.

Юсеф Х., Конбой М., Моргенталер А., Шлезингер С., Бугай Л., Паливал П., Грир С., Конбой И., Шаффер Д.Системное ослабление пути TGF-β одним лекарством одновременно омолаживает нейрогенез и миогенез гиппокампа у одного и того же старого млекопитающего. Oncotarget. 2015; 6: 11959–78.

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

17.

Конбой И., Конбой М., Ребо Дж. Системные проблемы: взгляд на старение и омоложение стволовых клеток. Старение. 2015; 7: 754–65.

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

18.

Карлсон ME, Hsu M, Comboy IM. Дисбаланс между pSmad3 и Notch индуцирует ингибиторы CDK в старых мышечных стволовых клетках. Природа. 2008; 454: 528–32.

CAS Статья PubMed Google Scholar

19.

Карлсон М., Сильва Х., Конбой И. Старение путей передачи сигналов и патология. Exp Cell Res. 2008; 314: 1951–61.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

20.

Elabd C, Cousin W, Upadhyayula P, Chen R, Chooljian M, Li J, Kung S, Jiang K, Conboy I. Окситоцин — это возрастной циркулирующий гормон, необходимый для поддержания и регенерации мышц. Nat Comm. 2014; 5. https://www.nature.com/articles/ncomms5082.

21.

Beranger G, Pisani D, Castel J, Djedaini M, Battaglia S, Amiaud J, Boukhechba F, Ailhaud G, Michiels J, Heymann D, Luquet S, Amri E. Окситоцин обращает вспять остеопению, вызванную овариэктомией, и тело набор жира. Эндокринология.2014; 155: 1340–52.

Артикул PubMed Google Scholar

22.

Camerino C. Низкий симпатический тонус и фенотип ожирения у мышей с дефицитом окситоцина. Ожирение. 2009; 17: 980–4.

CAS Статья PubMed Google Scholar

23.

Deblon N, Veyrat-Durebex C, Bourgoin L, Caillon A, Bussier A, Petrosino S, Piscitelli F, Legros J, Geenen V, Foti M, Wahli W, Di Marzo V, Rohner-Jeanrenaud F.Механизмы эффектов окситоцина против ожирения у крыс с ожирением, вызванным диетой. PLoS ONE. 2011; 6: e25565.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

24.

Элабд С., Базиль А., Бопиед Х, Брей V, Вагнер Н., Шайделер М., Зарагози Л., Массиера Ф., Лемичес Е., Траяноски З., Карл Г., Эуллер-Циглер Л., Айлхауд Г., Бенхаму С., Дани С., Амри Э. Окситоцин контролирует дифференцировку мезенхимальных стволовых клеток человека и обращает вспять остеопороз.Стволовые клетки. 2008; 26: 2399–407.

CAS Статья PubMed Google Scholar

25.

Takayanagi Y, Kasahara Y, Onaka T., Takahashi N, Kawada T., Nishimori K. У мышей с дефицитом рецепторов окситоцина развилось ожирение с поздним началом. NeuroReport. 2008; 19: 951–5.

CAS Статья PubMed Google Scholar

26.

Tamma R, Colaianni G, Zhu L, DiBenedetto A, Greco G, Montemurro G, Patano N, Strippoli M, Vergari R, Mancini L, Colucci S, Grano M, Faccio R, Liu X, Li J , Усмани С., Бачар М., Баб И., Нисимори К., Янг Л., Бюттнер К., Икбал Дж., Сан Л., Заиди М., Заллоне А.Окситоцин — анаболический гормон костей. Proc Natl Acad Sci. 2009; 106: 7149–54.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

27.

Zou K, Lisio MD, Huntsman HD, Pincu Y, Mahmassani Z, Miller M, et al. Ламинин-111 улучшает количество и функцию стволовых клеток скелетных мышц после эксцентрических упражнений. Стволовые клетки Translat Med. 2014; 3: 1013–22.

CAS Статья Google Scholar

28.

Ли Х., Макбет А., Пагани Дж., Янг В .: Окситоцин: великий посредник в жизни. Prog Neurobiol. 2009. 88 (2): 127–151.

29.

Modahl C, Green L, Fein D, Morris M, Waterhouse L, Feinstein C, Levin H. Уровни окситоцина в плазме у аутичных детей. Биол Психиатрия. 1998. 43: 270–7.

CAS Статья PubMed Google Scholar

30.

Ruggeri B, Sarkans U, Schumann G, Persico A. Биомаркеры расстройства аутистического спектра: старое и новое.Психофармакология. 2013; 231: 1201–16.

Артикул PubMed Google Scholar

31.

Ливак К.Дж., Шмиттген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 — ΔΔCT. Методы. 2001; 25: 402–8.

CAS Статья PubMed Google Scholar

32.

Конбой М.Дж., Конбой И.М. Получение взрослых стволовых клеток / клеток-предшественников, связанных с мышечными волокнами.Методы Мол биол. 2010; 621: 149–63. DOI: 10.1007 / 978-1-60761-063-2_10.

33.

Рудницки М.А., Яениш Р. Семейство факторов транскрипции MyoD и скелетный миогенез. BioEssays. 1995; 17: 203–209.

CAS Статья PubMed Google Scholar

34.

Berzsenyi M, Woollard D, McLean C, Preiss S, Perreau V, Beard M, Scott Bowden D, Cowie B, Li S, Mijch A, Roberts S. Снижение регуляции внутрипеченочных Т-клеток передача сигналов, связанная с GB вирусом C, в группе с коинфекцией HCV / HIV с уменьшенным заболеванием печени.J Hepatol. 2011; 55: 536–44.

CAS Статья PubMed Google Scholar

35.

Blackham S, Baillie A, Al-Hababi F, Remlinger K, You S, Hamatake R, McGarvey M. Профилирование экспрессии генов указывает на роль генов окислительного стресса, апоптоза, липидного метаболизма и внутриклеточного транспорта в организме хозяина в репликация вируса гепатита С. J Virol. 2010; 84: 5404–14.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

36.

do Valle T, Billecocq A, Guillemot L, Alberts R, Gommet C, Geffers R, Calabrese K, Schughart K, Bouloy M, Montagutelli X, Panthier J. Новая модель мыши показывает критическую роль врожденного иммунитета хозяина в устойчивости к Лихорадка Рифт-Валли. J Immunol. 2010; 185: 6146–56.

Артикул PubMed Google Scholar

37.

Герлах Р., Кэмп Дж., Чу Й, Йонссон С. Ранние реакции хозяев сезонных и пандемических вирусов гриппа А в первичных высокодифференцированных эпителиальных клетках легких человека.PLoS ONE. 2013; 8: e78912.

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

38.

Gersten M, Alirezaei M, Marcondes M, Flynn C, Ravasi T, Ideker T., Fox H. Комплексный системный анализ предполагает подавление EGR1 в нервной дисфункции, вызванной вирусом иммунодефицита обезьян, вызванной энцефалитом. J Neurosci. 2009; 29: 12467–76.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

39.

Хуанг Ю., Ли З., Хисени Х, Шмитт М., Девлин Р., Кароли Е., Соукуп Дж. Идентификация генных биомаркеров респираторно-синцитиальной вирусной инфекции в линии бронхиальных эпителиальных клеток. Genom Med. 2008; 2: 113–25.

Артикул Google Scholar

40.

Lee S, Chan R, Gardy J, Lo C, Sihoe A, Kang S, Cheung T, Guan Y, Chan M, Hancock R, Peiris M. Сравнение системного уровня ответов хозяина, вызванных пандемией и вирусы сезонного гриппа A h2N1 в первичных альвеолярных эпителиальных клетках человека типа I in vitro.Respir Res. 2010; 11: 147.

Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

41.

Lund A, Lucero J, Herbert L, Liu Y, Naik J. Трансгенные крысы с вирусом иммунодефицита человека проявляют легочную гипертензию. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2011; 301: L315–26.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

42.

Манель Н., Хогстад ​​Б., Ван И, Леви Д., Унутмаз Д., Литтман Д.Скрытый датчик ВИЧ-1 активирует противовирусный врожденный иммунитет в дендритных клетках. Природа. 2010; 467: 214–7.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

43.

Ndolo T, George M, Nguyen H, Dandekar S. Экспрессия белка Nef вируса обезьяньего иммунодефицита в CD4 + T-клетках приводит к молекулярному профилю вирусной устойчивости и уклонения от иммунитета. Вирусология. 2006; 353: 374–87.

CAS Статья PubMed Google Scholar

44.

Нгуен Х., Шанкаран С., Дандекар С. Основной белок вируса гепатита С индуцирует экспрессию генов, регулирующих уклонение от иммунитета и антиапоптоз в гепатоцитах. Вирусология. 2006. 354: 58–68.

CAS Статья PubMed Google Scholar

45.

Shornick L, Wells A, Zhang Y, Patel A, Huang G, Takami K, Sosa M, Shukla N, Agapov E, Holtzman M. Коррекция: эпителиальный слой дыхательных путей против функции иммунных клеток Stat1 для врожденной защиты от респираторных вирусная инфекция.J Immunol. 2011; 187: 2834-2834.

Артикул Google Scholar

46.

Тайнер Дж., Учида О, Кадзивара Н., Ким Е., Патель А., О’Салливан М., Уолтер М., Швенденер Р., Кук Д., Данофф Т., Хольцман М. Взаимодействие CCL5-CCR5 обеспечивает антиапоптотические сигналы для макрофагов. выживаемость при вирусной инфекции. Nat Med. 2005; 11: 1180–7.

CAS Статья PubMed Google Scholar

47.

Verhoeven D, George M, Hu W., Dang A, Smit-McBride Z, Reay E, Macal M, Fenton A, Sankaran-Walters S, Dandekar S. Повышенная экспрессия врожденного противовирусного гена, IFN- и цитолитические ответы позволяют прогнозировать восстановление иммунитета слизистой оболочки при инфицировании вирусом иммунодефицита обезьян. J Immunol. 2014; 192: 3308–18.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

48.

Чжао Б., Чжэн С., Гун Л, Ван И, Чэнь Ц., Цзинь В., Чжан Д., Юань Х, Го Дж, Дуань З., Хе Ю.Т-лимфоциты от пациентов с хроническим ВГС примированы для индуцированного активацией апоптоза и экспрессируют уникальную сигнатуру проапоптотического гена. PLoS ONE. 2013; 8: e77008.

CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

Анализ приседаний | Николас Солейн

«Просто нет других упражнений и, конечно же, нет тренажера, который обеспечивает уровень активности центральной нервной системы, улучшенный баланс и координацию, скелетную нагрузку и увеличение плотности костей, мышечную стимуляцию и рост, напряжение и силу соединительной ткани, психологическую потребность. и выносливости, и общей системной подготовки, чем правильно выполненное полное приседание.”- Начальная сила: базовая тренировка со штангой (3-е изд.)

Многие из нас проповедовали эту цитату другим, защищая приседания как фундаментальное упражнение для развития настоящей функциональной силы всего тела. Однако, поскольку страх перед чем-либо всегда будет преобладать над общественным мнением, мы постоянно пробираемся через плохо обоснованные утверждения о том, что приседание опасно, ненужно или лучше, если выполняется только наполовину. Неквалифицированные итоговые оценки, такие как «приседания вредны для ваших колен», особенно расстраивают, потому что они проводятся без ссылки на стандарт или модель и, следовательно, без анализа того, что происходит внутри тела во время «правильно выполненного полного приседа».”

Любой анализ движения или упражнения — и любой вывод о том, что это хорошо, плохо или что-то еще — должен иметь в качестве основы четко определенную стандартизованную модель. Модель определяет движение как правильное. Возможные отклонения от модели не являются действительной основой для анализа самой модели, поскольку такие отклонения по определению неверны. Например, если мы утверждаем, что приседания безопасны и полезны для колен, ни неправильно выполненное приседание, ни вариации движения не могут служить подходящей основой для контраргумента или вывода об ином.Как писал Рип, обсуждая прессу, «нельзя переопределять упражнение, а затем заявлять, что оно опасно».

Стандартизированная модель должна учитывать все потенциальные типы телосложения. Начиная с механического анализа рычагов, углов и сил системы атлет-штанга, задействованных в приседании, мы должны разработать набор обстоятельств, которые будут справедливы для всех антропометрий. После того, как мы установили механическую модель, добавить анатомический анализ довольно просто. И то и другое необходимо для адекватного обсуждения безопасности, пользы или ценности приседаний как фундаментальных упражнений.Чтобы проиллюстрировать это, это обсуждение фокусируется на том, является ли приседание безопасным и полезным для коленей атлета.

Механический анализ: рычаги, углы и силы

Механический анализ приседаний касается развития вращательной силы во всем диапазоне движений. Эта сила, называемая моментной силой, тем больше, чем дальше штанга перемещается по горизонтали от одного из суставов тела. Это расстояние называется плечом момента, и относительные длины плеч момента, воздействующих на каждый сустав, показывают относительную часть общей силы для управления или подъема штанги, которая влияет на суставы во время движения.

Верх приседаний

В верхней части приседа атлет стоит на относительно прямой вертикальной линии со штангой на спине. В этом и во всех упражнениях со штангой силы, действующие на тело, возникают из силы тяжести, которая тянет штангу вниз по прямой вертикальной линии. Гриф держится прямо над серединой стопы, так что вся система считается «уравновешенной». Это состояние баланса сохраняется на протяжении всего движения.

Рычаги, которые присутствуют в этом анализе, — это спина, бедро и голень или голень. Рычаги, поскольку они вращаются вокруг тазобедренных и коленных суставов, образуют диагностические углы, используемые для анализа и обсуждения движения. Эти углы представляют собой угол бедра, определяемый как угол, образованный плоскостью туловища и бедренной кости; коленный угол, образованный бедренной костью и голенью; и задний угол, образованный плоскостью туловища и пола. В верхней части приседа эти углы полностью открыты, поэтому сегменты спины, бедер и голени располагаются под нулевым градусом по отношению к вертикальной силе тяжести, действующей на штангу.В этой позиции не может быть моментальных рук. Вся кинетическая цепь — компоненты опорно-двигательного аппарата, участвующие в создании и передаче силы между основанием опоры (в данном случае — полом) и штангой — находится в состоянии сжатия.

На спуске

Когда атлет начинает спуск в нижнее положение, углы колен и бедер начинают сокращаться, а угол спины становится более горизонтальным. Эти углы создают моментные рычаги вдоль спины, бедра и голени.Тело опускается, и эти углы сужаются. Сила, создаваемая телом вокруг этих углов, противодействует моментной силе штанги, пропорциональной развитию их соответствующих моментных плеч.

Низ приседаний

Низ движения определяется вершиной угла бедра, опускающимся ниже горизонтальной плоскости, параллельной колену. Колени, бедра и угол спины еще больше сомкнулись. Бедра были отодвинуты назад, так как угол бедра и спины сузился, чтобы сбалансировать нагрузку на середину стопы.

Закрывающиеся углы создали горизонтальное смещение точек вращения — бедра, коленей и лодыжек — относительно вертикального вектора силы тяжести, действующего на штангу. Гравитация, действуя на штангу, передает силу рычагов тела в эти точки вращения. Величина силы, передаваемой в каждую из этих точек, прямо пропорциональна длине рычагов, действующих на каждый рычаг, создаваемой горизонтальным смещением штанги и суставов, когда подъемник закрывает эти углы.Момент рук измеряется по горизонтали между точкой вращения и вертикальным вектором силы тяжести (со сагиттальной точки зрения атлета представьте себе линию, опущенную прямо вниз со штанги на спине). Это показывает несколько рычагов момента, действующих на точки вращения тела.

Два рычага и моментные рычаги воздействуют на тазобедренный сустав.Задний рычаг — это расстояние от точки переноса штанги до бедра, измеренное по плоскости туловища. Горизонтальное смещение этих двух точек создает плечо момента, равное горизонтальному расстоянию между ними. Другой рычаг, воздействующий на бедро, расположен вдоль проксимального отдела бедра. Вектор силы тяжести пересекает бедренную кость, образуя сегмент рычага между этой точкой и тазобедренным суставом. Этот сегмент рычага имеет плечо момента, равное горизонтальному расстоянию между бедром и вектором силы тяжести.Момент силы, передаваемый по этим рычагам, контролируется бедром, и его необходимо преодолеть, чтобы бедро открылось из этого положения.

Другой сегмент рычага, созданный из точки, в которой вектор силы тяжести пересекает бедренную кость, простирается до дистального отдела бедренной кости и воздействует на колено. Плечо момента, которое определяет величину вращательной силы, передаваемой вдоль этого рычага, измеряется по горизонтали между вектором силы тяжести (проксимально) и коленом (дистально). Учитывая относительно открытый угол колена и положение коленей наружу / колени назад, которое эффективно сокращает длину этого сегмента рычага, создаваемое плечо момента и пропорциональная сила момента, передаваемая здесь, мала по сравнению с величиной силы момента, действующей на бедро. угол.

Стержень аналогичным образом разделен на два сегмента рычага и два других плеча момента, которые необходимо учитывать. Проксимальный сегмент рычага существует между коленом и точкой, в которой вектор силы тяжести пересекает стержень, и имеет плечо момента, равное горизонтальному расстоянию между коленом и вектором силы тяжести. Сила момента, передаваемая по этому сегменту рычага, воздействует на колено. Дистальный рычаг измеряется вдоль стержня от того места, где вектор пересекает стержень до голеностопного сустава, с плечом момента, которое измеряется горизонтально между этими точками.Представленная здесь сила момента воздействует на лодыжку.

В правильно выполненном приседании штанга находится прямо над серединой стопы. Нет никакой моментной силы, влияющей на эту точку равновесия с землей, и, следовательно, система атлет / штанга находится в равновесии.

Предполагая, что штанга остается сбалансированной по средней части стопы, можно управлять моментными силами, действующими на тело, путем размещения штанги и закрытия или открытия диагностических углов.Сила момента прямо пропорциональна длине плеча момента в системе рычагов. Распределение этих рычагов и относительная длина моментных рычагов, воздействующих на бедра, колени и, в меньшей степени, лодыжки, иллюстрируют величину силы момента, действующей на каждую точку вращения. В правильно выполненном полном приседании наибольший момент руки воздействуют на бедро.

Standing Back Up

Чтобы вернуться в исходное положение, подъемник должен создать достаточную моментную силу в каждой из точек вращения, чтобы преодолеть моментную силу, действующую на каждую точку, создаваемую силой тяжести, действующей на груз.Каждая точка вращения отвечает за процентную долю общей силы, которая должна быть создана. Эта доля прямо пропорциональна относительной длине рычагов, воздействующих на каждый сустав, вдоль его рычагов.

Приседания распределяют наибольшую нагрузку на бедра. Рычаги, управляемые бедром, расположены вдоль спины и проксимального отдела бедра, и у них самые длинные рычаги с моментом. Варианты приседаний, такие как приседания со штангой спереди или приседания с высокой штангой, изменяют относительную длину задействованных рук с моментом движения.В этих версиях приседаний используется более вертикальная спина, более открытый угол бедер и более закрытый угол колен. Эффектом этих различий является гораздо более короткий момент рук, воздействующий на бедро, поскольку вертикальный угол спины и открытый угол бедра приблизили бедра по горизонтали к штанге, и более сильные моментные руки, воздействующие на колено, поскольку закрытый угол в коленях вызвал более положение «колени вперед», смещение коленей горизонтально от груза. Эти вариации с доминированием колена не являются «правильными полными приседаниями» для целей нашего анализа.В нашем приседе это бедра, которые заставляют штангу подниматься вверх.

Конечная позиция такая же, как и начальная. Спина вертикальная, а бедра и колени полностью открыты. Плечи момента, воздействующие на точки вращения, постепенно сокращались бы до нуля на пути вверх, так что теперь вся система вдоль кинетической цепи снова находится в состоянии сжатия.

Анатомический анализ: добавление костей и мышц

После создания базовой модели, основанной на рычагах, углах и моментных силах, необходимо затем поместить модель в контекст опорно-двигательного аппарата.Кости составляют рычаги, мышцы контролируют их, а соединительные ткани связывают всю систему вместе. Приседания — это упражнение для всего тела, демонстрирующее загруженные человеческие движения с большим диапазоном движений. В отличие от каких-либо изолирующих или отдельных совместных упражнений, важно рассмотреть всю систему и то, как она работает вместе во всем диапазоне движений, чтобы проанализировать относительно узкие вопросы, такие как здоровье колена.

На вершине

В верхней части движения штангу держат за спину и держат чуть ниже позвоночника лопаток.Локти приподняты, а грудь приподнята, так что штанга опирается на «полку» мышц, созданных задними дельтовидными мышцами, прямо под трапециевидными мышцами и фиксируется в этом положении запястьями. Спина жестко удерживается выпрямителями позвоночника при естественном разгибании грудного и поясничного отделов. Мышцы живота сокращаются изометрически, а глубокая задержка дыхания дополнительно поддерживает позвоночник. Атлет будет сохранять жесткую спину на протяжении всего движения.

Мышцы тела создают достаточную силу только для выравнивания скелета, чтобы эффективно противостоять сжимающей силе гравитации, действующей на штангу.Гриф находится прямо над серединой стопы, если измерять расстояние от тыльной стороны стопы, а не от голени до пальцев ног. Бедра и колени полностью выпрямлены. Стойка атлета должна быть примерно на ширине плеч, а пальцы ног выставлены примерно на тридцать градусов.

Эксцентрическая фаза

Эксцентрическая часть движения начинается с сгибания коленей и бедер. Бедра отведены назад, а колени смещены вперед, чтобы штанга находилась в равновесии над серединой стопы.Сгибание в коленях и бедрах эксцентрично нагружает разгибатели этих суставов.

Ягодичные мышцы и подколенные сухожилия являются основными разгибателями бедра. Ягодичные мышцы нагружаются эксцентрически, готовясь к разгибанию бедра. Функцию подколенных сухожилий следует учитывать в зависимости от положения таза и коленей. Подколенные сухожилия прикрепляются к нижней части таза у седалищного бугра, который может вращаться вокруг тазобедренного сустава. Выпрямители позвоночника, работа которых состоит в том, чтобы удерживать спину в жестком разгибании поясницы, прикрепляются к крестцу в верхней части таза.Когда бедра отведены назад, а спина становится более горизонтальной, подколенные сухожилия притягивают это прикрепление к тазу, который вращается. Поскольку выпрямители наклоняют таз вперед, чтобы удерживать спину в жестком разгибании поясницы, подколенные сухожилия удлиняются в проксимальном направлении. Однако подколенные сухожилия также пересекают коленный сустав и являются сгибателями колена. Поскольку колени сгибаются, подколенные сухожилия укорачиваются в дистальном направлении. Это одновременное удлинение и укорочение означает, что подколенные сухожилия не сильно меняют длину во время этой части движения.Следовательно, функцию подколенных сухожилий можно рассматривать как изометрическое сокращение, контролирующее угол бедра.

Сгибание колена под нагрузкой эксцентрически нагружает четырехглавую мышцу. Четырехглавая мышца — это разгибатели колена, прикрепленные к передней большеберцовой кости через надколенник и надколенник.

Кроме того, когда атлет разблокирует колени, он заставляет свои колени двигаться параллельно пальцам ног, вращая бедренные кости наружу. Он будет держать колени наружу, задействуя внешние вращатели бедренных костей, чтобы они двигались параллельно направлению пальцев ног, пока он не заблокирует колени в разгибании на обратном пути.Это действие не только приводит в движение эти внешние вращатели, но и растягивает приводящие мышцы, нагружая их эксцентрично, так что они могут способствовать концентрической фазе приседания. Лифтер будет сохранять это положение пальцев ног / коленей наружу на протяжении всего движения.

Нижняя позиция

Механически мы определили нижнюю часть приседа по опусканию бедра ниже параллели. Это положение определяется анатомически как опускание тазобедренного сустава ниже параллельно верхней части надколенника.Это самый длинный эффективный диапазон движений, потому что в этом положении происходит несколько вещей.

Подколенные сухожилия полностью растянуты. Когда угол бедра сузился, таз наклонился вперед, удлиняя подколенные сухожилия. Чтобы штанга оставалась над серединой стопы, глубина должна зависеть от угла бедра, и чем острее угол бедра, тем большее напряжение приходится на подколенные сухожилия. Для большинства людей более глубокое опускание бедер потребует ослабления подколенных сухожилий в проксимальном направлении, позволяя им вывести таз из выравнивания, округляя нижнюю часть спины.Округление спины уменьшит способность подколенных сухожилий поддерживать разгибание бедра; это снизит эффективность спины как рычага, передающего силу, и сделает ее менее жесткой; и это может привести к травме нижней части спины. Напротив, когда подколенные сухожилия полностью растянуты, они находятся в лучшем положении для изометрического сокращения и фиксации угла бедра. Это хорошо, потому что, как мы видели в механическом анализе, угол бедра отвечает за наибольшую долю силы, необходимой для выхода из нижней части приседа.

Приводящие мышцы также полностью растягиваются чуть ниже параллели. Держа колени вытянутыми над пальцами ног, атлет эксцентрично сокращает эти мышцы, подготавливая их к подъему груза. Приводящие мышцы состоят из пяти мышц, которые прикрепляются вдоль медиальной и задней поверхности бедра, а также на седалищной и лобковой коже таза. В концентрической фазе приседания, когда угол бедра открывает расстояние между медиальной бедренной костью и медиальным тазом, укорачивается, так что приводящие мышцы способствуют разгибанию бедра.

В дополнение к приведению приводящих мышц в движение, акт выталкивания колен наружу перемещает бедренные кости в сторону от передней верхней подвздошной ости бедра (ASIS). Если атлет не вытолкнет колени наружу, глубина будет преждевременно обрезана, потому что бедро будет задевать ASIS. Если задет бедренная кость, единственный способ спуститься вниз — это округлить спину до поясничного сгибания, потому что глубина приседания зависит от угла бедра: если угол бедра не может стать более острым, потому что бедренная кость затирает все соединительные ткани между ними. это и ASIS, то глубина может возникнуть только из-за наклона таза кзади и округления поясницы, что является неэффективной и небезопасной практикой.Таким образом, этот диапазон движения является самым длинным эффективным диапазоном движений, потому что это самое глубокое положение, которое одновременно эффективно с механической точки зрения (все рычаги жесткие) и позволяет большему количеству мышечной массы способствовать разгибанию бедер, что является главный привод из нижнего положения.

Концентрическая фаза: генерирующая сила

В этот момент атлет должен изменить направление, создав достаточную силу с помощью задней цепи и четырехглавой мышцы, чтобы преодолеть моментные силы, действующие на углы бедра и колена, возникающие из-за силы тяжести на штанге.

Спинка — самый длинный рычаг в механизме. Он остается заблокированным в жестком поясничном и грудном отделах, так что позвоночник служит эффективным передатчиком силы. Выпрямители позвоночника и мышцы живота остаются напряженными в изометрическом сокращении, поддерживаясь большой задержкой дыхания.

Бедра должны выходить из нижнего положения. Из нашего механического анализа мы знаем, что наибольшая часть общей силы, необходимой для подъема из нижнего положения, должна исходить от разгибания бедер.Подколенные сухожилия, приводящие мышцы и ягодицы, переходящие от эксцентрических сокращений к концентрическим, создают небольшой отскок или «подпрыгивание», когда бедра поднимаются вверх из нижнего положения. Тугая растянутая мышца сокращается сильнее, чем более свободная и короткая мышца. Этот рефлекс растяжения возникает из-за того, что растяжение сообщает нервно-мышечной системе, что вскоре последует сокращение, и всегда происходит более эффективный запуск большего количества сократительных единиц, когда ему предшествует растяжение. Растяжка подколенных сухожилий для этого отскока — ключевая причина, по которой спина должна оставаться жесткой, поскольку угол бедра сокращается, а спина становится более горизонтальной.Из-за этого растяжения подколенные сухожилия создают большую часть отскока, который начинает разгибание бедра. При выполнении этой функции они сокращаются проксимально на бедре и дистально в точках прикрепления к большеберцовой кости.

Коленный сустав также должен разгибаться в этой фазе подъема. На этот сустав воздействуют две руки с моментом: одна на дистальном отделе бедра, а другая проксимально вдоль большеберцовой кости. Эти сегменты представляют собой рычаги, управляемые разгибателями колена, четырехглавой мышью.Четырехглавая мышца сокращается и создает переднюю силу, которая пересекает коленный сустав от бедренной кости и тянет переднюю большеберцовую кость через надколенник и надколенник.

Разгибание бедер и колен, все мышцы задней цепи, приводящие мышцы и квадрицепсы работают, чтобы вернуть атлета в исходное положение, в котором тело находится в состоянии сжатия, при этом нагрузка полностью поддерживается скелетной системой.

Теперь мы создали модель приседаний, которую можем использовать для сравнения различных вариантов, таких как приседания с фронтальной стенкой или частичные приседания, или для анализа проблем, связанных с самим приседанием, таких как его полезность в качестве основного упражнения или его влияние на колени. .

Частичное приседание

Проблема безопасности колен требует краткого контраста между нашей моделью и частичным приседанием, поскольку частичное приседание часто предлагается как более безопасная альтернатива полному приседанию.

Частичное приседание не так просто определить, так как это может быть четверть или полуприсед по фактическому диапазону движений. Независимо от глубины, частичное приседание обязательно будет иметь важные различия в рычагах и анатомических функциях. Во-первых, частичное приседание даст более вертикальный угол спины в ее нижнем положении.Механический результат заключается в том, что пропорциональная моментная сила, действующая на бедро, очень мала. Подколенные сухожилия и разгибатели бедра не расположены так, чтобы прикладывать большую силу для подъема штанги. В частности, подколенные сухожилия не были растянуты в проксимальном направлении, потому что спина осталась вертикальной. Они не приложат больших усилий для разгибания бедра.

Пропорция нагрузки перенесена на угол колена. При более вертикальном положении спины и относительно переднем положении коленей между вектором силы тяжести, делающим пополам бедренную кость проксимально и коленный сустав дистально, существует гораздо более длинное плечо.Разгибатели колена, четырехглавые мышцы — это основная группа мышц, прорабатываемая в этом положении. Конечным результатом этой позиции является то, что четырехглавые мышцы теперь имеют непропорционально большую долю силы, создавая гораздо большую переднюю силу по сравнению со слабой задней силой подколенных сухожилий.

Безопасно и полезно для колен

Является ли что-то «безопасным» — это вопрос о том, может или маловероятно, что это действие приведет к травме. Что касается безопасности колена, вопрос заключается в том, будет ли эта деятельность подвергать нагрузке сустав или его соединительные ткани таким образом, чтобы это было связано с риском травмы.Возможно, проще говоря, деятельность небезопасна, если она заставляет колено делать то, чего не должно делать.

Из его конструкции мы знаем, что коленный сустав и содержащиеся в нем кости не должны выполнять определенные функции. Колено имеет связки для предотвращения прямого (переднего) или обратного (заднего) движения большеберцовой кости относительно бедренной кости: передняя крестообразная связка и задняя крестообразная связка соответственно. Колено травмируется медиально, когда на колено при сгибании действует боковая сила, что часто случается при катании на лыжах.Колено также не должно выдерживать ничего, кроме небольшого внутреннего или внешнего вращения. Колено должно было работать как шарнир, более или менее защищенный от вращения.

В правильно выполненном полном приседании колено стабилизируется за счет передних и задних сокращений и не подвергается потенциально опасной вращательной силе. Колено работает в одной плоскости, так как шарнирный сустав предназначен для работы, а силы, контролирующие разгибание и сгибание колена, четырехглавую мышцу и подколенное сухожилие, уравновешены.

Атлет сначала помещает колени в положение, при котором не происходит вращения бедренной кости относительно большеберцовой кости. Положение пальцев ног / коленей наружу позволяет бедрам вращаться наружу, приспосабливая угол спины и глубину приседания. Это позволяет бедрам принимать естественное выравнивание с большеберцовой костью. Если, например, кто-то пытается приседать с очень широкой стойкой и ногами прямо, бедренные кости хотят повернуться наружу, но этому мешают связки в колене, прикрепленные ступней к полу.Такое выравнивание обеспечивает герметичность связок и самой коленной капсулы. Там, где пальцы ног указываются, чтобы бедра могли двигаться вперед, но при этом они были на одной линии с голенью, как в правильном приседании, в коленной капсуле нет стеснения. «Отскок» от нижнего положения происходит не из-за стеснения связок колена. Отскок ощущается из-за растянутых приводящих мышц и подколенных сухожилий. Правильно выполненное приседание оказывает очень маленькое, если оно вообще есть, растягивающее напряжение на ACL / PCL, потому что атлет отскакивает от растянутых и сжатых компонентов задней цепи и пропорционально нагруженных квадрицепсов.

Управление моментными силами также способствует безопасности колен. В правильно выполненном приседании четырехглавые мышцы нагружены пропорционально своей функции. Четырехглавая мышца создает переднюю силу, тянущую вперед на большеберцовую кость. Однако приседания имеют положение «колени назад» и «бедра назад» по сравнению с другими вариантами приседаний. В этом положении большая часть нагрузки переносится на заднюю цепь и растягивает и нагружает подколенные сухожилия, способствуя разгибанию бедер. Подколенные сухожилия обеспечивают сильную заднюю силу, оттягивающую большеберцовую кость, уравновешивая переднюю силу четырехглавой мышцы.

Сравните это с частичным приседанием, в котором квадрицепсы являются основными движущими силами, а подколенные сухожилия мало способствуют движению. Обязательно, подколенные сухожилия не могут уравновесить переднюю силу четырехглавой мышцы; подколенные сухожилия больше не могут обеспечивать функцию ACL. Возможным результатом является тендинит надколенника и травмы ПКС из-за несбалансированных и поперечных сил. Более того, даже несмотря на то, что частичное приседание демонстрирует очень короткий диапазон движений, оно позволяет атлету перемещать гораздо больший вес, чем тот, который тело, включая коленный сустав, могло приспособить для поддержки.

Приседания не создают сил, которые нагружают колено каким-либо образом, кроме того, как оно должно работать. Приседания уравновешивают силы, действующие на колено, так что оно стабилизируется на протяжении всего движения. Приседания безопасны для коленей.

Гипотетически приседание может повредить колени, если нагрузка превышает силу спортсмена. Однако такая чрезмерная нагрузка, как частичные приседания, не является предметом данного анализа. Правильное приседание также предполагает, что человек тренировался и адаптировался к весам, которые становятся все более тяжелыми.Ни в коем случае нельзя рационально анализировать безопасность приседаний, чтобы опустить чрезмерно тяжелую нагрузку на спину нетренированного атлета и посмотреть, как это повлияет на его колени. Любой, кто приседает с тяжелыми весами, адаптировался к этому. Вот почему приседания полезны для коленей.

Приседания нагружают колени точно так, как они должны функционировать, вызывая благотворную адаптацию костей, мышц и соединительных тканей, составляющих коленный сустав. Приседания намеренно и постепенно нагружают все тело за счет большого диапазона движений бедер и коленей.Результатом этого преднамеренного адаптивного стресса является увеличение плотности костей и укрепление соединительных тканей и мышц, поддерживающих сустав. Все эти изменения способствуют долгосрочному здоровью колен.

В дополнение к этим непосредственно полезным адаптациям, приседания обеспечивают различные другие системные адаптации, которые также полезны. Приседания тренируют атлета, чтобы стабилизировать груз и собственное тело в пространстве. В результате приседания улучшают центральную нервную деятельность, баланс и тренируют энергетические пути.Эти изменения снижают риск случайной травмы колена из-за отсутствия координации, равновесия, усталости или отсутствия базовой силы всего тела.

Вывод тот же, что по-разному произносился, констатировался и декларировался другими, но который я снова изложу здесь: при отсутствии недопустимой травмы или состояния каждый человек, который может приседать, должен.

---

Обсудить в форуме

Эффективный перенос генов в мезенхимные клетки почек с использованием синтетического аденоассоциированного вирусного вектора

Визуальный обзор

Резюме

Предпосылки После повреждения мезенхимальные предшественники в интерстиции почек дифференцируются в миофибробласты, клетки, играющие критическую роль в фиброгенезе почек .Способность доставлять генетический материал к предшественникам миофибробластов может открыть новые терапевтические подходы к лечению фиброза почек. Доклинические и клинические исследования показывают, что аденоассоциированные вирусы (AAV) эффективно и безопасно трансдуцируют различные тканевые мишени in vivo ; однако протоколы трансдукции мезенхимальных клеток почек не установлены.

Методы Мы оценили профили трансдукции различных псевдотипированных векторов AAV, экспрессирующих репортеры рекомбиназы GFP или Cre в почках мышей и органоидов почек человека.

Результаты Из шести протестированных AAV синтетический AAV под названием Anc80 показал специфическую и высокоэффективную трансдукцию стромы почек и мезангиальных клеток. Мы охарактеризовали клеточную специфичность, дозовую зависимость и кинетику экспрессии и показали эффективность этого подхода, выбив Gli2 из мезенхимальных клеток почек путем инъекции вируса Anc80-Cre гомозиготным или гетерозиготным Gli2-floxed мышам. После односторонней обструкции мочеточника у гомозиготных Gli2-flox мышей фиброз был меньше, чем у гетерозигот Gli2.Мы наблюдали такой же антифибротический эффект у β -catenin-floxed мышей, которым инъецировали вирус Anc80-Cre перед обструктивным повреждением, что решительно подтверждает центральную роль канонической передачи сигналов Wnt в активации миофибробластов почек. Наконец, мы показали, что синтетический вирус Anc80 может трансдуктировать мезенхимальную линию органоидов почек человека.

Выводы Эти исследования устанавливают новый метод индуцибельного нокаута флоксованных генов в мезангиуме, перицитах и ​​периваскулярных фибробластах мышей и являются основой для будущих подходов генной терапии к лечению фиброза почек.

Перициты почек и периваскулярные фибробласты являются основными предшественниками популяции миофибробластов во время фиброза почек и важной терапевтической мишенью для замедления прогрессирования фиброзных заболеваний почек. ¹ В настоящее время нет одобренных антифибротических препаратов для лечения ХБП, которая представляет собой серьезную неудовлетворенную медицинскую потребность.

Рекомбинантный аденоассоциированный вирус (AAV) — это неинтегрирующийся, необолочечный и дефицитный по репликации парвовирус, который стал мощным инструментом для доставки генов в клетки млекопитающих.Преимущества AAV-направленного переноса гена включают стабильную трансдукцию в неделящихся клетках, низкий иммунный ответ и благоприятный профиль безопасности для людей. В настоящее время продолжаются испытания генной терапии на основе AAV для ряда моногенных заболеваний, включая нервно-мышечные заболевания, гемофилию и наследственные формы слепоты. ^2–6 В 2017 году Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США одобрило первую генную терапию на основе вектора AAV для лечения одной из форм наследственной дегенерации сетчатки. ⁷

Более широкое применение генной терапии AAV ограничено неполным пониманием вирусного тропизма. Недавние усилия по созданию векторов AAV показали, что эффективность трансдукции может быть улучшена, а тропизм может быть изменен. ⁸ Системная инъекция AAV обеспечивает эффективную трансдукцию в несколько органов, но не в почки, независимо от капсидного белка. ^9–15 Артериальная инъекция AAV2 трансдуцирует проксимальные канальцы почек, но с низкой эффективностью. ^16–20 Внутривенное или внутриутробное введение Сообщалось, что введение AAV9 трансдуцирует проксимальные канальцы, подоциты и эндотелий клубочков, ^21–24 и ретроградная доставка мочеточника приводит к трансдукции канальцевого эпителия. ²⁵ Точно так же инъекция AAV2 или -8 через ретроградный мочеточниковый или тазовый доступ трансдуцирует проксимальный каналец. ^26,27 Таким образом, было показано, что различные AAV трансдуцируют эпителий почек, но эффективность в целом низкая; они могут потребовать артериального или мочеточникового введения, и на сегодняшний день ни один протокол не продемонстрировал трансдукцию мезенхимальных клеток почек.

В этом исследовании мы систематически оценивали различные серотипы AAV на предмет их способности доставлять генетический материал к перицитам и фибробластам почек, популяциям предшественников миофибробластов. ²⁸ Мы сообщаем, что синтетический AAVAnc80 эффективно трансдуцирует мезенхимные клетки почек, включая перициты, фибробласты и мезангиальные клетки. Мы проверяем использование Anc80 для переноса генов, выбивая Gli2 из мезенхимы почек с помощью Anc80-Cre, подтверждая антифибротический эффект после хронической обструкции.Мы предполагаем участие пути β -катенина в экспансии миофибробластов, потому что нокаут экспрессии мезенхимального β -катенина с использованием той же стратегии также был антифибротическим. Наконец, мы демонстрируем успешную трансдукцию мезенхимальных клеток в органоидах почек человека, предполагая, что Anc80 может быть полезен для нацеливания на эту линию у людей.

Методы

Приготовление и инъекция AAV

Нативный AAV-2/2 и альтернативные серотипы AAV5, -6, -8 и -9 и Anc80 были получены либо с промотором CMV, либо с синтетическим промотором CASI.Трансгенами были CMV.eGFP.WPRE, CASI.eGFP.WPRE или CASI.Cre.WPRE. Получение и титрование AAV выполняли с помощью ядра вектора переноса генов (http://vector.meei.harvard.edu/) в Центре генной терапии Grousbeck при Исследовательском институте глаза Шепенса и Массачусетской глазной и ушной больнице, как описано ранее. ^8,29 Вкратце, все препараты AAV были получены котрансфекцией плазмиды в клетках 293 почки эмбриона человека с использованием полиэтиленимина. Упаковывающую плазмиду AAV Rep2-CapX (X указывает серотип) котрансфицировали трансгеном AAV2, фланкированным ITR, и конструкциями аденохелперов.Через три дня после трансфекции клетки и среды собирали и подвергали лизису и перевариванию бензоназой. Вирусный вектор дополнительно очищали от лизата фильтрацией в тангенциальном потоке и ультрацентрифугированием в градиенте йодиксанола перед изменением состава в PBS. ^8,29 Конечный объем 100 мкл л на мышь вводили через ретроорбитальное венозное сплетение.

Эксперименты на животных

Все эксперименты на мышах проводили в соответствии с руководящими принципами экспериментов на животных, выпущенными Комитетом по уходу и использованию животных Вашингтонского университета.Мыши Gli2-flox (JAX # 007926), Rosa26tdTomato (JAX # 007909), β -catenin-flox (JAX # 004152) и C57BL / 6J (JAX # 000664) были приобретены в Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME) . Анестезия достигалась непрерывным испарением изофлурана (2%) с использованием системы анестезии RC2 (922100; VetEqip) во время операции. Для достижения обезболивания подкожно вводили бупренорфин (0,05 мг / кг), мелоксикам (1 мг / кг) и лидокаин (1%). Операция по односторонней обструкции мочеточника (УУО) была следующей. После бокового разреза правая почка была обнажена и освобождена от околопочечной жировой ткани, а мочеточник перевязан на уровне нижнего полюса с помощью двух 4.0 шелковых галстуков. Раны закрыли скобами. Мышей умерщвляли через 10 дней после операции UUO. Операции UUO у мышей C57Bl6 дикого типа были выполнены в возрасте 8 недель с использованием той же методики. Для характеристики эффективности и дозы почечной трансдукции во всех экспериментах использовали трех мышей, за исключением дозы 10 ¹² копий генома (GC) на мышь, которая использовала n = 2 из-за стоимости. Для экспериментов Gli2 в обеих группах было n = 6. Для экспериментов с β -катенином и отслеживанием клонов в обеих группах было n = 4.

Подготовка ткани и гистология

Мышей анестезировали изофлуораном (Baxter), а затем перфузировали через левый желудочек с помощью PBS при 4 ° C в течение 1 минуты. Для гистологического анализа срезы тканей фиксировали в 10% формальдегиде в течение 1 часа, заливали парафином, разрезали вращающимся микротомом толщиной 3 мкм и окрашивали в соответствии с обычными гистологическими протоколами. Для исследований иммунофлуоресценции почки фиксировали в 4% параформальдегиде на льду в течение 1 часа, а затем инкубировали в 30% сахарозе в PBS при 4 ° C в течение ночи.Ткани с ОКТ-заделкой (Sakura Finetek) криосрезовали на срезы размером 5- мкм и мкм и помещали на предметные стекла для суперзаморозки (Fisher Scientific). Срезы промывали 1 × PBS, блокировали 10% нормальной козьей сывороткой (Vector Labs) и инкубировали с первичными антителами (дополнительная таблица 1). Вторичные антитела конъюгировали с FITC или Cy3 (Jackson ImmunoResearch). Затем срезы окрашивали 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом и помещали в Prolong Gold (Life Technologies). Все изображения были получены методом конфокальной визуализации (Nikon C2 +).

Эксперименты ПЦР в реальном времени

Ткань собирали и немедленно замораживали в жидком азоте. РНК экстрагировали в соответствии с инструкциями производителя с использованием набора RNeasy Mini (Qiagen), и 600 нг общей РНК подвергали обратной транскрипции с помощью iScript (BioRad). Во время экстракции РНК ДНК удаляли с помощью стадии расщепления ДНКазой (Life Technologies). Количественные ПЦР проводили с использованием iQ-SYBR Green Supermix (BioRad) и системы Applied Biosystems 7300 Teal-Time PCR System.Условия цикла были 95 ° C в течение 3 минут, а затем 40 циклов при 95 ° C в течение 15 секунд и 60 ° C в течение 1 минуты с последующим одним циклом 95 ° C в течение 10 секунд. Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа использовалась в качестве гена домашнего хозяйства. Данные были проанализированы с использованием метода 2 ^{— ΔΔct} . Праймеры перечислены в дополнительной таблице 2.

Вестерн-блот

Белок экстрагировали из тканей или клеток с помощью RIPA или буфера для лизиса мочевины (мочевина: 8 М) с полным коктейлем мини-ингибиторов протеазы (Sigma-Aldrich).Образцы белков разделяли в стандартном полиакриламидном геле SDS, переносили на поливинилидендифторидные мембраны и инкубировали с первичными антителами с 5% обезжиренным молоком или 3% буфером BSA TBST в течение 2 часов при комнатной температуре или в течение ночи при 4 ° C с последующей реакцией со вторичным антитело растворяли в 5% буфере TBST из обезжиренного молока в течение 1 часа при комнатной температуре. Козьи антимышиные (P0447), козьи антимышиные (P0448) или кроличьи антимышиные (P0449) Ig, конъюгированные с HRP (DAKO), использовали в качестве вторичных антител.Для проявления сигнала использовали субстрат для вестерн-блоттинга ECL Plus (Pierce Biotechnology) или субстрат максимальной чувствительности SuperSignal West Femto (Pierce Biotechnology) в соответствии с инструкциями производителя, и сигналы детектировали с помощью системы обнаружения ChemDoc (BioRad).

Количественная оценка флуоресцентных репортерных белков

Мезангиальные и кортикальные интерстициальные области были сфокусированы для количественной оценки фракции флуоресцентных репортерных белков. Были взяты по крайней мере шесть различных областей коры головного мозга, и процентная доля флуоресцентных белков-положительных областей на PDGFR β -положительная область была рассчитана с использованием элементов Nikon NIS.

Клональные анализы

Пятинедельным самцам мышей инъецировали низкую дозу AAV (10 ¹⁰ GC на мышь) с последующей трехнедельной инкубацией. Была проведена операция UUO, и мышей умерщвляли через 10 дней после операции; Замороженные срезы толщиной 15- мкм и толщиной мкм непосредственно окрашивали 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом и затем анализировали с помощью конфокальной микроскопии. Когерентные кластеры tdTomato-позитивных клеток подсчитывали для общего числа клеток с помощью контрастного окрашивания DAPI.

Статистический анализ

Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.Сравнение двух групп проводилось с использованием непарных тестов t . Парные тесты t были использованы для сравнения повторных измерений в одной и той же группе. Статистический анализ выполняли с использованием GraphPad Prism 5.0c (GraphPad Software Inc., Сан-Диего, Калифорния). Значение P <0,05 считалось значимым.

Результаты

In vivo Почечная трансдукция с помощью вариантов AAV

Капсидный белок является основным детерминантом клеточного тропизма, и мы создали панель гибридных векторов AAV, используя геном одобренного AAV серотипа 2 и капсидные белки из AAV. серотипы 5, 6, 8 и 9.Мы создали дополнительный AAV, используя синтетический капсидный белок Anc80, который был разработан для уменьшения антигенных эпитопов и, как было показано, обладает уникальными характеристиками трансдукции. ^8,30–32 Все серотипы AAV содержали одну и ту же конструкцию трансгена CMV.eGFP.WPRE. Мы пришли к выводу, что системная доставка будет наиболее практичной для будущего клинического применения, и поэтому все исследования проводились с внутривенным введением; Если не указано иное, мы оценивали трансдукцию через 3 недели после инъекции.Используя дозу 10 ¹¹ GC на мышь, мы подтвердили эффективную трансдукцию AAV2 / 8 и AAV2 / Anc80 в печени с более низкими уровнями в сердце, легких и почках (рисунок 1A, дополнительный рисунок 1). AAV2 / 8 и AAV2 / Anc80 были единственными серотипами AAV, которые демонстрировали трансдукцию почек, причем Anc80 достигал в 3-5 раз большей трансдукции, чем AAV8. Экспрессия GFP была в основном интерстициальной и обогащена внешним мозговым слоем.

Рисунок 1.

Высокоэффективная трансдукция стромы почки синтетическим аденоассоциированным вирусом (AAV) Anc80.(A) Только серотипы AAV 2/2 и 2 / Anc80 показали какой-либо тропизм почек с экспрессией eGFP, обнаруженной в клубочках и интерстиции. Масштабная линейка, 50 мкм м. (B) Costaining показал, что интерстициальная экспрессия eGFP локализована в PDGFR β -положительных перицитах и ​​периваскулярных фибробластах, а внутриклубочковая экспрессия eGFP наблюдалась исключительно в WT1-отрицательных и PDGFR β -положительных мезангиальных клетках. Масштабная линейка, 20 мкм м. (C) AAV2 / Anc80 также трансдуцировал небольшую группу эпителиальных клеток, прилегающих к ренин и Nos1-положительным юкстагломерулярным клеткам.Масштабная линейка, 20 мкм м. (D и E) Трансдукция клубочков и интерстиция с помощью Anc80 с помощью экспрессирующих конструкций CMV-eGFP и CASI-eGFP. Масштабная линейка, 20 мкм м. (F) Превосходная трансдукция, обнаруженная после инъекции Anc80-Cre репортерным мышам R26tdTomato. Стоимость tdTomato и эндотелиального маркера эндомуцина не выявила детектируемой трансдукции эндотелия с помощью AAV. (G) Высокая эффективность трансдукции мезангиума (верхние панели) и интерстициальных перицитов и периваскулярных фибробластов (нижние панели), выявленная инъекцией Anc80-Cre мышам-репортерам R26-tdTomato.Шкала 100 мкм м на верхней панели; 20 мкм м на нижней панели. (H – J) Количественное определение интерстициальной и мезангиальной трансдукции между промоторами CMV и CASI и репортерами eGFP или Cre. DAPI, 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол. * P <0,05 для однофакторного дисперсионного анализа внутри группы; ** P <0,01 для однофакторного дисперсионного анализа внутри группы; ^# P <0,01 для двустороннего повторного дисперсионного анализа между группами.

Далее мы охарактеризовали клеточный тропизм Anc80 в почках с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания.Экспрессия GFP ограничена интерстициальной, клубочковой и юкстагломерулярной областями. Интерстициальные GFP-положительные клетки равномерно экспрессировали PDGFR β , что указывает на идентичность перицитов и фибробластов (рис. 1B). В клубочках GFP-положительные клетки были отрицательными по WT1 и положительными по PDGFR β , что соответствует мезангию (рис. 1В). Единственные трансдуцированные эпителиальные клетки всегда обнаруживались в канальце, смежном с клубочком, в клетках, которые экспрессируют котранспортер Na ⁺ : K ⁺ : 2Cl ^— Solute Carrier Family 12 Member 1, что указывает на толстую восходящую конечность.Интересно, что трансдуцировалась только часть эпителия, и это всегда были клетки, соседствующие с экспрессирующими ренин и синтазу азота 1 клетками, которые сами по себе не трансдуцировались (Figure 1C). Эти результаты показывают, что AAV Anc80 эффективно трансдуцирует подмножество эпителия в толстой восходящей конечности, прилегающей к юкстагломерулярному аппарату (JGA).

Затем мы спросили, может ли синтетический промотор CASI, состоящий из усеченного энхансера CMV, промотора -актина курицы β и энхансера UBC, а также последовательностей донора сплайсинга и акцептора сплайсинга, повысить чувствительность к обнаружению трансдукции по сравнению с промотором CMV. .Хотя общий тропизм клеток почек не изменился, мы наблюдали гораздо лучшую трансдукцию перицитов и фибробластов с промотором CASI по сравнению с промотором CMV (18% против 4% PDGFR β -положительных клеток, соответственно) (рис. 1, D и E). . Напротив, трансдукция мезангиальных клеток несколько снижалась с промотором CASI. Количественное определение эффективности трансдукции между AAV2 / 2 и AAV2 / Anc80 с промоторами CMV или CASI показано на рисунке 1, H и I. Экспрессия eGFP в эпителии JGA была обнаружена в течение 1 недели после инъекции AAV2 / Anc80, тогда как экспрессия в мезангиуме и interstitium потребовалось 2 недели для обнаружения.Экспрессия в мезангиуме увеличилась с 2 до 4 недель, тогда как интерстициальная экспрессия оставалась постоянной в течение этого периода времени (дополнительный рисунок 2).

Повышенная чувствительность для определения доставки гена с помощью AAV-Cre

Тот факт, что промотор CASI увеличил очевидную эффективность трансдукции по сравнению с промотором CMV, предполагает, что у нас может отсутствовать адекватная чувствительность для точного измерения вирусной трансдукции с использованием репортерной системы GFP. Мы предположили, что AAV, кодирующий рекомбиназу Cre, в комбинации с репортерной мышью может обеспечить более высокую чувствительность.Поэтому мы генерировали AAV, управляющую экспрессией рекомбиназы Cre, и вводили 3 × 10 ¹¹ GC на мышь репортерным мышам R26-tdTomato. Мы наблюдали очень сильную экспрессию во всех трех типах клеток почек (перициты / фибробласты, мезангиальные клетки и JGA), и общая эффективность трансдукции была намного выше по сравнению с AAV-GFP (рис. 1, F и G). Важно отметить, что не было трансдукции перитубулярных эндотелиальных клеток ни в продолговатом мозге (рисунок 1F), ни в коре головного мозга (дополнительный рисунок 3).Anc80-Cre может преобразовывать почти 70% интерстициальных перицитов и периваскулярных фибробластов и почти 90% мезангиума (рис. 1J). Исследование зависимости реакции от дозы AAV2 / Anc80-Cre выявило увеличение трансдукции при максимальной испытанной дозе (3 × 10 ¹¹ GC на мышь) (дополнительная фигура 4).

Затем мы исследовали, вызывает ли AAV неблагоприятное воздействие на неповрежденные почки и другие основные органы. Несколько удивительно, но наши исследования показали, что AAV8 и кассета CASI.GFP.WPRE (но не CMV.Кассета GFP.WPRE) приводила к токсичности для печени при 10 ¹² GC на мышь, включая гипертрофию гепатоцитов с набуханием ядра, моноклеточную инфильтрацию вдоль центральных вен и мостиковый фиброз (рис. 2А). Неясно, была ли эта токсичность связана с вектором или экспрессией трансгена, но она несколько отражала предыдущие данные об AAV8, сделанные Wang et al . ³³ Мы также наблюдали свидетельства спонтанного перехода миофибробластов в нормальных почках при дозе 10 ¹² GC на мышь того же AAV8 и кассеты.Это было очевидно по усилению экспрессии α SMA и иммунофлуоресценции, а также по увеличению мРНК, кодирующей как α SMA, так и фибронектин (рис. 2, B – D). Следует отметить, что гистологические аномалии почек не были обнаружены, и никаких гистологических аномалий в легких или сердце не наблюдалось ни для одного из протестированных серотипов AAV (данные не показаны). Неясно, было ли повреждение почек первичным результатом трансдукции перицитов наивысшей дозой AAV8 или, альтернативно, вторичным эффектом фиброза печени; однако, вероятно, второе, потому что уровни экспрессии трансгена были очень высокими в печени, но ниже в почках.Никакой токсичности не наблюдалось ни с одним из других AAV, включая Anc80. В частности, мы не наблюдали воспаления или фиброза сердца или легких через 8 недель после инъекции Anc80-CASI-Cre в дозе 3 × 10 ¹¹ GC на мышь (дополнительная фигура 5). Взятые вместе, эти результаты показывают, что, в отличие от AAV8, Anc80 обеспечивает эффективный перенос генов в перициты почек, мезангиальные клетки и JGA без токсичности.

Рисунок 2.

Аденоассоциированный вирус 2/8 (AAV2 / 8) проявляет токсичность для печени и почек при максимальной дозе.(A) AAV2 / 8 CASI.GFP.WPRE вызывал мостиковый фиброз в печени в дозе 10 ¹² копий генома на мышь. Масштабная шкала, 100 мкм M. (B) Тот же AAV был связан с умеренным переходом миофибробластов при той же дозе, но не более низких дозах. Масштабная линейка, 50 мкм м. (C и D) Количественная оценка дифференцировки миофибробластов с помощью ПЦР в реальном времени для α SMA и фибронектина (FN) по серотипам AAV. DAPI, 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол. * P <0,05.

Anc80 трансдуцирует предшественников миофибробластов

Любой подход генной терапии для лечения фиброза почек требует трансдукции предшественников миофибробластов.Поэтому мы формально проверили, являются ли перициты и периваскулярные фибробласты, трансдуцированные Anc80, предшественниками миофибробластов. Мы вводили Anc80-CASI-Cre в дозах от 10 ¹⁰ до 3 × 10 ¹¹ GC на мышь репортерным мышам R26-tdTomato и выполняли UUO. Самая низкая доза пометила около 5% перицитов почек, тогда как 1 × 10 ¹¹ GC на мышь пометили 45% (рис. 3, A и B). В почке UUO 15% tdTomato-положительных интерстициальных клеток были α SMA-положительных миофибробластов при низкой дозе AAV-Cre, и 60% были α SMA-положительные миофибробласты при средней и средней дозе.Инъекция AAV-Cre в малых дозах меченных изолированных клонов перицитов с tdTomato, и после UUO эти клоны размножились. Мы количественно оценили клональную экспансию, измерили общее 4,7-кратное увеличение tdTomato-положительных интерстициальных клеток после UUO и наблюдали сдвиг вправо в распределении размеров клонов после UUO (рис. 3C). Эти результаты подтверждают, что Anc80 трансдуцирует предшественники миофибробластов почек, которые подвергаются пролиферативной экспансии во время фиброзного повреждения.

Рисунок 3.

Anc80-Cre трансдуцирует предшественников миофибробластов.(A и B) Указанные дозы Anc80-Cre вводили мышам R26tdTomato за 3 недели до односторонней обструкции мочеточника (UUO). Через 10 дней интерстициальные tdTomato-позитивные клетки дифференцировались в α SMA-позитивных миофибробластов. (C) Количественная оценка эффективности трансдукции миофибробластов при различных дозах Anc80-Cre. (D) Клональный анализ когерентных клонов при трансдукции с низкой дозой показывает сдвиг вправо на графике частоты размера клона после UUO. CLK, контралатеральная почка; DAPI, 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол; GC, копия генома.* P <0,05.

Перицит-специфический нокаут Gli2 с помощью AAV-Cre улучшает фиброз почек

Ранее мы показали, что Gli2 необходим для пролиферации миофибробластов во время фиброза почек. ³⁴ Далее мы стремились оценить возможность редактирования генов с помощью AAV-Cre. Мы создали репортерных мышей R26tdTomato, которые были либо гомозиготами Gli2 ^{flox / flox} , либо гетерозиготами Gli2 ^{flox / wt} , и вводили 3 × 10 ¹¹ GC на мышь AAV-Anc80-CASI-Cre за 3 недели до операции UUO.На основе экспрессии tdTomato мы достигли эффективности трансдукции кортикальных перицитов и периваскулярных фибробластов на уровне 60% и не наблюдали значительных гистологических аномалий в контрлатеральной неповрежденной почке (рис. 4, A и B). Гомозиготы Gli2 ^{flox / flox} имели существенно сниженный фиброз по сравнению с контрольными гетерозиготами Gli2 ^{flox / wt} по ряду показателей. Они включали уменьшение площади трихром-положительного коллагена и экспрессию α, SMA и Col1a1 с помощью иммунофлуоресценции (рис. 3, A и B) и снижение экспрессии белка Col1a1 с помощью иммунофлуоресценции (рис. 4, C и D).При вестерн-блоттинге также были снижены уровни общего α SMA и фибронектина (рис. 4, E – G). Кроме того, почки с нокаутом Gli2 имеют пониженные уровни мРНК, кодирующей Gli1, Gli2, α, SMA, Col3a1, Col1a1 и фибронектин (рис. 4, H – M). У инъецированных мышей из любой группы не развились гистологические аномалии в контралатеральных почках, легких, сердце или печени (данные не показаны). Эти результаты показывают, что Anc80-Cre может эффективно опосредовать рекомбинацию связанных аллелей, отличных от локуса R26, в строме почки.

Рисунок 4.

Anc80-Cre подтверждает центральную роль Gli2 в почечном фиброзе. (A и B) Всего 3 × 10 ¹¹ копий генома Anc80-Cre на мышь инъецировали гетерозиготным или гомозиготным мышам Gli2-flox. Через три недели была выполнена односторонняя обструкция мочеточника (УУО), а через 10 дней почки были проверены на фиброз. Окрашивание трихромом и α, SMA показывает снижение фиброза в группе с нокаутом Gli2. (C и D) Уменьшение окрашивания Col1a1 при нокауте Gli2. Масштабная линейка, 50 мкм м.(E) Снижение общих уровней белка α SMA и фибронектина (FN) при нокауте Gli2 по сравнению с контролем. (F и G) Количественное определение полос методом денситометрии. (H – M) Уровни мРНК, кодирующих данные о фиброзе, и медиаторов, измеренные с помощью ПЦР в реальном времени. CLK, контралатеральная почка; DAPI, 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол; GAPDH, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа. * P <0,05; ** P <0,01 по сравнению с почкой CLK. ^# P <0,05 и ^## P <0.01 по сравнению с гетерозиготой UUO Gli2.

Перицит-специфический ген, нацеленный на

β -катенин с помощью AAV-Cre улучшает фиброз почек после UUO

Несколько линий доказательств указывают на участие канонической передачи сигналов Wnt– β -катенина в пролиферации и дифференцировке миофибробластов во время фиброгенеза почек. Однако это никогда не тестировалось напрямую из-за отсутствия подходящих моделей мышей. Мы использовали Anc80-Cre тропизм для проверки гипотезы о том, что каноническая передача сигналов β -катенин необходима для почечного фиброгенеза.Мы вводили Anc80-Cre мышам β -катенин ^{f / f} по сравнению с β -катенин ^{f / wt} и впоследствии индуцировали фиброз с помощью UUO. И снова 3 × 10 ¹¹ GC на мышь вводили за 3 недели до операции UUO. Через 10 дней у мышей с удалением β -катенина с помощью Anc80-Cre наблюдалось даже большее снижение фиброза, чем мы наблюдали с нокаутом Gli2 (фиг. 5, A и B). Мы смогли обнаружить существенно сниженные уровни интерстициального и общего белка β -катенин, а также α SMA и фибронектина (рис. 5, C – E).Важно отметить, что мы также увидели существенное сокращение различных показателей фиброза, по оценке с помощью ПЦР в реальном времени (рис. 5, F – M). Они включали снижение β -catenin нацелено на Axin2 и Lef1, что указывает на успешное устранение канонической передачи сигналов β -catenin.

Рисунок 5.

Делеция β -катенина в строме почки с помощью Anc80-Cre является антифибротической. (A) Гетерозиготным или гомозиготным мышам β -catenin-flox инъецировали 3 × 10 ¹¹ копий генома (GC) на мышь Anc80-Cre.Через три недели была выполнена односторонняя обструкция мочеточника (УУО). Окрашивание трихромом почек UUO на 10-й день показывает сильное снижение интерстициального отложения коллагена у мышей с нокаутом β -катенин. (B) Снижение дифференцировки миофибробластов у гомозиготных мышей с нокаутом β -катенин, что отражено сниженной иммунофлуоресценцией α SMA. (C) Anc80-Cre снижал экспрессию белка β -катенин в миофибробластах, что оценивалось по иммунофлуоресценции α SMA и β -катенин.Масштабная линейка, 50 мкм м. (D) Пониженные уровни общего белка β -катенин, фибронектин и α SMA при окрашивании Col1a1 у гомозиготных мышей β -catenin-flox, которым вводили Anc80-Cre, по сравнению с гетерозиготными мышами β -catenin-flox. . (E – G) Количественное определение интенсивности полос вестерн-блоттинга. Снижение общих уровней белка α SMA и фибронектина при нокауте Gli2 по сравнению с контролем. (H – M) Уровни мРНК, кодирующих данные о фиброзе, и медиаторов, измеренные с помощью ПЦР в реальном времени.* P <0,05; ** P <0,01 по сравнению с CLK. ^# P <0,05 и ^## P <0,01 по сравнению с гетерозиготой β-катенина UUO.

Аналогичный тропизм Anc80 в мезенхимальных клетках человека

Мыши не могут предсказать биологию векторов AAV у приматов, и поэтому мы затем оценили, способен ли Anc80 трансдуктировать мезенхимальные клетки человека. Сначала мы культивировали фибробласты почек взрослого человека и трансдуцировали их с помощью Anc80.CASI.GFP. Мы наблюдали экспрессию GFP в мезенхимальных клетках PDGFR β +, что свидетельствует о том же тропизме этого вируса у человека, что и у мышей (рис. 6А). Поскольку первичные клетки могут терять экспрессию маркеров дифференцировки в культуре, мы также спросили, может ли Anc80-GFP трансдуктировать мезенхимальную линию в органоидах почек человека, генерируемых из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. Мы наблюдали, что Anc80.CASI.GFP управлял экспрессией GFP исключительно в интерстиции органоидов почек и что 26% положительных по стромальному маркеру Meis1 клеток ³⁵ и 10% PDGFR β -положительных клеток были GFP-положительными (Рисунок 6, Б – Г).Хотя мы не можем быть уверены в идентичности интерстициальных GFP-положительных клеток, которые отрицательны по MEIS1 и PDGFR β , мы предполагаем, что это предшественники мезенхимального клона, которые еще не полностью дифференцировались, следовательно, у них отсутствуют маркеры терминальной дифференцировки, включая MEIS1. и PDGFR β . В совокупности эти наблюдения предполагают, что Anc80 AAV способен трансдуктировать клон мезенхимальных клеток почек человека.

Рисунок 6.

Anc80 трансдуцирует мезенхимные клетки почек человека.(A) Первичная культура фибробластов почек взрослых, трансдуцированных Anc80-eGFP. (B) Органоиды почек человека, подвергшиеся воздействию Anc80-eGFP, проявляют эпифлуоресценцию eGFP через 4 дня после трансдукции. (C) Определение стоимости стромальных маркеров Meis1 и PDGFR β показывает, что Anc80 способен трансдуктировать эти мезенхимные клетки почек. (D) Количественная оценка эффективности преобразования. DAPI, 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол; GC, копия генома.

Обсуждение

Мы сообщаем о трех основных выводах. Мы идентифицировали первый серотип AAV, а именно Anc80, который эффективно трансдуцирует мезенхимные клетки почек взрослых и предшественников миофибробластов.Мы также показываем, что Anc80-Cre обеспечивает высокоэффективную рекомбинацию двух отдельных floxed аллелей, Gli2 и β -catenin, подтверждая важную роль этих сигнальных путей в опосредовании фиброза почек и подтверждая этот подход на мышах. Наконец, мы показываем, что Anc80 также может доставлять генетический материал к мезенхимальным клеткам человека в культуре и органоидам почек человека, обеспечивая доказательство принципа использования векторов на основе AAV в подходах к генной терапии для лечения фиброза почек.Механистическая основа улучшенных трансдукционных свойств мезенхимального клона в почках взрослых мышей является предметом будущих исследований, но это может относиться к быстрой кинетике экспрессии после инфекции Anc80, которая может обеспечивать трансдукцию менее пермиссивных клеточных мишеней. ^30,32

Наши результаты находят применение в доклинических моделях фиброза, поскольку основным ограничением текущих исследований стромальной биологии является отсутствие высокоэффективных линий драйверов Cre для эффективного манипулирования экспрессией генов в почках взрослых.Хотя FoxD1-Cre опосредует рекомбинацию почти во всех стромах почек, он активен только во время нефрогенеза, а драйвер FoxD1-CreER ^t2 не экспрессируется в почках взрослых. ³⁶ Мы успешно использовали драйвер Gli1-CreER ^t2 , ^34,37,38 , но экспрессия в почках ограничена внешней медуллярной стромой в здоровой почке взрослого человека с очень ограниченной экспрессией в коре головного мозга. Таким образом, важным применением наших результатов является новый метод эффективного индуцибельного нокаута гена в мезенхимальных клетках почек взрослых по всей коре и мозговому веществу.Наш подход имеет дополнительное преимущество, заключающееся в том, что не требуется разведение аллеля драйвера Cre на фоне объединенного аллеля для конкретного интересующего гена.

Эти результаты подтверждают и расширяют важную роль Gli2 и канонической передачи сигналов Wnt– β -catenin в фиброгенезе почек. Мы уже показали роль Gli2 в дифференцировке миофибробластов, и здесь мы использовали эти знания в качестве положительного контроля, чтобы оценить, может ли Anc80-Cre удалять гены в локусах, отличных от локуса R26.Ранее было показано, что специфическая для канальцев абляция β -катенина не оказывает антифибротического действия на поврежденную почку, ³⁹ , а недавно сообщалось, что происходящие из канальцев Wnts необходимы для активации фибробластов и фиброгенеза почек. ⁴⁰ Однако вопрос о том, являются ли интерстициальные стромы мишенями Wnts, происходящих из канальцев, формально не проверялся из-за отсутствия индуцибельной линии CreER ^t2 с экспрессией, специфичной для стромы почки. Наши результаты, следовательно, подтверждают, что интерстициальные перициты и фибробласты действительно отвечают на лиганды Wnt и что каноническая передача сигналов β -catenin необходима для дифференцировки миофибробластов во время фиброза.Этот результат согласуется с нашей предыдущей демонстрацией, что генетическая стабилизация β -catenin в перицитах достаточна для управления дифференцировкой миофибробластов. ⁴¹

Перевод этих результатов в качестве терапевтического подхода к лечению ХБП может иметь несколько форм. AAV можно использовать, например, для доставки siRNA, нацеленной на Gli2 или β -катенин. Альтернативно, он может доставлять гены, кодирующие ингибиторы этих путей, такие как hedgehog-взаимодействующий белок или секретируемый ингибитор Wnt фактор ингибирования Wnt 1. ^42,43 Однако необходимо будет преодолеть несколько препятствий, чтобы внедрить такую ​​стратегию в клинику. Anc80 демонстрирует высокоэффективную трансдукцию печени, мышц, сетчатки и других проблем, что приводит к потенциальной внепочечной токсичности из-за экспрессии ингибиторов пути hedgehog или Wnt. Одним из возможных решений является продолжение разработки тропизма AAV для достижения специфичности почек, и недавние открытия показывают осуществимость таких усилий. ³¹ Альтернативно, использование промотора, специфичного для мезенхимальных клеток почек, может ограничивать внепочечную экспрессию.Наконец, хотя AAV поддерживает экспрессию генов в течение многих месяцев, медленно прогрессирующая природа ХБП может потребовать повторных инъекций, что повышает вероятность иммуногенности. Большинство млекопитающих приобретают гуморальный иммунитет против капсидов AAV в раннем возрасте, и, как следствие, у них формируется иммунный ответ против обычных AAV. ^8,44–47 Anc80 вызывает более слабый иммунный ответ, потому что это синтетический вирус, но повторные инъекции могут привести к приобретенному иммунитету. ^8,30

Таким образом, в этом исследовании оценивали пять различных стандартных AAV и синтетический AAV для применения в генной терапии предшественников миофибробластов почек.Мы идентифицируем Anc80 как многообещающего кандидата для применения в генной терапии, нацеленной на клон мезенхимальных клеток почек.

Раскрытие информации

L.H.V. является изобретателем нескольких технологий, лицензированных фармацевтическим и биотехнологическим компаниям, включая технологию Anc80, лицензию на которую получили компании Astellas, Vivet Therapeutics, Lonza Houston и Selecta Biosciences. L.H.V. получает финансирование исследований от Lonza Houston, Solid и Selecta Biosciences и консультирует их. L.H.V. является соучредителем и акционером GenSight Biologics и Akouos.L.H.V. также является членом Научно-консультативного совета GenSight Biologics, Akouos и NightStarX. Для всех других авторов не существует конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Антитело против ренина было подарком от Ариэля Р. Гомеса.

Эта работа была поддержана Giving / Grousbeck (LHV) и Национальными институтами здравоохранения / Национальным институтом диабета, болезней органов пищеварения и почек грантами DK103740 (для BDH), DK107374 (для BDH), DK076169 (для BDH) и DK115255 ( к Б.D.H.).

• Copyright © 2018 Американское общество нефрологов

Когда все будет хорошо. Системная векторная психология. Верьте и все будет хорошо: когда это произойдет

Хватит тратить время на беспокойство!

Smile Все будет хорошо, выяснил.

Все будет хорошо, потому что иначе быть не может!

Все будет хорошо, куда ни пойдешь!

Все будет не просто хорошо, а намного лучше! Безошибочно! Не сомневаюсь!

Как весна приходит после зимы, радость сменяет печаль.Все будет хорошо!

Человек — продукт его мыслей. Потому что он делает то, о чем думает, значительную часть времени!

Все будет хорошо! Верь в себя. и ты прорвешься!

Где бы вы ни были, говорите себе: раз уж я здесь, то все будет хорошо!

Время от времени, когда в жизни есть какие-то необычные дороги, все само собой становится лучше!

Все будет хорошо: теоретически … логически … дедуктивно… да в любом случае!

Пусть пока не годится, но потом все будет нормально. Надо подождать, а потом все наладится. Безошибочно!

Все будет хорошо! Живите активно, мысли позитивные!

Если вы начнете просыпаться с мыслью, что сейчас произойдет что-то хорошее, это произойдет.

Знаете, еще будет. Южный ветер все еще дует, и весна все еще вызывает в памяти воспоминания.

Ни при каких обстоятельствах ни о чем не жалейте — все к лучшему!

В то время, когда человек думает, что все идет наперекосяк, что-то прекрасное пытается войти в его жизнь.

Поверьте, все сбудется! Все будет круто!

Солнце за облаками всегда доступно. Да! Все будет хорошо. Несмотря ни на что.

Чтобы заметить радугу — нужно пережить дождь! Все будет хорошо!

Если тебе не очень хорошо, поищи того, кто хуже, и помоги ему. Вы почувствуете себя намного лучше!

Если с вами обидели, воспользуйтесь чудесным правилом трех Пс: признать, забыть обиду, похоронить.

Ни при каких обстоятельствах никому не мстите. Все будет! Для нас это хорошо, а для них они этого заслуживают!

Поверьте, все неприятности уйдут. Беды тоже устают, и завтра будет радостный день!

Поезд идет до конечной станции Успех со всеми остановками: Неудача, Апатия, Предательство, Ошибки, Действия … Успех.

Все будет как надо! Все проходит. и это пройдет. Все будет хорошо!

Счастье — это когда не нужно лгать, и это хорошо для вас.

Сильный человек — это не тот, у кого все хорошо. Это тот, в котором все хорошо, несмотря ни на что. Ты сильнее, чем думаешь!

Все происходящее происходит своевременно. Это лучшее, что могло быть!

Конец чего-то плохого неизменно является началом чего-то хорошего.

Не грусти. все будет хорошо, жизнь полна приятных моментов!

Не горюй и не грусти! Все самое лучшее впереди!

В итоге все будет нормально.Если все еще не все хорошо, это еще не конец.

Все будет так, как вы мечтаете, подождите. Помните о сахаре внизу.

Ни одно затмение не продолжается. Не унывайте, все будет хорошо!

Солнце на небе хорошо, но солнышко в душе более ответственно. Береги свое солнце!

Взгляните на свои проблемы под другим углом! Расслабьтесь, все будет хорошо!

Все будет хорошо! А еще вчерашние ошибки пойдут вам на пользу!

Я нашла себе настроение быть удачливым.Днем назад все было хорошо, а теперь лучше!

Кейсы на сегодня: встать перед зеркалом, расправить плечи, поднять голову, улыбнуться и сказать себе: все будет хорошо!

Зайдите в Настройки Души, откройте папку Статус, поставьте галочку на Radosten и забудьте пароль!

Все будет хорошо, потому что это не хорошо, что мне не подходит!

Все будет хорошо, потому что я так хочу и должен быть без этого!

Принципиально важно, чтобы рядом с вами был человек, который будет обнимать и говорить: все будет хорошо.И это ты сам!

Никто не будет чувствовать себя хорошо рядом с вами, пока вы не почувствуете себя комфортно наедине с собой.

Все будет хорошо! Счастье еще не наступило? Он огромный и медленный!

И будет день добрый, и жить захочется!

Мы все ждем — в то время, когда будет хорошо, а прекрасное рядом — тебя!

Счастье не приходит, приходит способность видеть!

Одетый в счастье, иду босиком
и я не боюсь, а что будет потом…
Дальше все будет и будет хорошо,
так как меня любит жизнь, а что надо еще …

Пусть все будет чудесно, безоблачно и ясно!

Неизменно есть вещи, способные поднять настроение, главное — найти в памяти о них повсюду!

Все будет хорошо! Статусы, цитаты, стихи, умные мысли, пожелания друзьям.

Иногда в некоторых случаях вы не знаете, что делать.Вы не знаете, что правильно, а что неправильно …

Вы уверены, что хорошо, а что плохо?

Приведу один пример … Вы просыпаетесь утром, и ваш ребенок говорит вам: «Я не хочу ходить в школу!» Вы думаете, что это очень плохо. Но уверены ли вы, что хорошо, а что плохо?

Недавно (не знаю, помните ли вы этот случай) отец водил ребенка в школу. Недалеко от школы грабители ворвались в банк в Афинах, в Каллифеи, украли крупную сумму денег, вышли с оружием на улицу, у них были автоматы Калашникова, четыре раза выстрелили в воздух, запугивая людей так, что к ним никто не подходил.Люди хотели их поймать — заявили в полицию, и она пыталась задержать грабителей. Во время всеобщей паники они остановили проезжающую машину, чтобы наехать на нее и убежать. Но в машине остановились, отец отвез маленькую дочку в школу. И он, защищая ребенка, выступал против них, сопротивлялся. Грабители избили и его, и ребенка. К счастью, никто из этих двоих не погиб. Но девушку ударили прямо в живот! Ребенка доставили в больницу, опасность миновала, но, как бы то ни было, девочка пережила сильный шок и пережила ужасные переживания.

И я думаю над следующим вопросом: если бы этот ребенок проснулся в то утро, заплакал и попросил остаться дома со словами: «Я не хочу ходить в школу, потому что мне не нравится школа, потому что я что-то я чувствую. Я не выспался, мне тяжело, я не выучил уроки », — тогда родители сказали бы ему:« Об этом не может быть и речи », полагая, что если они сдадутся, то навредят успехов и благополучия ребенка. «Пропускать занятия для вас не может быть и речи.Тебе нужно в школу. Вы уйдете и оставите свое «Я не хочу». В любом случае в школу ты пойдешь! «И я бы сделал то же самое на их месте. Разве нет? Не могли бы вы сделать то же самое? И вы не делаете одно и то же каждый день? Если ваш ребенок протестует против того, что вам кажется «хорошим», вы говорите, что «это хорошо. И особенно в школе, это так полезно. Вы не можете пропустить школу! «И вы водите его в школу, хочет ли ваш ребенок этого или нет.

Естественно, если бы этот отец знал, что весь этот кошмар случится этим утром по дороге в школу и что грабители застрелиют его ребенка и его самого… И он, наверное, сказал: «Если бы он знал, он бы никогда его не взял! Но как я узнал! В конце концов, ходить в школу «хорошо» и обязательно. ”

Итак, вы собираетесь предпринять какие-то действия, но не знаете, к чему они вас приведут.

Не знаю, случилось ли с вами что-то подобное: вы думаете о покупке чего-либо, куда-то путешествуете, встречаетесь с тем или иным человеком, ведете себя определенным образом, и вы не знаете, выйдет ли что-то хорошее (и из что именно).Вы не знаете, что делать и что вам принесет завтра. Даже в отношении тех действий, которые на первый взгляд кажутся очень позитивными, очень благочестивыми, блаженными и святыми. Согласен? В конце концов, что может быть лучше для вашего ребенка, чем ходить в школу? Но тем утром, если бы он не пошел в школу, было бы намного лучше!

Наконец, что лучше, а что хуже? Дилеммы и вопросы, ответы на которые, я думаю, будут даны в конце нашей жизни. И исчерпывающий ответ на все эти дилеммы мы получим в вечности.На этой земле то, что мы называем «добром», может причинить нам огромную боль. А то, что на первый взгляд, кажется, принесет нам большую боль, может впоследствии привести к чему-то очень «хорошему». А поскольку мы сами не можем этого различить, нам остается одно. Об этом я расскажу дальше.

Я вижу на твоем лице недоумение. Вы хотите знать все прямо сейчас, и я вам скажу. Думаю, нам остается одно. Мы этого не знаем, мы недоумеваем по этому поводу, мы многое остаемся в неведении.И вы часто пишете мне сообщения, письма и электронные письма и говорите: «Думаю, я сделаю это. Скажите: это правильно? «Я не знаю. Единственное, что знаю, я вам об этом расскажу. Чуть позже.

Думаю, как бы иначе было, если бы у нас был очень живой и откровенный. Очень четкая связь. То есть, когда вы видите человека и обращаетесь к нему, а он поворачивается к вам и ясно говорит, что думает, так мы могли живо общаться с Создателем, с нашим Богом, Господом. А потом мы говорили Ему: «Господи, что мне делать?» И мы сразу же услышали бы Его голос в ответ: «В этой ситуации сделайте так.Идти прямо. Это самый верный способ. «Затем, далее:« Господи, правда ли это движение ?! » И Он отвечал вам: «Нет, не делай этого! Это ни к чему хорошему не приведет. Не продолжай. Измени свои планы». Теперь, если бы у нас была такая живая и очевидная связь с Ним, наша жизнь была бы красивый.

Но у нас это не так. Перед нами неопределенность. Мы не понимаем, чего хочет от нас Бог. Мы не знаем, что Бог хочет от меня лично и от вас лично, потому что то, что Он хочет от меня, Он может не хотеть от вас.Наоборот. Он не хочет от всех одного и того же. У каждого свой путь. И так много ошибок, которые приносят нам серьезную боль, мы делаем на этом пути. Проходят годы, мы поступаем неправильно и переживаем. Мы идем в том направлении, которое, как нам кажется, ведет к хорошему, а в конечном итоге ведет к плохому. Конечно, если внимательно посмотреть на происходящее, «плохого» нет. Все в конечном итоге ведет к хорошему. Но нам это больно. Мы плачем. И мы воспринимаем все, что с нами происходит, как повседневные неприятности.Мы расстроены и разочарованы.

Наша настойчивость должна уважать знаки, данные Господом и предостережения: «Стой».

Поэтому я разработал следующую тактику как выход из некоторых ситуаций. Вас беспокоит какой-то вопрос. Вы долго не «стучите в дверь» (по этому поводу). Тук-тук — ты попробуй. Дверь не открывается. Еще раз: тук-тук. Дверь не открывается. Конечно, если пнуть ее и сломать, в результате можно попасть внутрь, но это произойдет через взлом.Самая красивая дверь, которую Господь открывает в нашей жизни, на мой взгляд, — это дверь, которая открывается легко и свободно. Конечно, с усилием и настойчивостью, но без эгоистичного давления. Я думаю так. В то же время наша настойчивость должна уважать знаки, данные Господом, и не настаивать чрезмерно, а принимать эти предупреждающие знаки: «Стой». Тогда подумайте: может, это знак от Бога, чтобы я не слишком настаивал и не менял курс?

И еще одно уточнение. Все, что я вам сегодня говорю, как всегда, не является истиной в последней инстанции.Не знаю, прав ли я. А может, на самом деле все не так. Но я говорю то, что понял из того, что вы читали, слышали и рассказывали.

Вот, например, один человек едет в аэропорт. Билетов нет, а ему говорят: «Мы поставим тебя в очередь». А теперь он ждет своей очереди и с нетерпением и с молитвой добивается места для этого полета. Он даже молится и просит Бога: «Я прошу Тебя, Господь, сделай что-нибудь, чтобы тебя взяли на борт, сделай то, что лучше для меня». Вот кричат ​​несколько имен, имя его не называется.В итоге он остался без билета. Самолет летит без него. Он очень расстроен, огорчен, возмущен, нервы на взводе. То, о чем я говорю, случилось со многими. Многие из-за опоздания в аэропорт или из-за нехватки места не сели на нужный рейс. Через несколько минут после взлета все внезапно слышат ужасную новость: самолет разбился. А человек, который только что убивал себя и вопил: «Ну почему я должен потерять этот полет ?!», падает на колени, целует землю и со слезами восклицает: «Я спасся! Я жив! Я жив! Если бы я был в этом самолете, я бы умер! И теперь я жив! Но я очень хотел попасть в этот рейс любой ценой, я настоял, я настроился на это, и вот страшно представить, что со мной сейчас будет! ”

И «идущий» — один из разбившихся.Он появляется мне и говорит: «Что ты мне скажешь? Ну, тот, другой, он не попал в рейс и сбежал. И я? Почему это случилось со мной? «А потом, вы знаете, что я делаю? Я молчу. Я не знаю, что ему ответить. Потому что на самом деле феномен жизни, тайна жизни превосходит наше понимание. Единственное, что я могу ему сказать: «Брат, не спрашивай меня. Вы спрашиваете Его, Кто Управляет нашей жизнью. Вы спрашиваете Того, Кто определяет, регулирует и знает все. И направляет обстоятельства туда, куда направляет каждого из нас.Он знает, сколько мы проживем, когда уедем, при каких обстоятельствах нас настигнет конец. Только он знает, как и почему. Он все знает. Но я не знаю и не могу вам ответить на этот вопрос. ”

Я действительно в растерянности. Но я знаю, что тот, кто в итоге выжил, после этого становится более зрелым, иначе смотрит на мир. Он думает: «Смотрите, куда все может привести! Так что в жизни не стоит жаловаться и говорить, как я сказал в момент, когда мой самолет улетел; «Ах, как плохо это обернулось для меня.«Потому что вы не знаете, что вас ждет в будущем, что на самом деле хорошо, а что плохо. ”

Нам остается одно. Я скажу это сейчас. Я довольно долго держал вас в напряжении. Я должен! Некоторые, услышав это предложение, говорят: «То есть, значит, мне ничего не нужно делать самому? Нет движения? Просто сядь и подожди? «Конечно, нужно действовать. Вам нужно делать то, что вы должны делать, вам нужно строить планы. А затем уповай на любовь Бога и скажи: «Боже мой, теперь Ты благословляешь мои дела и сам все устраиваешь.Я не знаю, что получится из того, что я начинаю делать. Возможны ошибки, неудачи, проблемы. Может, меня вообще выгонят. Я начинаю. Благослови мою жизнь. ”

«Хорошо» не означает, что все будет «в шоколаде», легко и приятно.

И я не рассчитываю на то, что все будет нормально в смысле «безоблачно». Будь осторожен! Наверное, это как раз та ошибка, которую люди совершают в жизни, и ты в моей, а я в своей. Различные учителя, проповедники, богословы — и я мог совершить эту ошибку — с детства воспитывали нас и учили, что когда ты рядом с Богом, с тобой все будет хорошо.Но пришла жизнь и разочаровала нас. Потому что они никогда не объясняли нам, что значит быть «хорошим». Ведь «хорошо» не означает, что все будет «в шоколаде», это легко и приятно. Потому что на самом деле мы увидели, что это скорее действует против . Мы поняли, что когда ты рядом с Богом, твои дела не всегда идут хорошо. Вы сталкиваетесь с несчастьями и печалями, с преследованием, с болезнями, с нуждами и неудачами — с такими разными неприятностями.Это правда жизни. Но через него вы познаете зрелость, внутреннее обогащение, смирение. Пройдя через эти беды и проблемы, ваша душа станет мудрой, умной, просвещенной.

Кто сказал, что человек, близкий к Богу, не столкнется с непредвиденными ситуациями? И что с ним то, чего он не ожидал и даже не предполагал, что вообще такое могло случиться в его жизни! Нет, даже не думайте, что рядом со Христом, любя Господа, вы не подвергнетесь жизненным испытаниям.Вы будете, и многие из них. Только одно отличие: вы будете знать, как их преодолеть. Вы преодолеете множество забот и научитесь держаться за волны и нырнуть в бездну, чтобы выдержать стремительный натиск. И когда волна начнет приближаться к вам, чтобы накрыть вас и разочаровать, вы погрузитесь в смирение, в любовь, в подчинение воле Бога, в полное подчинение. Вы подчинитесь и скажете: «Господь, я не могу объяснить свою жизнь. Но я знаю — и для меня этот хорошенький — что ты меня любишь.»

Мать пришла ко мне на исповедь несколько лет назад. Я ее спрашиваю: «У тебя есть семья?» Она говорит: «Да». И я увидел слезы в ее глазах. — «У тебя есть дети?» — «Была дочка, и я насильно отправил ее на экскурсию, организованную университетом. Я заставил ее уйти, чтобы она не была изолирована и оторвана от парней, чтобы она общалась с ними, а не была одна, не замкнулась. Я ей сказал: иди и ты. Они уехали за границу, в Токио, и там мою дочь, отца, убила молния! «Вы понимаете ?! Вы представляете, что чувствует эта мать? Неужели она действительно хотела сделать зло своему ребенку? Неужели она действительно хотела для него чего-то плохого? Она пригласила девушку пойти, чтобы она была счастлива.Посоветовал ей подружиться с университетской компанией. «Давай, — говорит она ей, — вырвись из дома, немного развейся и тоже обрадуйся». Сделайте перерыв в постоянной деятельности. «И в своих мыслях она не ошиблась. А потом, на балконе, где ее дочь небрежно сидела, ударила молния, и ребенок умер. Представьте себе, что этой матери звонят из Токио, чтобы сообщить о смерти ее дочери!

В жизни случается много сюрпризов, очень много. Иногда, когда вы думаете обо всем этом, вам хочется сказать: «Я лучше останусь дома, я никуда не пойду, и тогда со мной ничего не случится.» Вы ничего не знаете. Если вы рационалист и не доверяете Богу, то вы действительно так думаете. И в этом есть своя логика.

Но если вы любите Бога и вкладываете Его в свою жизнь, то вы говорите: «Я полностью вверяю себя рукам Бога и куда Он приведет»! Я ни в чем не могу быть уверен. Я уверена только в одном: он меня любит. «Но как он тебя любит? — спрашивает другой. «Вы сами недавно рассказывали мне о ребенке, которого застрелили из винтовки; о девушке, которая умерла; о человеке, который не попал в самолет, и многих других, с которыми я не знаю, что еще произошло.«Неужели все это« любовь »?

Послушайте Несколько дней назад у меня возникла проблема с зубами. Они заболели. Во время еды укусила что-то твердое — это оказался зуб! Он сломался: откололся небольшой кусочек. Я пошел его лечить. Дантист — моя духовная дочь (признается мне). И когда она подходит ко мне, она со страхом стоит передо мной. И вот я сижу в кресле и, как она, дантист, «дрожит» перед исповедью, поэтому в этот момент я предаюсь ей в объятия, дрожу и говорю: «Боже мой, что меня теперь ждет?» Очень болезненные моменты! Как правило, посещение стоматолога для пациента неприятно.Если у вас заболел зуб, вы понимаете, что это … или ухо, или мигрень. Это ужасные моменты. И вот доктор делает мне анестезию — бесполезно! Врач делает усиленную анестезию — а внутри все онемело. Заработал дрель, сверла, кружок. Я почувствовал сильную боль, моя нога дрожала, нервы натянулись, как тетива — невыносимо. И я сказал себе: «Этот доктор так меня любит и так меня обижает. Как это возможно, что она, которая так меня любит — я в этом уверен — принесет мне такие страдания? И, несмотря на то, что она знала, что мне больно, продолжила она.- Без шуток, — продолжила она.

Любовь — не всегда значит «гладить по голове»

Итак, любовь не всегда означает «похлопывать по голове». это значит причинять боль тому, кого любишь, и не останавливаться, когда другой стонет от боли, или страдает, или мучается, если ты знаешь, что другого пути нет. Кто нам ответит на вопрос: «Почему нет другого пути?» Я думаю, что ответ дает Крест Христов: «Вот, Крестом вы явили радость на весь мир.«Через боль приходит радость, через тьму испытаний приходит свет надежды. И, в конце концов, жизнь продолжается. Я не знаю, как: это загадка выше моего разума. Но я знаю: я могу пообщаться с вами сегодня, потому что мой любимый стоматолог позавчера не пожалел меня, но причинил мне боль, мучил, обездвижил мой рот, я не понимал, что со мной происходит, онемел, чувствовал дисфорию. принесли мне рекавери (хотя на тот момент мне было жутко плохо).

Что в итоге? Человек вверяет себя Богу. Другого пути нет.

(продолжение следует)

Тайны Бога … Я не могу вам их объяснить. Я не знаю, как их объяснить. Представляю, как вы удивлены, напуганы, в некоторых случаях не знаете, что сказать. И когда вы спрашиваете меня об этих безграничных и необъятных секретах — «почему это происходит, почему это происходит, почему Бог оставляет вас», я не знаю, что ответить. И более того: я согласен с вами.Но что тут посоветовать — помолимся. Обратимся лично к Богу: «Господи, зачем ты это делаешь? Просвети меня, чтобы я понял. Помогите мне разгадать ваш секрет. «

Так или иначе, все приведет к хорошему. Теперь, может быть, тебе это больно, и поэтому ты говоришь «но почему, но как так». А вы на время остановитесь и не торопитесь! Подождите несколько лет. Пусть на это уйдет несколько десятков лет. Видите, как легко я произношу это словами: «Пусть пройдет несколько десятилетий»? Через несколько секунд! А у вас протест.И все же в конечном итоге все так и будет. Должно пройти достаточное количество времени, чтобы вы поняли, почему произошли некоторые события. И тогда в какой-то момент вы почувствуете, что на все был «план». Говоря «план», я имею в виду поместье, «почему то или это должно произойти». «План», стоящий за болезнью, «план» за смертью вашего родственника. Или почему вы должны были потерять работу в этом году. Для всего существует мудрый «план», по которому вам, по простоте вашего сердца, следует доверять.Если вы найдете другой способ, я с уважением его приму. Обычно в таких ситуациях, когда происходят эти непредвиденные события, один сходит с ума, другой ни во что не верит и не знает, что делать в жизни. Мужчина попадает в ужасный тупик. Но выход есть: предать себя любви и заботе Бога. И тогда все будет хорошо.

Научитесь говорить в своей жизни: «Все будет хорошо». «Но теперь это нехорошо», — вы слышите голос внутри себя. «Все будет хорошо».«А что сейчас плохо? И все будет хорошо? «Да, и это. Все будет хорошо. Ждать и смотреть. Вы увидите, как меняются события. Требуется терпение. И в итоге из горького получится что-то сладкое. ”

Одна притча рассказывает, как жил царь и у него был раб. Вместе они занимались всеми делами царя, и раб всего царя помогал. Этот раб твердил то, что я тебе сказал: «Все будет хорошо, все хорошо». «Что будет хорошо?» Его спрашивали другие.Погода была пасмурная, и раб сказал: «Хорошо, очень хорошо». — «Смотри: пасмурно и моросит!» — «Хорошо очень хорошо.» На следующий день светило солнце. Раб для своего: «А сегодня все нормально». И вот однажды они пошли на охоту, что-то случилось с луком, который держал раб. И он выстрелил, отрубив царю палец. «Что ты со мной сделал, — крикнул король, — ах, мне больно, больно!» И раб поворачивается к нему и снова без страха говорит: «Все будет хорошо!» — «Как все хорошо, сумасшедший, ты понимаешь, о чем говоришь? Когда «все хорошо», сядьте в тюрьму за то, что вы со мной сделали, и там вы узнаете, что означает «все хорошо».Он посадил его в тюрьму, а сам остался без пальца. Однако он продолжал охотиться, потому что это была его слабость. Однажды в лесу царь ушел далеко от других, он пошел глубже, чем обычно, и там его схватили туземцы, целью которых было принести его в жертву своим богам и, кроме того, еще и поесть. Потому что эти туземцы ели людей. Они повели его и по дороге пели и праздновали криками и криками: «Мы поймали царя, теперь мы убьем его и съедим». А царь тем временем с грустью подумал: «Смотри, что меня ждет.Все подчиненные меня боятся, а эти туземцы заживо едят, и я не знаю, как меня спасти. И когда они повели его в заросли, один туземец из этого племени заметил, что у царя не было пальца, у него не было одного пальца. Туземцы кричали: «Ой, теперь мы не можем принести жертву и съесть ее, потому что у нее есть физические повреждения». Так повелел им их «бог», и их легенда гласила, что принести жертву «Богу» и съесть можно только человека без повреждений. И у царя не было ни одного пальца.«Ой, ой, — говорит туземец, — как жаль. Ладно, давай, уходи отсюда. Вы не достойны того, чтобы мы вас съели. И король ушел, перекрестился и поблагодарил Бога, говоря: «О, о, я был спасен, я спасен! Спасло то, что у меня не было пальца! Это его вдохновило, и он был ужасно счастлив. И первое, что он вспомнил о своей рабыне, которую он бросил в темницу. Он немедленно дал команду освободить его. К царю позвали раба, который сказал ему в волнении: «Прости меня, мой раб, за то, что я сделал тебе.«Я принес тебе такие мучения, из-за меня ты попал в темницу». Раб повернулся к нему и снова сказал: «Все хорошо, все хорошо, мой король! Не волнуйся! — «Вы сидели в тюрьме и говорите« все хорошо »? — «Но, мой король, вы бы подумали, если бы я не был в темнице, а охотился бы с вами в лесу, кого бы они тогда съели? Они съедят меня! У тебя не было одного пальца, и ты сбежал! Но у меня все пальцы, и меня бы не спасли! И тогда король понял, что на самом деле все и так хорошо.Бог знает, как все происходит. И это позволяет этому быть. […]

Когда я был на Кипре, я пошел в монастырь, и там я увидел фотографию одного аббата, очень молодого человека, который погиб в авиакатастрофе вместе с Патриархом Александрийским, направляясь к Святой Горе. Меня очень тронула история об этом настоятеле, рассказанная моими отцами. Мне сказали, что он очень духовный и святой человек, и поездка закончилась несчастьем. Думаю, был еще один человек, который должен был пойти со всеми.Но в последний момент что-то случилось, а другой не пошел. И, наверное, себе тот, кто не летал, пожалел: «Ах, как бы мне хотелось летать с отцами. Старейшины, отцы, настоятели, Патриарх Александрийский, я мог бы иметь такое благословение быть с ними. Но ладно, что поделаешь! Не взяли, негде было, не пришла моя очередь! «Что случилось потом, вы знаете: вертолет разбился, все погибли. То есть, видите: они с радостью поехали, и не куда-нибудь, а на Святую гору.И несмотря на это …

Все может случиться. Мы должны быть готовы ко всему и открыты. Победи себя крестным знамением. И жить дальше. И прими, что бы ни принес нам Господь, с уверенностью, что все это для нашего же блага. Все будет служить нам на пользу. Теперь кто-то скажет: «Хорошо, но как это объяснить? Вы говорите нам это, вы говорите нам одно или другое, в конце концов вы видите, что все будет хорошо. «А некоторые события на первый взгляд необъяснимы.Но где-то в глубине жизни есть благо. Я в этом участвую.

Вы видите бедных, которые страдают и страдают. За одним ударом судьбы следует другой. Удар, полная безысходность. А вы говорите: «Ну как же — такой хороший человек! И все наручники на его бедной голове! Это как понять? А потом вы видите другого: он живет зажиточной, мирской и греховной жизнью. Для него не существует Бога. Он здоров как бык. Стареть, дожить до ста лет и хоть что-то для него! Люди смотрят на него и говорят: «А что с ним будет? Он творит весь беззаконие, живет далеко от Бога, и с ним все хорошо.А другой, еще очень молодой, уже болеет раком. Еще одно: доживает до восьмидесяти лет, целый день курит, ругается и ничего! Это вас угнетает, и вы говорите: «Как все это объяснить, что это за Бог! Куда он смотрит? Как он все это отпустил? «Но на Бога, насколько я могу судить, а вы, наверное, заметили, то, что вы говорите, не влияет на то, что вы говорите, я и мы все вместе. Он говорит вам: «Говори, что хочешь. Я молчу. Я не могу рассказать вам, в чем мои секреты. ”

Я только что вспомнил, что именно это Бог сказал св.Антоний Великий. Однажды, когда он спросил Его: «Господи, почему одно случается с одним, а с другим?» Бог ответил ему: «Антоний, перестань спрашивать. Но я скажу вам кое-что, пока вы не продолжите свой допрос. Не пытайтесь проникнуть в секреты, относящиеся ко Мне. Все, о чем вы просите, — это абсолютно Моё дело. Божественные дела, выходящие за пределы вашего понимания. Они за пределами вашего ума. Ты делаешь лучше Энтони и не делаешь то, что делает Бог и как Он это делает. Это мое дело ». Бог сказал это святому не из презрения и не из безразличия.Он как будто говорил: «Энтони, ты не можешь этого понять. Я должен рассказать вам много разных историй. Я должен рассказать вам длинную историю, чтобы вы поняли путь каждого человека и все «как» и «почему». Я, который знает и имеет больше мудрости, чем ты, — говорит ему Бог, — и у меня есть любовь, сила и все божественные, святые свойства, я знаю больше, чем ты. И еще: знайте, что эти люди, у которых есть все, но не имеют связи с Богом, несмотря на то, что пока у них все хорошо, это не означает, что их жизнь закончилась полным благополучием.Потому что они все еще живы, и вы не знаете в деталях их конец. Ведь есть люди, которые хоть и богаты, но если их богатство, благополучие, здоровье не служат поводом для благодарности Богу, для душевного спокойствия, хвалы, милосердия, все, что у них есть, будет обернется для них катастрофой.

Есть богатые люди, разоренные собственным богатством. Есть люди, которых утопили дарованные Богом таланты. Поэтому не стоит делать такие выводы, встречая в жизни «несправедливость», и не удивляйтесь.Есть красивые женщины или красивые мужчины, которым Бог дает этот дар обаяния и телесной красоты. Но это очарование, эта внешняя красота иногда становится для них чем-то, что разрушает их жизнь. Они там увлекаются, тут увлекаются, легко увлекаются и не имеют постоянных связей. У них формируются дурные наклонности, и это их мучает. И когда вы спросите такого человека: «Почему вы так живете», он вам ответит: «Это все из-за моей красоты». И хотя красота — это дар, но она ведет к разрушению.А ты смотришь и завидуешь: «А почему я не такая красивая?» Вы прилагаете все усилия, чтобы стать красивее, а еще красивее (или красивее). Но может это ваше внешнее несовершенство — в вашей жизни есть защита Бога. Подумайте немного об этом. Ведь если этот красавец не обладает смирением, а своим поведением приносит страдания и огорчает людей, то еще неизвестно, приведет ли его красота в рай.

(следует окончание …)

Конечно все будет нормально.Мы уверены в этом. Такое желание мы произносим в дни рождения и в новогоднюю ночь. Мы так подбадриваем друг друга в случае неудачи. Песни с фразой «Завтра будет все хорошо» становятся нашими настоящими хитами, которые все знают наизусть. И мы уверены, что эта заветная мечта осуществится. Только жизнь показывает другое: мы конфликтуем с близкими, мы не любим и страдаем от этого, мы нервничаем и злимся, получаем маленькую зарплату, а страна становится все хуже и хуже. А потом разочарованно спрашиваем: когда все будет хорошо? А сколько еще ждать этого заветного «добра»?

Надеюсь, что все будет хорошо — почему наши надежды не оправдываются?
Что нужно сделать, чтобы завтра все было хорошо?
Когда, наконец, все станет хорошо для каждого из нас?

На днях мне посчастливилось побывать на концерте группы Ocean Elzy в Киеве.С верхнего сектора открывался прекрасный вид не только на сцену, но и на весь олимпийский стадион, хватило одного взгляда, чтобы увидеть — вот он, настоящий аншлаг. Десятки тысяч счастливых людей заполнили трибуны и все поле — они танцевали и кричали под известные песни, аплодировали и устраивали флешмобы. Каждую песню встречали тепло, но особенно одну.

Этот хор пел весь стадион, тысячи рук поднимались в такт музыке, или в своеобразной молитве за Украину.Оглядываясь вокруг и назад, я заметил тысячи глаз, и у многих были слезы, были люди, которые плакали, рыдая. Все зрители, как один, в тот момент мечтали и надеялись, что, наконец, наступит время, когда все будет хорошо для каждого из нас. Эта песня, которую мы всегда воспринимали как личную, на этот раз касалась общего — желания, чтобы завтра все было хорошо, исполняется на всю страну, потому что сегодня у нас настоящая гражданская война.

Концерт закончился, все с веселым настроением разошлись по домам.Многие пели «все самое лучшее», гуляя по проспектам и улицам. Но что дальше? Изменилась ли для них лично на следующий день ситуация в стране, в их семьях? Нет. Завтра было как обычно. Война продолжалась, даже не думая об изменении — в новостях каждый день сообщалось о гибели как мирных жителей, так и военных. Не думаю, что кто-то радикально изменил свою жизнь и стал чувствовать себя счастливее. Как это может быть? Откуда такое яркое и простое желание, чтобы все было хорошо, не сбылось? И наоборот, все ли становится хуже?

Хочу, чтобы все было хорошо — ищем корни желаний

Вера в светлое будущее, что «завтра все будет хорошо» характерна для большинства наших соотечественников.Вроде бы просто подобранный когда-то штамп и широко распространившийся благодаря красивому звуку. Но все намного сложнее …

Фраза « все будет хорошо, даже если … » действительно несет в себе огромные пласты, отражающие наш менталитет, который формировался тысячелетиями. Сложные погодные условия, неприветливая лесостепь с вкраплениями болот и гор, множество диких животных и даже больше вражеских кочевых племен — под давлением всего этого на нашей территории сформировалась уникальная ментальная надстройка, которой нет нигде в мире.Мы могли выжить, только тесно сотрудничая друг с другом, поддерживая слабых, оказывая помощь тем, кто в ней нуждается. Много лет назад, если бы он сгорел дотла, о, его хозяин мог только надеяться на тех, кто жил поблизости, в той же деревне, на тех, кто завтра может оказаться в такой же ситуации. «Что-то всегда побуждало нас сделать доброе дело тому, кто был ранен, тому, кто был слаб и нуждался в помощи. «Все будет хорошо, я верю …» сотни лет назад обрадовались соседи пожарных, и помогали все — кто хлебом, кто за углом дома, кто одеждой.И все это основано не на визуальном сострадании и сострадании, как в западной культуре, а на уретральном ощущении милосердия, жизненной истины и справедливости.

Хотя внешне визуальное сострадание и уретральное милосердие очень похожи, на самом деле между ними есть разница. Зритель часто, не осознавая этого, подменяет понятия, путает, где находится добро и зло, и совершает «добрые» дела, что в конечном итоге приводит к плачевному результату. Простой пример: гуманитарная помощь бедным странам Африки — заполнив африканские страны лекарствами, одеждой и едой, западные страны добились очень плохого результата: вместо развития народ Африки требует новых порций гуманитарной помощи. .

Уретральное милосердие не предполагает ревностной помощи всем, а только тем, кто действительно в ней нуждается. С нашим менталитетом мы никогда не пытаемся просто накормить человека и забыть о нем (читай: расплачиваться), а, напротив, у нас есть внутреннее желание оказать более глубокую помощь, например, дать удочку и научить нас, как рыбачить. И это проявляется во всем, в наших школах принято подтягивать отстающих, на работе — помогать тем, кто не справляется. «Конечно, все будет хорошо», — поощряем мы другого, принимая участие в его жизни и судьбе.

Наше общество было сформировано таким образом, что во главе стаи всегда стоял уретральный мужчина, который брал на себя ответственность за всех. По характеру такой человек обладает целым комплексом характеристик, позволяющих ему правильно и без изъянов выполнять свою роль. Подчиненные обществу, его лучшие свойства живут в сердце каждого из наших людей.

К сожалению, в лучшем случае нашего менталитета есть ловушки для сознания, которые искажают реальность, лишают нас правильных мыслей и действий.И одно из них — желание «завтра все будет хорошо». Будучи терпеливыми, мускулистыми, мы словно застряли в месте, откуда нет выхода. И вместо того, чтобы действовать, мы просто ожидаем, что все будет хорошо. Забыв, что для этого нужно что-то делать. И чем больше хочешь добра, тем больше работы нужно.

Ощущение, что в случае трагедии нам непременно помогут, лишает каждого из нас личной ответственности. Все мы в подсознании ожидаем, что придет сильный человек (лидер) и сделает что-то, что нас спасет, все в мире изменит.Мы ожидаем, что все общество изменится, и только после этого мы обязательно догоним. Ужас ситуации в том, что мы, перекладывая ответственность на другого, продолжаем сами делать то, что приводит к прямо противоположному результату, чем «завтра все будет хорошо»:

• мы не понимаем своих детей, воспитывая их на интуиции, поэтому мы теряем целое поколение молодых людей, просто не понимая их;
• мы конфликтуем в семьях и количество разводов растет настолько, что превышает количество браков;
• мы недовольны своей работой, своим благополучием;
• мы берем и даем взятки даже на самом маленьком уровне, например, врачу или учителю, тем самым увеличивая коррупцию в стране;
• мы злы и обижены, кричим и истеричны, сидим в своих страхах и депрессиях…

И все это объяснение мы ищем не в себе, не в своих действиях, а в ком-то другом. Партнер виноват в паре, учителя — недостатки в системе образования, врачи — плохое здравоохранение, а президент, коррумпированные чиновники или люди другой национальности — в ситуации в стране. И так далее. Куда ни глянь, везде виноват кто-то, а не я. А я — это ведь все тот же муж, отец, врач, учитель, милиционер, политик, обычный человек, который винит всех вокруг, а не себя.И он ждет, он ожидает, что все изменится и завтра все будет хорошо. Иначе и быть не может. Но ментальная надстройка предполагала действия всего стада на благо стада, а не только ожидание помощи.

Коллективистское мышление не позволяет нам смотреть на мир по-настоящему, но он сильно изменил . Новый, кожный возраст диктует свои правила, и они несут личную ответственность за все вокруг.Вы не можете ожидать изменений от другого, если не измените себя. Нельзя ожидать, что все обязательно будет хорошо, потому что без его собственных действий этого точно не произойдет. Более того, пока мы ждем, другие действуют и извлекают выгоду из нашей наивности и терпения.

Что делать, чтобы завтра все действительно было хорошо

Итак, чтобы изменить мир вокруг вас, вам нужно подумать о том, что я могу сделать для всех. Как показывает практика, не все действия, даже с лучшими намерениями, помогают добиться того, чтобы все получилось хорошо.Это связано с тем, что часто мы просто не знаем, что предпринять. Корни наших желаний скрыты от нас в подсознании, и мы полны своих рационализаций и часто ошибаемся.

РАЗБИРАТЕЛЬСТВО НЕПРАВИЛЬНЫХ ПРЕДСТАВЛЕНИЙ, ОКРУЖАЮЩИХ С ПСОРИАЗОМ — The Daily Guardian

Псориаз — не редкое кожное заболевание. От него страдают миллионы людей во всем мире. В августе отмечается месяц осведомленности о псориазе. Постоянное воспаление на коже приводит к появлению красных, толстых и чешуйчатых бляшек.Это может повлиять на кожу головы, конечности, спину, складки, ладони, подошвы, ногти или даже все тело.

Почему неправильные представления и дезинформация связаны с псориазом?

• Псориаз не является инфекционным или заразным; Многие люди думают, что это так, и это заблуждение может оказать изнурительное воздействие на социальное и психологическое благополучие из-за изоляции.

• Псориаз не ограничивается кожей, суставы поражены примерно на 1/3, а другие системные воспалительные заболевания сосуществуют, включая депрессию, атеросклеротическое заболевание, ожирение, инсулинорезистентность и т. Д.Считается заболеванием системного воспаления.

• Это не просто временная кожная сыпь, часто это хроническое системное заболевание, и семья и общество должны знать об этом.

• Существует множество очень эффективных методов лечения псориаза, и эти знания и осведомленность должны помочь друзьям и семье поддержать пациентов в получении лечения, которого они заслуживают.

• Псориаз может проявляться в разных формах у разных людей и может сбивать с толку даже медицинского работника, поэтому в этом случае не следует предпринимать попытки самодиагностики.

ЧТО МЫ МОЖЕМ ЛЕЧИТЬ ПСОРИАЗ?

Доступны многие виды лечения; выбор лечения зависит от тяжести заболевания, стоимости и удобства лечения, а также реакции человека на лечение. Лечение псориаза замедляет развитие кожи, регулирует иммунологический ответ, вызывающий псориаз, или их комбинацию. Варианты лечения включают кремы и мази, таблетки и инъекции. Псориаз может получить пользу от светотерапии, известной как «фототерапия».Современные методы лечения псориаза средней и тяжелой степени включают «таргетную терапию» или «биопрепараты», которые обладают очень хорошей эффективностью с меньшим количеством побочных эффектов. Часто предлагается сочетание терапии.

ЕСТЬ НЕСКОЛЬКО ВЕЩЕЙ, КОТОРЫЕ ВЫ МОЖЕТЕ СДЕЛАТЬ ДОМА

• Ежедневное купание — удаляет чешуйки и успокаивает воспаленную кожу. Можно добавить в ванну масло для ванн, овсянку коллоидную.

• Держите кожу увлажненной — поддержание кожи мягкой и влажной может минимизировать зуд и болезненность. Увлажняющие средства, такие как вазелин или густые кремы, продаются без рецепта, и их следует наносить сразу после мытья или душа.Можно ли использовать его от одного до трех раз в день?

• Избегайте факторов, вызывающих псориаз. Курение, употребление алкоголя, инфекции, травмы кожи, стресс могут усугубить псориаз. Употребление алкоголя также мешает принимать многие лекарства от псориаза.

• Воздействие солнца — полезно в ограниченных количествах, интенсивное пребывание на солнце или солнечный ожог могут вызвать обострение.

• Роль диетических вмешательств в лечении псориаза неясна. Эксперты рекомендуют людям с псориазом, страдающим избыточным весом или ожирением, уменьшить количество потребляемых калорий, чтобы попытаться похудеть, рекомендуется придерживаться питательной сбалансированной диеты.

• Стремитесь вести здоровый образ жизни с адекватными физическими упражнениями.

Автор — клинический доцент кафедры дерматологии больницы Амрита, Кочи.